Iridoidné a acyklické monoterpénové glykozidy, kankanosidy L, M, N, O a P z Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT(Orobanchaceae) je trváca parazitická rastlina rastúca na koreňochSalvadoraaleboCalotropisdruh, rozšírený v severnej Afrike, Arábii a ázijských krajinách.1) Stonky tejto rastliny (japonsky Kanka-nikujuyou) sa tradične používajú naliečba impotencie, sterility, lumbaga a telesnej slabostiako aj činidlo podporujúce krvný obeh.1,2) Počas našich štúdií o bioaktívnych zložkách zo stoniekC. tubulosa, 3-6) predtým sme uviedli dvadsaťštyri fenyletanoidných aminoglykozidov vrátane kankanozidov H1, H2, I, J1, J2, K1a K2a dva acylované oligocukry z čerstvých stoniekC. tubulosa. 5,6) Okrem toho, riaditeľfenyletanoidové glykozidy, echinakozid, akteozid a izoakteozidZistilo sa, že inhibujú zvýšenie hladín aspartátaminotransferázy (AST) a alanínaminotransferázy (soli) v sére v poranenej pečeni myší vyvolanéD- galaktozamín (D-GalN)/ lipopolysacharid v dávkach 25-100 mg/kgper os(p.o.). Boli tiež objasnené štrukturálne požiadavky fenyletanoidových glykozidov na hepatoprotektívnu aktivitu.5) V tejto pokračujúcej štúdii o zložkách v čerstvých stonkáchC. tubulosaďalej sme izolovali jedenásť iridoidných glykozidov vrátane kankanozidov L (1), M (2) a N (3), sedem acyklických monoterpénových glykozidov vrátane kankanozidov O (4) a P (5), tri fenylpropanoidy a štyri lignany. Tento článok sa zaoberá izoláciou a objasnením štruktúry piatich nových zlúčenín (1-5).

PRÍRODNÁ CISTANCHE TUBULOSA NA ZĽAVENIE SEXUÁLNEJ DYSFUNKCIE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Čerstvé stonky C. tubulosa (kultivované v Urumqi, provincia Xinjiang, Čína) sa extrahovali metanolom pod refluxom, čím sa získal metanolický extrakt (8,36 % z čerstvých stoniek). Z metanolového extraktu sa frakcie eluované H2O a MeOH (5,63 % a 2,73 %, v uvedenom poradí) získali stĺpcovou chromatografiou Diaion HP-20 (H20—>MeOH), ako je opísané vyššie.5) Frakcia eluovaná MeOH bola podrobený SiO2 a ODS kolónovej chromatografii a nakoniec HPLC, aby sa získali kankanosidy L (1, 0.0026 %), M (2, 0.{{27 }}001 %), N (3, 0.00{{60}}7 %), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) a P (5, 0 .0002 %), 6-deoxykatalpol3,7) (6, 0,197 %), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583 %), glurozid3,7) (8, 0,0443 %), kankanoizid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 %), kyselina mussaenozidová3,7) ( 10, 0,0056 %), 8- kyselina epilogánová3,8) (11, 0,0023 %), 8-kyselina epideoxylogánová3,7) (12, 0,0004 %), kyselina geniposidová3,7) (13, 0,0040 % ), kankanozid E3) (14, 0,0026 %), (2E,6Z)-8-bD-glukopyranozyloxy-2,6-dimetyl-2,6-kyselina oktadiénová3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 %), (2E,6E)-3,7-dimetyl-8-hydroxyoktadién-1-yl-ObD-glukopyranozid10) (16, 0,0082 %), 8-hydroxygeraniol 8-O-bD-glukopyranozid11) (17, 0,0044 %), betulalbuzid A12) (18, 0,0004 %), ihličnan13) (19, 0,0002 %), syring 20, 0,0015 %), sinapový aldehyd 4-ObD-glukopyranozid14) (21, 0,0001 %), ( )-pinorezinol ObD-glukopyranozid4,8,15) (22, 0,0010 %), eucommin A16) (23000,26) %), izoeukommín A17) (24, 0,0010 %) a ( )-syringarezinol ObD-glukopyranozid4,8,18 (25, 0,0044 %).

