Faktor indukovaný hypoxiou pericytov v obličkách reguluje erytropoézu, ale nie fibrózu obličiek
Mar 13, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Szu-Yu Pan1,2,3 a kol
Inhibítory enzýmu prolylhydroxylázovej domény (PHD) sú účinné pri liečbechronické ochorenie obličiek(CKD) - asociovaná anémia stabilizáciou hypoxiou indukovateľného faktora (HIF), čím sa zvyšuje erytropoetín a následne erytropoéza. Obavy z progresie CKD je však potrebné riešiť v klinických štúdiách. Hoci predklinické štúdie preukázali protizápalový účinok vobličkymodely chorôb, vplyv inhibítorov PHD naobličkyfibrózabol nekonzistentný pravdepodobne preto, že účinky HIF sú závislé od typu bunky a kontextu. Hlavnýobličkybunky produkujúce erytropoetín sú pericyty, ktoré produkujú erytropoetín prostredníctvom génovej transkripcie závislej od HIF-2a. Obavy z vplyvu HIF v pericytoch naobličkyfibrózavyplýva zo skutočnosti, že pericyty sú hlavnými prekurzorovými bunkami myofibroblastov pri CKD. Pretože bunky exprimujúce Gli1 spĺňajú morfologické a anatomické kritériá pre pericyty, indukovali sme Gli1 plus bunkovo špecifickú stabilizáciu HIF alebo knockout, aby sme študovali vplyv HIF v pericytoch naobličkypatológia myší s alebo bez fibrotického poškodenia vyvolaného jednostrannou ureterálnou obštrukciou. V porovnaní s kontrolami z rovnakého vrhu myši s pericytovo špecifickou stabilizáciou HIF v dôsledku von Hippel-Lindau proteínu alebo knockoutu PHD2 vykazovali skôr zvýšený sérový erytropoetín a polycytémiu než rozoznateľný rozdiel vobličkyfibróza. V porovnaní s Gli1pluspericyty vytriedené z kontrol zo vrhu, Gli1pluspericyty vytriedené z PHD2 knockoutovaných myší vykazovali skôr zvýšenú expresiu génu erytropoetínu ako rozpoznateľné zmeny v expresii Col1a1 alebo Acta2. Okrem toho knokaut HIF-1a alebo HIF{6}}a špecifický pre pericyty neovplyvnilobličkyfibróza. Naša štúdia teda podporuje absenciu negatívnych účinkov inhibítorov PHD naobličkyfibrózamyší napriek stabilizácii HIF v pericytoch.
KĽÚČOVÉ SLOVÁ: erytropoetín;fibróza; hypoxiou indukovateľný faktor; pericyte
Cistancheje dobré preobličkovéfunkciu
Prekladové vyhlásenie
Inhibítory enzýmu prolylhydroxylázovej domény (PHD) sú účinné pri liečbe anémiechronickýobličkychoroba(CKD) prostredníctvom stabilizácie hypoxiou indukovateľného faktora (HIF), čím sa zvýši erytropoetín (EPO) a erytropoéza. Obličkové pericyty produkujú EPO prostredníctvom HIF-2a v normálnej fyziológii, ale pri CKD sa odlišujú od myofibroblastov produkujúcich jazvy. Nie je jasné, či má vplyv expresia HIF v obličkových pericytochobličkovéfibróza. Predklinickými myšacími modelmi manipulácie HIF a renálnej fibrózy sme ukázali, že manipulácia HIF špecifická pre Gli1 plus pericyt ovplyvňuje produkciu EPO a erytropoézu, ale nierenálna fibróza. Naša štúdia podporuje absenciu negatívnych účinkov inhibítorov PHD na renálnu fibrózu.
Základom liečby anémie u pacientov schronickýobličkychoroba(CKD) sú látky stimulujúce erytropoézu a doplnky železa. 1,2 Inhibítor enzýmu prolylhydroxylázovej domény (PHD) sa v poslednej dobe ukazuje ako sľubná terapeutická látka pre anémiu spojenú s CKD hlavne prostredníctvom stabilizácie hypoxiou indukovateľného faktora (HIF) a tým zvyšovania produkcie erytropoetínu (EPO).3–5 aplikácia inhibítorov PHD alebo stabilizátorov HIF u pacientov s CKD je bezprostredná v dohľadnej budúcnosti, ak sa objavia obavy týkajúce sa možnej angiogenézy, rastu nádoru, abnormálneho metabolizmu glukózy a zrýchleného poklesuobličkyklinickými skúškami.
HIF je najdôležitejší známy bunkový mechanizmus snímania kyslíka.6,7 Funkčný HIF pozostáva z podjednotiek a a b. HIF-a je kyslíkovo labilná podjednotka, ktorá sa rýchlo degraduje za normoxických podmienok v prítomnosti kofaktorov. HIF-b nie je regulovaný napätím kyslíka. Degradácii HIF-a predchádza hydroxylácia prolínu a polyubikvitinácia. Hydroxylácia prolínu je katalyzovaná PHD v prítomnosti kyslíka, železa a 2-oxoglutarátu ako kofaktorov. Polyubikvitináciu potom katalyzuje E3 ubikvitín ligáza zložená z komplexu von Hippel Lindau proteín (pVHL)-Elongin BC-CUL2. Požiadavka železa, PHD a pVHL na degradáciu HIF umožňuje stabilizovať HIF v normoxickom stave s inhibíciou alebo znížením ktorejkoľvek z týchto kľúčových zložiek.
