Glykozidy Cistanche zlepšujú učenie a pamäť u potkanieho modelu vaskulárnej demencie

pre viac informácií:{0}}

J. CHEN1,2, S.-N. ZHOU1, Y.-M. ZHANG2, Y.-L. FENG2, S. WANG2

1 Neurologická klinika, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan, Čína. & Brain Science Research Institute, Shandong University, Shandong, PR Čína

2Neurologická klinika, Ľudová nemocnica autonómnej oblasti Vnútorné Mongolsko, PR Čína

Jin Chen a Yan-Mei Zhang prispeli k tejto štúdii rovnakým dielom

Abstraktné.– CIEĽ:Glykozidy cistanche(GC) sú extrahované z Xin JiangCistanche, ktorá je široko používaná ako čínska bylina. Cieľom tejto štúdie je zhodnotiť účinky GC na vaskulárnu demenciu (VD).

MATERIÁLY A METÓDY: Model VD bol vytvorený podviazaním obojstrannej spoločnej krčnej tepny u dospelých potkanov kmeňa Wistar, ktorým sa denne ip podával fyziologický roztok, GC (10 mg/kg telesnej hmotnosti/d, ip) alebo oxiracetam (450 mg/kg telesnej hmotnosti/d, ip) počas 14 dní. Test Morris Water Maze ocenil kognitívnu výkonnosť potkanov. Hipokampus bol vypreparovaný a podrobený proteomickej a imunohistochemickej analýze. VÝSLEDKY: Skupina GC vykazovala signifikantne nižšiu únikovú latenciu ako skupina VD štyri a päť dní po operácii. Neukázali žiadny významný rozdiel v porovnaní so skupinou s falošnou operáciou a kontrolnou skupinou s oxiracetamom. V hipokampe vykazovalo 21 proteínových škvŕn v skupine GC rôzne úrovne expresie v porovnaní so skupinou VD. To zahŕňalo štyri proteíny, ktoré vykazovali významný rozdiel: tri upregulované proteíny proteín podobný tioredoxínu 1, mitogénom aktivovaná proteínkináza 1 s dvojitou špecifickosťou a proteín príbuzný dihydropyridináze 2 (CRMP-2) a jeden down-regulovaná proteínová glutatiónsyntetáza. Imunohistochemická analýza ukázala, že hladina proteínu P-tau bola signifikantne vyššia v skupine s modelom VD ako v skupine s falošnou operáciou (p < 0,05).="" po="" ošetrení="" gc="" hladina="" proteínu="" p-tau="" u="" vd="" modelových="" potkanov="" vykazovala="" významný="" pokles="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" vd="" ošetrenou="" fyziologickým="" roztokom="" (p="">< 0,05).="" závery:="" gc="" hrá="" rozhodujúcu="" úlohu="" pri="" ochrane="" hipokampálnych="" neurónov="" vo="" vd="" znížením="" fosforylácie="" p-tau="" a="" zvýšením="" hladiny="" expresie="" crmp-2.="" farmakologická="" manipulácia="" s="" gc="" ponúka="" novú="" možnosť="" liečby="">

Kľúčové slová:

Vaskulárna demencia, Glykozidy cistanche, Proteomika, P-tau, proteín súvisiaci s dihydropyrimidinázou 2.

Kliknite na Cistanche a cistanche deserticola ma na zlepšenie pamäte

Úvod

Vaskulárna demencia (VD) je druhou najčastejšou senilnou demenciou a je spôsobená najmä ischemickou cerebrovaskulárnou chorobou. VD vedie k heterogénnemu kognitívnemu poškodeniu a sú potrebné nové účinné terapeutické lieky, ktoré liečia alebo zabraňujú progresii VD1. Stále však neexistuje účinná čínska bylina na zlepšenie kognitívnej poruchy vyvolanej cerebrálnou ischémiou.

