Zlepšenie produkcie echinakozidu a akteozidu dvojstupňovou elicitáciou v bunkovej suspenznej kultúre Cistanche Deserticola

pre viac informácií:{0}}

Wen-Hao Chen a kol

Abstraktné

Vo vhodných koncentráciách polyamíny podporovali rast kalusu aechinakozidobsah zCistanche deserticolazatiaľ čo Ag plus zvýšil obsahechinakozidaakteozid. V 20-dňovom kultivačnom období, keď sa na 8. a 16. deň pridal putrescín (25 lM) a Ag plus (10 lM), resp.echinakozidprodukcia (1,7 gl–1) aakteozidprodukcia (0,4 gl–1) dosiahla maximum, čo bolo 1.4-násobok a 1.{6}}násobok týchto jednorazových ošetrení putrescínom, 1.6-násobok a 1.{10}}násobok tých, ktoré sú liečené jedným Ag plus. Exogénny putrescín zvýšil životaschopnosť buniek a antioxidačnú enzymatickú aktivitu výrazne zvýšili konečnú biomasu. Ag plus pridanie významne zvýšilo obsah H2O2 a aktivitu fenylalanínamónia-lyázy, čo viedlo k vyššímechinakozidaakteozidobsahu.

Kľúčové slováakteozid,Cistanche deserticola, Echinakozid, Elicitor, Suspenzná kultúra

Skratky

APOX askorbát peroxidáza

CAT Catalase

H2O2 Peroxid vodíka

PAL Fenylalanín-amónium-lyáza

PeGs Fenyletanoidové glykozidy

ROS reaktívne formy kyslíka

SOD Superoxiddismutáza

Cistanche deserticola

Kliknite na produkty Cistanche UK a Cistanche extract

Úvod

Cistanche deserticolaYC Ma je ​​široko používaný v tradičnej čínskej medicíne. Fenyletanoidové glykozidy (PeG) sú hlavnými bioaktívnymi zložkami tejto rastliny.echinakozidaakteozidsú hlavnými zložkami na zlepšenie sexuálnej potencie, reguláciu imunitnej funkcie, vychytávanie voľných radikálov a vlastnosti proti starnutiu (Song et al. 2003). V dôsledku nadmerného využívania, náročného pestovania a zhoršeného životného prostredia divoký Cistanche deserticolarastliny sú na pokraji vyhynutia. Kultúra rastlinných buniek môže byť atraktívnou alternatívou na získanie týchto bioaktívnych zložiek. Hlavné problémy, s ktorými sa stretávame pri kultivácii in vitroCistanche deserticolamajú nízku biomasu a nízky obsah PeG. Uvádza sa, že mnohé elicitory stimulujú PeGsyntézu (Cheng a kol. 2005, 2006; Lu a Mei 2003; Ouyang a kol. 2003a; Xu a kol. 2005), ale bohužiaľ väčšina elicitorov znížila bunkovú biomasu.

V posledných rokoch sa v suspenznej kultúre rastlinných buniek skúmala kombinácia rôznych elicitorov. V dôsledku rozdielnych účinkov rôznych elicitorov môže kombinácia rôznych elicitorov dosiahnuť synergický účinok. Elicitory môžu byť pridané súčasne, napríklad do suspenznej kultúry Taxus spp. (Yuan et al. 2002) a ženšen (Bae et al. 2006). Na druhej strane pridanie rôznych elicitorov v štádiu rastu biomasy a v štádiu produkcie sekundárneho metabolitu poskytlo maximálnu produkciu biomasy a taxolu v suspenznej kultúre Taxus baccata ( Khosroushahiet al. 2006). Je však dostupných málo správ týkajúcich sa použitia kombinujúcich sa elicitorov v bunkovej kultúre Cistanche deserticola.

