Účinky Cistanche na funkčné poškodenie pľúc, pečene a týmusu u potkanov so sepsou

Abstraktné

Cieľ: Štúdium účinkov extraktu Cistanche na akútpečeňpoškodenie funkcie pľúc a týmusu u potkanov so septickým šokom a preskúmať liečbu septického šoku.

Metódy: Použite ligáciu a perforáciu slepého čreva (CLP) na replikáciu modelu septického šoku, pozorujte patologické zmenypečeňtkaniva pľúc a týmusu a určiť biologické indikátory akútneho poškodenia pečene, pľúc a týmusu a vplyvCistancheextrakt.

Výsledky: Po CLP u potkanov sa významne znížil mitochondriálny stav III, pomer P/O a rýchlosť kontroly dýchania hepatocytov v skupine s normálnym soľným roztokom a aktivita ATPázy sodno-draslíkovo-vápenato-magnéziovej membrány bola významne znížená; pomer vlhkej a suchej hmotnosti pľúc, alveolárna komunikácia Index permeability, permeabilita pľúcnych kapilár a malondialdehyd v pľúcnom tkanive boli významne zvýšené a superoxiddismutáza bola významne znížená; percento apoptózy tymocytov a fragmentácie DNA sa výrazne zvýšilo. VCistancheskupine podávania sa vyššie uvedené ukazovatele významne zlepšili v porovnaní so skupinou s normálnym fyziologickým roztokom a dosiahli alebo sa priblížili úrovni skupiny s umelou chirurgiou.

Záver:Cistanchemá dobrý ochranný účinok na akútpečeň, pľúca aporanenie týmusuu potkanov so septickým šokom. Jeho mechanizmom môže byť zníženie poškodenia tkanív voľnými kyslíkovými radikálmi, zlepšenie funkcie bunkových membrán a zlepšenie imunitnej funkcie organizmu a schopnosti stresu.

Kľúčové slová:

rastlinné extrakty/farmakológiaCistanchedeserticola/farmakológia sepsa/komplikácie šok, sepsa/liečba čínskej medicíny potkanov.

Táto štúdia pozorovala účinkyCistanchena modeli septického šoku u potkanov s akútnymi pľúcami,pečeň, a týmusu a iných orgánových poškodení, snažiac sa chrániť funkciu buniek ako prielom, preskúmať účinok a mechanizmusCistanchepri sepse, s cieľom vyvinúť účinné ochranné lieky proti sepse Urobte užitočné prieskumy.

Pre viac informácií kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa zabraňuje ochoreniu obličiek, kliknite sem a získajte vzorku

1. materiál a metódy

1.1 Lieky, činidlá a prístrojové lieky:

Pentobarbital sodný (China National Pharmaceutical Group Shanghai Chemical Reagent Company), súprava malondialdehydu (MDA), súprava superoxiddismutázy (SOD), činidlo ATPáza (Inštitút biologického inžinierstva Nanjing Jiancheng),CistancheHodnotí Dr. Wang Chizhi z Katedry tradičnej čínskej medicíny, Tri Gorges University) Vodný odvar, Evansova modrá. Prístroj: transmisný elektrónový mikroskop Hitachi H{0}}, prietokový cytometer (EPICS, Beckman Coulter), spektrofotometer typu 721.

1.2 Príprava extraktu Cistanche deserticola

Výťažok zCistanche\ bol pripravený metódou lúhovania. Vezmite 200 g suchej hmotnostiCistanche, vložte do kadičky, pridajte destilovanú vodu v pomere 1:1O, namočte na 30 minút až 1 hodinu, zohrejte na elektrickom sporáku 1 hodinu, prefiltrujte a proces dvakrát zopakujte. Zozbieraný filtrát sa zahrieval, aby sa odparil a koncentroval na 1 g/ml, a potom sa uzavrel a skladoval v chladničke pri 4 stupňoch na neskoršie použitie.