Obličkové pericyty sú zabudované do mikrovaskulárnej bazálnej membrány a sú v tesnom kontakte s endotelovými bunkami, aby podporovali mikrovaskulatúru a regulovali prietok krvi.8–13 Uviedli sme, že obličkové pericyty sú obličkové bunky produkujúce EPO (REPC), ktoré produkujú EPO prostredníctvom HIF{{3 }} a-závislá génová transkripcia indukovaná anémiou alebo hypoxiou.14 Pericyty sa ukázali ako hlavný zdroj myofibroblastov produkujúcich jazvy pri CKD,8,10,11,15,16, čo je zistenie podporené inými nezávislými správami.17, 18 Hoci prechod na myofibroblasty vedie k represii transkripcie Epo, nadmerná expresia HIF-2a čiastočne obnovuje produkciu EPO v myofibroblastoch.14,17
Naše štúdie to ukázalirenálna fibrózamôžu byť oslabené prerušením prechodu pericyt-myofibroblast prostredníctvom farmakologickej blokády transformujúceho rastového faktora-b, 19 rastového faktora odvodeného od krvných doštičiek,20 vaskulárneho endotelového rastového faktora,21 alebo dráh WNT/b-katenínu.22
Pokiaľ ide o obavy zo zrýchleného poklesuobličkyfunkcie u pacientov liečených inhibítormi PHD je málo známe o účinkoch aktivity HIF v pericytoch alebo myofibroblastoch narenálna fibróza.23 Naopak, účinky nadmernej expresie HIF alebo knockout narenálna fibrózaboli rozsiahle študované, buď neselektívne24–27 alebo selektívne v tubulárnych bunkách,28,29 endotelových bunkách30 a podocytoch.31,32 Výsledky však boli nekonzistentné pravdepodobne preto, že účinky HIF sú závislé od typu buniek a kontextu.
Štúdie in vitro s použitím izolovaných ľudských obličkových fifibroblastov33 a potkaních obličkových medulárnych intersticiálnych buniek34 naznačujú profibrotickú úlohu HIF-1a. Avšak Souma et al.17 uviedli, že sprievodný knockout PHD1, PHD2 a PHD3 v REPC myší Tg(Epo-Cre), ktoré exprimujú Cre rekombinázu pod kontrolou promótora Epo, neovplyvňujerenálna fibrózav modeli unilaterálnej ureterálnej obštrukcie (UUO). Renálna expresia Epo je však nízka a veľkosť skupiny REPC je malá v rovnovážnom stave bez hypoxie alebo anémie, 35 čo naznačuje, že transgén Epo-Cre definuje iba malú časť celkových REPC. Nedávno sa ukázalo, že obličkové bunky exprimujúce Gli{2}} sú pericyty a diferencujú sa na myofibroblasty naobličkyporanenie.11,36 Ablácia buniek Gli1 plus zlepšuje indukciu UUOobličkovéfibróza.11 Tu sme použili myši s Cre rekombinázou pod kontrolou Gli1 promótora/enhanceru na štúdium účinkov pericytovo špecifickej stabilizácie HIF alebo knockoutu narenálna fibróza.
cistanche je dobre naobličky
METÓDY
Myši
Gli1CreERT2/ plus, Tg(UBC-CreERT2), VhlF/F,ROSA26fstdTomato/fstdTomat, Hif1aF/Fa Hif2aF/F myši boli zakúpené od Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Egln1F/F myši láskavo poskytol profesor Guo-Hua Fong (University of Connecticut Health Center, Farmington, CT). Všetky štúdie sa uskutočnili podľa protokolu schváleného Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a ich používanie, National Taiwan University College of Medicine (IACUC 20160499).
Jednostranná ureterálna obštrukcia
Postup bol podrobne opísaný v predchádzajúcej štúdii.14 Stručne povedané, u dospelých myší vo veku 7 až 9 týždňov pod anestéziou ketamínom/xylazínom (ketamín 100 mg/kg, xylazín 10 mg/kg) uretery myší boli obnažené a podviazané nylonovým stehom cez rez na ľavom boku. Dátum operácie UUO bol identifikovaný ako deň 0 experimentu.
Štatistické analýzy
Údaje boli vyjadrené ako priemerplusSD. Štatistické analýzy sa uskutočňovali s použitím GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Štatistická významnosť bola stanovená Studentovým t-testom alebo Mann-Whitney U testom, ako je uvedené v titulkoch.
Doplnkové metódy
Úplné metódy vrátane myší, UUO, podávania tamoxifénu, kvantitatívnej polymerázovej reťazovej reakcie, imunoblotu, imunohistochémie, hybridizácie RNA in situ, mikroskopie, prietokovej cytometrie a izolácie obličkových buniek Gli1 plus sú v doplnkových metódach.
VÝSLEDKY
Zvýšená produkcia EPO a erytropoéza u myší s knockoutom Gli1 plus pericyt-špecifickým PHD2
Aby sme demonštrovali, že Gli1 plus pericyty produkovali EPO predtým, ako sme zamierili študovať účinok manipulácie HIF špecifickej pre pericyty narenálna fibróza, vygenerovali sme Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fmyši na podmienečnú indukciu PHD2 knockoutu v Gli1 plus pericytoch (obrázok 1a). V porovnaní so súrodencom Egln1F/Fmyši, Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fmyši vykazovali vyššiu hladinu EPO v sére (obrázok 1b), vyššiu hmotnosť sleziny (obrázok 1c), viac TER-119pluserytroidná línia v splenocytoch do 14. dňa po tamoxiféne (obrázok 1d), ale podobná zmena telesnej hmotnosti po podaní tamoxifénu (doplnkový obrázok S1A). Hematokrit (Hct) bol vyšší v Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fmyši v deň 21 (obrázok le). Analyzovali sme renálnu Epo mRNA a periférny krvný obraz 14 dní po tamoxiféne. V porovnaní so súrodencom Egln1F/Fmyši, Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fmyši mali zvýšenú renálnu expresiu Epo (obrázok 1f) a periférne retikulocyty (obrázok 1g), zatiaľ čo počet periférnych bielych krviniek a počet krvných doštičiek sa nelíšili (doplnkový obrázok S1B a C). Na identifikáciu obličkových buniek zodpovedných za expresiu Epo sme vykonali in situ hybridizáciu Epo onobličkysekcie z Egln1F/F a Gli1CreERT2/plus; Egln1F/Fmyši (doplnkový obrázok S2A–F). Zvýšené intersticiálne bunky exprimujúce Epo bolo možné identifikovať hlavne v kortikomedulárnom spojení a v menšej miere vo vnútornej dreni a kôre v Gli1CreERT2/plus; Egln1F/Fmyši. Tieto výsledky naznačujú, že knockout PHD2 špecifický pre Gli1 plus pericyt indukoval renálnu produkciu EPO a erytropoézu.
