Vplyv polysacharidu Astragalus na stav obličiek a ukazovatele fibrózy potkanieho modelu diabetickej nefropatie vyvolanej streptozotocínom

Pre viac informácií:emily.li@wecistanche.com

Yue Ji, Xue-Rou Yan, Hong-Tao Yang, Kang Yang, Qing-Yun Zhao, Shou-Ci Hu, Qi-Hang Su

1 Tianjinská univerzita tradičnej čínskej medicíny, Tianjin, Čína.

2 Prvá fakultná nemocnica Tianjinskej univerzity tradičnej čínskej medicíny, Tianjin, Čína

Zvýraznenie

Hoci sa nepozoroval žiadny účinok na zníženie hladiny cukru v krvi, polysacharid astragalus sa mohol zlepšiťobličkovérúrkovýintersticiálne poškodenie u potkanov s diabetickou nefropatiou a skoré štádiumobličkovéfunkciuškody, čo môže súvisieť so znížením regulácie TGF- 1 a -SMA.

Abstraktné

Cieľ: Skúmať vplyv astragalus polysacharidu (APS) na stav obličiek a indexy fibrózy u potkanov s diabetickou nefropatiou. Metódy: 72 samcov potkanov bolo náhodne rozdelených do troch skupín: negatívna kontrolná skupina (NC, n=24); modelová skupina diabetickej nefropatie (DNM, n=24); a model diabetickej nefropatie so skupinou APS (DNM plus APS, n=24). Potkany zo skupín DNM a DNM plus APS sa podrobili tak jednostrannej nefrektómii, ako aj injekcii streptozotocínu (STZ) (65 mg/kg). Skupine potkanov DNM plus APS sa podávalo 50 IU/kg/d APS subkutánnou injekciou od prvého týždňa po operácii až do smrti. Potkanom skupiny NC a DNM sa subkutánne injikoval rovnaký objem fyziologického roztoku. V 3., 8. a 13. týždni po operácii sa náhodne usmrtilo 6 potkanov z každej skupiny a odobrala sa krv na meranie sérového kreatinínu a dusíka močoviny v krvi. Deň pred usmrtením boli potkany umiestnené do metabolickej klietky na 24 hodín, aby sa zhromaždil moč. V 14. týždni po operácii sa náhodne vybralo 6 potkanov z každej skupiny na meranie telesnej hmotnosti a indexu obličiek. Krv sa odoberala na meranie glukózy v krvi. Obličky sa odobrali na detekciu patologických zmien farbením hematoxylínom a eozínom. Výsledky: Histologické hodnotenie DNM potkanov naznačilo symptómy poškodenia, ktoré dokazujú hyperplázia glomerulárnej mezangiálnej matrice, atrofia obličkových tubulov a zhrubnutie bazálnej membrány. Naopak, potkany s diabetickou nefropatiou vyvolanou STZ liečené APS (50 IU/kg/d) vykazovali významne zlepšené histologické výsledky, čo naznačuje, že APS má priaznivý účinok naobličkovétkanívu STZ-indukovaných DNM potkanov. Naše výsledky tiež ukázali, že APS zmiernil poškodenie obličiek a účinne zlepšil telesnú hmotnosť u potkanov DNM. Znížil sa pomer hmotnosti obličiek k telesnej hmotnosti a zlepšilo sa skoré štádium poškodenia funkcie obličiek po liečbe APS. V neskorších štádiách ochorenia sa 24 h bielkovina v moči výrazne znížila. Okrem toho APS znížila expresiu TGF- 1 a -SMA v obličkách. Záver: APS sa výrazne zlepšiloobličkovérúrkovýintersticiálne poškodenie u DNM potkanov a skoré štádium poškodenia funkcie obličiek. Mechanizmus môže súvisieť s downreguláciou expresie TGF{0}} a -SMA, ktoré oneskorujú progresiu renálnej intersticiálnej fibrózy u DNM potkanov.

