Účinky nutraceutika na báze ovocia a zeleniny na biomarkery zápalu a oxidačného stavu v plazme zdravej populácie: Placebom kontrolovaná, dvojito zaslepená a randomizovaná klinická štúdia

kontaktný emailtina.xiang@wecistanche.comPre viac informácií

Abstraktné: Existujú vedecké dôkazy o pozitívnom účinkupolyfenolyz rastlinných potravín ďalejzápal aoxidačnépostavenie. Cieľom tejto štúdie bolo zistiť, či liečba vysokopolyfenolovými nutraceutikami znižuje plazmatickú koncentráciu určitýchoxidačnéazápalovébiomarkerov v zdravej populácii. V intervenčnej skupine (n {{0}}) a skupine s placebom (n=55) sa vybralo a stratifikovalo 18 subjektov podľa pohlavia. Deväťdesiatdva jedincov dokončilo štúdiu po dvoch 16-týždňových liečebných obdobiach oddelených štvortýždňovým vymývacím obdobím. Výsledky odhalili štatisticky významné rozdiely u subjektov liečených polyfenolovým extraktom v porovnaní s placebom: Zníženie homocysteínu, oxidovaného lipoproteínu s nízkou hustotou (OxLDL), TNF-, sTNFR1 a C-reaktívneho proteínu (CRP). Najvýraznejší pokles bol pozorovaný pre OxLDL (zo 78,98 ± 24,48 na 69,52 ± 15,64; p < 0.05)="" a="" crp="" (z="" 1,50="" ±="" 0).="" 33="" až="" 1,39="" ±="" 0,37;="" p="">< 0,05),="" pričom="" obidve="" vykazovali="" významné="" rozdiely="" v="" porovnaní="" s="" placebom="" (p="">< 0,001).="" navyše="" katecholamíny="" sa="" zvýšili="" po="" podaní="" skúmaného="" produktu,="" najmä="" v="" prípade="" dopamínu="" (z="" 15,43="" ±="" 2,66="" na="" 19,61="" ±="" 5,73;="" p="">< 0,05).="" preto="" sa="" zdá,="" že="" konzumácia="" nutraceutika="" na="" báze="" ovocia="" a="" zeleniny="" s="" vysokým="" obsahom="" polyfenolov="" zlepšuje="" parametre="" súvisiace="" s="" prínosmi="" pre="" zdravie="">oxidačnéazápalovébiomarkerov), vrátane pozoruhodných zmien v expresii katecholamínov.

Kľúčové slová: polyfenol; biomarkery; oxidačný stres; ovocie; zelenina; nutraceutický

1. Úvod

Vedecká literatúra dokumentuje úlohu stravy v prevencii neprenosných chorôb, ako je obezita, kardiovaskulárne choroby, rakovina a všetky príčiny smrti, najmä prostredníctvom konzumácie ovocia a zeleniny pre ich vysoký obsah bioaktívnych zlúčenín, najmä polyfenolov [1 ,2]. Existuje inverzný vzťah medzi stredomorskou stravou, ktorá sa vyznačuje vysokou spotrebou produktov bohatých na polyfenoly, prostredníctvom konzumácie potravín a nápojov bohatých na polyfenoly, ako je ovocie, zelenina, kakao, čaj a káva, a rizikom všetkých príčin mortalita [3,4]. Napriek tomu, že bolo preukázané, že konzumácia 800 g/deň ovocia a zeleniny znižuje riziko kardiovaskulárnych ochorení a úmrtnosti zo všetkých príčin a 600 g/deň znižuje riziko rakoviny, WHO a viaceré diétne smernice stále odporúčame 400 g/deň [5]. Väčšina populácie však nedosahuje ani minimum stanovené zdravotnými úradmi, ktoré zodpovedá piatim porciám ovocia a zeleniny denne [6,7]. Výhody súvisiace so zdravým životným štýlom sú známe po celom svete, objavujú sa nové produkty, ktoré ponúkajú možnosť začlenenia vyššie uvedených bioaktívnych zlúčenín prostredníctvom doplnkov/nutraceutík, čo pomáha dosiahnuť výživové odporúčania [8].

Okrem toho v dôsledku progresívneho starnutia populácie, okrem iných faktorov, ako je strava a životný štýl, dochádza k zrýchlenému nárastu neurodegeneratívnych ochorení, pričom hlavným exponentom je AD, ktorej prevalencia sa zdvojnásobuje každých 20 rokov. Kvôli dopadu a spoločenským nákladom, ktoré generuje, sa uskutočnilo mnoho štúdií o vzťahu medzi spotrebou ovocia a zeleniny ako príspevku antioxidantov, ktoré znižujúoxidačnépoškodenie na úrovni mozgu [9].

Polyfenoly vznikajú ako sekundárne metabolity rastlín ako obranný mechanizmus proti nepriaznivým podmienkam (okrem iného parazity, klíma alebo znečistenie) [10] a tvoria širokú skupinu bioaktívnych fytochemikálií vrátane fenolových kyselín, stilbénov, lignanov, fenolických alkoholov a flavonoidy [11,12]. Poskytujú potenciálne účinky v prevencii a liečbe viacerých patológií, ako sú kardiovaskulárne ochorenia, rakovina, diabetes mellitus a starnutie a neurodegeneratívne ochorenia [13] prostredníctvom niekoľkých bioaktivít (kardioprotektívna aktivita, anti-zápalovéaktivita, anti-aging aktivita, antioxidačná aktivita, protirakovinová aktivita, antimikrobiálne účinky, neuroprotektívne účinky, pľúcne ochranné účinky, obličkové ochranné účinky, prevencia osteoporózy a ochrana pred UV žiarením) [14]. Polyfenoly zoslabujúzápalpotlačením pro-zápalovétranskripčné faktory z interakcie s proteínmi zapojenými do génovej expresie a bunkovej signalizácie [15]. Vazodilatačná, vazoprotektorová, antitrombotická, antilipemická, antisklerotická, protizápalová a antiapoptotická kapacita polyfenolov je dôsledkom ich zdravých vlastností [12], keďže polyfenoly sú hlavným zdrojom antioxidantov (10-krát vyšší ako vitamín C a 100-krát vyšší ako vitamín E a karotenoidy) [16]. V skutočnosti sú kvercetín, myricetín a kaempferol flavanoly, flavonoidy s najvyššou schopnosťou neutralizovať voľné radikály, pretože ich štruktúra fenolových skupín je schopná zachytiť nepárové elektróny ROS a generovať neutralizované reaktívne druhy [17]. Koncentrácia polyfenolov v plazme je však vysoko závislá od chemickej štruktúry a potravinového zdroja, takže na získanie všetkých súvisiacich výhod sa odporúča ich dlhodobý príjem [12].

