Hypotermia vyvolaná oxkarbazepínom po prechodnej ischémii predného mozgu poskytuje terapeutickú neuroprotekciu prostredníctvom prechodného potenciálu receptora Vaniloid typu 1 a 4 u pieskomilov, časť 3

4. Materiály a metódy

4.1. Experimentálne zvieratá

Samce pieskomilov (celkový počet=252) boli použité vo veku 6 mesiacov (telesná hmotnosť 63–78 g). Pieskomily boli chované v experimentálnom zvieracom centre Kangwon NationalUniversity (Chuncheon, Kórea).

Pieskomily sú veľmi roztomilé zvieratká. Žijú v púštnych oblastiach, sú dobrí v kopaní jaskýň a majú silné inštinkty na skladovanie a vyhľadávanie potravy. Medzi týmito malými chlapcami majú pieskomily obzvlášť dobrú pamäť, vďaka čomu ľudia chcú poznať ich tajomstvá.

Po prvé, keď samce pieskomilov hľadajú potravu, používajú na určenie smeru sériu signálov, ako sú orientačné body a terén. Dlhodobým pozorovaním a praxou si vybudovali vlastný „geografický informačný systém“. Naproti tomu samičky pieskomilov majú na tieto signály horšiu pamäť, najmä v neustále sa meniacom prostredí.

Po druhé, samce pieskomilov tiež vykazujú silnú pamäť pri boji s prirodzenými nepriateľmi. Podľa vedcov, keď sú pieskomily ohrozené, rýchlo vojdú do nory a pokúsia sa ujsť. Ale keď čelia rovnakej hrozbe, samce pieskomilov si zapamätajú spôsob útoku prirodzených nepriateľov a vyhnú sa im, čím sa zvýšia ich šance na prežitie.

Napokon, pamäť samcov pieskomilov spočíva aj v ich vzájomnom sociálnom správaní. Každý pieskomil má svoj jedinečný zápach. Keď sa stretnú s inými pieskomilmi, použijú svoj čuch na vzájomné identifikovanie identity a postavenia. Táto pamäťová schopnosť umožňuje pieskomilom nielen vytvoriť relatívne stabilné sociálne spojenie, ale je tiež dôležitou zárukou ich reprodukcie.

Stručne povedané, vzťah medzi samcami pieskomilov a pamäťou je neoddeliteľný. V procese hľadania prežitia a rozmnožovania v prírode sa spoliehajú na svoju silnú pamäť, aby sa neustále prispôsobovali prostrediu a zlepšovali sa. Ako ľudia by sme sa mali od týchto malých chlapcov učiť a neustále si zdokonaľovať pamäť, aby sme sa lepšie prispôsobili tomuto neustále sa meniacemu svetu. Je vidieť, že potrebujeme zlepšiť našu pamäť a Cistanche dokáže výrazne zlepšiť pamäť, pretože dokáže regulovať aj rovnováhu neurotransmiterov, ako je zvýšenie hladín acetylcholínu a rastových faktorov, ktoré sú veľmi dôležité pre pamäť a učenie. Okrem toho môže Cistanche tiež zlepšiť prietok krvi a podporiť dodávku kyslíka, čo môže zabezpečiť, aby mozog získal dostatočnú výživu a energiu, čím sa zlepší mozgová vitalita a vytrvalosť.

Kliknutím na položku Know zvýšite výkon pamäte

Pre túto štúdiu bol experimentálny protokol schválený (číslo schválenia KW-200113-1; dátum schválenia 18. februára 2020) výborom Institutional Animal Care and Use Committee.

Výskumný protokol sa držal smerníc navrhnutých v „Aktuálnych medzinárodných zákonoch a politikách“ Príručky pre starostlivosť a používanie laboratórnych zvierat, ktorú vydalo The National Academies Press (8. vydanie, 2011).

4.2. Experimentálne skupiny, indukcia tFI a liečby HyT a OXC

Aby sa preukázali ochranné účinky OXC proti ischemickému poraneniu po tFI u pieskomilov, boli pieskomily rozdelené do šiestich skupín: (1) skupina simulovaná + vehikulum (n=24); (2) skupina tFI + vehikulum (n {{5 }}); (3) sham+HyT skupina (n=24); (4) skupina tFI+HyT (n=60); (5) skupina simulovaná + OXC (200 mg/kg) (n=24); a (6) skupina tFI+OXC (n=60).