EhcinakozidvCistanche deserticola

Predchádzajúce správy oCistanche deserticolasa zamerali na zvýšenie obsahu PeG, ale elicitory, ako sú polyamíny na podporu biomasy, boli čiastočne ignorované. Polyamíny môžu podporovať biomasu kalusu zvýšením bunkovej proliferácie a zmiernením starnutia buniek (Bais a Ravishankar 2002). Nedávno bolo hlásené, že polyamíny sa podieľajú na interakcii s etylénom a toleranciou voči abiotickému stresu, zatiaľ čo etylén a reaktívne druhy kyslíka (ROS) z abiotického stresu viedli k starnutiu a smrti buniek (Cona et al. 2006). Na druhej strane, oxidačný stres spôsobený elicitormi viedol k akumulácii ROS, vrátane peroxidu vodíka (H2O2) a superoxidového aniónu (O2–), o ktorých sa uvádza, že sprostredkúvajú programovanú bunkovú smrť a syntézu sekundárnych metabolitov ako signálne molekuly (Yuan et al. 2001 Xu andDong 2005). Napríklad H2O2 indukoval génovú expresiu fenylalanín-amónium-lyázy (EC 4.3.1.5), kľúčového enzýmu pre obrannú odpoveď a sekundárny metabolizmus (Desikan et al. 1998), ktorý reguloval produkciu PeG v bunkovej kultúreCistanche deserticola(Cheng et al. 2005; Ouyanget al. 2003a). Vzhľadom na oxidačný stres niektoré ióny kovov, ako napríklad Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, účinne podporovali syntézu sekundárnych metabolitov v mnohých rastlinách (Zhao et al. 2005). Možno môžu zvýšiť aktivitu PAL a produkciu PeG. V tejto štúdii boli na zvýšenie rastu kalusu aplikované polyamíny a kovové ióny, ako aj kombinácia týchto elicitorov,echinakozid, aakteozidobsah z Cistanche deserticola. Okrem toho sa skúmal aj vzťah medzi elicitormi a obsahom H2O2, ako aj ich účinky na aktivity PAL a antioxidačných enzýmov.

Materiály a metódy

Rastlinné materiály

Cistanche deserticolabunkové línie boli indukované z kmeňa. Po sterilizácii sa stonka narezala na kúsky s veľkosťou približne 1 cm3 a kultivovala sa na médiu B5 (Gamborg et al. 1968) obsahujúcom 5 1M kyseliny naftalénoctovej (NAA), 9 1M 6-benzyladenínu (6-BA), 4 lM 2,4-kyselina dichlórfenoxyoctová (2,4-D) a 30 g sacharózy l–1. Po 30 dňoch bol svetložltý kalus vybratý a subkultivovaný na médiu B5 s 5 1MNAA, 9 1M 6-BA a 1 1M 2,4-D a kultúra bunkovej suspenzie bola založená podľa metód Ouyang a kol. (2003b).

Kalusová kultúra

Asi 1,5 g čerstvého kalusu (0,125 g DW) z 20-dňovej suspenznej kultúryCistanche deserticolabol naočkovaný do 250-ml Erlenmeyerovej banky obsahujúcej 50 ml média B5. Médium B5 bolo pred autoklávovaním doplnené 5 1M NAA, 9 1M 6-BA, 1 1M 2, 4-D a 30 g sacharózy 1–1 pri pH 5,6. Všetky experimenty sa uskutočnili s tromi opakovaniami pri 25 stupňoch v tme na rotačnej trepačke (110 ot. min-1) počas 20 dní.

ActedosievCistanche deserticola

Elicitorové liečby

V jedinom elicitačnom experimente sa filtrom sterilizované roztoky putrescínu (Put), spermínu (Spm), spermidínu (Spd), dusičnanu strieborného a chloridu kobaltnatého pridali do média s navrhnutými koncentráciami, aby sa preskúmali ich účinky na rast oncallus a obsah PeG. S optimálnym typom a koncentráciou elicitora sa skúmal vplyv času kŕmenia. Potom, na základe optimálnej koncentrácie a času kŕmenia, bola navrhnutá kombinácia rôznych elicitorov na zvýšenie produkcie PeG v dvojstupňovom elicitačnom experimente. Ako kontrola slúžila kalusová kultúra bez elicitorov. Aby sa preskúmal mechanizmus účinku elicitorov, kalus sa vybral v určenom čase po pridaní elicitoru na ďalšiu analýzu v dvojstupňovom experimente.