Cieľom súčasnej klinickej štúdie bolo vyhodnotiť, či dlhodobá konzumácia veľkého množstva polyfenolov prostredníctvom nutraceutík na báze ovocia a zeleniny je schopná zlepšiť biomarkery súvisiace szápalaoxidačnéstav u zdravých jedincov, ktorí nekonzumujú odporúčané množstvá ovocia a zeleniny. Okrem toho, zdravá staršia populácia bola predmetom niekoľkých intervenčných štúdií, ktoré spájajú spotrebu ovocia a zeleniny a hladiny katecholamínov ako premenné súvisiace s kogníciou [27,28,34].

2. Výsledky

2.1. Študijná populácia

Do tejto štúdie bolo zahrnutých celkom 108 subjektov (tabuľka 1 uvádza ich demografické údaje), rozdelených do dvoch homogénnych skupín (N1 a N2). Nakoniec, po prekrížení a strate sledovania, 92 subjektov (N1=48, N{8}}) ​​dokončilo intervenciu a boli zahrnuté do konečnej štatistickej analýzy, ako je znázornené na obrázku 1.

2.2. Plazmatické biomarkery

Priemery a štandardné odchýlky všetkých biomarkerov analyzovaných u všetkých subjektov, na začiatku aj na konci intervencie po príjme polyfenolového extraktu (EXT) alebo placeba (PLA), sú znázornené v tabuľke 2.

Čo sa týka lipidového profilu, rozdiely v cholesterole lipoproteínov s vysokou hustotou (HDL) v závislosti od typu konzumovaného produktu boli pozoruhodné. Hodnoty HDL sa výrazne znížili po konzumácii PLA (∆4,52 mg/dl;p<0.05),while increased="" significantly="" in="" the=""><0.05).additionally, the="" difference="" between="" both="" groups="" was="" also="" statistically="" significant="" at="" the="" end="" of="" the=""><0.05). finally,="" total="" cholesterol="" and="" triglycerides="" values="" did="" not="" show="" significant="" differences="" throughout="" the="" intervention="" after="" pla="" or="" ext="">
Regarding the vitamins analyzed, a slight increase in vitamin B12 was observed in both groups, as well as small non-significant variations in vitamin E values, as shown in Table2(p>0.05). Napríklad vitamín B12 sa menil po užívanej liečbe v skupinách PLA aj EXT; signifikantné rozdiely sa však nenašli (p=0.43 resp. p=0.20). V prípade vitamínu E sa hodnoty líšili v skupinách PLA(p=0.98) a EXT(p=0.91). Navyše pri porovnaní medzi skupinami na konci intervencie nie signifikantné rozdiely boli pozorované buď pre vitamín B12 (p=0.205) alebo vitamín E (p=0.974).

Čo sa týka hodnôt katecholamínov, hlavným nálezom bolo signifikantné zvýšenie dopamínu (∆4,18 pg/ml;p<0.001)after consumption="" of="" ext="" with="" respect="" to="" pla="" (p="0.22)," showing="" significant="" differences="" between="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" intervention=""><0.001). a="" significant="" increase="" in="" norepinephrine="" values="" was=""><0.05), with="" an="" increase="" of="" ∆="" 39.21="" pg/ml="" in="" the="" ext="" group,="" not="" observed="" in="" the="" pla="" group="" (p="0.72)." there="" was="" no="" signifificant="" difference="" between="" the="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" study.="" analyzing="" the="" cortisol="" and="" adrenaline="" values,="" no="" signifificant="" differences="" were="" observed="" in="" any="" group="" during="" the="" intervention,="" nor="" at="" the="" end="" of="" the="">

Funkciu štítnej žľazy určovali hormóny T3, T4 a TSH. Počas intervencie sa pozorovalo, že hodnoty hormónu T3 významne klesli v oboch skupinách (p < 0.05).="" hodnoty="" hormónu="" t4="" sa="" pohybovali="" rôznymi="" spôsobmi,="" významne="" sa="" zvýšili="" v="" skupine="" pla="" (∆="" 0,57="" mcg/l;="" p="">< 0,001)="" a="" nevýznamne="" sa="" znížili="" v="" skupine="" ext="" (∆="" 0,47="" mcg="" ).="" hodnoty="" hormónu="" tsh="" zostali="" po="" konzumácii="" oboch="" produktov="" konštantné.="" pri="" porovnaní="" vývoja="" troch="" hormónov="" medzi="" skupinami="" na="" konci="" štúdie="" neboli="" pozorované="" žiadne="" významné="" rozdiely="" pre="" t3="" (p="0.195)," t4="" (p="0.195)" alebo="" tsh="" (p="">

Na určenie bezpečnosti skúmaných produktov sa analyzovali transaminázy (GOT, GPT a GAMMA GT), aby sa vyhodnotila funkcia pečene subjektov, pričom sa nepozorovali významné zmeny (p > 0,05) v žiadnom vyššie uvedených pečeňových enzýmov po konzumácii buď produktu alebo placeba. Preto sa dá predpokladať, že príjem produktov je bezpečný.

3. Diskusia

Ako je uvedené vyššie, údaje získané v tomto rukopise odrážajú určité rozdiely medzi liečbami. Avšak za bazálnych podmienok neboli pozorované žiadne významné rozdiely medzi skupinami, čo posilňuje významné zmeny získané po konzumácii produktu.

Plazmatický homocysteín sa považuje za indikátor kardiovaskulárneho rizika, ktorý možno upraviť cvičením a diétou. Okrem toho je dobre známy jeho vysoký neuroprotektívny účinok [35,36]. Zdá sa však, že jedlo poskytuje stály prísun živín na udržanie optimálneho metabolizmu homocysteínu [37]. V našej štúdii sa homocysteín významne znížil po konzumácii produktu, ako v predchádzajúcich štúdiách [22,38]. Preto konzumácia polyfenolov vo vysokých dávkach pomáha znižovať homocysteín, čo by sa dalo považovať za kardioprotektívnu kapacitu. Na druhej strane, lipidový profil, celkový cholesterol a triglyceridy neboli počas intervencie ovplyvnené. Bolo však pozoruhodné, že plazmatický HDL cholesterol sa výrazne zvýšil po konzumácii produktu a znížil sa po konzumácii placeba. Tieto zmeny v plazmatických lipoproteínoch posilňujú myšlienku kardioprotektívnej kapacity skúmaného produktu.

