Účinky diabetes mellitus na sexuálnu funkciu, histomorfológiu a expresiu aktínu svalového svalu v kavernóznom tele penisu u potkanov
Mar 05, 2025
Abstrakt:
Cieľ:Pozorovaťsexuálna funkcia cukrovkyModel potkany a skúmajte možný mechanizmus sekundárnej sexuálnej dysfunkcie spôsobeného hyperglykémiou.
MetódyExperimentálne potkany boli náhodne rozdelené do slepej skupiny (n =5) askupina s cukrovkou(n =15). Po úspešnom vytvorení modelu cukrovky zvierat sa hodnotila sexuálna funkcia dvoch skupín. Pozorovali sa histologické charakteristiky semenníkov v dvoch skupinách. Merala sa expresia -smooth svalového aktínu (-SMA) v penisovom tkanive dvoch skupín. Výsledky boli významne znížené hladiny sexuálnych hormónov v sére (P<0.01). Histomorphological observation showed that in the diabetes group the interstitial tissue of testis was disordered; Compared with the blank group, the number of smooth muscle cells in the penis tissue was reduced, and the degree of fibrosis was aggravated. The expression of α-SMA positive cells in the diabetes group was significantly decreased (P<0.01).
ZáverZnížené hladiny pohlavných hormónov, znížený počet buniek hladkého svalstva v kavernóznom tele penisu, znížená expresia -SMA v kavernóznom tele penisu, narušená štruktúra intersticiálneho tkaniva semenníkov, morfologické zmeny buniek hladkého svalstva a zhoršenie fibrózy u diabetových potkanov sú dôležitými fenotypovými vlastnosťami tejto choroby. Preskúmanie diagnózy a liečby tohto ochorenia s týmito fenotypovými znakmi bude mať veľký význam.
Kľúčové slová:diabetes mellitus;erektilná dysfunkcia; sexuálna funkcia; sexuálny hormón; - Expresia aktínu hladkého svalstva
Bylinné cistanche doplnky na erektilnú dysfunkciu spôsobenú cukrovkou
Diabetes mellitus (DM)je už dlho ústredným bodom pozornosti na domácom aj medzinárodnej úrovni kvôli jeho vysokému výskytu a prevalencii [1]. Rôzne komplikácie vyvolané DM významne ovplyvňujú kvalitu života pacientov. Medzi nimi výskyterektilná dysfunkcia (ed)u mužovPacienti s DMje výrazne zvýšený. V súčasnosti sa DM stala vysoko rizikovou skupinou pre ED [2–3]. Preto vykonávanie hĺbkových štúdií oDM-indukovaný ED (DMed)Má veľký význam. Cieľom tejto štúdie je pozorovať účinky DM na erektilnú funkciu, pohlavné hormóny, úrovne expresie -smooth svalového aktínu (-SMA) v penisovom kavernóznom tele a morfológia semenníkových intersticiálnych aPenile Cavernous hladký svalTkanivá u potkanov, predbežné skúmanie potenciálneho patologického základu ED vyvolaného DM.
1 materiály a metódy
1.1 Experimentálne zvieratá a činidlá
Vybralo sa dvadsať dospelých samcov SD potkanov SD s rovnomernou telesnou hmotnosťou. Medzi hlavné experimentálne činidlá patrili streptozotocín (STZ) a apomorfín (APO), ako aj protilátky potrebné na detekciu expresie -SMA. Túto štúdiu schválila Výbor pre starostlivosť o zvieratá a etiku zvierat v nemocnici Dongzhimen, Pekingská univerzita čínskej medicíny (č. 17-04).
1.2 Experimentálne metódy
1.2.1 Vytvorenie modelu diabetického potkana
Twenty experimental SD rats were randomly divided into a control group (5 rats) and a diabetes group (15 rats). STZ was dissolved in citrate buffer to prepare a 10 mg/mL solution. The diabetes group was intraperitoneally injected with STZ solution at a dose of 55 mg/kg to induce the DM model rats. Blood glucose levels >16,7 mmol/l kedykoľvek po 5 dňoch intraperitoneálnej injekcie STZ sa považovala za štandard pre úspešné zriadenie modelu DM [4].