Sedem a päť gerbilov v troch skupinách tFI sa použilo na analýzu Western blot a histologické vyšetrenie 30 minút, 12 hodín, 1 deň, 2 dni a 4 dni po operácii tFI a v troch simulovaných skupinách sedem a päť pieskomily sa použili 30 minút a 4 dni po falošnej operácii, aby sa minimalizovali počty. V tomto experimente sa tFI vyvinul tak, ako bolo opísané vyššie [34].

Stručne povedané, gerbily boli anestetizované 2,5 % izofluránom (v 32 % kyslíka a 68 % oxidu dusného). V anestézii boli obe spoločné krčné tepny izolované z krčnej pošvy okludovanej svorkami na aneuryzmu (Yasargil Nemecko FE 723K) (Aesculap, Aesculap ) po dobu piatich minút.

Dokonalé zastavenie prívodu krvi do mozgu bolo potvrdené pozorovaním arteriálneho prietoku krvi v oboch sietnicových artériách (vetvy vnútorných karotidartérií) pomocou oftalmoskopu (HEINE K180®) od Heine Optotechnik (Herrsching, Nemecko).

Telesná teplota pred a počas operácie bola vo všetkých skupinách kontrolovaná pri normotermii (37 ± 0,2 ◦C) pomocou termometrickej prikrývky. Po piatich minútach oklúzie sa klipy odstránili.

V tejto štúdii bola vykonaná simulovaná operácia tak, že boli podrobení rovnakej operácii tFI bez oklúzie spoločných krčných tepien. HyT v dvoch simulovaných+HyT a tFI+HyT skupinách bol kontrolovaný (podobne ako zmena telesnej teploty v tFI+ OXC group) celotelovým ochladzovaním ľadovým obkladom počas šiestich hodín.

Telesná teplota dvoch simulovaných+OXC a tFI+OXC skupín sa zaznamenávala šesť hodín po okamžitej intraperitoneálnej injekcii 200 mg/kg OXC (Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA) po operácii tFI.

Dávka OXC bola zvolená na základe predchádzajúcej štúdie uvádzajúcej, že 200 mg/kg OXC účinne chránilo pred bunkovou smrťou v mozgu po [36]. Na zaznamenanie zmeny telesnej teploty sa merala telesná teplota v konečníku každú hodinu po tFI. 6 hodín pri teplote miestnosti (asi 22 ◦C).

Pieskomily dostali čas zotavenia štyri dni po tFI, pretože pyramídové bunky lokalizované v hipokampálnej oblasti CA1 začínajú odumierať štyri dni po tFI [30,34,62].

4.3. Test SMA

Test SMA bol vykonaný na skúmanie zmien hyperaktivity vo všetkých skupinách. Skrátka, ako už bolo opísané [63], test SMA sa uskutočnil 1. deň po tFI, pretože lokomotorická aktivita dosahuje najvyšší bod v 1. deň po ischemickom poškodení po tFI.

Pieskomily zo všetkých skupín boli adaptované na prostredie na dve hodiny a boli umiestnené do voľnej klietky (šírka 44 cm; dĺžka 44 cm; výška 30) získanej od Ugo Basile SRL (Gemonio, Taliansko), v ktorej boli dve paralelné horizontálne Inštalovali sa infračervené lúče 4 × 8 nad podlahou na jednu hodinu. SMA bol zaznamenaný pomocou Photobeam Activity System-Home Cage od San Diego Instruments (San Diego, CA, USA).

Pohyb (dráha a celková prejdená vzdialenosť) bol detekovaný prerušením poľa infračervených lúčov produkovaných fotobunkami.

SMA sa nepretržite monitorovala jednu hodinu a údaje sa zbierali pomocou analyzátora AMB od IPC Electronics (Cumbria, UK).

Zber údajov sa začal 15 minút po zvyknutí si v klietke na otvorenom poli. Nakoniec boli získané výsledky vyhodnotené ako vzdialenosť (metre) pohybu v testovacom období (jedna hodina).

4.4. Testy kognitívnych funkcií

4.4.1. RAMT

Na porovnanie priestorovej pamäte naprieč všetkými skupinami sa vykonala RAMT podľa doterajších štúdií [38,44]. Na tento test sa použilo radiálne 8-ramenné bludisko od Stoelting Co (Wood Dale, IL, USA).