Biochemické testy

V určenom čase po pridaní elicitora sa bunky prefiltrovali a jemne premyli destilovanou vodou. Potom sa bunková životaschopnosť stanovila farbením 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloridom podľa metódy Verleysenet al. (2004), Index životaschopnosti je definovaný ako absorbancia meraná na gram čerstvého tkaniva. Obsah H2O2 v čerstvých bunkách bol stanovený podľa metódy Velikovej et al. (2000). Stanovenie aktivity fenylalanín-amónnej lyázy (PAL) (EC 4.3.1.5) bolo založené na metóde Koukola a Conna (1961). Metódy použité na superoxiddismutázu (SOD) (EC1.15.1.1), katalázu (CAT) (EC 1.11.1.6), extrakciu askorbátperoxidázou (APOX) a stanovenie boli rovnaké ako metódy Jebara et al. (2005).

Meranie biomasy, echinakozidu a akteozidu

Na stanovenie suchej hmotnosti (DW) sa kalus prefiltroval a premyl destilovanou vodou a potom sa lyofilizoval na konštantnú hmotnosť, aby sa zaznamenala suchá hmotnosť.

Suché bunky (20 mg) boli extrahované 10 ml 50 percent (objem/objem) metanolu pri izbovej teplote v ultrazvuku (40 kHz, 160 W) počas 15 minút. Po filtrácii cez filter 0,22 lm sa 20 ul vzorky vstrekli do systému HPLC (Waters 2695) vybaveného kolónou C18 (Diamonsil, 250 mm. 4,6 mm, veľkosť častíc 5 um). Mobilná fáza pozostávala z metanolu a 0,05 percentného roztoku kyseliny octovej vo vode (v/v) v pomere 35:65 (v/v). Prietok bol 1,0 ml min^–1teplota kolóny bola 30 stupňov a vlnová dĺžka UV detekcie (Waters 2996) bola 334 nm.

Kalibračné krivkyechinakozidaakteozidboli v dobrej linearite v rozsahu {{0}},2–6,4 lg(r=0,9997) a 0,16–4,6 lg (r {{1{{ 24}}}},9995. Priemerná výťažnosť echinakozidu a akteozidu (n=5) bola 98,7 percenta (RSD=1,5 percenta) a 98,2 percenta (RSD=1 0,28 percent ), resp. Experimenty s presnosťou a správnosťou ukázali dobré výsledky, relatívna štandardná odchýlka bola menšia ako 2 percentá. Limity kvantifikácie boli 0,04 a 0,06 lg pre echinakozid a akteozid. Echinakozidové a akteozidové štandardy boli zakúpené od NICPBP (Národný inštitút pre kontrolu farmaceutických a biologických produktov, Peking, Čína). Produkcia echinakozidu/akteozidu=obsah echinakozidu/akteozidu (mg g–1 DW) x Biomasa (g DW l^–1).

Štatistické analýzy

Všetky experimenty a stanovenia sa opakovali trikrát a všetky hodnoty boli priemery troch opakovaní ± SE. Údaje sa podrobili analýze variancie (jednocestná ANOVA, Tukeyov test), aby sa zistili významné rozdiely pomocou PROC ANOVA verzie SAS 6.12.

Výsledky

Účinky polyamínov na rast kalusu,echinakozid, aakteozidobsahu.

Tabuľka 1 ukazuje účinky polyamínov na rast kalusu,echinakozid, aakteozidobsah zCistanche deserticola. Put a Spm výrazne podporili rast kalusu pri vhodnej koncentrácii. Asi 25 lM Put bolo najefektívnejšie a biomasa (11,2 g DW l–1) bola 1.3-násobok kontroly. Súčasne zosilnené polyamínyechinakozidobsah výrazne. Keď sa pridalo 25 lM Put,echinakozidobsah sa zvýšil o 46 percent v porovnaní s kontrolou, pričom sa nezistilo žiadne významné zvýšenie obsahu akteozidov.