Kľúčové slová: DiabetikNefropatia, Astragalus polysacharid,Renálnaindex, Fibróza, TGF- 1, -SMA

Cistanche je dobrý na funkciu obličiek

Pozadie

Diabetická nefropatia (DN) je bežnou lebečnou komplikáciou diabetu s vysokou morbiditou. Približne 25-50 percent pacientov s cukrovkou trpí DN. Títo pacienti vykazujú progresívnu stratuobličkovéfunkciu, čo môže mať za následok konečné štádium renálneho ochorenia, ako je renálne zlyhanie [1]. Patogenéza a mechanizmus DN nie sú úplne jasné. Nedávne štúdie ukázali, že dysfunkcia energetického metabolizmu a dystrofia môžu spustiť metabolickú pamäť, ktorá inhibuje vývoj a sekrečnú funkciu buniek pankreasu, čo nakoniec vedie k DN [2].

Tradičná čínska medicína (TCM) bola široko používaná na liečbu DN a preukázala dobré účinky. Podľa teórie TČM je etiologickým faktorom DN stáza krvi, ktorá spôsobuje poruchy funkcie tela, inhibuje tvorbu Qi a krvi a spúšťa nedostatok Qi. Nedostatok Qi môže vyvolať progresiu DN. Štúdie naznačujú, že injekcia Shuxuetong [extrakt z Shuizhi (Hirudo) a Dilong (lumbricus)] dramaticky zlepšuje hladinu glukózy v krvi aobličkovéfunkciupacientov s DN [3]. Huangkui Capsule extract of Huangkui (abelmosk)] zlepšuje mikrozápal u pacientov s DN [4]. Bailing Pills zmierňuje mikrozápal a oxidačný stres u pacientov trpiacich chronickou DNobličkovézlyhanie[5]. Okrem toho, Tangweikang Pill, vrátane Huangqi (Radix Astragali seu Hedsari), Shuizhi (Hirudo) a Wuweizhi (Fructus Schisandrae Chinensis), sú široko používané v klinickej praxi [6, 7]. Výskumníci preukázali, že pilulka Tangweikang zvyšuje expresiu matrix metaloproteázy-9 a znižuje expresiu tkanivového inhibítora metaloproteináz-1 v obličkách potkanov s modelom diabetickej nefropatie (DNM) [8, 9].

Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari), ktorý dopĺňa Qi, aktivuje krvný obeh a znižuje stázu krvi, patrí medzi najdôležitejšie bylinky na liečbu DN na klinike[10,11]. Ako je uvedené v niektorých klasických starých knihách TČM, vrátane Tang Ye Ben Cao, ktoré zostavili Wang Haogu[12] a Yi Zong. Jin Jian zostavil Wu Qian [13], symptómy DN sú podobné príznakom „choroby z disperzie smädu“, „vodnatého“, „zakaleného moču“ a „choroby z konzumácie“ v čínskej medicíne a hlavnej patogenézy DN je spôsobená abnormalitou Sanjiao (horná, stredná alebo dolná)[14]. Nedostatok Qi a Yin je prejavom dysfunkcie vnútorností alebo čriev. Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari) bol aplikovaný v DN[15] na liečbu poranenia pľúc, sleziny, pečene a obličiek, ako aj obohatenie Qi a Yin, zvýšenie prietoku krvi a čistenie sieťových ciev. Astragalus polysacharid (APS) (schválené č. Z20040085) je jednou z hlavných vysoko aktívnych zložiek v Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari). V posledných rokoch sa zistilo, že APS má široké spektrum farmakologických účinkov na expresiu inzulínových signálnych molekúl v obličkovom tkanive potkanov s diabetom 2. typu [16]. Málo sa však vie o faktoroch ovplyvňujúcich mechanizmy stredného a neskorého štádia DN. Cieľom tejto štúdie bolo preskúmať vplyv APS na stav obličiek a indexy fibrózy u potkanov s DN.