Glykozidy cistanche (GC) sú široko používané ako bylina s neuroprotektívnymi účinkami. Výťažok z Herba Cistanches zdokonaľujeučenie a pamäťmyší podporovaním diferenciácie neurónových buniek, rastu neuritov a tvorby synapsií2. Glykozidy cistanche môžu zabrániť apoptóze v neurónoch cerebelárnych granúl a prejaviť antiapoptózny účinok inhibíciou aktivácie kaspázy-3 a kaspázy-83. Echinakozid, hlavná aktívna zložka Herba Cistanches, postačuje na ochranu neurónových buniek pred poškodením rotenónom aktiváciou signalizácie Trk4. Mechanizmy, ktorými GC zlepšuje kognitívne poškodenie pri VD, sú však stále do značnej miery neznáme.

Tau proteín je neuronálny mikrotubulový proteín, ktorý stabilizuje neurónové mikrotubuly. Fosforylácia proteínu tau (P-tau) ovplyvňuje jeho schopnosť interagovať s mikrotubulmi a ovplyvňuje synaptický prenos. Akumulácia neurofibrilárnych klbiek (NFT) pozostáva z proteínu P-tau a je jednou z hlavných charakteristík Alzheimerovej choroby (AD)5. Je dobre známe, že VD a AD sú dve najčastejšie ochorenia demencie. Zdieľajú spoločnú koreláciu s vaskulárnymi rizikovými faktormi, ako je hypertenzia, diabetes mellitus a hypercholesterolémia. Preto sa P-tau môže podieľať aj na VD.

Hodnotili sme účinky GC naučivo-pamäťová funkciana potkanom modeli VD a vykonali proteomiku a imunohistochemickú analýzu na hipokampe potkanov VD, aby poskytli pohľad na neuroprotektívne účinky GC. Naše výsledky ukázali, že GCzlepšené učenie a pamäťu VD potkanov a zmenili hladiny proteínov, ako je P-tau u VD potkanov.

Materiály a metódy

Zvieratá

Šesťmesačné samce potkanov Wistar (hmotnosť 230- 270 g) boli poskytnuté z centra pre experimentálne zvieratá v provincii Hubei v Číne. Všetky experimentálne postupy na zvieratách sa uskutočňovali podľa Smerníc pre starostlivosť o zvieratá a miestnych etických predpisov nemocnice Wuhan č. 1, Čína. Číslo etického schválenia je 00014834. Zvieratá boli umiestnené oddelene v skupinách po 4 na klietku pri 25 stupňoch s cyklom 12-hodina svetlo/12-hodina tma a voľný prístup k potrave a vode. Zvieratá (n=45) boli náhodne rozdelené do štyroch skupín: modelová skupina (n=12), skupina s falošnou operáciou (n=11), skupina liečená GC (n{14} }) a kontrolná skupina liečená oxiracetamom (n=10).

Bilaterálne podviazanie spoločnej krčnej tepny (2-VO)

V hlbokej anestézii s 10 percentami chloralhydrátu (reagent Tianjin Damao Chemical Reagent Factory, Tianjin, Čína) (350 mg/kg telesnej hmotnosti,

ip) sa obojstranné spoločné krčné artérie (CCA) opatrne oddelili od okolitých tkanív a potom sa tesne podviazali stehom. Koža sa následne zrekonštruovala a potkany sa následne udržiavali pri teplote miestnosti a vrátili sa do domácej klietky až do resuscitácie. Kontrolné potkany s falošnou operáciou boli podrobené rovnakému chirurgickému postupu bez ligácie CCA. Potkany VD boli liečené GC (10 mg/kg telesnej hmotnosti/d, ip) alebo oxiracetamom (450 mg/kg telesnej hmotnosti/d, ip) bezprostredne po operácii počas 14 po sebe nasledujúcich dní. Modelovej skupine sa injikoval rovnaký objem normálneho fyziologického roztoku.