Štruktúry kankanozidov L (1), M (2) a N (3)

Kankanozid L (1) sa získal ako biely prášok s negatívnou optickou rotáciou ([a]D 26 - 45,7 v MeOH). Jeho IR spektrum ukázalo silný absorpčný pás pri 3433 a 1{{20}}}80 cm- 1, čo naznačuje glykozidovú skupinu. Bombardovanie rýchlymi atómami (FAB)-MS 1 cyklu v pozitívnom a negatívnom iónovom móde ukázalo kvázimolekulárne iónové píky pri m/z 371 [M Na] a 347 [M-H]-, v danom poradí, a molekulový vzorec bol stanovené ako C15H24O9 meraním FABMS s vysokým rozlíšením. Kyslá hydrolýza zlúčeniny 1 s 1,0 M kyselinou chlorovodíkovou (HCl) uvoľnila D-glukózu, ktorá sa identifikovala analýzou HPLC s použitím optického rotačného detektora.3-6)1H- a 13C-NMR spektrá zlúčeniny 1 (CD3OD, tabuľky 1, 2), ktoré boli priradené rôznymi NMR experimentmi,19) vykazovali signály priraditeľné štyrom metylénom [d 1,43 (1H, br dd, J= cca 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= cca 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= cca 8). , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

cca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (po 1H, obidva d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], dva metíny [d 2,15 (1H, dd, J=7,2, 8,9 Hz, 9-H) a 2,23 (1H, m, 5-H)] a acetálová skupina [d 4,81 (1H, d, J{{28 }},9 Hz, 1-H)] spolu s b-glukopyranozylovou skupinou [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Ako je znázornené na obr. 1, experiment 1H–1H korelačnej spektroskopie (1H–1H COSY) na 1 indikoval prítomnosť čiastkových štruktúr napísaných tučnými čiarami. V experimente heteronukleárnej korelácie s viacerými väzbami (HMBC) na 1 boli pozorované korelácie s dlhým dosahom medzi nasledujúcimi protónmi a uhlíkmi (1-H a 3-C, 8-C; {{ 49}}H a 1-C; 8-C, 9-C; }}H2 a 7-C, 8-C; 1 -H a 1-C), ako je znázornené na obr. 1. Ďalej bola relatívna stereoštruktúra 1 charakterizovaná fázovo citlivou experiment jadrovej Overhauserovej vylepšenej spektroskopie (fázovo citlivá NOESY), ktorý ukázal NOE korelácie medzi nasledujúcimi protónovými pármi (1-H a 3aH; 3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H a 5-H, 5-H a 6b-H, 9-H a 7-H; a 10-H2), ako je znázornené na obr. 1. 1H- a 13C-NMR spektrá 1 boli superponovateľné na spektrá hlavnej iridoidnej zložky 6-deoxykatalpolu (6), s výnimkou signálov spôsobených na nasýtený d-laktolový zvyšok. Nakoniec hydrogenáciou 6 sa získala 1, takže stereoštruktúra kankanozidu L bola objasnená ako 3,{101}}dihydro-6-deoxykatalpol (1).