Materiály a činidlá

Zvieratá a liečba

Laboratórne zvieratá a kŕmne prostredie. Sedemdesiatdva zdravých samcov potkanov Sprague-Dawley s priemernou telesnou hmotnosťou 180 ± 20 g vo veku 8 týždňov bolo chovaných pri izbovej teplote (23 ± 1 stupeň) s cyklom 12 hodín svetlo a 12 hodín tma (svetlá sa rozsvietili od 6:{10}} ráno až 18:{12}} popoludní). Potrava a voda boli dostupné ad libitum. Pokusy sa uskutočňovali podľa inštitucionálnych predpisov a národných kritérií pre pokusy na zvieratách. Etický výbor inštitútu pre zvieratá pred uskutočnením experimentov preskúmal celý protokol pre zvieratá. Experimentálne postupy boli v súlade so smernicou Európskeho parlamentu 2010/63/EÚ a so všetkými zvieratami sa zaobchádzalo v súlade s usmerneniami Výboru pre výskum zvierat TCM Univerzity Tianjin (TCMLAEC2014005).

Zoskupovanie a modelovanie zvierat. DN bola vyvolaná jednostrannou nefrektómiou a jednorazovým intraperitoneálnym podaním 65 mg/kg streptozotocínu (STZ)[17. 21], ktorý bol rozpustený v tlmivom roztoku citrátu sodného pri pH 4,2,4,5. Kontrolným zvieratám boli injekčne podané vehikulá (tlmivý roztok citrátu sodného, ​​pH 4.2-4.5). Potkany boli náhodne rozdelené do troch skupín negatívnej kontrolnej skupiny (NC, n =24); DNM,n=24;a DNM so skupinou APS (DNM plus APS,n =24). Skupina potkanov DNM plus APS dostávala APS (50 IU/kg/d) subkutánnou injekciou od prvého týždňa po operácii až do smrti. NC a DNM skupiny potkanov dostali subkutánne injekcie s rovnakým objemom fyziologického roztoku.

Indikátory a metódy detekcie

Všeobecné vyhlásenie. V 14. týždni po operácii sa náhodne vybralo 6 potkanov z každej skupiny na meranie telesnej hmotnosti, hmotnosti obličiek a indexu obličiek. Krv sa odoberala metódou vnútorného kútika na biochemické testovanie glukózy v krvi (ACCU-CHEK, Indianapolis, IN, USA). Obličkový index sa vypočítal nasledovne: obličkový index=hmotnosť obličiek/telesná hmotnosť × 100 percent.

Funkcia obličiek a 24-h bielkoviny v moči. V 3., 8. a 13. týždni po operácii bolo 6 potkanov z každej skupiny náhodne usmrtených a krv bola odobratá metódou abdominálnej aorty na biochemické testovanie sérového kreatinínu (Scr) a dusíka močoviny v krvi (BUN). Deň pred usmrtením boli potkany umiestnené do metabolických klietok na 24 hodín, aby sa zhromaždil moč, ktorý sa testoval biuretovou reakciou počas 24 hodín urinárneho proteínu. Vzorky krvi boli centrifugované pri 3000 ot./min. počas 15 minút a sérum bolo odobraté a skladované pri -80 stupni až do analýzy, ako je opísané nižšie. Scr, BUN a celkový proteín v moči za 24 hodín boli testované na čítačke doštičiek s použitím experimentálnej reagenčnej súpravy. Patologické a imunohistochemické vyšetrenie. Ako je opísané vyššie, po získaní krvi a moču boli všetky zvieratá usmrtené cervikálnou dislokáciou. Obličky boli úplne obnažené a opatrne oddelené od periférneho tkaniva a obličkového puzdra. Po vykonaní pozdĺžneho rezu spolu s obličkovými tkanivami ostrou čepeľou a odbere sa uskutočnila fixácia 10 percent formalínom na detekciu patologických zmien farbením hematoxylínom a eozínom (HE) a imunohistochémiou (IHC). Obličkové tkanivá sa potom zaliali do parafínu a narezali na 5 uM rezy na farbenie s HE, zatiaľ čo expresia TGF- 1 a -SMA sa detegovala pomocou IHC s použitím streptavidín-peroxidázovej metódy.