Morrisov test vo vodnom bludisku

Test MWM sa uskutočnil podľa vyššie opísanej metódy7. Testovacia oblasť pozostávala z kruhového bazéna naplneného vodou (25 ± 1 stupeň), ktorý bol nepriehľadný mliekom, takže potkany neboli schopné vidieť podvodnú plošinu 1 cm pod hladinou vody. Bazén bol rozdelený do štyroch kvadrantov (označené zóny I, II, III a IV) a plošina bola ponorená do zóny II. Vizuálne signály boli umiestnené na stene testovacej miestnosti. Zvieratá sa umiestnili do vody v jednom zo štyroch počiatočných kvadrantových bodov, ktoré sa v priebehu pokusov náhodne menili. Potkany dostali 2 minúty, aby našli plošinu a sedeli na nej 15 sekúnd. Potkany, ktoré nedokázali nájsť miesto v danom čase, boli jemne vedené na plošinu a nechali na nej zostať 15 sekúnd. Na zaznamenanie dráhy plávania, latencie, vzdialenosti plávania a času v každej zóne sa použil automatický sledovací systém. Všetky potkany boli usmrtené dva týždne po MWM teste na následnú analýzu.

Extrakcia bielkovín

V hlbokej anestézii s 10 percentami chloralhydrátu boli všetky potkany podrobené testu MWM dekapitované. Hipokampálne tkanivá sa rýchlo zozbierali na ľade a potom sa okamžite zmrazili v tekutom dusíku. Všetky tkanivá boli homogenizované pod tekutým dusíkom s použitím trecej misky a tĺčika a zozbierané v lyzovacom pufri (7 M močovina, 2 M tiomočovina, 2 percentá CHAPS, 20 mM Tris). Nerozpustné častice sa odstránili centrifugáciou pri 12, 000 otáčkach za minútu počas 20 minút pri 4 stupňoch. Kontaminované nukleové kyseliny vo vzorkách boli rozrušené prerušovanou sonickou osciláciou počas 5 minút. Supernatanty sa zhromaždili po centrifugácii za rovnakých podmienok, ako je opísané vyššie. Koncentrácia proteínu v supernatantoch sa merala Bradfordovým testom a supernatanty sa skladovali pri 80 °C.

Dvojrozmerná gélová elektroforéza

Proteínové alikvóty (120 ug) boli upravené rehydratačným pufrom (7M močovina, 2M tiomočovina, 4 percentá CHAPS, 1 percento hmotn./obj. DTT, 0,5 percentný IPG pufor a stopa brómfenolovej modrej) v objeme 350 µl. Izoelektrické zaostrovanie (IEF) sa uskutočňovalo v pásikoch IPG (pH 4-7, veľkosť 22 cm) pri 30}0 V počas 12 minút, 700 V počas 18 minút, 1500 V počas 1,5 hodiny, 9900 V počas 3 h, 9990 V počas 6,5 h a potom 600 V počas 20 h na systéme Ettan IPGphor II (GE ETTAN IPGPHOR3). Po programe IEF boli prúžky ekvilibrované v IPG ekvilibračnom pufri I (6 M močovina, 2 percentá SDS, 30 percent glycerol, 0,375 M Tris, pH 8,8, 20 mg/ml DTT a stopy brómfenolovej modrej) a potom sa alkyluje (25 mg/ml jódacetamidu namiesto DTT v ekvilibračnom pufri) počas 15 minút. 2-DE sa uskutočnilo na 12,5 percentách SDS polyakrylamidových géloch (24 cm x 19,5 cm x 1,0 mm) s 0,5 percentným agarózovým tesniacim lepidlom, s použitím elektroforézneho systému Ettan DALT Six (GE ETTAN DALTsix, PA, USA). Elektroforéza sa uskutočňovala pri 2 W počas 45 minút, nasledovala separácia pri 17 W počas štyroch hodín, kým brómfenolová modrá takmer nedosiahla dno gélov. Proteínové škvrny sa vizualizovali farbením striebrom (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) v analytických géloch. 2-Premývačka DE vytvorená trojmo a z troch nezávislých proteínových extrakcií pre každú skupinu.

Preparatívna gélová elektroforéza

Vzorky proteínov (600 ug) zo štyroch skupín potkanov sa podrobili 2-DE podľa metódy opísanej vyššie. Proteínové škvrny sa vizualizovali farbením brilantnou modrou Coomassie (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) v preparatívnych géloch.