Na určenie, či PHD2 reguluje produkciu EPO v bunkových typoch a orgánoch iných ako pericyty vobličkyvygenerovali sme Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fmyši na vyvolanie globálneho knockoutu PHD2 (doplnkový obrázok S3A). Po podaní tamoxifénu knockout génu Egln1 vobličky, bolo možné zistiť pečeň, slezinu, srdce a pľúca (doplnkový obrázok S4). Vobličky, expresia Egln1 mRNA sa znížila na 4 percentá, čo naznačuje vysokú účinnosť knockoutu PHD2 (doplnkový obrázok S3B). Ako v Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/Fmyši, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fmyši vykazovali progresívny nárast Hct v porovnaní so súrodencom Egln1F/Fmyši (doplnkový obrázok S3C). Najmä Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fmyši vykazovali pokles telesnej hmotnosti (doplnkový obrázok S3D). Pozoruhodne vysoká hladina EPO v sére, okolo 130,000 pg/ml, bola zistená v Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F myší, čo bolo oveľa vyššie ako to, ktoré sa dosiahlo flebotómiou (menej ako 5, 000 pg/ml) u myší divokého typu (doplnkový obrázok S3E). Na identifikáciu zdroja sérového EPO sme skontrolovali hladiny Epo mRNA v rôznych orgánoch z Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F,a kontrolné myši z rovnakého vrhu v deň 15. U kontrolných myší z rovnakého vrhu sa Epo mRNA sotva detegovala v žiadnom orgáne. V 5 hlavných orgánoch (obličkypečeň, pľúca, srdce, slezina) Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F myši, iba tieobličkyukázali pozoruhodný nárast Epo mRNA, čo naznačujeobličkyako hlavný zdroj sérového EPO (doplnkový obrázok S3F a G). In situ hybridizácia Epo mRNA naobličkyrezy odhalili, že obličkové bunky s expresiou Epo boli intersticiálne bunky s pericytovou morfológiou v Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fmyši (doplnkový obrázok S5). Preto tieto údaje potvrdili, že obličkové Gli1 plus pericyty produkovali EPO na PHD2 knockout, čím sa zvýšila erytropoéza a Hct.
Knokaut pVHL špecifický pre Gli1 plus pericyt vedie k polycytémii, ale nemá žiadny vplyv na renálnu fibrózu
V súlade s predchádzajúcimi správami11,36 zvýšil Gli1pluspericyty boli zobrazené v kortikomedulárnom spojení a dreni po poranení UUO v Gli1CreERT2/plus; ROSA26fstdTomato/ fstdTomatoreportérske myši (doplnkový obrázok S6), čo naznačuje, že Gli1 plus pericyty proliferujú a významne prispievajú k myofibroblastom počasrenálna fibróza.Preto sme študovali účinok stabilizácie alebo knockoutu HIF v Gli1pluspericyty narenálna fibróza.
Použili sme myši s Gli1pluspericytovo špecifický knockout pVHL, nie PHD2 z dôvodu možnej redundancie v 3 rôznych PHD. Skúmať dlhodobý účinok pericytovo špecifickej stabilizácie HIF naobličkyu myší bez CKD, Gli1CreERT2/plus; VhlF/Fmyši a VhlF/Fsúrodencom z jedného vrhu sa podával tamoxifén vo veku 6 týždňov a potom sa pozorovali až do veku 30 týždňov (doplnkový obrázok S7A). Jedna nečakaná smrť v Gli1CreERT2/plus; VhlF/Fmyši sa vyskytli vo veku 25 týždňov (úmrtnosť 14,3 %), ale vo Vhl nedošlo k žiadnym úmrtiamF/Fsúrodenci. V Gli1 sa zistila slabosť a znížený prírastok telesnej hmotnostiCreERT2/ plus; VhlF/Fmyši už vo veku 16 týždňov (doplnkový obrázok S7B). Kvôli vychudnutiu a neočakávanej smrti boli niektoré myši usmrtené pred dosiahnutím veku 30 týždňov. Patológia odhalila difúznu závažnú erytropoézu v slezine a prekrvenie červených krviniek v pečeni, pľúcach aobličkyvo veku 18 týždňov (doplnkový obrázok S8). Okrem prekrvenia červených krviniek nie je badateľnýfibrózabol pozorovaný v hlavných orgánoch vrátaneobličky. Hladiny Hct a EPO v sére sa zvýšili na 87 plus -2,6 percent a 1604 plus -141 pg/ml vo veku 30 týždňov (tj 24 týždňov po tamoxiféne) (doplnkový obrázok S9A a B)