Účinky Ag plus a Co2 plus na rast kalusu, obsah echinakozidu a akteozidu

Účinky kovových iónov na rast kalusu,echinakozid, aakteozidObsah echinakozidu a akteozidu bol silne podporovaný Ag plus, zatiaľ čo rast kalusu bol mierne inhibovaný. Keď sa pridalo 10 lM Ag plus,echinakozidobsah aakteozidobsah sa zvýšil o 73 percent a 62 percent v porovnaní s kontrolou. Súčasne nebol žiadny významný rozdiel v biomase medzi úpravou Ag plus a kontrolou. Co2 plus takmer nepreukázal pozitívne účinky na rast kalusu a obsah PeG.

Účinky času kŕmenia na rast kalusu, echinakozid a obsah akteozidu

Na ďalšie experimenty sa vybrali Put (25 um) a Ag plus (10 um). Účinky času kŕmenia na rast kalusu,echinakozid, aakteozidobsah je uvedený v tabuľke 3. Keď sa pridal Put (25 lM) na 8. deň, získala sa maximálna biomasa (11,8 g DW l–1). Medzitým,echinakozidobsah sa zvýšil na 107,2 mg g–1 DWakteozidobsah bol takmer rovnaký ako obsah kontroly.

Ag plus pridanie v skoršom čase viedlo k menšiemu počtu biomasy. Pridaním Ag plus (10 uM) v deň 16, obojeechinakozidobsah (127,9 mg g–1 DW) aakteozidobsah (34,2 mg g–1 DW) dosiahol maximum, čo bolo 2.2-násobok a 1{6}}násobok obsahu v kontrolnej skupine.

Kombinované účinky Put a Ag plus na rast kalusu, tvorbu echinakozidu a akteozidu

Ako ukazujú výsledky jednotlivých elicitorov, pridanie Put v ranom štádiu zvýšilo biomasu a pridanie Ag plus v neskoršom štádiu podporilo obsah echinakozidu a akteozidu bez výrazného zníženia biomasy. Preto bol navrhnutý dvojstupňový protokol. Put (25 uM) a Ag plus (10 uM) sa pridali v ich príslušných optimálnych štádiách.

Obrázok 1 ukazuje účinky kombinácie pridania Putand Ag plus na rast kalusu,echinakozid, aakteozidprodukcia v kontraste s kontrolou. Keď sa pridal Put (25 lM) na 8. deň a Ag plus (10 lM) na 16. deň, optimálny obsah biomasy (11,4 g DW l–1), obsah echinakozidu (152,4 mg g–1 DW) a obsah akteozidu (36,1 mg g–1 DW) boli dosiahnuté na 20. deň (obr. 1). Theechinakozidprodukcia (1,7 gl–1) aakteozidprodukcia (0,4 gl–1) predstavovala 3.3-násobok a 2.{6}}násobok tých v kontrolnej skupine, v uvedenom poradí, ktoré boli vyššie ako tie, ktoré boli pri jednotlivom vyvolaní (tabuľka 3) . V porovnaní s liečbou jedným elicitorom,echinakozidaakteozidprodukcia kombináciou elicitorov bola 1.4-násobok a 1.{3}}násobok týchto pri jednorazovej liečbe Put, 1.{5}}násobok a 1.{7}}násobok týchto jednorazových Ag plus liečby , resp. Predĺžená kultivácia znížila biomasu, produkciu echinakozidov a produkciu akteozidov (obr. 1).

Obr. 1 Profily biomasy (A), Obr.echinakozid, aakteozidprodukcia (B) s/bez kombinovania elicitorov v suspenznej kultúreCistanche deserticola. Zvislé stĺpce predstavujú štandardnú chybu troch opakovaní. Kalus, 0,125 g DW, sa naočkoval do 250-ml Erlenmeyerových baniek obsahujúcich 50 ml média B5. Put (25 uM) a Ag plus (10 uM) sa pridali v deň 8 a deň 16, v danom poradí. Experimenty sa uskutočňovali pri 25 stupňoch v tme na rotačnej trepačke (110 ot./min-1) počas 20 dní

Vplyv Put a Ag plus na životaschopnosť buniek, obsah H2O2 a aktivity PAL a antioxidačných enzýmov