Akvizícia a analýza obrazu

Gélové obrázky boli zachytené na {{0}}DE Image Scanning system (UMAX Powerlook1100, VT, USA) a analyzované softvérom Image Master 2D Platinum 5.0 (GE, PA, USA). Proteínové škvrny boli detekované automaticky a potom manuálne upravené, aby sa odstránili pruhy, škvrny a artefakty.

Laserová desorpčná ionizácia s pomocou matrice – hmotnostná spektrometria s časom letu (MALDI-TOF-MS)

Na odtlačky peptidovej hmoty a následnú analýzu boli gély narezané na plátky a škvrny zafarbené Coomassie boli odfarbené a premyté 100 mM hydrogénuhličitanom amónnym a acetonitrilom, redukované DTT pri 60 stupňoch počas 40 minút a potom alkylované pomocou IAA 30 minút v tme. Gél bol zahrnutý v 50 ul 12 ng/ul modifikovaného trypsínového roztoku v 50 mM hydrogénuhličitanu amónnom (pH 8,6) pri 37 stupňoch cez noc. Peptidy sa extrahovali z gélovej zátky pomocou 1 percentá kyselina mravčia/2 percentá acetonitrilu a koncentrovali sa pomocou C-18 Zip-Tips. Digesty boli nanesené (štyri replikáty) na cieľ MALDI s použitím kyseliny a-kyano 4-hydroxyškoricovej (2 mg/ml v 50% acetonitrile, 0,1% TFA obsahujúcej 10 mM fosforečnanu amónneho) ako matrice. Spektrá boli získané na hmotnostnom spektrometri 4700 MALDI TOF/TOF (Applied Biosystems, NY, USA) a analyzované softvérom GPS Explorer TM (Applied Biosystems).

Imunohistochémia

Koronálne hipokampálne rezy boli fixované v 4 percentnom paraformaldehyde predtým, ako boli zapustené do parafínu a potom narezané na 4- µm hrubé rezy. Koronálne hipokampálne rezy dokončené v časti Depart boli spracované na potlačenie aktivity endogénnej peroxidázy s použitím 3 percent H202 vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom. Nešpecifické imunoreakcie boli blokované pri teplote miestnosti počas 15 minút. Rezy sa potom inkubovali s P-tau protilátkou a sekundárnou protilátkou pri teplote miestnosti počas 3 0 min a vizualizovali sa po reakcii 3,3'-diaminobenzidín tetrahydrochloridu (Dako, Tokio, Japonsko). Obrázky boli zachytené pomocou svetelného mikroskopu (Olympus, Tokio, Japonsko) a spracované pomocou softvéru Photoshop (verzia 7.0, Adobe, San Jose, CA, USA).

Štatistická analýza

Kvantitatívne údaje boli vyjadrené ako priemer ± SD. Dvojcestná analýza rozptylu (ANOVA) sa uskutočnila pomocou analytického softvéru SPSS 10.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). p < 0,05="" sa="" považovalo="" za="">

Výsledky

GC podporuje učenie a pamäť u potkanov VD

Na vyhodnotenie účinkov GC na kognitívne funkcie modelu potkanov VD sme vykonali test MWM. V teste MWM skupina GC vykazovala signifikantne nižšiu únikovú latenciu ako skupina VD 4 a 5 dní po operácii, ale nevykazovala žiadny významný rozdiel v porovnaní so skupinou s falošnou operáciou a kontrolnou skupinou s oxiracetamom (tabuľka I). Tieto údaje naznačujú, že GC podporuje učenie a pamäť u potkanov VD. GC mení proteomické profily hipokampu potkanov VD.

Proteomickou analýzou hipokampu potkanov sme zistili, že 21 proteínových škvŕn v skupine GC vykazovalo rôzne úrovne expresie v porovnaní so skupinou VD. Medzi nimi štyri proteíny vykazovali významný rozdiel v hipokampe GC potkanov (tabuľka II): vrátane troch upregulovaných proteínov proteínu podobného tioredoxínu 1 (TXNL 1), mitogénom aktivovanej proteínkinázy 1 s dvojitou špecifickosťou (MAPKK 1) a proteín 2 súvisiaci s dihydropyrimidinázou (DPYSL2); a jednu down-regulovanú proteín glutatiónsyntetázu (GCL). Typické profily dvojrozmernej gélovej elektroforézy (2-DE) DPYSL2 sú znázornené na obrázku 1.