1.3 Zvieratá a zvieracie modely septikémie

Zdravé samce potkanov SD (poskytnuté Experimentálnym zvieracím centrom Huazhongskej univerzity vedy a techniky, vážiace 200 25 og. Zvieratá boli náhodne rozdelené do 3 skupín, skupina s falošnou operáciou (, z{2}}), kontrolná skupina s normálnym soľným roztokom (, z-8) a aCistanchedeserticolaskupina (jedna 8). Skupine s falošnou operáciou a kontrolnej skupine bol podávaný normálny fyziologický roztok (1,{2}} ml/kg) sondou a skupine, ktorej bol podávaný, bol podaný 1 g/ml (aplikačná dávka 200 mg/kg)Cistanchesondou, ld 2-krát a kŕmené 15 dní fyziológie. Kontrolná skupina s fyziologickým roztokom aCistanche deserticolaskupina použila ligáciu a perforáciu slepého čreva na replikáciu modelu sepsy. Pred operáciou mali zvieratá pitnú vodu zadarmo a 12 hodín hladovali.

1.4 Meranie mitochondriálnej aktivity ATPázy pečene potkana a mitochondriálnej respiračnej funkcie pečene

16 hodín po operácii 6g potkanapečeňsa rýchlo umiestnil do {{0}} stupňového separačného média (250mmol sacharózy, 2mmol etoxyetylpiperazín2-etylsulfónovej kyseliny, 0,1mmol kyseliny etyléndiamíntetraoctovej, pH 7.4), s použitím diferenciálnej rýchlosti Potkanie mitochondrie boli pripravené odstredivou separáciou pri nízkej teplote. Na meranie aktivity ATPázy použite metódu stanovenia fosforu [2. Metóda Clarkovej kyslíkovej elektródy [3] sa použila na zaznamenanie mitochondriálnej redoxnej reakčnej krivky pomocou JYD-IA merača rozpusteného kyslíka a rýchlosti dýchania štádia III a štádia IV, rýchlosti kontroly dýchania (RCR) a pomeru fosfor-kyslík ( ADlP/0) boli vypočítané.

1.5 Histológia pľúc potkana a meranie funkcie pľúc

Po 16 hodinách sa otvoril hrudník a vybral sa ľavý lalok pľúc. Po odvážení vlhkej hmotnosti sa pečie v peci (80 stupňov, 20 hodín), kým hmotnosť nebola konštantná, a vypočítala sa suchá hmotnosť. Pre obsah bielkovín vypočítajte index pľúcnej permeability (proteín alveolárnej lavážnej tekutiny/ga plazmatický proteín, LPI). Podľa metódy intravenóznej injekcie Evansovej modrej, ktorú zaviedli Zhou et al. [4] sa merali zmeny pľúcnej vaskulárnej permeability (PVP) potkanov. Na stanovenie aktivity malondialdehydu (MDA) v pľúcnom tkanive potkanov sa použila metóda Ls s kyselinou tiobarbiturovou (TBA). Pomocou xantínoxidázovej metódy [6 na stanovenie aktivity SOD.

1.6 Tkanivo týmusu

Fyzikálne vyšetrenie a stanovenie rýchlosti apoptózy buniek 2 až 3 potkany v každej skupine sa usmrtili v zodpovedajúcom čase po operácii, izoloval sa intaktný týmus a urobili sa rutinné parafínové rezy, zafarbili sa HE a pozorovali sa pod svetelným mikroskopom; 2.5 fixácia glutaraldehydom, Vytvorte rez elektrónovým mikroskopom a pozorujte ho transmisným elektrónovým mikroskopom. Ďalším prípravkom suspenzie tymocytov, prietokovou cytometriou detekcia počtu buniek nachádzajúcich sa v apoptotickej zóne, získajte percento apoptotických buniek. Podľa Burtona a kol. L7] (difenylamínová metóda), čítačka mikrodoštičiek deteguje a vypočítava percento fragmentácie genómovej DNA tymocytov.

1.7 Štatistické spracovanie

Experimentálne údaje sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka ± s). Softvér SPSS vykonáva jednosmernú analýzu rozptylu a korelačnej analýzy. P<0.05 indicates="" a="" statistical="">

2. Výsledok

2.1 Zmeny stavu pečeňových mitochondrií Ⅲ, RCR a kontrolná skupina pomeru P/O

Rýchlosť dýchania v stave III bola významne nižšia ako v skupine s falošnou operáciou (P<0.01). the="" breathing="" rate="" of="" state="" iv="" was="" not="" significantly="" changed="" compared="" with="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group.="" as="" a="" result,="" the="" rcr="" of="" the="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group=""><0.01). the="" rcr="" in="" the="">Cistancheliečebná skupina bola bližšia skupine s falošnou operáciou. Pomer ADP/0 v kontrolnej skupine sa znížil a pomer v skupine liečenej Cistanche sa obnovil. V porovnaní so skupinou s falošnou operáciou bol významný rozdiel (P<>