Labyrintový nástroj pozostával z centrálnej plošiny a ôsmich ramien (každé rameno šírka 5 cm; výška 9 cm; dĺžka 35 cm). Pieskomily boli trénované raz denne po dobu troch dní pred.

Menovite, peletové krmivo získané od DBL Co (Chungbuk, Kórea) bolo umiestnené na koncovú časť každého ramena a každý pieskomil bol umiestnený na centrálnu plošinu. Potom pieskomil hľadal krmivo.

Po simulovanej alebo tFI operácii sa skutočný test vykonával raz denne počas štyroch dní počínajúc dňom po operácii.

Na analýzu sa vyhodnotil počet chýb, pričom jedna chyba sa vyskytla vždy, keď pieskomil vstúpil do ramena, ktoré už bolo predtým navštívené. Test bol ukončený, keď pieskomil skonzumoval krmivo.

4.4.2. PAT

Na porovnanie krátkodobej pamäte medzi skupinami sa PAT uskutočnil podľa predtým publikovaných metód [64,65] s určitými modifikáciami. Stručne povedané, pieskomily boli testované pomocou systému Gemini Avoidance System (GEM 392) od San Diego Instruments (SanDiego, CA, USA), ktorý pozostáva z dvoch (tmavých a svetlých) oddelení, ktoré spolu komunikujú prostredníctvom vertikálne posuvnej brány.

Experimentálne sedenia sa uskutočňovali v dvoch fázach: tréning a skutočný test vykonaný jeden deň pred a štyri dni po tFI alebo falošnej operácii.

Skutočný test bol vykonaný 20 minút po tréningu meraním času latencie (v sekundách) počas pobytu v tmavej miestnosti. Konkrétne počas tréningu bolo pieskomilovi umožnené voľne skúmať dve oddelenia počas jednej minúty, kým bola brána otvorená. .

Potom, keď pieskomil vošiel do tmavého priestoru, dvere sa zatvorili a pieskomil dostal elektrický šok (0.5 mA) z oceľovej mriežky na podlahe na päť sekúnd.

V skutočnej testovacej relácii, v deň 4 po tFI, bol gerbil umiestnený do svetlého oddelenia a bol zaznamenaný čas latencie vo svetlom oddelení pred vstupom do tmavého oddelenia.

4.5. Analýza Western Blot pre TRPV1 a TRPV4

Na vyšetrenie hladín expresie TRPV1 a TRPV4 v gerbilovom hipokampálnom CA1 sa uskutočnila technika Western blot podľa vyššie opísaných metód [66,67].

Stručne, podľa určeného harmonogramu (30 minút, 12 hodín, 1 deň, 2 dni a 4 dni po simulovanej alebo tFI operácii) sa pieskomilom (n=5 pre každú skupinu) podala anestézia na eutanáziu intraperitoneálnou injekciou s 200 mg/kg pentobarbitalu sodného (JW Pharm.Co., Ltd., Soul, Kórea).

Potom boli ich mozgy zozbierané a homogenizované s 50 mM fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom (PBS, pH 7,4) obsahujúcim 0,1 mM etylénglykol-bis (aminoetyléter)-N,N,N{{ 11}}, kyselina N0-tetraoctová (EGTA) (pH 8.0), 10 mM kyselina etyléndiamíntetraoctová (EDTA) (pH 8,0), 0,2 % Nonidet P{{17 }}, 15 mM pyrofosfát sodný, 100 mM glycerofosfát, 2 mM ortovanadát sodný, 50 mM NaF, 150 mM NaCI, 1 mM fenylmetylsulfonylfluorid (PMSF) a 1 mM ditiotreitol (DTT).

Potom sa vzorky odstredili a supernatanty sa odobrali na stanovenie hladín proteínov pomocou testovacej súpravy Micro BCA od Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, USA) s hovädzím sérovým albumínom od Pierce Chemical Co (Rockford, IL, USA).

Alikvóty obsahujúce 2 0 ug celkového proteínu sa povarili v nanášacom pufri, 150 mM Tris (pH 6,8) obsahujúcom 6 % dodecylsulfát sodný (SDS), 3 mM DTT, 0,3 % brómfenolovú modrú a 30 % glycerol.