Štatistická analýza

Údaje sa analyzovali pomocou softvéru SPSS 13.{1}} (SPSS. Inc., Chicago, IL, USA). Všetky údaje boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka v tabuľkách a na obrázkoch označené zvislými stĺpcami. Rozdiely medzi skupinami boli stanovené analýzou rozptylu. Hodnota pravdepodobnosti P menšia ako 0,05 sa považovala za významnú.

Výsledok

Všeobecné charakteristiky

Telesná hmotnosť v skupine DNM bola významne znížená v porovnaní so skupinou (P=0.001, tabuľka 1). Telesná hmotnosť v skupine DNM plus APS bola výrazne zvýšená v porovnaní so skupinou DNM (P=0,017, tabuľka 1). Obličkový index bol vyšší v skupine DNM ako v skupine NC (P=0.001, tabuľka 1). Okrem toho bol obličkový index znížený v skupine DNM plus APS v porovnaní so skupinou DNM (P= 0.026, tabuľka 1). Hladina glukózy v krvi bola zvýšená v skupine DNM v porovnaní so skupinou NC (P=0.001, tabuľka 1), zatiaľ čo v skupine DNM glukózy v krvi medzi skupinou ] a DNM plus APPS nebol zjavný rozdiel, čo naznačuje, že Samotný APS na udržanie stabilnej hladiny cukru v krvi v 14. týždni nie je účinný.

Biochemické indexy

Neexistoval žiadny významný rozdiel v hladine Scr a BUN alebo v hladine 24-hodinového proteínu v moči v rôznych časových bodoch v každej skupine (tabuľka 2-3), V porovnaní so skupinou NC vykazovali potkany DNM skupiny zjavne vyššie hladiny BUN v rôznych časových bodoch (P=0.021, P=0.012, P=0.008, v tomto poradí, tabuľka 2). V porovnaní so skupinou DNM potkany DNM plus APS vykazovali zjavne nižšie hladiny BUN v 3. a 8. týždni (P=0.017 a P= 0.015, v uvedenom poradí, tabuľka 2). V porovnaní so skupinou NC vykazovali potkany skupiny DNM zjavne vyššie hladiny Scr v rôznych časových bodoch (P=0.033, P=0.026, P=0.028, v uvedenom poradí, tabuľka 3 ) V porovnaní so skupinou DNM. Potkany DNM plus APS vykazovali zjavne nižšie hladiny Scr v 8. týždni (P= 0.021, tabuľka 3), zatiaľ čo v 3. a 13. týždni nebol pozorovaný žiadny rozdiel. V porovnaní so skupinou NC vykazovali potkany v skupine DNM významne vyššie 24 h hladiny bielkovín v moči (P=0,021, P= 0,037, P= 0,019, tabuľka 4) a po 8. týždni sa bielkoviny v moči dramaticky zvýšili (P{{ 38}}.017, tabuľka 4). V porovnaní so skupinou DNM.DNM plus APS potkany vykazovali významne nižšie hladiny proteínov v moči za 24 hodín v 13. týždni (P=0.011, tabuľka 4).

Patologické nálezy

Glomerulárna štruktúra bola v skupine NC jasná a nebola pozorovaná žiadna zjavná anomália mezenchymálna hyperplázia alebo zhrubnutie bazálnej membrány. Kortikálne a medulárneobličkovérúrkovýštruktúry boli normálne, usporiadané v poradí, bez zápalu a fibrózy (obrázok 1A), v porovnaní so skupinou NC. Farbenie HE v skupine DNM (obrázok 1B) odhalilo hyperpláziu glomerulárnej mezangiálnej matrice, atrofiu obličkových tubulov a zhrubnutie bazálnej membrány. V niektorých oblastiach bola pozorovaná fokálna glomeruloskleróza, zhrubnutie Bowmanovho puzdra a infiltrácia obličkových intersticiálnych zápalových buniek a fibrózna proliferácia. Tieto patologické zmeny v porovnaní so skupinou DNM sa v rôznej miere zmiernili v skupine DNM plus APS (obrázok 1C). Okrem toho skupina DNM plus APS ukázala, že atrofia obličkových tubulov sa dramaticky znížila a renálna intersticiálna fibróza nebola jasne pozorovaná pri farbení HE.