2.2 Účinok Cistanche na aktivitu mitochondriálnej ATPázy

Mitochondriálna membránová kalciová-ATPáza, sodno-draselná ATPáza, magnéziová-ATPáza a kalcium-horčík-ATPázová aktivita hepatocytov v kontrolnej skupine bola významne nižšia ako v skupine s falošnou operáciou. Enzýmové aktivityCistancheliečenej skupine boli významne vyššie ako v zodpovedajúcej kontrolnej skupine a dosiahli úroveň skupiny s falošnou operáciou.

2.3 Účinok Cistanche na apoptózu tymocytov

Výsledky prietokovej cytometrie ukázali, že v porovnaní so skupinou s falošnou operáciou sa apoptóza tymocytov v kontrolnej skupine po operácii výrazne zvýšila, pričomCistancheExtrakt z deserticoly mohol účinne znížiť rýchlosť apoptózy a percento fragmentácie DNA bolo podobné ako percento detegované prietokovou cytometriou. Výsledky sú v podstate rovnaké (tabuľka 4).

2.4 Účinok Cistanche na histologické zmeny týmusu

Pozorovanie týmusu v parafínovej sekcii v skupine s falošnou operáciou nepreukázalo žiadne zjavné patologické zmeny. Tymocyty boli husto distribuované v kôre týmusu, jadro bolo okrúhle, tmavomodro sfarbené a menej cytoplazmy; po prechode do drene sa jadro postupne zväčšovalo a prevládajú svetlejšie sfarbené epitelové retikulárne bunky. V kontrolnej skupine bola kôra týmusu zvierat riedko zložená z buniek, lymfocyty sa znížili a makrofágy pribudli. Lokálne bola pozorovaná fokálna nekróza a rozptýlené fragmenty buniek. Bunky drene týmusu sa výrazne nezmenšili a bunky boli distribuované hustejšie ako kortikálna oblasť, čím sa vytvoril takzvaný fenomén "kortikálno-medulárna inverzia". Fragmenty tymocytov zvierat vCistanche-podávanej skupine boli výrazne znížené a výrazne sa zlepšil aj fenomén "inverzie mozgovej kôry a miazgy".

Pozorovanie kontrolnej skupiny pomocou elektrónového mikroskopu ukázalo, že väčšina objemu buniek sa zmenšila, povrch buniek sa zmenšil, tvoril pľuzgiere, chromatín aglomeroval, niektoré bunky mali tvar polmesiaca, vytvorili sa apoptotické telieska a bežné boli nekrózy a lýzy buniek. VCistancheskupiny, zmeny v morfológii buniek sa významne znížili a fenomén bunkovej nekrózy a lýzy sa výrazne zlepšil.