Vzorky sa separovali pomocou 10% SDS-polyakrylamidovej gélovej elektroforézy (PAGE). Ďalej sa gély preniesli na nitrocelulózové membrány od spoločnosti Pall Co (East Hills, NY, USA) pri 350 mA a 4 °C počas 90 minút.

Na blokovanie nešpecifického zafarbenia sa membrány inkubovali v 5% odtučnenom mlieku počas 60 minút pri teplote miestnosti. Potom boli imunoreagované s každou primárnou protilátkou: králičia anti-TRPV1 (riedená 1:1000) (Abcam, Cambridge, UK), králičia anti-TRPV4 (riedená 1:1000) (Abcam) a králičia anti- - aktín (riedený 1:2000) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) pri 4 °C počas 7 hodín.

Následne reagovali s oslím anti-králičím IgG konjugovaným s chrenovou peroxidázou (HRP) (zriedený 1:4500) (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) pri teplote miestnosti počas 1 hodiny.

Nakoniec sa na zlepšenie vizualizácie použila chemiluminiscenčná súprava na báze aluminolu od Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, MA, USA).

Ako už bolo opísané [68], imunobloty TRPV1 a TRPV4 sa analyzovali pomocou softvéru Scion Image od Scion Crop (Frederick, MD, USA). Pásy boli skenované a bola uskutočnená denzitometrická analýza. Hladiny proteínov boli normalizované oproti zodpovedajúcej hladine -aktínu.

4.6. Príprava histologických rezov

Na imunohistochemické a histopatologické vyšetrenia sa pieskomily (n=7 pre každú skupinu) usmrtili podľa určeného plánu (30 minút, 12 hodín, 1 deň, 2 dni a 4 dni po tFI alebo simulovanej operácii).

Ako už bolo opísané [34], pieskomily boli hlboko anestetizované pentobarbitalom sodným (200 mg/kg) (JW Pharmaceutical, Soul, Kórea). V anestézii boli pieskomily transkardiálne opláchnuté 0,1 M fosfátovým tlmivým roztokom (pH 7,4) a fixované 4 % paraformaldehydom (v 0,1 M fosfátovom tlmivom roztoku, pH 7,4).

Následne boli získané ich mozgy a následne fixované s použitím rovnakého fixačného prostriedku počas šiestich hodín. Potom sa mozgové tkanivá narezali (25 um hrúbka koronálnych rovín) v akryostate (Leica, Wetzlar, Nemecko).

4.7. Histochemické farbenie pomocou CV

Aby sa preskúmalo morfologické a neurónové poškodenie v hipokampe každej skupiny, uskutočnilo sa farbenie krezylovou fialovou (CV), ako sme opísali vyššie [69]. Stručne povedané, octan krezylfialovej (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) sa rozpustil v koncentrácii 1.0 % (w/v) v destilovanej vode a ľadovej kyseline octovej (0.28 % sa pridalo do tohto roztoku. Sekcie boli zafarbené a pripevnené kanadským balzamom (Kanto, Tokio, Japonsko).

4.8. Farbenie FJ B

Farbenie FJ B sa uskutočnilo na vyšetrenie degenerácie neurónov (smrť alebo strata). Podľa publikovaného postupu [34] boli pripravené rezy mozgu namočené v 1 % hydroxide sodnom, okamžite prenesené do 0.06 % manganistanu draselného a okamžite zreagované s 0,0004 % Fluoro-Jade B (Histochem , Jefferson, AR, USA).

Rezy sa krátko premyli a umiestnili na ohrievač sklíčok (asi 50 ◦C) na reakciu s FJ B. Na vyhodnotenie terapeutického účinku OXC proti tFI sa spočítali počty FJ B+ buniek v oblasti CA1 podľa metódy publikovanej v [ 70].

Stručne povedané, digitálne obrázky buniek FJ B + boli zachytené z piatich rezov na gerbila pomocou epifluorescenčného mikroskopu (Carl Zeiss) (Oberkochen, Nemecko) pri vlnovej dĺžke 450–490 nm. Bunky sa spočítali v 250 um2, čo zahŕňalo SP, v strede oblasti CA1 pomocou systému na analýzu obrazu (Optimas 6.5) (CyberMetrics, Scottsdale, AZ, USA).