Imunofarbiaci účinok TGF{0}} a -SMA v tkanive obličiek

Výsledok imunofarbenia TGF- 1 v skupine NC (obrázok 2A) odhalil mierne pozitívnu expresiu v renálnych tubulárnych epiteliálnych bunkách, ktoré sa javili ako difúzne hnedo-žlté alebo hnedé častice a väčšina glomerulov vykazovala negatívnu expresiu. V porovnaní so skupinou NC sa v skupine DNM pozorovalo množstvo hnedo-žltých pozitívnych granúl v renálnych tubulárnych a renálnych intersticiálnych oblastiach (obrázok 2B), čo naznačuje, že expresia TGF- 1 vobličkybola vyššia ako v skupine NC. Navyše v skupine DNM plus APS (obrázok 2C) hladina žltých granulovaných pozitívnych reaktantov vykazovala miernu stratu farby a bola znížená v porovnaní s hladinami v skupine DNM. V skupine NC (obrázok 2D) sa pozitívna expresia -SMA objavila ako niekoľko hnedo-žltých alebo hnedých častíc lokalizovaných hlavne v bunkách hladkého svalstva renálnych artérií a občas v renálnych tubuloch a renálnej intersticiálnej. V porovnaní so skupinou NC bola väčšia renálna intersticiálna oblasť pokrytá hnedo-žltými alebo hnedými časticami, čo naznačuje, že expresia a-SMA bola zvýšená v skupine DNM (obrázok 2E). Okrem toho v skupine DNM plus APS (obrázok 2F) hladina žltých granulárnych pozitívnych reaktantov vykazovala miernu stratu farby a bola znížená v porovnaní so skupinou DNM.

Diskusia

DN je závažná diabetická komplikácia s klinickými príznakmi, ktoré časom zvyšujú rýchlosť vylučovania bielkovín močom a renálnu hypofunkciu progreduje do nefrózy v terminálnom štádiu. Mnoho diabetických patologických produktov vrátane katecholamínov, endotelínu, rastového faktora podobného inzulínu-1, konečných produktov pokročilej glykácie a TGF- 1 bolo korelovaných s orgánovou fibrózou. Predchádzajúce štúdie ukázali, že TGF- 1-indukovaná signálna dráha má dôležitú participatívnu úlohu vobličkovéfibrózaza určitých renálnych patologických stavov [22]. V tejto štúdii sme pripravili zvierací model DN pomocou uninefrektómie a injekcie streptozotocínu [23]. Potkany v skupine DNM vykazovali závažné príznakyobličkovézranenievrátane zvýšených hladín glukózy v krvi a BUN v sére a zvýšených hladín bielkovín v moči po 24 hodinách, ako aj významného poklesu telesnej hmotnosti. Okrem toho patologické štúdie v obličkách odhalili hyperpláziu glomerulárnej mezangiálnej matrice, atrofiu obličkových tubulov a infiltráciu zápalových buniek, čo naznačuje, že DN u potkanov vedie k veľkému objemu proteinúrie. Výsledky súčasnej štúdie ukázali, že APS, zložka TCM, znižuje expresiu a-SMA a TGF- 1 v diabetických obličkách a hrá dôležitú úlohu pri rozvoji renálnej fibrózy spojenej s DN u myší .

Akumulácia extracelulárnej matrice je príčinou glomerulosklerózy a tubulointersticiálnej fibrózy v patologickom procese DN a TGF- 1 hrá dôležitú úlohu pri tubulointersticiálnej fibróze. TGF- 1 môže indukovať adhéziu a sedimentáciu medzibunkovej matrice a inhibovať degradáciu bunkovej matrice, čo prispieva k tubulointersticiálnej fibróze [24, 25]. Inhibícia TGF- 1 teda môže zmierniť progresiu DN. Jeremiah [26] vykonal experimenty s UUO potkanmi a ukázal, že po odstránení obštrukcie sa renálna tubulárna intersticiálna fibróza zmiernila a expresia TGF- 1 bola znížená, čo podporuje, že inhibícia vysokej expresie TGF- 1 môže zmierniť alebo oddialiť intersticiálna fibróza renálnych tubulov.