Hlavným zistením v tomto výskume bol významný pokles OxLDL spolu so zvýšením HDL cholesterolu po chronickej konzumácii extraktu bohatého na polyfenoly v porovnaní s placebom. Tieto výsledky sú v súlade s predchádzajúcimi štúdiami, ktoré podporujú, že polyfenoly vykazujú ochranu proti ateroskleróze, čím inhibujú proliferáciu hladkého svalstva ciev [12,39,40]. OxLDL je jedným z mála parametrov uznaných Európskym úradom pre bezpečnosť potravín (EFSA) v rámci funkčných tvrdení a zdá sa, že je vhodnou výslednou premennou na zdôvodnenie zdravotných tvrdení súvisiacich so znížením oxidačného poškodenia lipidov [ 41,42]. Okrem toho OxLDL podporuje adhéziu monocytov k endotelovým bunkám prostredníctvom mechanizmu nezávislého od expresie ICAM-1 a VCAM-1, čím vznikajú penové bunky [43]. To sa však pri LDL nevyskytuje [44]. Táto väzba sa uskutočňuje prostredníctvom určitých receptorov, ako je CD36. OxLDL je ligand pre PPAR a upreguluje expresiu CD36, čím podporuje vychytávanie OxLDL makrofágmi [45] a následne prispieva k rozvoju aterosklerózy prostredníctvom aktivácie imunitného systému [46]. Je zaujímavé, že OxLDL podporuje endoteliálnu dysfunkciu a aterosklerózu, čím znižuje kardiovaskulárne riziko [47,48].

Na druhej strane liečba skúmaným produktom viedla k plazmatickej redukcii CRP, proteínu akútnej fázy syntetizovaného v pečeni, sprostredkovaného inými cytokínmi, najmä IL-1 a IL-6 [49]. Vysoké hladiny CRP korelujú so zvýšeným rizikom kardiovaskulárnych príhod, a to aj u zdravých jedincov [50]. Niekoľko štúdií zistilo súvislosť medzi koncentráciami CRP a kardiovaskulárnymi príhodami, akými sú akútny infarkt myokardu, cievna mozgová príhoda a progresia periférnej arteriálnej okluzívnej choroby [51,52]. Hoci hladiny získané v CRP sú v normálnych medziach pre zdravého človeka, pokles týchto hladín ukazuje na opodstatnenosť polyfenolov v tomto smere.

Navyše, imuno-zápalový marker TNF- sa po konzumácii extraktu výrazne znížil. TNF- je prozápalový cytokín, ktorý je významne exprimovaný v tukovom tkanive, ako aj v leukocytoch, endotelových bunkách a svalových bunkách [53], podieľa sa na endoteliálnej dysregulácii, stimuluje migráciu monocytov a makrofágov a indukuje expresiu adhéznych molekúl [54]. V skutočnosti môže dôjsť k zvýšeniu TNF- v strave s nízkou koncentráciou karoténov, čo môže vysvetliť zníženie pozorované v hladinách TNF- [55]. Preto dáva zmysel, že v našej štúdii znižuje svoju hodnotu po konzumácii produktu kvôli vysokej prítomnosti karoténov v produkte.

Polyfenolový extrakt použitý v tomto skúmaní bol testovaný v niekoľkých intervenčných štúdiách s rôznymi dobami spotreby a v rôznych skupinách populácie, čo viedlo k nekonzistentným výsledkom. Pri {{0}}týždňovom zásahu u trénovaných mužov patriacich k rakúskym špeciálnym policajným silám bolo hlásené významné zníženie (p < 0,001)="" v="" koncentrácii="" karbonylových="" skupín="" v="" proteínoch="" a="" tnf-="" v="" 16.="" a="" 28.="" týždni="" .="" rozdiel="" oproti="" našej="" štúdii="" bol="" v="" tom,="" že="" v="" ich="" štúdii="" boli="" vzorky="" získané="" v="" 4.,="" 8.,="" 16.="" a="" 28.="" týždni.="" pozoruhodné="" je,="" že="" hodnoty="" stúpali="" do="" 8.="" týždňa="" a="" klesali="" od="" 16.="" týždňa="" [56].="" v="" osemtýždňovej="" intervencii="" u="" jedincov="" s="" nadváhou="" a="" obezitou="" starších="" ako="" 40="" rokov="" boli="" hlásené="" významné="" zníženia="" celkového="" cholesterolu,="" ldl="" cholesterolu="" a="" tnf-,="" ktoré="" sa="" nedosiahli="" pri="" placebe;="" napriek="" tomu="" sa="" nezistili="" žiadne="" signifikantné="" rozdiely="" v="" crp,="" stnfr1="" alebo="" oxldl="" [57].="" zdá="" sa,="" že="" oba="" výsledky="" potvrdzujú,="" že="" dlhodobý="" príjem="" polyfenolov,="" ako="" v="" našej="" štúdii="" (16="" týždňov),="" je="" spojený="" s="" vyššou="" účinnosťou="" proti="" zápalu.="" v="" ďalšej="" osemtýždňovej="" intervencii="" u="" obéznych="" žien="" boli="" pozorované="" významné="" zlepšenia="" v="" niekoľkých="" markeroch="" oxidácie="" proteínov,="" ako="" sú="" karbonylové="" proteíny,="" oxldl="" (p="0" 0,015)="" a="" celková="" oxidácia="" lipidov="" všetkých="" lipidov.="" čo="" sa="">zápalovémarkerov sa zaznamenalo významné zníženie TNF- (p=0,011). Na začiatku boli hodnoty TNF nad stanoveným rozsahom v skupinách s placebom a extraktom; na konci intervencie zostali zvýšené v skupine s placebom a klesli na normálne hodnoty v skupine, ktorá produkt konzumovala [58]. Nakoniec, účinnosť extraktu bola testovaná aj u nezdravých subjektov, ktorí uvádzajú zníženie OxLDL po trojmesačnej konzumácii ťažkými fajčiarmi [59].