Pretože nie je rozoznateľnýrenálna fibrózau myší s Gli1 plus pericyt-špecifickým pVHL knockoutom sme indukovali UUO u myší a hodnotili závažnosť renálnej fibrózy o 7 alebo 14 dní neskôr (obrázok 2a). Vymazané alely Vhl v Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fmyši boli zistené vobličkygenómovej DNA polymerázovou reťazovou reakciou, čo naznačuje knockout pVHL v pericytoch (doplnkový obrázok S10). Hct sa zvýšil v Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fmyši aj po operácii UUO (obrázok 2b). Je pozoruhodné, že expresia EPO mRNA bola zvýšená v kontralaterálnom aj UUOobličkyz Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fmyši (obrázok 2c), čo naznačuje, že stabilizácia HIF by mohla aktivovať transkripciu Epo v pericytoch aj myofibroblastoch. Žiadny rozdiel však vrenálna fibrózamedzi Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fa súrodenec VhlF/F myši mohli byť detegované, ako bolo merané oblasťou zafarbenou picrosirius (obrázky 2d a 3a a b) a expresiou Col1a1 mRNA (obrázok 2e) vobličky. Okrem toho sa hladiny mRNA a proteínu a-aktínu hladkého svalstva nelíšiliobličky(Obrázok 2f a g a doplnkový obrázok S11). Aby sme potvrdili, že myofibroblasty si zachovali schopnosť expresie Epo po knockoute pVHL, vykonali sme in situ hybridizáciu Epo a Acta2 naobličkyrezy (doplnkové obrázky S12 a S13). Renálna expresia Acta2 sa drasticky a porovnateľne zvýšila po poranení UUO v oboch Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fa VhlF/Fmyši. V Gli1 bolo možné pozorovať viac intersticiálnych buniek exprimujúcich EpoCreERT2/ plus; VhlF/Fmyši ako vo VhlF/F myši, bez ohľadu na prítomnosť poranenia UUO. Okrem toho bolo možné v UUO identifikovať bunky so súčasnou expresiou Acta2 a Epoobličkyod Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fmyši, ale nie VhlF/Fmyši. V skutočnosti sme v UUO len ťažko dokázali identifikovať bunky exprimujúce Epoobličkyz VhlF/Fmyši. Tieto výsledky naznačujú, že knockout pVHL obmedzený na Gli1 plus pericyty podporoval expresiu Epo, ale nie diferenciáciu myofibroblastov alebo produkciu kolagénu ani po poranení UUO.
Pretože poškodenie UUO vedie k poškodeniu proximálnych tubulárnych buniek a náboru makrofágov,37 hladiny mRNA Havcr1 (kódujúceobličkymolekula poranenia-1) (obrázok 4a) a Adgre1 (kódujúca modul podobný endoteliálnemu rastovému faktoru s obsahom mucínového receptora podobného hormónu 1, tiež známy ako F4/80) (obrázok 4b) zvýšená v UUOobličky, ale medzi Gli1 sa nezistil žiadny rozdielCreERT2/ plus; VhlF/Fa súrodenec VhlF/F myši. Hladiny mRNA Vegfa, Hmox1, Egln1 a Egln3 (kódujúce vaskulárny endotelový bunkový rastový faktor-A, hemoxygenázu-1, PHD2 a PHD3, v tomto poradí) vobličkysa nezmenili (obrázok 4c – f), čo pravdepodobne odráža, že tieto transkripty neboli dominantne produkované Gli1 plus pericytmi alebo sa nezmenili po Gli1 plus pericyte obmedzenom VHL knockout. Hodnotili sme tubulointersticiálne poškodenie pri farbení kyselinou periodickou – Schiffobličkysekcií a nezistil sa žiadny rozdiel medzi Gli1-CreERT2/ plus; VhlF/F,a súrodenec VhlF/Fmyši (obrázky 4g a 5a a b). Pretože sa uvádza, že tamoxifén zmierňujefibróza,38,39 sme predĺžili vymývacie obdobie medzi posledným podaním tamoxifénu a operáciou UUO z 2 týždňov na 4 týždne (doplnkový obrázok S14A). Opäť sa nezistil žiadny rozdiel medzi Gli1CreERT2/ plus; VhlF/F a súrodenec VhlF/F myši (doplnkový obrázok S14B – E). Tieto zistenia naznačujú, že knockout pVHL špecifický pre Gli1 plus pericyt vedie k produkcii EPO a polycytémii, ale nemá žiadny vplyv naobličkovéfibróza.
cistanche je dobre naobličky
Knokaut PHD2 špecifický pre Gli1 plus pericyt zvyšuje produkciu EPO, ale nie produkciu kolagénu alebo diferenciáciu myofibroblastov
Aby sme potvrdili účinky stabilizácie HIF v Gli1 plus pericytoch na bunkovej úrovni, triedili sme bunky tdTomato plus zobličkyz Gli1CreERT2/ plus; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoa Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši po poranení UUO (doplnkové obrázky S15 a S16). Pri mikroskopickom vyšetrení triedené bunky pri excitácii emitovali oranžovo-červenú fluorescenciu (doplnkový obrázok S17A–C). V porovnaní s tými od Gli1CreERT2/ plus; ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši, hladina Egln1 mRNA v tdTomato plus bunkách triedených z kontralaterálnych a UUOobličkyz Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši 7 dní po poranení UUO znížené na 46 percent a 33 percent (doplnkový obrázok S17D a E).