V posledných rokoch väčšina štúdií TGF- skúmala jeho dráhu prenosu signálu. TGF- môže indukovať aktiváciu rôznych signálnych molekúl, ako sú proteíny Smad, mitogénom aktivované proteínkinázy a fosfatidylinozitol 3kináza/proteínkináza B atď., a signálna dráha TGF- 1/Smad je hlavnou induktor [27] renálnej fibrózy. -SMA je proteín cytoskeletu v eukaryotických bunkách, ktorý ovplyvňuje štruktúru mikrofilamentov buniek [28]. V normálnom obličkovom tkanive je -SMA exprimovaný iba v strede obličkovej cievy a zriedkavo je exprimovaný v glomerulách a renálnom interstíciu. Za patologických stavov v obličkách sa -SMA môže exprimovať a proliferovať okolo glomerulárnej mezenchymálnej oblasti, okolitej oblasti glomerulu, okolitej oblasti fibrózy a okolo krvných ciev [29].

Fibroblasty môžu byť za určitých podmienok transformované na myofibroblasty a zmeny v mikroprostredí môžu ovplyvniť transformáciu fibroblastov na myofibroblasty. Nielen transdiferenciácia funkcie renálnych tubulárnych epiteliálnych buniek, ale aj aktivácia renálnych intersticiálnych fibroblastov vedie k renálnej intersticiálnej fibróze, čo vedie k aktivácii proliferácie svalových fibroblastov. Mnohé štúdie ochorenia obličiek potvrdili, že počet svalových fibroblastov, úroveň expresie -SMA a stupeň renálnej intersticiálnej fibrózy pozitívne korelujú s progresiou ochorenia obličiek. Markerový proteín -SMA je dôležitým indikátorom progresie renálnej intersticiálnej fibrózy [30].

Iné štúdie uvádzajú, že TCM má priaznivé účinky pri liečbe DN. Chen et al [31] uviedli, že zmes Gegen (Radix Puerariae) a Shanzha (Fructus Crataegi) inhibuje poškodenie obličiek pri diabete 2. typu prostredníctvom zníženia PI3K/Akt. Zhang et al [32] naznačili, že Shenkangove granule zlepšujú poškodenie obličiek u potkanieho modelu DN tým, že zabraňujú akumulácii extracelulárnej matrice, znižujú expresiu kolagénu I a III a inhibujú expresiu matricových metaloproteináz-2 a { {5}} v obličkovom tkanive. Pre túto štúdiu sú obzvlášť dôležité nedávne zistenia, že kombinácia APS a iného extraktu TCM, reínu, zmierňuje patologické stavy chronickýchobličkovézlyhanievrátane funkčného poškodenia glomerulov, intersticiálneho zápalu a apoptózy renálnych tubulárnych buniek [33].

V tejto štúdii sme zistili, že APS znižuje expresiu -SMA a TGF- 1 in vivo a zmierňuje poškodenie obličkového tkaniva. V porovnaní s predchádzajúcimi štúdiami TCM pri DN sa ochranný účinok vyskytol prostredníctvom iného mechanizmu, čo naznačuje, že terapeutická stratégia zlúčeniny TCM pre DN môže byť účinná.

Účinok zníženia hladiny cukru v krvi sa však po liečbe APS nepozoroval. Predpokladáme, že ako choroba postupuje (obdobie pozorovania: 13 týždňov), používanie samotného APS na udržanie stabilnej hladiny cukru v krvi v priebehu času nie je účinné. Predchádzajúce experimenty ukázali podobné výsledky [34, 35], je však potrebné ďalšie potvrdenie. V niektorých klinických štúdiách sa látky TCM predpisujú ako samostatné látky a u väčšiny pacientov môže byť potrebné spoločné podávanie dvoch alebo viacerých látok (APS plus metformín alebo APS plus inzulín).