Pokiaľ ide o katecholamíny, po konzumácii skúmaného produktu sa pozorovalo významné zvýšenie norepinefrínu a najmä dopamínu. V žiadnej skupine však neboli pozorované žiadne významné zmeny pre kortizol a adrenalín. Napriek tomu, že niektoré predchádzajúce štúdie zaznamenali zníženie kortizolu v plazme [60] alebo slinách [61] po príjme polyfenolov, nie je to obvyklé a hodnoty len zriedkavo vykazujú významné zmeny [62–64] týkajúce sa príjmu polyfenolov. Skutočnosť, že sa hodnoty adrenalínu a kortizolu nezvýšili, znamená, že sa nevyvinula adrenergná odpoveď spojená s konzumáciou produktu. Noradrenalín a dopamín sú tiež zvýšené u starších pacientov s neurodegeneratívnymi ochoreniami [65,66] a súvisia s úzkosťou [67] a kognitívnym zlepšením [68]. Navyše norepinefrín úzko súvisí s pozornosťou, ako aj s bdelosťou [69,70]. Výsledky získané v tejto štúdii týkajúce sa dopamínu a noradrenalínu by mohli súvisieť so zlepšeniami na kognitívnej úrovni pozorovanými v inej publikácii [71]. Môžeme tvrdiť, že konzumácia polyfenolov preto zvyšuje úroveň bdelosti a pozornosti, čo koreluje s výsledkami na úrovni kognitívnych testov [71].

Obmedzenie tohto klinického skúšania, ako je opísané v Di Lorenzo et al. [10] v systematickej štúdii o biologickej dostupnosti polyfenolov je, že zahrnutie zdravých jedincov do klinických štúdií sťažuje hodnotenie významných rozdielov v biomarkeroch, ktoré sa menia za patologických podmienok. Medzi ďalšie obmedzenia tejto štúdie patrí skutočnosť, že metabolity fenolových zlúčenín v produkte neboli stanovené nad rámec obsahu vitamínu E alebo individuálnej odpovede, čo by mohlo ovplyvniť biologickú dostupnosť a biologickú aktivitu polyfenolu [72].

Je dôležité si uvedomiť, že dobrovoľníci tejto štúdie sú zdraví jedinci a biomarkery zápalu, ktoré sme určili, sú medzi normálnymi hodnotami v plazme. Preto rozdiely pozorované v rozmedzí normálnych hodnôt pre tieto biomarkery, napriek tomu, že sú štatisticky významné, nie sú z klinického hľadiska nápadné. Ak však skúmaný produkt dosiahol štatisticky významné zmeny u zdravých ľudí, tieto zmeny by mohli byť ešte väčšie u pacientov s abnormálnymi hodnotami [73,74], pretože polyfenoly v produkte by pomohli aspoň čiastočne bojovať proti látke spôsobujúcej toto narušenie. plazmatickej hladiny [75].

Budúci výskum by sa preto mohol zamerať na zváženie týchto aspektov v zdravej aj nezdravej populácii.

4. Materiály a metódy

4.1. Skúšobný dizajn

Táto štúdia pozostávala z randomizovanej, skríženej, dvojito zaslepenej, pohlavne stratifikovanej a placebom kontrolovanej klinickej štúdie na posúdenie účinnosti dennej spotreby enkapsulovaného nutraceutika (Juice Plus plus Premium®, The Juice Plus plus Company, Collierville , TN, USA) na základe rôznych druhov ovocia a zeleniny na biomarkeroch krvnej plazmy zápalu a oxidačného stavu. Intervencia trvala 36 týždňov – dve obdobia po 16 týždňoch oddelené vymývacím obdobím 4 týždňov. Počas intervencie subjekty prišli do laboratória štyrikrát (na začiatku a na konci každej fázy), pričom vzorky krvi dostali za podmienok nalačno. Na začiatku každej fázy bol produkt (EXT alebo PLA) dodaný subjektom a na konci každej fázy boli subjekty povinné vrátiť balíčky pre výskumníkov, aby kvantifikovali zostávajúce produkty.

Každý subjekt podpísal dokument informovaného súhlasu a bol mu pridelený číselný kód v poradí príchodu; následne externý výskumník vykonal randomizáciu pomocou počítačového generátora (Epidat v4.1 Epi-dat, Španielsko) a priradil subjekty do jednej zo skupín. Ani výskumníci, ani subjekty nevedeli, do ktorých skupín subjekty patria. Produkt aj placebo boli označené kódmi poskytnutými distribuovanou spoločnosťou a zaradené do A a B a až na konci štúdie boli výskumníci upozornení, ktorý kód zodpovedá produktu a ktorý placebu. Protokol bol schválený Inštitucionálnym revíznym výborom Katolíckej univerzity San Antonio of Murcia (UCAM) (dátum: 24. novembra 2017; kód: CE111072). Táto štúdia bola vykonaná podľa štandardov správnej klinickej praxe a bola vykonaná v súlade s Helsinskou deklaráciou. Štúdia bola zaregistrovaná na www.clinicaltrials.gov (prístup 11. júna 2020) (identifikátor CFE/JU/44-17.) Štúdia sa uskutočnila na Katedre farmácie Fakulty zdravotníckych vied Katolíckej univerzity San Antonio z Murcie (UCAM). Súčasná európska legislatíva o ochrane osobných údajov bola dodržaná (nariadenie (EÚ) 2016/679).

4.2. Účastníci

Subjekty museli splniť všetky kritériá zaradenia (podpísať formulár informovaného súhlasu, BMI medzi 18,5 a 35 kg/m2, netrpieť chronickým ochorením, neskonzumovať viac ako tri porcie ovocia a zeleniny denne a vek od 18 rokov a 65 rokov) a nespĺňate žiadne z vylučovacích kritérií (užívanie liekov alebo farmakologická liečba, užívanie multivitamínov, alergia na ovocie alebo zeleninu, diéta, vegetariánstvo alebo vegánstvo, fajčenie, konzumácia viac ako 3 pohárov alkoholu ( víno alebo pivo) denne, tehotná, mala veľkú operáciu v posledných troch mesiacoch, mala problémy so spánkom a darovala 0,5 l krvi za posledné tri mesiace). Po kontrole kritérií zaradenia/vylúčenia začalo štúdiu celkovo 108 subjektov oboch pohlaví. Overenie sa vykonalo, aby sa zabezpečilo, že subjekty naďalej spĺňajú kritériá počas všetkých návštev na oddelení pomocou prieskumu indexu stredomorského životného štýlu (MEDLIFE) na posúdenie stravovacích návykov a fyzickej aktivity [76]. Počas zásahu bolo stratených 16 subjektov na sledovanie, takže

počet subjektov, ktoré dokončili štúdiu, bol 92, ktorých demografické údaje sú uvedené v tabuľke 1.