Analyzovali sme hladiny mRNA Epo, Col1a1, Col3a1 a Acta2 v triedených tdTomato plus Gli1 plus pericyty z Gli1CreERT2/ plus;ROSA26fstdTomato/fstdTomatoa Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši. V súlade s výsledkami získanými od myší s knockoutom pVHL špecifickým pre Gli1 plus pericyt, knockout PHD2 v Gli1 plus pericytoch viedol k zvýšenej expresii Epo, ale nemal žiadny vplyv na expresiu Col1a1, Col3a1 a Acta2 na bunkovej úrovni (obrázok 6) , čo potvrdzuje neutrálny účinok stabilizácie HIF na profibrotické vlastnosti pericytov/myofibroblastov.
Gli1+ pericytovo špecifický HIF knockout neovplyvňuje renálnu fibrózu
Pretože tieto experimenty potvrdili neutrálny účinok stabilizácie HIF na profibrotické vlastnosti pericytov/myofibroblastov, vytvorili sme Gli1CreERT2/plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F myši na štúdium účinku HIF knockout v pericytoch/myofibroblastoch narenálna fibróza(Obrázok 7a). Vymazanie Hif1a a Hif2a vobličkybolo možné zistiť vobličkygenómová DNA po podaní tamoxifénu (doplnkový obrázok S18). V porovnaní s kontrolou súrodencov Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F myši mali podobnú zmenu telesnej hmotnosti a hladinu Hct 7 dní po UUO (obrázok 7b a c). V zmyslerenálna fibróza, nebol zistený žiadny rozdiel v oblasti zafarbenej picrosirius, hladiny mRNA Col1a1 a Acta2 vobličky(Obrázok 7d – f). Hladiny mRNA Havcr1 a Adgre1 sa tiež nelíšili (obrázok 7g a h). Zmenili sme dávku a vymývacie obdobie tamoxifénu (doplnkové obrázky S19A a S20A) a výsledky pre ukladanie kolagénu a génovú expresiu boli podobné (doplnkové obrázky S19B – E, S20B – E). Experimenty sme zopakovali v Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F(obrázok 8a–c) a Gli1- CreERT2/ plus ; Hif2aF/F(obrázok 8d – f) myši a nepreukázali rozdiel v indukcii UUOrenálna fibrózav porovnaní s kontrolou súrodencov.
DISKUSIA
Hlavné zistenia tejto štúdie zahŕňali nasledovné: (i) renálna Gli1 plus pericytovo špecifická HIF stabilizácia viedla k produkcii EPO a erytropoéze, ale žiadny účinok na patológiu obličiek s alebo bez poškodenia UUO; a (ii) obličkový Gli1 plus HIF-1a špecifický pre pericyt a knockout HIF{5}} neovplyvnilirenálna fibrózabuď.
Predtým sme uviedli, že pericyty odvodené od obličkových Foxd1 plus progenitorov sú REPC a regulované HIF-2a. 14 V tejto štúdii sme ukázali, že obličkové bunky Gli1 plus sú tiež REPC. Hoci žiadny priamy dôkaz nevysvetľuje vzťah medzi FOXD1 a GLI1 v pericytoch, predchádzajúce štúdie ukázali, že obličkové bunky Foxd1 plus progenitorovo odvodené a bunky Gli1 plus sú pericyty a sú schopné diferencovať sa na myofibroblasty pri poranení.10,11,36 Náš údaje ukázali, že knockout buď PHD2 alebo pVHL špecificky v Gli1 plus pericytoch viedol k zvýšenej renálnej produkcii EPO, erytropoéze a polycytémii, čo je v súlade s nedávnou správou Greenwalda et al.40 Okrem toho v porovnaní s výrazným znížením Epo expresia v UUO obličkách súrodencov divokého typu, expresia Epo v UUO obličkách myší s Gli{17}}špecifickým pVHL knockoutom bola porovnateľná s hladinou zobrazenou v kontrolnej kontralaterálnejobličkyschválenie stabilizácie HIF by mohlo prekonať mechanizmus represie Epo vo fibrotických obličkových myofibroblastoch.14,17 V súlade s naším zistením Souma et al.17 uviedli, že syntéza EPO je obnovená v UUO-obličkymyofibroblasty u myší s knockoutom PHD2. V súlade s našimi zisteniami veľmi nedávna štúdia41 uviedla, že obličkové bunky Gli1 plus sú subpopuláciou receptora rastového faktora odvodeného od krvných doštičiek-b plus REPC a zachovávajú si schopnosť produkcie EPO v UUOobličky.