4.9. Imunohistochémia

Na preskúmanie zmien v imunoreaktivite NeuN, TRPV1 a TRPV4 v oblasti CA1 sa uskutočnila všeobecná imunohistochémia. Stručne povedané, podľa publikovanej metódy [34] boli pripravené rezy mozgu inkubované s primárnymi protilátkami-myšacia anti-NeuN (riedená, 1:1100) (Chemicon, Temecula, CA, USA), myšou anti-TRPV1 (riedená, 1:500) (Abcam, Cambridge, Spojené kráľovstvo) a králičie anti-TRPV4 (riedené, 1:500) (Abcam, Cambridge, Spojené kráľovstvo).

Potom boli tieto inkubované rezy inkubované v zodpovedajúcich sekundárnych protilátkach (zriedených 1:250) (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA, USA) a vyvinuté s použitím Vectastain ABC (riedený, 1:250) (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA , USA). Nakoniec tieto imunoreagované rezy mali farbu po vizualizácii 3,3'-diaminobenzidínom.

Počty NeuN+ buniek sa spočítali nasledovne. Digitálne snímky NeuN+ buniek boli zachytené z piatich rezov na gerbila pomocou svetelného mikroskopu (AxioM1) (Carl Zeiss, Nemecko).

Bunky boli spočítané rovnakým spôsobom ako počet FJ B+ buniek. Na vyhodnotenie hustoty štruktúr TRPV1+ a TRPV4+sa použili zodpovedajúce oblasti v regióne CA1 v piatich sekciách na zviera. Snímky štruktúr TRPV1+ a TRPV4+boli zachytené pomocou svetelného mikroskopu AxioM1 (Carl Zeiss) (Nemecko).

Hustoty TRPV{{0}} a TRPV4+štruktúr boli vyhodnotené ako relatívna optická hustota (ROD). Na tento účel boli obrázky transformované na strednú úroveň šedej. ROD bola prezentovaná ako percento pomocou Adobe Photoshop (verzia 8.0) a softvéru NIH Image J (National Institute of Health, Bethesda, MD, USA).

4.10. Štatistická analýza

Údaje sme prezentovali ako priemer ± štandardná chyba priemeru (SEM). Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou GraphPad Prism (verzia 5.{1}}) (GraphPadSoftware, La Jolla, CA, USA). Rozdiely v priemeroch medzi experimentálnymi skupinami boli štatisticky analyzované obojsmernou analýzou rozptylu (ANOVA) s post hocBonferroniho viacnásobným porovnávacím testom na objasnenie rozdielov súvisiacich s tFI medzi všetkými skupinami. Štatistická významnosť sa posudzovala pri p < 0. 05.

Autorské príspevky: Konceptualizácia: M.-HW a T.-KL; Metodológia, J.-CL a DWK;Softvér, H.-IK a MCS; validácia, JHA, IJK a JHP; Investigation, J.-CL, H.-IK a M.CS; Data Curation, JHC, IJK a JHP; Writing-Original Draft Preparation, H.-IK a J.-CL; Písanie-recenzia a úprava, M.-HW; Dohľad, S.-SL; Správa projektu, M.-HW; Funding Acquisition, S.-SL a T.-KL Všetci autori si prečítali publikovanú verziu rukopisu a súhlasili s ňou.

Financovanie: Túto prácu podporila organizácia Brain Korea 21 (BK21) Fostering Outstanding Universities for Research (FOUR, 4220200913807) financovaná Národnou výskumnou nadáciou (NRF) Kórey a Programom základného vedeckého výskumu prostredníctvom Kórejskej národnej výskumnej nadácie (NRF) financované ministerstvom školstva (NRF-2020R1I1A1A01070897).

Vyhlásenie inštitucionálnej kontrolnej rady: Pieskomily boli chované v Experimentálnom zvieracom centre Národnej univerzity Kangwon (Chuncheon, Kórea). Pre túto štúdiu bol experimentálny protokol schválený (číslo schválenia, KW{0}}; dátum schválenia 18. februára 2020) Institutional Animal Care and Use Committee.

Výskumný protokol sa držal smerníc navrhnutých v „Súčasných medzinárodných zákonoch a politikách“ Príručky pre starostlivosť a používanie laboratórnych zvierat, ktorú vydalo The National Academies Press (8. vydanie, 2011).

Vyhlásenie o informovanom súhlase: Neuplatňuje sa.

Vyhlásenie o dostupnosti údajov: Údaje uvedené v tejto štúdii sú dostupné na požiadanie od príslušného autora.