4.3. Testovací doplnok

Skúmaný produkt a placebo mali rovnaké vlastnosti a oba boli vyrobené a poskytnuté spoločnosťou The Juice Plus plus Company, Collierville, TN, USA. Prezentácia bola vo forme bielych zapuzdrených farmaceutických produktov, dodávaných vo fľašiach odlíšených iba kódom. Po ukončení štúdie boli vyšetrovateľom poskytnuté, ktorý kód patrí k produktu a ktorý k placebu. Rozdiely v komerčnom produkte spočívali v tom, že pozostával z príjmu troch rôznych druhov kapsúl denne – dvoch zmiešaných bobuľových plodov, dvoch zmiešaných druhov ovocia a dvoch zmiešanej zeleniny, každá z nich v samostatnej fľaši. Z tohto dôvodu, a aby bolo možné vyrobiť podobný produkt a placebo, bolo rozhodnuté vyrábať kapsuly obsahujúce zmes troch vyššie uvedených kapsúl (bobule, ovocie a zelenina), pričom denná spotreba pre túto štúdiu bola šesť kapsule – tri pred raňajkami a tri v popoludňajších hodinách spolu s vodou.

Skúmaný výrobok bol dodávaný v nepriehľadných bielych kapsulách a obsahoval ovocnú, zeleninovú a bobuľovú šťavu v prášku a dužinu z jablka, pomaranča, ananásu, brusnice, broskyne, čerešne acerola, repy, sušených sliviek, datle, manga, mrkvy, petržlenu, kelu, brokolica, kapusta, špenát, ryžové otruby, paradajky, artičokové listy, čučoriedky, černice, čierne ríbezle, čučoriedky, brusnice, concord hrozno, baza, extrakt z hroznových jadierok, extrakt zo zeleného čaju, koreň zázvoru, maliny, kakao, granátové jablko, prírodná zmes tokoferolov ( , δ, , -tokoferoly, slnečnicový -tokoferol), zmes prírodných karotenoidov (luteín, -karotén, lykopén, astaxantín), citrusový pektín, citrusové bioflavonoidy, citrónová kôra, uhličitan vápenatý, cesnakový prášok, spirulina, zmes prírodných enzýmov, oxid kremičitý , stearát horečnatý získaný zo zeleniny, tangeretín a Lactobacillus acidophilus. Denná dávka 6 kapsúl poskytla 2,91 mg karoténu, 18,7 mg vitamínu E, 159 mg vitamínu C, 318 µg folátu, 6,1 mgluteínu, 1 mg lykopénu a 0,15 mg astaxantínu. Placebo pozostávalo z mikrokryštalickej celulózy, ryžového škrobu, vegetariánskej kapsuly (celulózy), stearanu horečnatého a umelých farbív (FD&C žltá #6 a FD&C modrá #1).

Polyfenolová charakterizácia produktu bola uskutočnená v predchádzajúcej štúdii Brescianiho a kol. prostredníctvom UHPLC-QqQ-MS, ktorá ukazuje celkovo 119 polyfenolových zlúčenín rôznych fenolových skupín, vrátane flavonolov, ako je kaempferol a kvercetín, antokyány a flavóny [77]. Čo sa týka biologickej dostupnosti, znalosť biodostupného množstva polyfenolov je zaujímavejšia ako celkové množstvo, keďže v mnohých situáciách nie sú najrozšírenejšie polyfenoly pre organizmus najaktívnejšie [78]. Z tohto dôvodu Bresciani a kol. vyhodnotili biologickú dostupnosť produktu, pričom zistili, že z 92 sledovaných molekúl bolo v plazme identifikovaných iba 20 cirkulujúcich metabolitov, pričom všetky z nich boli zvyšky sulfátu, glukuronidu alebo glycínu, ktoré sa v plazme objavili v rôznych časoch v závislosti od miesta absorpcie v tráviaci trakt [79].

4.4. Študijné premenné

Všetky premenné boli počas štúdie analyzované štyrikrát: na začiatku a na konci každého 16-týždňovej fázy spotreby produktu. Počas štúdie subjektom nebolo umožnené začať alebo modifikovať akúkoľvek hormonálnu liečbu, ani vykonať žiadne významné zmeny v stravovaní alebo fyzickej aktivite, ktoré by mohli ovplyvniť premenné štúdie.

Merania vzoriek krvi

Subjekty museli prísť po 12-hodinovom období pôstu, pričom umožnili príjem vody iba v predchádzajúcich 3 hodinách. Cvičenie strednej až vysokej intenzity nebolo povolené 24 hodín pred extrakciou. Vzorky krvi sa odoberali z antekubitálnej žily do k3E/K3EDTA skúmavky na odber krvi (3 ml) a do skúmaviek na odber krvi sérovým gélom a aktivátorom zrazeniny (5 ml) *3. Pred odoslaním do laboratória (Laboratorios MUNUERA SL Murcia, Španielsko) boli centrifugované iba skúmavky na odber krvi s gélom na sérum a aktivátorom zrazeniny (4500 ot./min., 5 minút, 4 ◦C). Biomarkery analyzované pre každú premennú boli: (a) Prozápalové biomarkery: OxLDL (ng/ml) testom ELISA vo vzorkách séra, TNF- (pg/ml) a sNTFR1 (ng/ml) kompetitívnym testom ELISA (diagnostika DRG), CRP (mg/l) turbidimetrickou imunoanalýzou (PETIA) a homocysteín (pg/ml) na analyzátore BN ProSpec® (podľa protokolu poskytnutého v súprave Siemens N Latex HCYOPAX 03); (b) vitamíny: vitamín E (mcg/ml) pomocou HPLC s JASCO chromatografom (PU-980 IntelligentPLC-Plus) a kolónou Betasil-C18 (veľkosť častíc 5 µm, 250 × 4,6 mm) spojenou s fluorescenciou JASCO detektor (FP-920 Intelligent Fluorescense Detector) a vitamín B12 (pg/ml) pomocou chemiluminiscencie s komerčnými imunotestami s použitím automatizovaného zariadenia Centaur XPSiemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (c) katecholamíny: kortizol (mcg/l) pomocou chemuminiscenčnej techniky s imunotestom Immulite 2000 (DPC, Gwynedd, RU) a noradrenalín (pg/ml), adrenalín (pg/ml) a dopamín (pg/ml) HPLC s prietokom 0,5 ml/min, Tº 35 ◦C, citlivosť 20, potenciál 0,7, mobilná fáza acetonitril-voda a reverzná fáza C18 s použitím n elektrochemického detektora; (d) hormóny štítnej žľazy: T3 (mcg/l), T4 (mcg/l) a TSH (mU/l) pomocou automatizovaného zariadenia CentaurXP Siemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (e) imunitný stav: IgA (mg/l) s použitím turbidimetrickej techniky s testom Monolab. Ako činidlá boli použité Tris pufor (20 mmol/1), PEG 8000 a pH 8,3 ako riedidlo a kozie sérum, anti-ľudský IgA a pH 7,5 ako protilátka.