Pochopiť mechanizmus účinku elicitorov na bunkový rast a sekundárny metabolizmusCistanche deserticolaV dvojstupňovej elicitačnej kultúre sa skúmali zmeny bunkovej životaschopnosti, obsahu H2O2 a aktivity PAL a antioxidačných enzýmov po pridaní Put a Ag plus. Keď bol na 8. deň pridaný Put (0 h na obr. 2), obsah H2O2 rýchlo klesol, čo bolo len 48,9 percent kontroly na 6. hodine, v uvedenom poradí, a obnovil sa na úroveň kontroly postupne po 24 hodinách (obr. 2A). Životaschopnosť buniek sa zvyšovala do 12 hodín a potom neustále klesala, čo bolo o 26,9 percenta a 16,7 percenta vyššie ako kontrola po 24 hodinách a 48 hodinách (obr. 2B). Aktivity SOD a APOX sa výrazne zvýšili po 6 hodinách a aktivita SOD klesla na podobnú úroveň kontroly po 24 hodinách, zatiaľ čo aktivita APOX bola stále 1,{24}}násobok kontroly (obr. 2C, D). Putadícia nepreukázala žiadny významný vplyv na aktivitu CAT (obr. 2E). Zníženie obsahu H2O2 a rast aktivity antioxidačných enzýmov znamenali menšie oxidačné poškodenie a udržali viac životaschopných buniek ako kontrola.

Obr. 2 Zmeny obsahu H2O2, bunkovej životaschopnosti, aktivity APOX, SOD, CAT a PAL po pridaní Put na 8. deň insuspenznej kultúryCistanche deserticola. Vertikálne pruhy predstavujú štandardnú chybu troch opakovaní

Súčasne PAL aktivita dosiahla maximum v 12. hodine a potom postupne klesala na úroveň podobnú kontrole po 48 hodinách (obr. 2F).

Bunky sa kontinuálne kultivovali po pridaní Put a Ag plus sa pridalo do média v deň 16 (0 h na obr. 3). Obsah H202 sa rýchlo zvyšoval a udržiaval si výrazne vyššiu hladinu ako kontrola až do 48 hodín (obr. 3A). Avšak životaschopnosť buniek bola významne inhibovaná a zmenšila sa (obr. 3B). Aktivita APOX sa udržiavala na konštantnej úrovni a po 24 hodinách sa znížila (obr. 3C). Aktivity SOD a CAT sa prudko zvýšili po 3 hodinách a svoje maximá dosiahli po 12 a 6 hodinách, ktoré boli 1.{14}}krát a 1{16}}krát vyššie ako kontroly, potom pomaly klesali (obr. 3D , E). Aktivita PAL sa zvýšila na 2.{19}}násobok kontroly po 24 hodinách, čo bolo stále o 22,5 percenta vyššie ako u kontroly po 48 hodinách (obr. 3F).

Obr. 3 Zmeny obsahu H2O2, bunkovej životaschopnosti, aktivity APOX, SOD, CAT a PAL po pridaní Ag plus na 16. deň insuspenznej kultúryCistanche deserticolas pridaním Put v deň 8. Zvislé stĺpce predstavujú štandardnú chybu troch opakovaní.

Diskusia

Polyamíny a kovové ióny vykazovali rôzne vplyvy na rast kalusu a produkciu PeGCistanche deserticola. Pri správnych koncentráciách polyamíny hlavne podporovali rast kalusu, zatiaľ čo Ag plus podporoval tvorbuechinakozidaakteozidvýrazne. Keď sa oba Putand Ag plus v optimálnej koncentrácii pridali v rôznych časoch, došlo k určitým synergickým účinkom.

Pri raste kalusu sa podporný účinok spoliehal na typ polyamínov, koncentráciu a čas podávania. 25 lMPut bolo najúčinnejších na rast kalusu, keď sa pridalo 8. deň. Elicitor vykazoval optimálny podporný účinok v počiatočnom štádiu rastu. Hoci sa zistilo, že Ag plus a Co2 plus zosilňujú sekundárne metabolity v rôznych rastlinách (Zhaoet al. 2005), iba Ag plus preukázal pozitívny vplyv na obsahechinakozidaakteozid. Pretože Ag plus môže inhibovať životaschopnosť buniek a bunkovú proliferáciu, pridanie Ag plus v deň 16 zvýšilo produkciuechinakozidaakteozidbez výrazného zníženia biomasy.