1.2.2 Test erektilnej funkcie u potkanov
Po potvrdení úspešného modelovania DM sa potkany odvážili a umiestnili sa do priehľadnej sklenenej skrinky. Rozpúšťadlo APO (100 ug/kg) sa subkutánne vstrekalo na zadnej strane krku na základe telesnej hmotnosti. Okolité prostredie bolo udržiavané tiché a vnútorné osvetlenie bolo upravené na úroveň, ktorá je dostatočná na pozorovanie erekcie penisu u potkanov. Bol pozorovaný a zaznamenaný počet erekcií penisu do 30 minút po subkutánnej injekcii. Kritériá pre erekciu penisu: zväčšenie penisu, stiahnutie predkožky, vystavenie žlakom sprevádzané hyperémiou a začervenaním a viditeľnosť stredných a dolných segmentov penisu.
1.2.3 Meranie pohlavných hormónov u potkanov
Hladiny sexuálnych hormónov v sére v týchto dvoch skupinách sa merali pomocou metódy RadioIMmunoAsAy podľa špecifických postupov uvedených v pokynoch RadioIMmunoAssay Kit.
1.2.4 Histopatologické pozorovanie semenníkového intersticiálneho tkaniva
Po zbere krvi z brušnej aorty potkanov sa pravý semenník rovnomerne extrahoval. Semenník bol premytý pufrom PBS a plne fixovaný v paraformaldehyde počas 72 hodín. Tkanivo bolo zabudované do parafínu, rozrezané, zafarbené hematoxylínom-eozínom (H&E) a pozorované pre histologické charakteristiky.
1.2.5 Pozorovanie penisovej kavernóznej fibrózy u potkanov
Po zbere krvi z brušnej aorty bolo penisové tkanivo vyrezané a premyté pufrom PBS. Tkanivo bolo úplne fixované v paraformaldehyde počas 72 hodín, vložené do parafínu, rozdelené a zafarbené Massonovým trichrómom. Relatívny obsah vlákien hladkého svalstva/kolagénu v penisovom kavernóznom tkanive každej skupiny bol pozorovaný pod mikroskopom.
1.2.6 Meranie hladín expresie -SMA v penisovom kavernóznom tkanive
Penilné kavernózne tkanivo bolo vystavené rutinnej deparafinizácii do vody, premyté pufrom PBS po dobu 5 minút a vystavené mikrovlnnej tepelnej opravy v citrátovom pufri (pH 6. {{}}) počas 20 minút. Po ochladení na teplotu miestnosti sa tkanivo trikrát premyli PBS, zakaždým 3 minúty. 3% roztok peroxidu vodíka sa aplikoval v tmavej miestnosti pri teplote miestnosti počas 15 minút, po ktorom nasledovalo premytie PBS. Potom bola pridaná protilátka SMMA a tkanivo sa inkubovalo cez noc pri 4 stupni. Po návrate na teplotu miestnosti sa tkanivo premylo PBS, inkubované so sekundárnou protilátkou pri 37 stupňoch počas 30 minút a znova sa premylo PBS. DAB sa použil na vývoj farieb v tme a reakcia bola ukončená vodou. PBS sa použil ako náhrada za primárnu protilátku ako negatívnu kontrolu a kvantitatívna analýza sa uskutočnila pomocou obrazového analyzátora.
1.3 Štatistické metódy
Údaje zozbierané v tejto štúdii boli usporiadané pomocou Microsoft Excel a potom analyzované pomocou SPSS 25. 0 na štatistické testovanie. Údaje každej skupiny sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (x̄ ± s). P-hodnota menšia ako 0. 0 5 (p <0,05) sa považovala za štatisticky významnú.
2 výsledky
2.1 Porovnanie zmien telesnej hmotnosti a glukózy v krvi medzi týmito dvoma skupinami
Pozri tabuľku 1.
2.2 Porovnanie miery erekcie penisu medzi týmito dvoma skupinami
Pozri tabuľku 2.
2.3 Porovnanie hladín sexuálneho hormónu v sére medzi týmito dvoma skupinami
Pozri tabuľku 3.