Klinické štúdie preukázali účinnosť inhibítorov PHD pri liečbe anémie spojenej s CKD.3–5,42–45 Dôležité je, že súhrnné analýzy štúdií fázy III s roxadustatom preukázali nie horšie alebo dokonca lepšie kardiovaskulárne výsledky.46 zatiaľ bola zverejnená správa týkajúca sa účinku inhibítorov PHD na progresiu CKD. Experimentálne bola úloha hypoxie a HIF vrenálna fibrózaje kontroverzná.47,48 U myší vystavených akútnemu poškodeniu obličiek (AKI) vyvolanému ischemicko-reperfúznym poškodením Kapitsinou a kol.24 preukázali, že inhibícia PHD pred AKI sa zlepšujefibróza, zatiaľ čo inhibícia vo fáze skorého zotavenia AKI nie. Okrem toho Uchida et al.26 preukázali, že inhibítor PHD sa môže zlepšiťrenálna fibrózav spojení so znížením prozápalových cytokínov a obnovením hustoty kapilár v obličkách potkanieho modelu CKD vyvolaným 5/6 subtotálnou nefrektómiou, hoci nie je preukázaný žiadny účinok na proteinúriu a hladinu kreatinínu v sére. Na rozdiel od toho nedávna správa ukázala, že inhibítor PHD prispieva k polycytémii a oslabeniu tubulointersticiálnej nefritídy, ale nemá žiadny vplyv na renálnu fibrózu v modeli chronickej tubulointersticiálnej nefritídy vyvolanej adenínom.25 Bol tiež preukázaný protizápalový účinok inhibítorov PHD v obličkách myšieho modelu s obéznym diabetom 2. typu.27 Či PHD inhibítory zlepšujú renálnu fibrózu prostredníctvom zmiernenia intersticiálneho zápalu, si vyžaduje ďalšiu štúdiu. Hoci tieto štúdie neuvádzali účinky inhibítorov PHD na aktiváciu renálnych myofibroblastov, absencia negatívneho účinku na renálnu fibrózu by mohla podporiť ignorovateľný účinok expresie HIF na produkciu kolagénu v obličkových pericytoch. Hodnotenie účinku HIF na obličky je sofistikované.49 Po prvé, rôzne typy buniek môžu exprimovať rôzne izoformy HIF.50 Po druhé, dokonca aj tá istá izoforma HIF môže regulovať rôzne cieľové gény v rôznych typoch buniek.51 Po tretie, expresia a regulácia HIF vo fyziologickom stave môžu byť odlišné od chorých obličiek.50 Okrem toho rýchla degradácia HIF za normoxických podmienok zvyšuje obtiažnosť nepresných analýz hladín proteínu HIF v tkanive.52 Preto predchádzajúce nekonzistentné výsledky týkajúce sa účinku na renálnu fibrózu sú pravdepodobne pretože účinky HIF sú závislé od typu bunky a kontextu. Napríklad dôkazy ukázali, že inhibítor PHD pred AKI vyvolaným ischemicko-reperfúznym poškodením zlepšuje fibrózu po AKI prostredníctvom endotelového HIF-2a-závislého mechanizmu,24,30 zatiaľ čo HIF-1a-závislý zápal , fibróza a dysplázia obličkových buniek sa našli v Tg(Hoxb7-Cre); VhlF/Fmyši, ktoré majú pVHL knockout v zberných kanálikoch a podskupine distálnych tubulov.29 V našej štúdii zameranej na to, či aktivita HIF v pericytoch modulujerenálna fibróza,demonštrovali sme, že produkcia EPO bola podstatne zvýšená v obličkových pericytoch u myší s Gli1 plus pericytovo špecifickou HIF stabilizáciou bunkovo špecifickým pVHL alebo PHD2 knockoutom, a najmä expresia Epo bola udržiavaná v UUO-obličkových myofibroblastoch. Nezistili sme však, že by pericytovo špecifická stabilizácia HIF ovplyvnila prechod pericyt-myofibroblast, produkciu kolagénu v myofibroblastoch alebo UUO-indukovanúobličkyfibróza. Okrem toho expresie Havcr1 a Adgre1 neboli ovplyvnené v obličkách UUO, čo znamená, že závažnosť renálneho tubulárneho poškodenia a zápalu obličiek nebola ovplyvnená u myší so stabilizáciou HIF špecifickou pre pericyt. Pretože myofibroblast je typ buniek produkujúcich jazvy počasrenálna fibrózanaše výsledky môžu poskytnúť experimentálny dôkaz o absencii negatívneho účinku stabilizácie HIF inhibítormi PHD na renálnu fibrózu. V súlade s našou štúdiou to uvádza aj Souma et al.17renálna fibrózanie je ovplyvnená sprievodným knockoutom PHD1, PHD2 a PHD3 v REPC myší Tg(Epo-Cre).
cistanche je dobre naobličkové
V našej štúdii Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/F myši sa vyznačovali zvýšenou produkciou endogénneho EPO a polycytémiou. Či ovplyvňuje zvýšená hladina EPO v sére polycytémierenálna fibrózaje kontroverzný. Existujú rozsiahle štúdie o účinkoch exogénneho rekombinantného EPO na AKI alebo CKD.53–57 V skorších štúdiách sa uvádza, že vysoké dávky rekombinantného EPO spôsobujú polycytémiu, hypertenziu a zhoršenie funkcie obličiek.56,58 Zaujímavé je, že niektoré štúdie odhalili že nízka dávka exogénneho analógu EPO, taká nízka, že neindukuje erytropoézu, má za následok renoprotektívne účinky vo zvyškuobličkya modely myší db/db.59,60 Okrem toho sa ukázalo, že flebotómia na normalizáciu polycytémie zmierňuje zvýšenú albuminúriu u myší db/db vystavených vysokej dávke exogénneho analógu EPO.60 V klinickej kohorte pacientov s polycytémiou vera, ochorenie charakterizované polycytémiou bez zvýšeného endogénneho EPO,61 frekvencia CKD (definovaná ako odhadovaná rýchlosť glomerulárnej filtrácie<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2="" )="" was="" 27%,="" which="" was="" higher="" than="" in="" the="" general="" population.62,63="" however,="" the="" annual="" decline="" rate="" of="" estimated="" glomerular="" filtration="" rate="" was="" slower="" in="" patients="" with="" polycythemia="" vera="" than="" with="" other="" myeloproliferative="" diseases.