PRÍRODNÁ CISTANCHE TUBULOSA NA ZĽAVENIE PORUCHY BUDENIA POŠTY PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosid M (2) sa získal ako biely prášok s negatívnou optickou rotáciou ([a]D 26 - 18,7 v MeOH). IR spektrum zlúčeniny 2 ukázalo absorpčné pásy pri 3433, 1736, 1655 a 1076 cm- 1, ktoré možno pripísať hydroxylovým, d-laktónovým, olefínovým a éterovým skupinám. FAB-MS spektrum kladných iónov 2 ukázalo kvázimolekulárny iónový pík pri m/z 353 [M Na] a molekulový vzorec bol stanovený ako C15H2208 meraním kladných iónov FAB-MS s vysokým rozlíšením. Kyslá hydrolýza zlúčeniny 2 s 1,0 M HCl uvoľňuje D-glukózu. 'H- a13CNMR spektrá 2 (CD3OD, tabuľky 1, 2) ukázali signály priraditeľné štyrom metylénom [d 1,66, 2,11 (1H každý, oba m, 4-H2), 2,15, 2,75 (každý 1H, obidva m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (po 1H, obidva d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], dva metíny [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], olefín [d 5,94 (1H, m, 7-H)] a nasýtená laktónová skupina (d C 174,9) spolu s bD-glukopyranozylovým zvyškom [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Ako je znázornené na obr. 1, experiment 1 H–1 H COZY na 2 naznačil prítomnosť čiastkových štruktúr napísaných tučnými čiarami a v experimente HMBC boli pozorované korelácie na veľké vzdialenosti medzi nasledujúcimi protónovými a uhlíkovými pármi ({{ 103}}H a 1-C; 7-C; 9-C; }}H2 a 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H a 10-C); Relatívna stereoštruktúra 2 bola charakterizovaná fázovo citlivým NOESY experimentom, ktorý ukázal NOE korelácie medzi nasledujúcimi protónovými pármi (3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H a 5-} H;

Kankanozid N (3) sa izoloval ako biely prášok s negatívnou optickou rotáciou ([a]D 25 - 24,6 v MeOH). V FAB-MS s kladnými iónmi 3 sa pozoroval kvázimolekulárny pík iónov pri m/z 371 [M Na]. Molekulový vzorec C16H28O8 bol stanovený meraním FAB-MS s vysokým rozlíšením. Kyslá hydrolýza 3 s 1,{14}} M HCl uvoľňuje D-glukózu. Údaje1H- a 13C-NMR (CD3OD, tabuľky 1, 2) ukázali signály priraditeľné k metylu [d 1.07 (3H, d, J= 7,2 Hz, {{ 28}}H3)], štyri metylény {d 1,37, 1,87 (po 1H, obidva m, 7-H2), 1,65, 1,81 (po 1H, obidva m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] a [3,70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, štyri metíny [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] a poloacetálová skupina [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] spolu s bD-glukopyranozylovou skupinou [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101 }}H)]. Iridoidná štruktúra 3 bola objasnená experimentmi 1H–1H COSY a HMBC a relatívna stereoštruktúra bola charakterizovaná fázovo citlivým NOESY experimentom, ako je znázornené na obr. 1. V dôsledku toho bola objasnená sterostruktúra 3, ako je znázornené.

PRÍRODNÁ CISTANCHE TUBULOSA NA RIEŠENIE SEXUÁLNEHO PROBLÉMU PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Štruktúry kankanozidov O (4) a P (5)

Kankanozidy O (4) a P (5), C16H26O8, sa tiež získali ako biele prášky s negatívnou optickou rotáciou (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 v MeOH). IR spektrá 4 a 5 ukázali absorpčné pásy pri 3433, 1696, 1647 a 1076 cm- 1 pre 4 a 3434, 1701, 1647 a 1{ {95}}76 cm- 1 pre 5, ktoré možno pripísať glykozidickým, karboxylovým a olefínovým funkciám. Ich UV spektrá vykazovali spoločné absorpčné maximum pri 217 nm, čo ukazuje na prítomnosť skupiny a,b-nenasýtenej karboxylovej kyseliny v oboch z nich. Kyslá hydrolýza 4 a 5 uvoľnila D-glukózu, zatiaľ čo enzymatickou hydrolýzou s glukozidázou 4 a 5 poskytli (2E,6E)-8-hydroxy-2,6-dimetyl{{37} },6-kyselina oktadiénová20) (4a) a (2E,6E)-8-hydroxy-3,7-dimetyl-2,{{ 47}}kyselina oktadiénová21) (5a). 1H- a 13C-NMR dáta 4 (CD3OD, tabuľky 2, 3) ukázali signály priraditeľné dvom metylom [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], tri metylény {d 2,19 (2H, br t, J= cca 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} a dva trisubstituované olefíny [d 5,41 (1H, ddd, J= 1,2, 6,2, 7,6 Hz, 7-H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}},2, 1,0 Hz, 3-H)] spolu s b-Dglukopyranozylovou časťou [d 4,34 (d, J= 7},8 Hz, 1 -H)]. Porovnaním uhlíkových signálov v 13C-NMR spektre 4