4.5. Štatistická analýza

Spojité premenné sú prezentované ako priemer ± štandardná odchýlka (SD) na začiatku a v ich vývoji, pričom sa na overenie normálneho rozdelenia nespojitých údajov použije Kolmogorov-Smirnovov test. Analýza sa uskutočnila pre všetky subjekty, ktoré sa zúčastnili štúdie, v období konzumácie produktu aj placeba. Pre kvantitatívne premenné sa uskutočnilo porovnanie Studentovho t-testu medzi dvoma vetvami štúdie. Aby sa analyzovali rozdiely medzi skupinami (EXT a PLA) vo vývoji rôznych premenných, bola vykonaná opakovaná analýza rozptylu s časom ako vnútrosubjektovým faktorom. Týmto spôsobom sa stanovili rozdiely pre každú analyzovanú premennú s ohľadom na tieto faktory. Pre post-hoc analýzu sa uskutočnil Bonferroniho test. Porovnávali sa významné rozdiely (s možnosťou predpokladať rovnosť rozptylu alebo nie). V súbore štatistických testov bola zvolená hladina významnosti 0,05. Štatistická analýza sa uskutočnila pomocou softvéru SPSS 24 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA).

5. Závery

Náš výskum ukázal, že chronická konzumácia polyfenolového extraktu na báze bobúľ, ovocia a zeleniny u zdravej populácie, ktorá nejedí odporúčané množstvá ovocia a zeleniny denne, zlepšuje oxidačný stav a zápal zlepšením niekoľkých krvných biomarkerov, najmä OxLDL, CRP a HDL-cholesterol, ktoré tiež zlepšujú hodnoty katecholamínov – najmä dopamínu.

Autorské príspevky: Finančná akvizícia, MPZ a JM; vyšetrovanie, RA a JM; metodika, RA, J.Á.C., RX-M., BC, DV, MPZ a JM; administrácia projektov, JM; dozor, JM; validácia, JM; písanie – recenzia a úprava, RA, J.Á.C. a JM Všetci autori si prečítali a súhlasili s publikovanou verziou rukopisu.
Financovanie: Táto štúdia bola financovaná spoločnosťou Juice Plus Company. Spoločnosť nikdy nespolupracovala pri návrhu alebo správe získaných údajov.
Vyhlásenie Inštitucionálneho revízneho výboru: Táto štúdia bola vykonaná v súlade s usmerneniami Helsinskej deklarácie, schválenými etickým výborom Katolíckej univerzity San Antonio of Murcia (UCAM) (dátum: 24. novembra 2017; kód: CE111702).
Vyhlásenie informovaného súhlasu: Informovaný súhlas sa získal od všetkých subjektov zapojených do štúdie.

Vyhlásenie o dostupnosti údajov: Nie je potrebné.
Poďakovanie: Autori ďakujú subjektom za účasť na štúdii, ako aj spoločnosti JuicePlus Company za podporu a propagáciu výskumu.
Konflikty záujmov: Autori vyhlasujú, že v súvislosti s týmto rukopisom nemajú žiadne konflikty záujmov.
Dostupnosť vzorky: Neuplatňuje sa.