="" in="" the="" study="" of="">CreERT2/ plus; VhlF/F myši vystavené poraneniu UUO, naše údaje ukázali zvýšenú renálnu expresiu Epo a polycytémiu, ale bez zmenyrenálna fibrózazápalom a tubulárnym poranením. Celkové účinky pericytovo špecifickej stabilizácie HIF na poškodenie obličiek, zápal a fibrózu boli teda neutrálne, čo podporilo bezpečnosť inhibítorov PHD pri progresii CKD. Renálne pericyty možno definovať ako heterogénnu populáciu fibroblastov v tesnom kontakte s endotelovými bunkami vobličky.8–13 Kvôli vývojovej zložitosti,64,65 heterogénnej biologickej funkcii8,11–13,23 a rozdielnej regulácii PHD a HIF17,41,66 optimálny genetický marker pre obličkové pericyty ešte nebol definovaný. Bunky Gli1 plus spĺňajú morfologické a anatomické kritériá pre pericyty. Po poranení UUO proliferujú obličkové Gli1 plus bunky a diferencujú sa na myofibroblasty. Renálne bunky Gli1 plus predstavovali približne 45 percent celkového objemu renálnych myofibroblastov a ablácia renálnych buniek Gli1 plus sa znížilarenálna fibróza.11,36 Boli sme si vedomí toho, že obličkové bunky Gli1 plus sú subpopuláciou buniek receptora rastového faktora-b plus buniek odvodených od krvných doštičiek11,36,41 a že účinky genetickej manipulácie obmedzenej na Gli1 plus pericyty môžu byť maskované inými fibroblastmi. Naše experimenty na triedených obličkových Gli1 plus bunkách však dokázali, že stabilizácia HIF bola schopná zvýšiť expresiu Epo, ale nie kolagénu alebo Acta2 na bunkovej úrovni. Nemôžeme vylúčiť možnosť, že stabilizácia HIF riadená inými pericytovými markermi môže mať odlišné výsledky. Myši s Cre rekombinázou poháňané promótorom Col1a1, Foxd1 alebo Pdgfrb sa v tejto štúdii nepoužili na definovanie pericytov, pretože ich Cre rekombináza je aktívna aj v glomerulárnych podocytoch, 8 glomerulárnych mezangiálnych bunkách, 67 bunkách hladkého svalstva ciev, 68 a pravdepodobne v niektorých tubulárnych epitelové bunky.69 knockout pVHL v podocytoch a tubulárnych bunkách sa uvádza, že vyvoláva renálne patológie, ako je crescentická glomerulonefritída31 a renálne cysty.70 Okrem toho sme použili indukovateľný Cre na knockoutovanie PHD2 alebo pVHL po 5. týždni veku, pretože Foxd1 je exprimovaný v embryonálnom ukázalo sa, že štádium a knockout pVHL alebo PHD2 u Foxd{24}}exprimujúcich pericytov zhoršuje nefrogenézu.71,72
V triedených obličkových Gli1 plus bunkách s PHD2 knockoutom pomocou Gli1CreERT2/ plus; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši, pozorovali sme významné zvýšenie expresie bunkovej Epo mRNA, ale nie Col1a1 alebo Acta2. 50-násobné zvýšenie Epo mRNA potvrdilo nadmernú expresiu HIF v triedených obličkových Gli1 plus pericytoch s PHD2 knockoutom. Okrem toho in vivo knockout pVHL alebo PHD2 v Gli1 plus pericytoch viedol k zvýšenej renálnej expresii Epo a polycytémii, ale nierenálna fibróza. Veríme, že ak HIF downstream molekuly v pericytoch ovplyvnenérenálna fibróza, bolo by to pozorované v našej štúdii. Účinky inaktivácie PHD2 na stabilizáciu HIF môžu byť maskované biologickou redundanciou PHD1 a PHD3. Pozorovali sme však konzistentné účinky na produkciu EPO a kolagénu v pericytoch Gli1 plus s knockoutom pVHL alebo PHD2, čo ďalej podporuje stabilizáciu HIF v pericytoch podporuje erytropoézu, ale niefibróza. Nepodarilo sa nám vygenerovať Gli1CreERT2/ plus;VhlF/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši cez kríženie Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fa ROSA26fstdTomato/fstdTomatomyši, pretože Vhl aj ROSA26 sú umiestnené na chromozóme 6.
UUO sme použili ako aobličkymodel poranenia na skúmanie účinkov pericytovo špecifickej manipulácie HIF narenálna fibrózapretože v modeli UUO sa väčšina pericytov Gli1 plus diferencovala na myofibroblasty a ablácia buniek Gli1 plus zlepšila renálnu fibrózu.11,36 Model UUO bol úspešne použitý aj na demonštráciu zmien produkcie kolagénu a EPO počas prechodu pericyt-myofibroblast našou skupinou a iní.14,17,41 Avšak UUO má ako model CKD svoje vlastné obmedzenia a naše zistenia v tejto štúdii nemožno zovšeobecniť na iné modely CKD. Budúce štúdie sú zaručené na testovanie účinkov manipulácie HIF špecifickej pre pericyty v rôznych modeloch CKD.
Na záver sme demonštrovali, že Gli1 plus pericytešpecifická HIF stabilizácia zvyšuje EPO, erytropoézu, ale neovplyvňujefibrózav modeloch s poranením UUO alebo bez neho. Na bunkovej úrovni stabilizácia HIF špecifická pre Gli1 plus pericyt zvyšuje expresiu Epo, ale nie expresiu Col1a1, Col3a1 a Acta2. Knokaut HIF špecifický pre pericyt neovplyvnilrenálna fibróza, buď. Tieto výsledky poskytujú experimentálny dôkaz o absencii negatívnych účinkov inhibítorov PHD na renálnu fibrózu a progresiu CKD.
Cistanche na zlepšenieobličkyfunkciu
DISCLOSURE
Všetci autori nedeklarovali žiadne konkurenčné záujmy.