Keď sú rastlinné bunky vystavené pôsobeniu elicitoru, elicitor iniciuje prenos signálu z povrchu plazmatickej membrány a produkciu ROS, indukuje obrannú reakciu rastlín a zvyšuje sekundárny metabolizmus rastlín reguláciou kľúčových enzýmov, ktoré katalyzujú biosyntézu cieľových sekundárnych metabolitov (Zhao et al. 2005). Oxidačný stres v dôsledku liečby elicitorom vedie k akumulácii ROS a možno ho zmierniť antioxidačnými enzýmami vrátane SOD, APX, CAT a POD. Keď oxidačné poškodenie presahuje funkcie antioxidačných enzýmov, rastlinné bunky môžu odumrieť, pretože ich životaschopnosť klesá.

Predpokladá sa, že H2O2, typ ROS, sprostredkuje programovanú bunkovú smrť a reguluje syntézu sekundárnych metabolitov indukciou expresie mnohých obranných génov a sekundárnych metabolitových biosyntetických génov, ako je PAL. Predpokladá sa, že H2O2, typ ROS, sprostredkuje programovanú bunkovú smrť a reguluje syntézu sekundárnych metabolitov indukciou expresie mnohých obranných génov a sekundárnych metabolitových biosyntetických génov, ako je PAL.

Polyamíny zlepšili toleranciu abiotického stresu tým, že účinne odstraňovali ROS, chránili nukleovú kyselinu a membránu (Alca´zar et al. 2006) a zvyšovali aktivitu antioxidačných enzýmov (Tang a Newton 2005). Podľa správy Papadakisa a Roubelakisa-Angelakisa (2005), Put ukázal lepší blokujúci účinok na akumuláciu ROS ako Spd a Spm. Ako je uvedené v našich výsledkoch, konečné spracovanie biomasy inPut bolo väčšie ako pri spracovaní Spd a Spm. Exogénna Put znížila obsah H2O2, zvýšila aktivity antioxidačných enzýmov a efektívne bunkovú životaschopnosť. Pravdepodobne vyššia životaschopnosť buniek prispela k väčšej proliferácii a vyššej biomase. Potom by sa dalo vysvetliť, prečo Ag plus pridanie v skoršom čase viedlo k menšiemu počtu biomasy pre Ag plus k zvýšeniu akumulácie H2O2 a výraznému zníženiu bunkovej životaschopnosti. Aktivity antioxidačných enzýmov sa zvýšili na zmiernenie oxidačného stresu bez ovplyvnenia životaschopnosti buniek. Pridanie Ag plus tiež podporilo aktivitu PAL, ako aj produkciuechinakozidaakteozidznačne. Mechanizmus môže byť v súlade s výsledkami Desiken et al. (1998) a Yuan a kol. (2001). H2O2 môže hrať kľúčovú úlohu v bunkovej proliferácii a produkcii PeG. Dajte zvýšenú aktivitu PAL aechinakozidobsah v určitej miere, možno iným spôsobom, aby Put znížil obsah H2O2.

V posledných rokoch sa väčšina správ zamerala na účinok jediného elicitora na rast kalusu a obsah PeGsCistanche deserticola. Mnohé elicitory však nezvýšili rast kalusu pri optimálnej koncentrácii, ako napríklad aschitosan, funálny elicitor (Fusarium solani), metyljasmonát a kyselina salicylová (Cheng a kol. 2006; Lu a Mei2003; Xu a kol. 2005). Zmes prvkov vzácnych zemín zlepšila rast buniek a produkciu PeG, o 26 percent a 167 percent viac ako v prípade kontroly (Ouyanget al. 2003b). Opakovaná elicitácia s jediným elicitorom tiež značne zvýšila produkciu PeG (Cheng et al.2005, 2006). Je to dobrá alternatíva na získanie optimálnej produkcie biomasy a PeG pridaním rôznych elicitorov v rôznych fázach. Keď sa na 8. a 16. deň pridalo 25 lM Put a 10 lM Ag plus,echinakozidprodukcia (1,7 gl–1) a produkcia akteozidov (0,4 gl–1) dosiahli maximum, ktoré boli vyššie ako tie z jednej Put alebo Ag plus elicitácie, ako aj z predchádzajúcich správ.

