HPLC Stanovenie echinakozidu v Cistanche Cistanche

HPLC stanovenie echinakozidu v Cistanche Cistanche

Ďalšie informácie:{0}}

Cieľ:HPLC stanovilo množstvoechinakozidvCistanchemletý v stave tekutého dusíka, ako aj v prirodzene vysušenom stave na vzduchu, porovnávajúc ho vdivoká cistancheaumelo pestované Cistanche.

Metódy:bol použitý lc{0}}systém HPLC (Shimadzu, Japonsko). Kolóna bola YMC inertsil ods-sp (4,6 mm x 150 mm, 5 um; YMC Co Ltd, Japonsko); Mobilná fáza: acetonitril-metanol-1 % kyselina mravčia (10:15:75); Detekčná vlnová dĺžka 334 nm; Prietok 0,7 mg · ml-1. Teplota kolóny 30 stupňov C.

Výsledky:rozdielne podmienky spracovania mali veľmi jasný vplyv na obsah echinakozidu, pričom vo všeobecnosti boli vyššie hladiny echinakozidu v Cistanche mletom pod tekutým dusíkom ako v mletom stave za podmienok prirodzeného sušenia na vzduchu; Obsah aktívnej zložky divočinyCistanchebola oveľa vyššia ako u umelej kultúry.

Kliknutím získate práškové produkty s extraktom Cistanche

Cistanche je ohrozený druh, parazitická rastlina, ktorá obýva korene Clostridium, Salix rubrum. V Číne sa Cistanche distribuuje najmä vo Vnútornom Mongolsku, Ningxia, Gansu a Xinjiang, s vynikajúcou povesťou „púštneho ženšenu“, ktorý má veľkú liečivú hodnotu. Jeho hlavnými liečivými zložkami sú fenyletanolové glykozidy, ktoré možno rozdeliť na echinakozid, listový cohozid, Cistanche a ďalšie v závislosti od ich substituentov. Medzi nimi má echinakozid zlepšenú sexuálnu funkciu, antioxidačné účinky a účinky na zachytávanie voľných radikálov, ale má aj niektoré antiapoptotické účinky. Od 80. rokov 20. storočia sa pri separácii prírodných produktov široko používa technológia HPLC, ktorá poskytuje jednoduchý a rýchly spôsob separácie fenyletanolových glykozidov. Na analýzu obsahu cistanche, hlavnej aktívnej zložky voľne rastúcej a umelo pestovanej cistanche, v rôznych obdobiach rastu bola zvolená metóda HPLC, ktorá poskytuje vedecký základ pre racionálny vývoj a využitie cistanche a pre efektívne hodnotenie jej kvality.

Nástroje a činidlá

Shimadzu, Japonsko lc-20aparatúra HPLC, lc-20na tandemovom dvojitom piestovom čerpadle, cto-20kolónová pec, spda-20detektor UV Vis s dvojitou vlnovou dĺžkou; Kunshan kq-100 ultrazvuková čistička; Acetonitril (chromatograficky čistý, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); metanol (chromatograficky čistý, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Kyselina mravčia (chromatograficky čistá, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); destilovaná voda

Kontrola: echineozid, obsah väčší alebo rovný 98,43 percent (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Päť vzoriek Cistanche: umelo vysadených na jeden rok s nasledujúcimi Cistanche, umelo vysadených pre Cistanche, umelo vysušených Cistanche, divokých Cistanche a umelo vysadených viac ako tri roky s Cistanche.

2 metódy a výsledky

2.1 stanovenie chromatografických podmienok

Aby sa oddelil vrchol meraného echineozidu v LC chromatograme od iných látok, ako aj aby sa tlak pumpy a časový harmonogram nachádzali vo vhodnom rozsahu, bola vykonaná experimentálna úprava chromatografických podmienok a po optimalizačných experimentov s mobilnou fázou sa dospelo k záveru, že čím vyššia teplota, tým kratší retenčný čas a nižšia koncentrácia, tým kratší je tlak čerpadla a nižší retenčný čas, ale výška píku sa zmenšila, čo bolo nepriaznivé pre meranie. Ako mobilná fáza sa nakoniec určilo acetonitril-metanol-1-percentná kyselina mravčia (10:15:75), detekčná vlnová dĺžka 334 nm, prietok 0,7 ml/min a teplota kolóny 30 stupňov C, podľa objektívnych podmienok izbovej teploty a maximálneho ložiskového tlaku čerpadla, čo viedlo k bohatým informáciám s ostrými tvarmi vrcholov a dobrou separáciou zložiek.