3. Diskusia

Syndrómy multiorgánovej dysfunkcie sú základným dôvodom nezvratného stavu a vysokej mortality v neskorom štádiu septického šoku. Ochrana funkcie orgánov má veľký význam pre zníženie vysokej klinickej úmrtnosti na septický šok. Cistanche je tradičný čínsky bylinný liek našej krajiny. Prvýkrát bol publikovaný v „Shenlong Materia Medica“. Je to jeden zo známych tradičných čínskych liekov na výživu esencie a krvi, výživu obličiek a posilnenie jangu. Moderné farmakologické štúdie ukázali, že môže zlepšiť imunitné funkcie tela a stres, podporovať syntézu DNA, odolávať žiareniu, odolávať starnutiu, zvyšovať rýchlosť syntézy bunkovej DNA a chrániť bunky tkaniva. Medzi hlavné zložky v ňom obsiahnuté patrí Cistanche Polysacharid (cDPS) a D-manitol, ktoré dokážu účinne odstraňovať voľné radikály.Cistanchepolysacharidy môžu tiež podporovať proliferáciu T a B lymfocytov a môžu synergicky stimulovať proliferáciu myších tymocytov pomocou ConA a PHA. Tento experiment je založený na základnom bode zlepšovania a ochrany funkcie dôležitých životne dôležitých orgánov pri septickom šoku a myšlienke posilňovania organizmu TČM pomocou objektívnych a citlivých detekčných metód na pozorovanie efektuCistanchev štáte Ⅲpečeňmitochondrie u potkanov so septickým šokom, rýchlosť kontroly dýchania (RCR), P/O pomer, membránová ATPáza a index pľúcnej permeability, pľúcna vaskulárna permeabilita, MDA pľúcneho tkaniva, aktivita SOD, apoptóza tymocytov. Experimentálne výsledky to ukazujúCistanchemôže zvýšiťpečeňmitochondriálny RCR, pomer P/O, zosilniťpečeňmitochondriálna respiračná funkcia, urýchľuje prenos elektrónov v mitochondriálnom dýchacom reťazci, zvyšuje stupeň spojenia oxidatívnej fosforylácie a membránovej aktivity ATPázy a zvyšuje intracelulárnu syntézu ATP. V skupine, ktorej sa podával Cistanche, sa index pľúcnej permeability a permeabilita pľúcnych ciev významne znížili, aktivita malondialdehydu v pľúcnom tkanive sa znížila a superoxiddismutáza sa výrazne zvýšila. Predpokladá sa, že Cistanche môže znížiť poškodenie buniek pľúcneho tkaniva voľnými kyslíkovými radikálmi prostredníctvom svojho antioxidačného účinku a má dobrý ochranný účinok pri poranení pľúc. Pri septickom šoku môžu tymocyty, najmä nezrelé T-lymfocyty, veľké množstvo apoptózy spôsobiť zníženie uvoľňovania zrelých lymfocytov do periférnych lymfatických orgánov a potom priamo alebo nepriamo poškodiť imunitnú funkciu organizmu. Korekcia abnormálnej apoptózy tymocytov pri septickom šoku je prospešná pre zlepšenie imunity organizmu. Zistila to táto experimentálna štúdiaCistancheextrakt môže výrazne zlepšiť apoptózu tymocytov a má výrazný ochranný účinok na tymocyty zvierat so septikémiou. Ďalej zvyšuje obranyschopnosť organizmu pri infekčnom procese a znižuje poškodenie dôležitých orgánov cudzími toxínmi. Zistili sme tiež, že krvný tlak skupiny liekov sa výrazne zlepšil a úmrtnosť sa výrazne znížila. Cistanche a Cistanche posilnili funkciu pečeňových a pľúcnych buniek a znížili apoptózu tymocytov. Existuje významná pozitívna korelácia, čo naznačujeCistanchemôže zlepšiť funkcie životne dôležitých orgánov tela a posilniť imunitu organizmu môže byť dôležitým farmakologickým základom pre Cistanche pri liečbe septického šoku.

Cistanchemá významný ochranný účinok na akútne poškodenie orgánov a jeho mechanizmus môže byť: ① odolávať peroxidácii membránových esterov, zvyšovať stabilitu membrány a znižovať poškodenie membránovej štruktúry voľnými radikálmi. ② Podporujte syntézu tkanivovej nukleovej kyseliny a spomaľte rozklad a deštrukciu nukleovej kyseliny, podporte syntézu bielkovín a urýchlite opravu a regeneráciu tkanivových buniek. ③Posilniť imunitnú funkciu tela a znížiť poškodenie tela spôsobené patogénnymi faktormi. ④ Inhibujte nadmernú apoptózu tkanivových buniek. ⑤Zlepšite mikrocirkuláciu tela a zabezpečte prekrvenie životne dôležitých orgánov.

Referencie

[1] Jin Huiming, model sepsy po podviazaní a perforácii slepého čreva [J]. China Disease Journal of Physiology, 1990, 6 (2): 126.

[2]3 Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Moderné medicínske experimentálne metódy [M]. Severný Peking: Vydavateľstvo People's Health Publishing House, l997:342.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Moderné medicínske experimentálne metódy [M3. Severný Peking: People's Health Press, 1997: 508-510.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing atď. Moderné klinické biochemické vyšetrenie

[5]. Peking: Lekárska tlač ľudovej armády, 2001: 896-899.

[6] He Weijing, Li Wei, Bi Zheng atď. Detekcia apoptózy v bunkách leukémie Difenylamínová metóda [J]. Shanghai Journal of Medical Testing, 2001, 16 (3): 160.