Záver

Na záver sme demonštrovali, že APS má významné účinky na DN, APS nielen významne znížil poškodenie funkcie obličiek v počiatočnom štádiu a albumín v moči v strednom a neskorom štádiu, ale tiež zlepšil renálne tubulárne intersticiálne poškodenie u potkanov DN. Mechanizmus môže súvisieť so zníženou reguláciou expresie TGF- 1 a -SMA, a teda s oneskorením v progresii renálnej intersticiálnej fibrózy u potkanov DN.

Referencie

1 Pang GM, Yan Y, Zhu P a kol. Klinický návrh špecifikácie tradičnej čínskej medicíny o diabetickej periférnej neuropatii. Chin J Tradit Chin Med Pharm 2010,

2: 260-264. 2. Wang YZ, Zhang ZH. Mechanizmus diabetickej nefropatie. Chin Rem Clin 2008, 8: 58-60.

3. Xiang HD. Patologické pri diabetickej nefropatii. Int J Endocrinol 2004, 24: 125-136.

4. Min XL, Lan LG. Účinok injekcie Shu-Tong na diabetickú nefropatiu. Shanxi J Tradit Chin Med 2008, 29: 407-409.

5. Gao ZT, Wang G. Vplyv kapsuly Huangkui na mikrozápal u pacientov s cukrovkou. Chin J Integr Tradit West Nephrol 2011, 12: 1104-1105.

6. L Lin, Ni Q, Liu XM. Kapsula Tang-Wei-Kang zvráti diabetickú nefropatiu u 132 pacientov. J Med Res 2008, 37: 46-50. 7. Wang HW, Qing N, Pang JL a kol. Štúdia o pravidle čínskej medicíny pri liečbe diabetickej nefropatie. Chin Arch Tradit Chin Med 2008, 26: 2365-2368.

8. Lin L, Guo L. Vplyv TWK na expresiu MMP -9 v kôre obličiek u diabetických potkanov vyvolaných streptozotocínom. J Shanxi Coll Tradit Chin Med 2003, 4: 8-18.

9. Lin L, Qing Q, Liu XM. Účinky a mechanizmy kapsuly Tang-Wei-Kang na ochranu funkcie obličiek u potkanov s cukrovkou. Chin J Chin Mat Med 2003, 28: 62-66.

10. Wang W, Koka V, Lan HY. Transformačný rastový faktor-beta a signalizácia Smad pri ochoreniach obličiek. Nephrol 2005, 10: 48-56.

11. Alexopoulos E, Gionanlis L, Papayianni E, a kol. Prediktory výsledku pri idiopatickej rýchlo progresívnej glomerulonefritíde. BMC Nephrol 2006, 7: 1-13.

12. Wang HG. Odvar a materiál Medica. Ľudové lekárske nakladateľstvo, 1986.

13. Wu Q. Zlaté zrkadlo medicíny. Čínska medicína, 2002.

14. Ji Y, Li JC, Meng JY a kol. Štúdia dvojsmerného regulačného účinku dvojice liečiv Ban Xia (Pinellia ternata) a Huanglian (Coptis Chinensis) na gastrointestinálny pohyb myší. Tradit Med Res 2018, 3: 148-156.

15. Ji Y, Wang TR, Zhang KX a kol. Literárny rozbor pravidelnosti a nežiaducich reakcií škorice a jej prípravkov na predpis. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 163-168.

16. Zhou Y, Wu Y. Účinky polysacharidu astragalus na transdukciu inzulínového signálu v obličkovom tkanive potkanov s diabetom 2. typu. J Hubei Med Univ 2005, 18: 242-247.

17. Xu Y, Zhou SW, Tang JL a kol. Optimálny výber potkaních modelov experimentálnej diabetickej nefropatie. Acta Acad Med Milita 2006, 28: 2247-2249.

18. Li ZJ, Zhang Y. Pokroky vo výskume na zvieracom modeli diabetickej nefropatie. Chin B Life Sci 2011, 23: 90-95.

19. Yang F, Tang LQ, Wang FL a kol. Vplyvné faktory na vznik experimentálnej diabetickej nefropatie u potkanov. Anhui Med Pharma J 2012, 16: 735-738.