GC moduluje hladinu P-tau v hippocampe potkanov VD

Imunohistochemickou analýzou sme zistili, že hladina proteínu P-tau bola signifikantne vyššia v skupine s modelom VD ako v skupine s falošnou operáciou (p < 0.05).="" po="" ošetrení="" gc="" hladina="" proteínu="" p-tau="" u="" vd="" modelových="" potkanov="" vykazovala="" významný="" pokles="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" vd="" ošetrenou="" fyziologickým="" roztokom="" (p="">< 0,05),="" ale="" nevykazovala="" žiadny="" významný="" rozdiel="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" s="" oxiracetamom="" (obrázok="">

Diskusia

VD je spôsobená poruchou pamäti a kognitívnych funkcií, ktorú spôsobujú najmä cerebrovaskulárne ochorenia8,9,10,11. Model oklúzie dvoch ciev (2VO) je jednoduchý a stabilný a uznávaný ako štandardný model cerebrálnej ischémie. V tejto štúdii sme použili model 2VO na vytvorenie zvieracieho modelu VD. Testom MWM sme zistili, že skupina VD vykazovala zníženú kognitívnu schopnosť v porovnaní so skupinou s falošnou operáciou, čo potvrdzuje, že sme úspešne vytvorili model VD. Na základe tohto modelu sme zistili, že liečba GC zlepšila priestorovú kognitívnu schopnosť potkanov VD v podobnom rozsahu s oxiracetamom, čo je pozitívna kontrola. Tieto údaje naznačujú, že GC by mohla podporovať priestorové učenie a zhoršenie pamäti pri VD.

Aby sme preskúmali mechanizmus, ktorým GC vykazuje neuroprotektívne účinky na VD, použili sme proteomický prístup na skríning odlišne exprimovaných proteínov v hipokampe potkanov VD. Zistili sme, že niekoľko proteínov súvisiacich s energetickým metabolizmom, skladaním proteínov, signálnou dráhou a cytoskeletom vykazovalo odlišné expresie v hipokampe potkanov VD liečených GC v porovnaní s tými, ktorí boli liečení fyziologickým roztokom ako kontrolou.

Jedným z rozdielne exprimovaných proteínov je DPYSL2, tiež známy ako proteín mediátorovej odozvy na kolaps-2 (CRMP{2}}), ktorý je obohatený o distálnu časť rastúcich axónov v primárnych hipokampálnych neurónoch a je rozhodujúci pre diferenciáciu axónov. a rast neurónov12,13. Okrem toho CRMP-2 podporuje zostavovanie mikrotubulov a sprostredkúva signalizáciu Ras na zvýšenie tvorby viacerých axónov a neuronálnej polarity14,15. V tejto štúdii sa hladina proteínovej expresie CRMP-2 zvýšila 2,28-krát v skupine GC v porovnaní so skupinou VD, čo naznačuje dôležitú úlohu CRMP-2 v potenciálnych opravných mechanizmoch tvorby neurónovej siete a udržiavanie polarity neurónov pri VD.

Okrem toho sme v tejto štúdii zistili vyššiu P-tau v skupine modelov VD, ale nižšiu expresiu P-tau po liečbe GC. Proteín Tau hrá kľúčovú úlohu v morfogenéze neurónov. V určitých patologických situáciách môže proteín P-tau vytvárať aberantné agregáty, ktoré sú toxické pre neuróny, ovplyvnením mitochondriálnej funkcie15. Predchádzajúce štúdie naznačujú, že GC môže zvýšiť mitochondriálny energetický metabolizmus s antioxidačnou funkciou16, 17, 18. Je zaujímavé, že fosforylácia CRMP-2 bola tiež charakterizovaná ako zložka neurofibrilárnych spletí pri AD.