s tými z 4a bol pozorovaný glykozylačný posun v polohe 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Poloha glukozidovej väzby bola tiež potvrdená experimentmi HMBC, ako je znázornené na obr. 2. Následne sa objasnila stereoštruktúra zlúčeniny 4 na (2E,6E)-8-bD-glukopyranozyloxy-2,{{ kyselina 16}}dimetyl-2,6-oktadiénová. Na druhej strane, 1H- a 13C-NMR dáta 5 (CD3OD, tabuľky 2, 3) indikovali prítomnosť (2E,6E)-8-hydroxy{{30}} ,7-dimetyl-2,6-skupina kyseliny oktadiénovej [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (po 1H, oba br d, J= cca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7,1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] spolu s bD-glukopyranozylovou časťou [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. Konektivita bD-glukopyranozylovej skupiny v 5 bola objasnená na základe experimentov HMBC, ako je znázornené na obr. 2. Okrem toho sa pozoroval typický glykozylačný posun pre signály v polohe 8- (d C5: 75,6; 5a: 68,8). na základe vyššie uvedených dôkazov bola stereoštruktúra 5 určená ako (2E,6E)-8-bD-glukopyranozyloxy{100}},{101}}dimetyl{102}},{103 kyselina oktadiénová.

Účinky zložiek na cytotoxicitu indukovanú faktorom nekrózy nádorov-a (TNF-a) v bunkách L929

Je známe, že TNF-a sprostredkováva rôzne poškodenia orgánov prostredníctvom indukcie bunkovej apoptózy. V prípade pečene sa biologické účinky TNF-a podieľajú na poškodení pečene vyvolanom hepatálnymi toxínmi, ischémiou/reperfúziou, vírusovou hepatitídou a alkoholom.22-24) Preto sa TNF-a považuje za dôležitým cieľom na objavenie protizápalových a hepatoprotektívnych látok. Na základe vyššie uvedeného konceptu sme skúmali ochranné zložky z prirodzene sa vyskytujúcich produktov na bunkovú smrť indukovanú TNF-a v bunkách L929, bunkovej línii citlivej na TNF-a.25) Predtým sme uviedli

že u niekoľkých zložiek z Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) a Sapindus rarak, 36-38) sa zistili inhibičné účinky TNF-a-indukovanej cytotoxicity v L929 bunkách. Keďže fenyletanoidové zložky C. tubulosa (naprechinakozid, akteozid a izoakteozidatď.) 5) tiež inhibovali túto cytotoxicitu, ďalej sme skúmali zložky iridoidu, fenylpropanoidu a lignanu, ako je uvedené v tabuľke 4. Výsledkom bolo, že kankanozid A (9, inhibícia: 16,3 ± 2.0 % pri 1 00 mM), kyselina mussaenozidová (10, 44,7 ± 8,7 %), 8-kyselina epigamová (11, 10,7 ± 0,4 %), 8-hydroxy geraniol 8-ObD- Zistilo sa, že glukopyranozid (17, 21,3 ± 2,4 %) a ( )-pinorezinol ObD-glukopyranozid (22, 22,3 ± 1,6 %) vykazujú významnú aktivitu. Hoci ich aktivity boli slabšie ako aktivity echinakozidu (IC50= 31.1 mM), akteozidu (17,8 mM) a izoaceteozidu (22,7 mM), základných fenyletanoidových zložiek.5)

PRÍRODNÁ CISTANCHE TUBULOSA NA ZLEPŠENIE SEXUÁLNEJ FUNKCIE PHGS75% ECH 30% ACT 12%