2.2 určenie stĺpcov

YMC-Inertsil ODS-SP (4,6 mm x 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japonsko).

2.3 príprava experimentálneho roztoku

2.3.1 príprava štandardných roztokov

Príslušné množstvo echineozidového štandardu sa presne odvážilo a pridalo sa k nemu mobilná fáza acetonitril-metanol-1-percentná kyselina mravčia (10:15:75), čím sa získalo 0.0 6 mg · ML - 1, 0.{17}}5 mg · ML {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ML - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 a 0,005 mg · ML - 1 roztoky štandardu echinakozidu.

2.3.2 príprava skúšobného roztoku

Príslušné množstvá umelo vysadeného čerstvého cistanche (do jedného roka), umelo čerstvého cistanche a voľne rastúceho čerstvého cistanche sa rozdrvili na prášok v mažiari pod tekutým dusíkom; Vhodné množstvo vyššie uvedeného 3 Cistanche sa tiež narezalo na bloky, vysušilo sa na vzduchu prirodzene v tieni a po vysušení sa rozdrvilo a rozdrvilo na prášok. Umelé suché cistanche a divé viac ako tri roky suché cistanche boli rozomleté ​​priamo na prášok. 0.5 g prášku Cistanche pripraveného vyššie sa odobralo a umiestnilo do centrifugačnej skúmavky, pridalo sa 25 ml mobilnej fázy, odvážilo sa a nechalo sa namočiť 30 min, sonikovalo sa 40 min, ochladilo sa a potom znovu odvážil, aby sa doplnila chýbajúca hmotnosť mobilnou fázou, pretrepal sa a odstredil a supernatant sa odobral na filtráciu 0,45 μM mikroporéznou filtračnou membránou.

2,4 grafy regresných kriviek pre štandardnú vzorku echinakozidu

Pripravené štandardné vzorky echineozidu sa vstrekli do LC prístroja oddelene a koncentrácia kontroly (mg · L{{0}}) sa použila ako os a zodpovedajúce plochy píkov sa zoradili na vynesenie grafu. štandardná krivka, výsledkom čoho je regresná rovnica: y=66 867 100x{2}}.83, R2=0.98637, ktorá ukázala echineozid pri 0,1 ~ 1,2 ug v rámci dobrého lineárneho vzťahu.

3 Diskusie

Echinakozid je jednou z hlavných aktívnych zložiek Cistanche, ktorá môže dobre predstavovať chemický základ farmakologického účinku Cistanche, čím sa zhoduje hodnotenie kvality liečivého materiálu a jeho farmakologického účinku a zlepšuje sa opodstatnenosť hodnotenia kvality Cistanche.

Rôzne podmienky spracovania mali jasný vplyv na obsah echinakozidu, pričom vo všeobecnosti boli vyššie hladiny echinakozidu v Cistanche mletom pod tekutým dusíkom ako v pôde za podmienok prirodzeného sušenia na vzduchu. Bežné sušenie vzduchom znížilo množstvo echineozidu, ktoré sa mohlo spotrebovať počas sušenia na vzduchu alebo premeniť. Aby sa predišlo poklesu obsahu účinnej látky a zaručila sa účinnosť Cistanche, mala by sa zvoliť vhodná liečba.

Stále väčšina verila, že umelé pestovateľské prostredie Cistanche, ako aj rastové návyky boli na nerozoznanie od voľnej prírody bez rozdielu v kvalite, mali tendenciu klásť dôraz len na výnos a neanalyzovali kvalitu. Táto štúdia ukázala, že množstvo umelo pestovaného echinakozidu Cistanche bolo nižšie ako množstvo divokého echinakozidu Cistanche. Najvyššia bola {{0}},3360 percent divokej cistanche a najnižšia bola 0.007 0 percent umelej cistanche. Preto ho ešte treba študovať v technológii pestovania, aby sa zlepšil obsah účinných látok.

Kvalita Cistanche závisí od množstva jeho účinnej látky, echinakozidu, ktorý má zase silný vzťah k ročnému obdobiu, času a spôsobu zberu, takže pri zbere Cistanche by sa mal brať do úvahy stav akumulácie účinnej látky a štádiu rastu a vývoja. Zvážte kvalitu aj výnos.

Metóda uvedená v tomto dokumente je jednoduchá, presná, reprodukovateľná a presná na stanovenie echineozidu. Užitočné na určenie Cistanche.