Poďakovanie: Autori oceňujú Hyun Sook Kim a Seung Uk Lee za ich technickú pomoc v tejto štúdii.

Konflikty záujmov: Autori vyhlásili, že neexistuje finančný konflikt záujmov.

Skratky

CA1: podpole Cornu Ammonis 1; CNS, centrálny nervový systém; CV, krezylová fialová; DG, dentate gyrus;FJ B, Fluoro-Jade B; HyT, hypotermia; NeuN, neurónové jadrá; OXC, oxkarbazepín; PAT, test pasívneho vyhýbania sa; ROD, relatívna optická hustota; SMA, spontánna motorická aktivita; SO, stratum oriens;SP, stratum pyramidal; SR, stratum radiatum; tFI, prechodná ischémia predného mozgu; TRPV1, transientreceptorový potenciálny vaniloid typu 1.

Referencie

1. Busto, R.; Dietrich, WD; Globus, MY; Valdes, I.; Scheinberg, P.; Ginsberg, MD Malé rozdiely v intraischemickej teplote mozgu kriticky určujú rozsah ischemického poškodenia neurónov. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1987, 7, 729-738. [CrossRef][PubMed]

2. Maher, J.; Hachinski, V. Hypotermia ako potenciálna liečba cerebrálnej ischémie. Cerebrovasc. Brain Metab. Rev. 1993, 5,277-300.

3. Nurse, S.; Corbett, D. Neuroprotekcia po niekoľkých dňoch miernej hypotermie vyvolanej liekmi. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1996, 16,474-480. [CrossRef]

4. Fisher, M.; Feuerstein, G.; Howells, DW; Hurn, PD; Kent, TA; Savitz, SI; Lo, EH; Group, S. Aktualizácia predklinických odporúčaní akademického priemyslu v oblasti liečby cievnej mozgovej príhody. Mŕtvica 2009, 40, 2244–2250. [CrossRef]

5. Liu, L.; Yenari, MA Terapeutická hypotermia: Neuroprotektívne mechanizmy. Predné. Biosci. 2007, 12, 816–825. [CrossRef]

6. Lyden, PD; Krieger, D.; Yenari, M.; Dietrich, WD Terapeutická hypotermia pre akútnu mozgovú príhodu. Int. J. Stroke 2006, 1, 9–19. [CrossRef][PubMed]

7. Klassman, L. Terapeutická hypotermia pri akútnej cievnej mozgovej príhode. J. Neurosci. Zdravotné sestry. 2011, 43, 94–103. [CrossRef]

8. Groysman, LI; Emanuel, BA; Kim-Tenserová, MA; Sung, GY; Mack, WJ Terapeutická hypotermia pri akútnej ischemickej cievnej mozgovej príhode. Neurosurg. Focus 2011, 30, E17. [CrossRef] [PubMed]

9. Schwab, S.; Georgiadis, D.; Berrouschot, J.; Schellinger, PD; Graffagnino, C.; Mayer, SA Uskutočniteľnosť a bezpečnosť miernej hypotermie po masívnom hemisférickom infarkte. Mŕtvica 2001, 32, 2033–2035. [CrossRef]

10. Katz, LM; Young, AS; Frank, JE; Wang, Y.; Park, K. Regulovaná hypotermia znižuje oxidačný stres mozgu po hypoxickej ischémii. Brain Res. 2004, 1017, 85–91. [CrossRef]

11. Liu, K.; Khan, H.; Geng, X.; Zhang, J.; Ding, Y. Farmakologická hypotermia: Potenciál pre budúcu terapiu cievnej mozgovej príhody? Neurol. Res.2016, 38, 478–490. [CrossRef]

12. Ma, J.; Wang, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Wang, Z.; Chen, G. Neuroprotektívne účinky liekovej terapeutickej hypotermie pri ochoreniach centrálneho nervového systému. Curr. Drogové ciele 2017, 18, 1392–1398. [CrossRef]

13. Calabresi, P.; Cupini, LM; Centonze, D.; Pisani, F.; Bernardi, G. Antiepileptiká ako možná neuroprotektívna stratégia ischémie mozgu. Ann. Neurol. 2003, 53, 693-702. [CrossRef]

14. Tanaka, T.; Litofsky, NS Antiepileptiká pri pediatrickom traumatickom poranení mozgu. Expert Rev. Neurother. 2016, 16, 1229–1234.[CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com