Referencie

1. Aune, D.; Giovannucci, E.; Boffetta, P.; Fadnes, LT; Keum, N.; Norat, T.; Greenwood, DC; Riboli, E.; Vatten, LJ; Tonstad, S. Príjem ovocia a zeleniny a riziko kardiovaskulárnych ochorení, celkovej rakoviny a úmrtnosti zo všetkých príčin - Systematický prehľad a metaanalýza prospektívnych štúdií v závislosti od dávky. Int. J. Epidemiol. 2017, 46, 1029–1056. [CrossRef] [PubMed]
2. Slavín, JL; Lloyd, B. Zdravotné prínosy ovocia a zeleniny. Adv. Nutr. 2012, 3, 506–516. [CrossRef]
3. Tresserra-Rimbau, A.; Rimm, EB; Medina-Remón, A.; Martínez-González, MA; López-Sabater, MC; Covas, MI; Corella, D.; Salas-Salvadó, J.; Gómez-Gracia, E.; Lapetra, J.; a kol. Príjem polyfenolov a riziko úmrtnosti: Opätovná analýza štúdie PREDIMED. BMC Med. 2014, 12, 77. [CrossRef]
4. Tresserra-Rimbau, A.; Rimm, EB; Medina-Remón, A.; Martínez-González, MA; de la Torre, R.; Corella, D.; Salas-Salvadó, J.; Gómez-Gracia, E.; Lapetra, J.; Arós, F.; a kol. Inverzná súvislosť medzi zvyčajným príjmom polyfenolov a výskytom kardiovaskulárnych príhod v štúdii PREDIMED. Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2014, 24, 639–647. [CrossRef]
5. Blomhoff, R.; Andersen, LF; Iversen, PO; Johansson, L.; Smeland, S. Kostråd pre å fremme folkehelsen og forebygge kroniske syk dommer. Metodol. Vitensk. kunnskapsgrunnlag 2011. Dostupné na internete: https://www.helsedirektoratet.no/rapporter/kostrad for-a-fremme-folkehelsen-og-forebygge-kroniske-sykdommer-metodologi-og-vitenskapelig-kunnskapsgrunnlag/Kostr percent C3 percent A5d percent 2{{52 }}pre percent 20 percent C3 percent A5 percent 20fremme percent 20folkehelsen percent 20og percent 20forebygge percent 20kroniske percent 20sykdommer percent 20sykdommer percent 20 percent E2 percent 80 percent 93 percent 2 0metodologi percent 20og percent3.pdf20vitenskape3%}pdf20 /attachment/inline/2a6293e0-169e-41bd-a872-f3952dbb22c2:0d09926111d614e6059e804b7f9b21c17bd0c1cfol percent percent Ahelsend percenta percent02 percent percentahelsend percenta 2 percent percent C3 percentem percentem forebygge percent 20kroniske percent 20sykdommer percent 20 percent E2 percent 80 percent 93 percent 20metodologi percent 20og percent 20vitenskapelig percent 20kunnskapsgrunnlag.pdf (prístup 11. januára 2021).
6. Benton, D.; Young, HA Úloha ovocných štiav pri dosahovaní 5-denných odporúčaní pre príjem ovocia a zeleniny. Nutr. 2019, 77, 829–843. [CrossRef] [PubMed]
7. Li, Y.; Zhang, D.; Pagán, JA Sociálne normy a spotreba ovocia a zeleniny v New York City Neighborhoods. J. Urban Health 2016, 93, 244–255. [CrossRef] [PubMed]
8. Sachdeva, V.; Roy, A.; Bharadvaja, N. Aktuálne vyhliadky nutraceutík: Prehľad. Curr. Pharm. Biotechnol. 2020, 21, 884–896. [CrossRef]
9. Román, GC; Jackson, RE; Gadhia, R.; Román, AN; Reis, J. Stredomorská strava: Úloha ω-3 mastných kyselín s dlhým reťazcom v rybách; polyfenoly v ovocí, zelenine, obilninách, káve, čaji, kakau a víne; probiotiká a vitamíny v prevencii mŕtvice, kognitívneho poklesu súvisiaceho s vekom a Alzheimerovej choroby. Neurol. 2019, 175, 724–741. [CrossRef]
10. Di Lorenzo, C.; Colombo, F.; Biella, S.; Stockley, C.; Restani, P. Polyfenoly a ľudské zdravie: Úloha biologickej dostupnosti. Živiny 2021, 13, 273. [CrossRef]
11. Manach, C.; Williamson, G.; Morand, C.; Scalbert, A.; Rémésy, C. Biologická dostupnosť a biologická účinnosť polyfenolov u ľudí. I. Prehľad 97 štúdií biologickej dostupnosti. Am. J. Clin. Nutr. 2005, 81, 230S–242S. [CrossRef]
12. Quiñones, M.; Miguel, M.; Aleixandre, A. Polyfenoly, prirodzene sa vyskytujúce zlúčeniny s priaznivými účinkami na kardiovaskulárne ochorenia. Nutr. Hosp. 2012, 27, 76–89. [CrossRef]
13. Li, S.; Tan, HY; Wang, N.; Cheung, F.; Hong, M.; Feng, Y. Potenciálny a akčný mechanizmus polyfenolov pri liečbe ochorení pečene. Oxid. Med. Bunka. Longev. 2018, 2018, 8394818. [CrossRef]
14. Li, A.; Li, S.; Zhang, Y.; Xu, X.; Chen, Y.; Li, H. Zdroje a biologické aktivity prírodných polyfenolov. Živiny 2014, 6, 6020–6047. [CrossRef]
15. Panel EFSA pre potravinárske prídavné látky a zdroje živín pridávané do potravín (ANS). Hodnotenie rizika pre ženy v peri- a post-menopauze, ktoré užívajú potravinové doplnky obsahujúce izolované izoflavóny. EFSA J. 2015, 13, 4246. [CrossRef]
16. Rice-Evans, CA; Miller, NJ Antioxidačné aktivity flavonoidov ako bioaktívnych zložiek potravy. Biochem. Soc. Trans. 1996, 24, 790-795. [CrossRef] [PubMed]
17. Korkina, LG; Afanas' Ev, IB Antioxidačné a chelatačné vlastnosti flavonoidov. Adv. Pharmacol. 1996, 38, 151-163.
18. Dorjgochoo, T.; Gao, Y.-T.; Chow, W.-H.; Shu, X.; Yang, G.; Cai, Q.; Rothman, N.; Cai, H.; Li, H.; Deng, X.; a kol. Hlavný metabolit F2-izoprostánu v moči môže byť citlivejším biomarkerom oxidačného stresu ako samotný izoprostán. Am. J. Clin. Nutr. 2012, 96, 405–414. [CrossRef] [PubMed]
19. Santilli, F.; D'Ardes, D.; Davì, G. Oxidačný stres pri chronickom vaskulárnom ochorení: Od predpovede k prevencii. Vascul. Pharmacol. 2015, 74, 23–37. [CrossRef] [PubMed]
20. McGuire, Ministerstvo poľnohospodárstva USA a Ministerstvo zdravotníctva a ľudských služieb USA, stravovacie usmernenia pre Američanov, 2010. Washington, DC: Tlačiareň vlády USA, január 2011. Adv. Nutr. 2011, 2, 293–294. [CrossRef] [PubMed]