Závery

CRMP2 je bežne fosforylovaný proteínkinázou závislou od cyklínu-5 (Cdk5) a kinázou glykogénsyntázy-3 (GSK3) v mozgu pacientov s AD, rovnakými kinázami, ktoré fosforylujú proteín tau za vzniku NFT19,20. Sú potrebné ďalšie štúdie, aby sa preskúmalo, či GC reguluje úroveň expresie P-tau a CRMP2 vo VD reguláciou aktivity Cdk5 a GSK321,22,23. V súhrne naše údaje naznačujú, že GC hrá rozhodujúcu úlohu pri ochrane hipokampálnych neurónov VD, a to znížením fosforylácie P-tau a zvýšením úrovne expresie CRMP-2. Farmakologická manipulácia GC ponúka novú príležitosť pre rozvoj terapie proti VD.

Poďakovanie

Túto štúdiu podporila Špeciálna nadácia pre Taishanských vedcov a Národný fond prírodných vied (30960520).

Konflikt záujmov

Autori vyhlasujú, že neexistujú žiadne konflikty záujmov.

Referencie

1)GORELICK PB, PANTONI L. Pokroky pri vaskulárnom kognitívnom postihnutí. Mŕtvica 2013; 44: 307-308.

2)CHOI JG, MOON M, JEONG HU, KIM MC, KIM SY, OH MS. Cistanches Herba zlepšuje učenie a pamäť indukciou nervových rastových faktorov. Behav Brain Res 2011; 216: 652-658.

3) TIAN XF, PU XP. Fenyletanoidové glykozidy z Cistanches salsa inhibujú apoptózu indukovanú 1-metyl-4-fenylpyridíniovým iónom v neurónoch. J Ethnopharmacol 2005; 97: 59-63.

4)ZHU M, LU C, LI W. Prechodná expozícia echinakozidu je dostatočná na aktiváciu signalizácie Trk a ochranu neurónových buniek pred rotenónom. J Neurochem 2013; 124: 571-580.

5)MEDINA M, AVILA J. Nové pohľady na úlohu tau pri Alzheimerovej chorobe. Dôsledky pre terapiu. Biochem Pharmacol 2014; 88: 540-547.

6) NING M, ZHANG Z, CHEN Z, ZHAO T, ZHANG D, ZHOU D, LI W, LIU Y, YANG Y, LI S, HE L. Genetické dôkazy, že vaskulárna demencia súvisí s Alzheimerovou chorobou: genetická asociácia tween tau polymorfizmus a vaskulárna demencia v čínskej populácii. Age Ageing 2011; 40: 125-128.

7) CAIN DP, BOON F. Podrobná behaviorálna analýza odhaľuje stratégie úloh aj poruchy priestorovej pamäte u potkanov, ktorí dostali bilaterálnu mŕtvicu strednej cerebrálnej artérie. Brain Res 2003; 972: 64-74.

8) ZHONG G, WANG Y, ZHANG Y, GUO JJ, ZHAO Y. Fajčenie je spojené so zvýšeným rizikom demencie: metaanalýza prospektívnych kohortových štúdií so skúmaním potenciálnych modifikátorov účinku. PLoS One 2015; 10: e0118333.

9) NETO E, ALLEN EA, AURLIEN H, NORDBY H, EICHELE T. EEG spektrálne znaky rozlišujú medzi Alzheimerovou a vaskulárnou demenciou. Predný Neurol 2015; 6:25.

10)CALABRÒ RS, DE LUCA R, LEO A, BALLETTA T, MARRA A, BRAMANTI P. Lokomat tréning pri vaskulárnej demencii: motorické zlepšenie a ešte viac! Aging Clin Exp Res 2015 12. marca.

11)UTKAN T, YAZIR Y, KARSON A, BAYRAMGÜRLER D. Etanercept zlepšuje kognitívnu výkonnosť a zvyšuje expresiu eNOS a BDNF počas experimentálnej vaskulárnej demencie pri diabete vyvolanom streptozotocínom. Curr Neurovasc Res 2015 11. marca.