2.4 Patologické pozorovanie semenníkového intersticiálneho tkaniva medzi týmito dvoma skupinami
Testikulárne intersticiálne tkanivo kontrolnej skupiny sa javilo ako normálne. Intersticiálne bunky mali okrúhle alebo oválne tvary, s pravidelnou morfológiou, normálnym medzibunkovým rozstupom, usporiadaným usporiadaním a bez významného zníženia počtu buniek. Naopak, diabetická skupina vykazovala semenník intersticiálny edém, nepravidelnú morfológiu buniek, voľné medzibunkové priestory, narušené usporiadanie, narušené intracelulárne štruktúry a príznaky dediferencie v niektorých bunkách a stratili štrukturálne znaky. Pozri obrázok 1.
| Zoskupenie | Veľkosť vzorky (n) | Základná telesná hmotnosť (G) | Telesná hmotnosť 5 dní po modelovaní (G) | Glukóza v krvi 5 dní po modelovaní (mmol/l) | Telesná hmotnosť pred obeťou (g) | Glukóza v krvi pred obeťou (mmol/l) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Skupina s cukrovkou | 15 | 220.4 ± 5.5 | 264.2 ± 10.8** | 24.3 ± 5.0** | 316.7 ± 16.4** | 25.2 ± 5.1** |
| Kontrolná skupina | 5 | 220.0 ± 5.2 | 286.2 ± 10.1 | 4.9 ± 1.3 | 319.1 ± 13.9 | 6.8 ± 1.2 |
Poznámka: V porovnaní s kontrolnou skupinou,P <0. 01.
Tabuľka 2: Porovnanie miery erekcie penisu medzi dvoma skupinami
| Zoskupenie | Veľkosť vzorky (n) | Pozitívne prípady v teste erekcie (n) | Miera erekcie (%) |
|---|---|---|---|
| Skupina s cukrovkou | 15 | 5 | 33.3** |
| Kontrolná skupina | 5 | 4 | 80.0 |
Poznámka: V porovnaní s kontrolnou skupinou,P <0. 01.
Tabuľka 3: Porovnanie hladín pohlavného hormónu v sére medzi dvoma skupinami (X̄ ± S)
| Zoskupenie | Veľkosť vzorky (n) | T (nmol·l⁻⁻) | Fsh (iu · l⁻⁻) | Lh (ng · l⁻⁻) |
|---|---|---|---|---|
| Skupina s cukrovkou | 15 | 3.38 ± 0.87** | 8.49 ± 3.06** | 489 ± 50.12** |
| Kontrolná skupina | 5 | 6.04 ± 1.26 | 5.98 ± 1.03 | 386 ± 40.73 |
Poznámka: V porovnaní s kontrolnou skupinou,P <0. 01.
2.4 Patologické pozorovanie semenníkového intersticiálneho tkaniva medzi dvoma skupinami
V kontrolnej skupine sa semenné intersticiálne tkanivo javilo normálne, pričom intersticiálne bunky boli okrúhle alebo oválne tvarované, vykazujúce pravidelnú morfológiu, normálne medzibunkové priestory a usporiadanie usporiadania. Počet buniek nepreukázal žiadne významné zníženie. V porovnaní s kontrolnou skupinou vykazovala diabetická skupina semennícky intersticiálny edém, nepravidelne tvarované bunky, voľné medzibunkové priestory, narušené usporiadanie, narušené intracelulárne štruktúry a príznaky dedifferencie v niektorých bunkách a stratili svoje štrukturálne vlastnosti. Pozri obrázok 1.
2.5 Pozorovanie penisovej kavernóznej fibrózy medzi dvoma skupinami
Massonovo zafarbenie sa použilo na pozorovanie rozdielov v stupni fibrózy v penisovom kavernóznom tkanive medzi týmito dvoma skupinami. V diabetickej skupine bol podiel kolagénových vlákien významne vyšší, so zvýšením relatívneho obsahu, zatiaľ čo podiel buniek hladkého svalstva bol menší, so znížením relatívneho obsahu. Pozri obrázok 2.
Obrázok 1 Výsledky farbenia semenníkov v dvoch skupinách (× 10, n=3)
Obrázok 2 Výsledky farbenia Massona Corpora Cavernosa v dvoch skupinách (× 4, n=3)
2.6 Expresia -SMA v bunkách hladkého svalstva Corpus Cavernosum v dvoch skupinách
Imunohistochémia sa použila na detekciu expresie -SMA v týchto dvoch skupinách. V porovnaní so slepou skupinou bola hnedo -žltá zafarbená časť v diabetickej skupine významne znížená, to znamená, že pozitívna expresia -SMA v diabetickej skupine bola významne znížená. Pozri obrázok 3.
Obr. 3 Imunohistochemické výsledky Corpus Cavernosum v dvoch skupinách (× 10, n=3)