21. Baroni, L.; Bonetto, C.; Rizzo, G.; Bertola, C.; Caberlotto, L.; Bazzerla, G. Asociácia medzi kognitívnymi poruchami a vitamínom B12, folátom a stavom homocysteínu u starších dospelých: Retrospektívna štúdia. J. Alzheimerova choroba. Dis. 2019, 70, 443–453. [CrossRef]
22. Samman, S.; Sivarajah, G.; Man, JC; Ahmad, ZI; Petocz, P.; Caterson, ID Zmiešaný ovocný a zeleninový koncentrát zvyšuje plazmatické antioxidačné vitamíny a folát a znižuje plazmatický homocysteín u mužov. J. Nutr. 2003, 133, 2188–2193. [CrossRef] [PubMed]
23. Meng, H.; Li, Y.; Zhang, W.; Zhao, Y.; Niu, X.; Guo, J. Vzťah medzi kognitívnou poruchou a homocysteínom v populácii s deficitom B12 a folátov v Číne: Prierezová štúdia. Medicína 2019, 98, e17970. [CrossRef]
24. Lin, F.; Pei, L.; Zhang, Q.; Han, W.; Jiang, S.; Lin, Y.; Dong, B.; Cui, L.; Li, M. Ox-LDL indukuje apoptózu endotelových buniek a migráciu makrofágov reguláciou kaveolínovej-1 fosforylácie. J. Cell. Physiol. 2018, 233, 6683–6692. [CrossRef] [PubMed]
25. Calder, PC; Albers, R.; Antoine, J.-M.; Blum, S.; Bourdet-Sicard, R.; Paprade, GA; Folkerts, G.; Friedmann, PS; Frost, GS; Guarner, F. Zápalové chorobné procesy a interakcie s výživou. Br. J. Nutr. 2009, 101, 1–45. [CrossRef]
26. Karlsen, A.; Paur, I.; Bøhn, SK; Sakhi, AK; Borge, GI; Serafini, M.; Erlund, I.; Laake, P.; Tonstad, S.; Blomhoff, R. Čučoriedková šťava moduluje plazmatickú koncentráciu zápalových markerov súvisiacich s NF-KB u subjektov so zvýšeným rizikom CVD. Eur. J. Nutr. 2010, 49, 345–355. [CrossRef] [PubMed]
27. Gonçalves, CFL; Santos, MC; Ginabreda, MG; Fortunato, RS; Carvalho, DPd; Freitas Ferreira, AC Flavonoid rutín zvyšuje vychytávanie jodidu štítnou žľazou u potkanov. PLoS ONE 2013, 8, e73908. [CrossRef]
28. Mancini, A.; Martorana, GE; Magini, M.; Festa, R.; Raimondo, S.; Silvestrini, A.; Nicolotti, N.; Mordente, A.; Mele, MC; Miggiano, GAD; a kol. Oxidačný stres a metabolický syndróm: Účinky stravy obohatenej o prírodné antioxidanty na inzulínovú rezistenciu. Clin. Nutr. ESPEN 2015, 10, e52–e60. [CrossRef]
29. Giuliani, C.; Noguchi, Y.; Harii, N.; Napolitano, G.; Tatone, D.; Bucci, I.; Piantelli, M.; Monako, F.; Kohn, LD Flavonoid kvercetín reguluje rast a génovú expresiu v potkaních FRTL-5 bunkách štítnej žľazy. Endokrinológia 2008, 149, 84–92. [CrossRef]
30. Kanazawa, K.; Sakakibara, H. Vysoký obsah dopamínu, silného antioxidantu, v banáne cavendish. J. Agric. Food Chem. 2000, 48, 844-848. [CrossRef]
31. Parmar, HS; Kar, A. Ochranná úloha extraktov Mangifera indica, Cucumis melo a Citrullus vulgaris pri chemicky vyvolanej hypotyreóze. Chem. Biol. Interagujte. 2009, 177, 254–258. [CrossRef]
32. Rahman, MM; Ichiyanagi, T.; Komiyama, T.; Sato, S.; Konishi, T. Účinky antokyanov na oxidačný stres vyvolaný psychickým stresom a stav neurotransmiterov. J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 7545–7550. [CrossRef]
33. Graumann, R.; Paris, I.; Martinez-Alvarado, P.; Rumanque, P.; Perez-Pastene, C.; Cardenas, SP; Marin, P.; Diaz-Grez, F.; Caviedes, R.; Caviedes, P. Oxidácia dopamínu na aminochróm ako mechanizmus neurodegenerácie dopaminergných systémov pri Parkinsonovej chorobe. Možná neuroprotektívna úloha DT-diaforázy. Pol. J. Pharmacol. 2002, 54, 573-580. [PubMed]
34. Jiang, X.; Huang, J.; Song, D.; Deng, R.; Wei, J.; Zhang, Z. Zvýšená spotreba ovocia a zeleniny súvisí so zníženým rizikom kognitívnej poruchy a demencie: Metaanalýza. Predné. Starnutie Neurosci. 2017, 9, 18. [CrossRef] [PubMed]
35. Borai, 1H; Ezz, MK; Rizk, MZ; Aly, HF; El-Sherbiny, M.; Matloub, AA; Fouad, GI Terapeutický vplyv polyfenolov z listov hrozna na určité biochemické a neurologické markery pri Alzheimerovej chorobe vyvolanej AlCl(3). Biomed. Pharmacother. 2017, 93, 837–851. [CrossRef] [PubMed]
36. Zeng, Q.; Li, F.; Xiang, T.; Wang, W.; Ma, C.; Yang, C.; Chen, H.; Xiang, H. Vplyv potravinových skupín na celkový homocysteín v plazme pre špecifické genotypy MTHFR C677T v čínskej populácii. Mol. Nutr. Food Res. 2017, 61. [CrossRef] [PubMed]
37. Ganguly, P.; Alam, SF Úloha homocysteínu vo vývoji kardiovaskulárnych ochorení. Nutr. J. 2015, 14, 6. [CrossRef]
38. Upadya, H.; Prabhu, S.; Prasad, A.; Subramanian, D.; Gupta, S.; Goel, A. Randomizovaná, dvojito zaslepená, placebom kontrolovaná, multicentrická klinická štúdia na posúdenie účinnosti a bezpečnosti extraktu Emblica Officinalis u pacientov s dyslipidémiou. Doplnok BMC. Altern. Med. 2019, 19, 27. [CrossRef] [PubMed]
39. Bulotta, S.; Celano, M.; Lepore, SM; Montalcini, T.; Pujia, A.; Russo, D. Priaznivé účinky fenolových zložiek olivového oleja oleuropeínu a hydroxytyrozolu: Zameranie na ochranu pred kardiovaskulárnymi a metabolickými ochoreniami. J. Transl. Med. 2014, 12, 219. [CrossRef]
40. Osakabe, N.; Baba, S.; Yasuda, A.; Iwamoto, T.; Kamiyama, M.; Takizawa, T.; Itakura, H.; Kondo, K. Denný príjem kakaa znižuje náchylnosť lipoproteínov s nízkou hustotou k oxidácii, ako sa preukázalo u zdravých ľudských dobrovoľníkov. Voľný Radic. Res. 2001, 34, 93-99. [CrossRef] 41. Martini, D.; Rossi, S.; Biasini, B.; Zavaroni, I.; Bedogni, G.; Musci, M.; Pruneti, C.; Passeri, G.; Ventura, M.; Di Nuzzo, S.; a kol. Tvrdené účinky, výsledné premenné a metódy merania zdravotných tvrdení navrhnutých podľa nariadenia Európskeho spoločenstva 1924/2006 v rámci ochrany pred oxidačným poškodením a kardiovaskulárneho zdravia. Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2017, 27, 473–503. [CrossRef] [PubMed]
42. Turck, D.; Bresson, J.-L.; Burlingame, B.; Dean, T.; Fairweather-Tait, S.; Heinonen, M.; Hirsch-Ernst, KI; Mangelsdorf, I.; McArdle, HJ; Naska, A.; a kol. Usmernenie k vedeckým požiadavkám na zdravotné tvrdenia týkajúce sa antioxidantov, oxidačného poškodenia a kardiovaskulárneho zdravia: (Revízia 1). EFSA J. Eur. Food Saf. Auth. 2018, 16, e05136. [CrossRef]
43. Dwivedi, A.; Anggård, EE; Nosič, MJ Adhézia monocytov na endotelové bunky sprostredkovaná oxidovaným LDL nezahŕňa NFkappaB. Biochem. Biophys. Res. komun. 2001, 284, 239-244. [CrossRef]
44. Quinn, MT; Parthasarathy, S.; Fong, LG; Steinberg, D. Oxidatívne modifikované lipoproteíny s nízkou hustotou: Potenciálna úloha pri nábore a retencii monocytov / makrofágov počas aterogenézy. Proc. Natl. Akad. Sci. USA 1987, 84, 2995–2998. [CrossRef] [PubMed]