12) ZHOU LS, ZHAO GL, LIU Q, JIANG SC, WANG Y, ZHANG DM. Utlmenie proteínu mediátora odozvy na kolaps-2 preprogramuje fenotyp makrofágov a zlepší hojenie infarktu v experimentálnom modeli infarktu myokardu. J Inflamm (Londýn) 2015; 12:11.

13) WILSON SM, KI YEON S, YANG XF, PARK KD, KHANNA R. Diferenciálna regulácia fosforylácie mediátorového proteínu 2 odpovede na kolaps (CRMP2) pomocou GSK3ß a CDK5 po traumatickom poranení mozgu. Front Cell Neurosci 2014; 8:135.

14)LIM NK, HUNG LW, PANG TY, MCLEAN CA, LIDDELL JR, HILTON JB, LI QX, WHITE AR, HANNAN AJ, CROUCH PJ. Lokalizované zmeny kinázy glykogénsyntázy-3 a proteínu mediátora odozvy na kolaps-2 v mozgu postihnutom Huntingtonovou chorobou. Hum Mol Genet 2014; 23: 4051-4063.

15) BRUSTOVETSKY T, PELLMAN JJ, YANG XF, KHANNA R, BRUSTOVETSKY N. Proteín mediátora kolapsínovej odozvy 2 (CRMP2) interaguje s N-metyl-D-aspartátovým (NMDA) receptorom a Na plus /Ca2 plus ex-meničom a reguluje ich funkčná činnosť. J Biol Chem 2014; 289: 7470-7482.

16) DONG B, YUAN X, ZHAO Q, FENG Q, LIU B, GUO Y, ZHAO B. Vodná dvojfázová extrakcia fenyletanoidných glykozidov z kmeňov Cistanche deserticola YC Ma za pomoci ultrazvuku. J Sep Sci 2015 Jan 21. [Epub pred tlačou].

17)HU GS, JIA JM, KIM DH. Účinky podávania tyrozínu a fenylalanínu na akumuláciu fenyletanoidných glykozidov do bunkovej suspenznej kultúry Cistanche deserticola. Chin J Nat Med 2014; 12: 367-372.

18) DONG S, GAO R, YANG Y, GUO M, NI J, ZHAO L. Simultánne stanovenie fenyletanoidných glykozidov a aglykónov kapilárnou zónovou elektroforézou s bežiacim modifikátorom pufra. Anal Biochem 2014; 449: 158-163.

19) XIONG WT, GU L, WANG C, SUN HX, LIU X. Antihyperglykemické a hypolipidemické účinky Cistanche tubulosa u diabetických db/db myší 2. typu. J Ethnopharmacol 2013; 150: 935-945.

20) LIU B, OUYANG J, YUAN X, WANG L, ZHAO B. Adsorpčné vlastnosti a preparatívna separácia fenyletanoidových glykozidov z Cistanche deserticola použitím makroporéznych živíc. J Chro- motor B Analyt Technol Biomed Life Sci 2013; 937: 84-90.

21) CALDERÓN-RIVERA A, SANDOVAL A, GONZÁLEZ-RAMÍREZ R, GONZÁLEZ-BILLAULT C, FELIX R. Regulácia neurónových cav3.1 kanálov cyklín-dependentnou kinázou 5 (cdk5). PLoS One 2015; 10: e0119134.

22)CASTRO-ALVAREZ JF, URIBE-ARIAS A, CARDONA-GÓMEZ GP. Zacielenie na cyklín-dependentnú kinázu 5 zabraňuje agregácii b-amyloidu zahŕňajúcu glykogénsyntázovú kinázu 3b a fosfatázy. J Neurosci Res 2015 24. februára [Epub pred tlačou].

23) ROUGET R, SHARMA G, LEBLANC AC. Cyklín-dependentná kináza 5 Fosforylácia familiárnych priónových proteínových mutantov zhoršuje konverziu na amyloidnú štruktúru. J Biol Chem 2015; 290: 5759- 5771.