20. Yaribeygi H, Mohammadi MT, Rezaee R, a kol. Fenofibrát zlepšuje funkciu obličiek zlepšením expresie NOX-4, IL-18 a p53 v experimentálnom modeli diabetickej nefropatie. J Cell Biochem 2018.

21. Zhao Y, Huang W, Wang J a kol. Taxifolín zmierňuje diabetickú nefropatiu u diabetických potkanov vyvolaných streptozotocínom. Am J Transl Res 2018, 10: 1205-1210.

22. Boukhalfa G, Desmouliere A, Rondeau E, a kol. Vzťah medzi expresiou aktínu alfa-hladkého svalstva a fibrotickými zmenami v ľudských obličkách. Exp Nephrol 1996, 4: 241-247.

23. Hewitson TD, Becker GJ. Intersticiálne myofibroblasty pri IgA glomerulonefritíde. Am J Nephrol 1995, 15: 111-117.

24. Tang WW, Van GY, Qi M. Myofibroblast a alfa 1 (III) kolagén pri experimentálnej tubulointersticiálnej nefritíde. Kidney Int 1997, 51: 926-931.

25. Iwano M, Plieth D, Danoff TM, a kol. Dôkaz, že fibroblasty pochádzajú z epitelu počas fibrózy tkaniva. J Clin Invest 2002, 110: 341-350.

26. Grupp C, Lottermoser J, Cohen DI, a kol. Transformácia vnútorných medulárnych fibroblastov potkana na myofibroblasty in vitro. Kidney Int 1997, 52: 1279-1290.

27. Ina K, Kitamura H, Tatsukawa S, a kol. Význam -SMA v myofibroblastoch sa objavuje pri renálnej tubulointersticiálnej fibróze. Histol Histopathol 2011, 26: 855-866.

28. Murphy JT, Duffy SL, Hybki DL a kol. Permeabilita ľudských mikrovaskulárnych pľúcnych endotelových buniek sprostredkovaná trombínom je závislá od vápnika. J Trauma 2001, 50: 213-222.

29. Satpathy M, Gallagher P, Lizotte-Waniewski M, et al. Trombínom indukovaná fosforylácia regulačného ľahkého reťazca myozínu II v kultivovaných endotelových bunkách rohovky hovädzieho dobytka. Exp Eye Res 2004, 79: 477-486.

30. Biruková AA, Šmurová K, Birukov KG, et al. Úloha Rho GT zohráva pri dysfunkcii bariéry pľúcnych vaskulárnych endotelových buniek indukovanej trombínom. Microvasc Res 2004, 67: 64-77.

31. Z Chen, Y Yuan, X Zou a kol. Zmes Radix Puerariae a Fructus Crataegi inhibuje poškodenie obličiek pri diabete 2. typu prostredníctvom zníženia AKT/PI3K. Bmc Complementary & Alternative Medicine 2017, 17: 454-458.

32. Yu Zhang, N Zhou, H Wang, S Wang a kol. Účinok granúl Shenkang na progresiu chronického zlyhania obličiek u 5/6 nefrektomizovaných potkanov. Experimental & Therapeutic Medicine 2015, 9: 2034-2042.

33. Y Lian, L Xie, M. Chen a kol. Účinky polysacharidu astragalus a kombinácie reínu na apoptózu u potkanov s chronickým zlyhaním obličiek [J]. Evid Based Complement Alternat Med 2014, 27:1862-1868.

34. Lai YN, Yu MH, Zhu QY a kol. Účinok polysacharidov astragalus na TGF- 1 v obličkovom tkanive diabetických potkanov. Fudan Univ J Med Sci 2002, 29: 255-257. 35. Li ZJ, Zhang Y, Liu YM a kol. Účinok polysacharidov astragalus na expresiu nefrínu a podocínu v podocytoch potkanov s ranou diabetickou nefropatiou. Chin J Pathophysiol 2011, 27: 1772-1776.