Od: ' Zlepšenieechinakozidaakteozidprodukciu dvojstupňovou elicitáciou v kultúre bunkovej suspenzieCistanche deserticola' odWen-Hao Chen a kol

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Referencie

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Zapojenie polyamínov do reakcie rastlín na abiotický stres. Biotechnol Lett 28:1867-1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Zvýšená produktivita ginsenosidu kombináciou etefónu a metyljasmonátu v náhodných koreňových kultúrach ženšenu (Panax ginseng CA Meyer). Biotechnol Lett 28:1163-1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Úloha polyamínov v ontogenéze rastlín a ich biotechnologické aplikácie. Kult orgánových orgánov rastlinných buniek 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Opakovaná elicitácia zvyšuje akumuláciu fenyletanoidových glykozidov v bunkových suspenzných kultúrachCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203-207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Zlepšenie biosyntézy fenyletanoidných glykozidov vCistanche deserticolabunkové suspenzné kultúry chitosanovým elicitorom. J Biotechnol 121:253-260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Funkcie aminooxidáz vo vývoji a obrane rastlín. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin a peroxid vodíka iniciujú programovanú bunkovú smrť, ale majú rozdielne účinky na expresiu obranného génu v suspenzných kultúrach Arabidopsis. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Požiadavky na živiny suspenzných kultúr buniek koreňov sóje. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Zmeny v
aktivity askorbátperoxidázy, katalázy, guajakolperoxidázy a superoxiddismutázy v uzlinách fazule obyčajnej (Phaseolus vulgaris) pri strese zo soli. J Plant Physiol 162:929-936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Zlepšená produkcia taxolu kombináciou indukujúcich faktorov v suspenznej bunkovej kultúre Taxus baccata. Cell Biol Int 30:262-269
Koukol J, Conn EE (1961) Metabolizmus aromatických a vlastnosti fenylalanín deaminázy z Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003) Zlepšenie produkcie fenyletanoidových glykozidov hubovým elicitorom v bunkovej suspenznej kultúreCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437-1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Tvorba fenyletanoidových glykozidovCistanche deserticolakalus pestovaný na pevných médiách. Biotechnol Lett 25:223-225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Účinky prvkov vzácnych zemín na rastCistanche deserticolabuniek a produkciu fenyletanoidných glykozidov. J Biotechnol 102:129-134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Polyamíny inhibujú tvorbu superoxidu sprostredkovanú NADPH oxidázou a putrescín zabraňuje programovanej bunkovej smrti vyvolanej peroxidom vodíka generovaným polyaminooxidázou. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Pokroky vo výskume farmakologickej aktivity v rastlináchCistancheHoffing a Link. Bylinné drogy Chin Tradit 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Polyamíny znižujú oxidačné poškodenie vyvolané soľou zvýšením aktivít antioxidačných enzýmov a znížením peroxidácie lipidov v borovici Virginia. Regulácia rastu rastlín 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oxidačný stres a niektoré antioxidačné systémy v ošetrených kyslým dažďom boli rastlinnou ochrannou úlohou exogénnych polyamínov. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Hodnotenie analytických techník na predpovedanie životaschopnosti po kryokonzervácii. Kult orgánového tkaniva rastlinných buniek 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2 – z elicitorom indukovaného oxidačného vzplanutia je nevyhnutný na spustenie aktivácie fenylalanín-amónnej lyázy a syntézy katarantínu v bunkových kultúrach Catharanthus roseus. Enzyme Microb Technol 36:280–284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Účinky metyljasmonátu a kyseliny salicylovej na syntézu fenyletanoidových glykozidov v suspenzných kultúrachCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402-406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Dráha transdukcie signálu pre oxidačné vzplanutie a produkciu taxolu v suspenzných kultúrach Taxus Chinensis var. mairei indukovaný oligosacharidom z Fusarium oxysprum. Enzyme Microb Technol 29:372–379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Pôsobiace dráhy elicitorov na dráhe biosyntézy taxolu a ich synergický efekt. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Transdukcia elicitorového signálu vedúca k produkcii rastlinných sekundárnych metabolitov. Biotechnol Adv 23:283-333