POĎAKOVANIE
SYP je podporovaný Ministerstvom vedy a techniky (granty 106-2314-B-418-006, 107-2314-B-418-001 a 108-2314-B-418-004) a Far Eastern Memorial Hospital (dotácie 2017-C-037 a 2020-C- 037). SLL je podporovaná Ministerstvom vedy a techniky (granty 108-2314-B-002-078-MY3 a 109-2314-B-002-260), National Health Research Institutes (grant EX108-10633 SI), National Taiwan University Hospital (NTUH; granty 108-T16 a 109-T16), NTUH a NTU College of Medicine (grant NSCCMOH-131-43), pani Hsiu-Chin LeeObličkyResearch Foundation a Taiwan Health Foundation.
Ďakujeme profesorovi Guo-Hua Fongovi (zdravotné stredisko Univerzity v Connecticute) za Egln1F/Fmyši; Dr. Yi-Ting Tsai (NTU College of Medicine) na patologické vyšetrenie Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fa VhlF/Fmyši; a Katedre lekárskeho výskumu NTUH, základnému zariadeniu na triedenie a zobrazovanie buniek prvého jadrového laboratória, základnému zariadeniu modelu transgénnej myši a laboratóriu génového knockoutovania myši na lekárskej fakulte NTU za podporu vybavenia a technickú pomoc.
AUTORSKÉ PRÍSPEVKY
SYP, PZT, YHC, YTC, FCC, YLC a WCC uskutočnili experimenty a analyzovali údaje. SYP, YLC, TH, YMC a TSC sa podieľali na návrhu experimentu a analýze údajov. SLL navrhol a riadil projekt. SYP a SLL napísali rukopis.
DOPLNKOVÝ MATERIÁL
Doplnkový súbor (PDF)
Doplnkové metódy.
Obrázok S1. Telesná hmotnosť, počet periférnych bielych krviniek a počet krvných doštičiek sa u myší s knockoutom PHD2 špecifickým pre pericyty nezmenili.
Obrázok S2. Reprezentatívne obrazy Epo mRNA detegované RNA in situ hybridizáciou vobličkyz Egln1F/F a Gli1CreERT2/þ; Egln1F/F myši. Obrázok S3. Globálny knockout PHD2 podporuje produkciu EPO a
erytropoéza.
Obrázok S4. PCR analýza genómovej DNA extrahovanej zobličkypečeň, slezina, srdce a pľúca v Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F a kontrolné myši z rovnakého vrhu.
Obrázok S5. Reprezentatívne obrazy Epo mRNA detegované RNA in situ hybridizáciou vobličkyEgln1F/F myší.
Obrázok S6. Reprezentatívne snímky Gli1þ pericytov v CLK a UUOobličkypo úraze UUO.
Obrázok S7. Dlhodobé účinky pericytovo špecifickej stabilizácie HIF v
Gli1CreERT2/þ;VhlF/F myši.
Obrázok S8. Správa o patológii Gli1CreERT2/ plus; VhlF/F myši.
Obrázok S9. Zvýšený hematokrit a hladiny EPO v sére v Gli1CreERT2/ plus; VhlF/Fmyši.
Obrázok S10. PCR analýzaobličkygenómovej DNA po indukcii tamoxifénom.
Obrázok S11. Kompletné gélové obrázky pre imunoblotovanie a-SMA a a[1]tubulínu.
Obrázok S12. Renálna expresia Epo a Acta2 vo VhlF/F a Gli1CreERT2/plus; VhlF/Fmyši 7 dní po poranení UUO.
Obrázok S13. Renálna expresia Epo a Acta2 vo VhlF/F a Gli1CreERT2/plus; VhlF/Fmyši 14 dní po poranení UUO.
Obrázok S14.Renálna fibrózav predĺženom modeli vymývania tamoxifénu.
Obrázok S15. Experimentálna schéma na značenie obličkových buniek Gli1þ pomocou tdTomato.
Obrázok S16. Stratégia hradlovania na triedenie obličkových buniek tdTomatoþ.
Obrázok S17. Validácia expresie tdTomato a delécie Egln1 v triedených obličkových bunkách tdTomatoþ.
Obrázok S18. PCR analýzaobličkygenómová DNA z Gli1CreERT2/plus; Hif1aF/F; Hif2aF/Fa súrodenec Hif1aF/F; Hif2aF/Fkontrolné myši po podaní tamoxifénu.
Obrázok S19. UUO vyvolanérenálna fibrózav Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F; Hif2aF/Fmyšiam po vysokej dávke a krátkom vymývacom období tamoxifénu.
Obrázok S20. UUO vyvolanérenálna fibrózav Gli1CreERT2/ plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F myši po polovičnej dávke a predĺženom vymývacom období tamoxifénu.
Tabuľka S1. Priméry používané na genotypizáciu.
Tabuľka S2. Priméry používané pre kvantitatívnu PCR.
Doplnkové makro. Makro pre automatickú kvantifikáciu pikrosírovej červenej farbyobličkyoblasť podľa ImageJ.
Produkty Cistanche sú dobré preobličkové
LITERATÚRA
1. Ochorenie obličiek: Pracovná skupina pre anémiu na zlepšenie globálnych výsledkov (KDIGO). Usmernenie klinickej praxe KDIGO pre anémiu vchronické ochorenie obličiek.Kidney Int Suppl. 2012;2:279–335.
2. Astor BC, Muntner P, Levin A, et al. Združenie oobličkyfunkcie s anémiou: Tretí národný prieskum zdravia a výživy (1988-1994). Arch Intern Med. 2002;162:1401–1408.
3. Maxwell PH, Eckardt KU. HIF inhibítory prolylhydroxylázy na liečbu renálnej anémie a ďalej. Nat Rev Nephrol. 2016;12:157–168.
4. Chen N, Hao C, Peng X a kol. Roxadustat na anémiu u pacientov sobličkychoroba nedostáva dialýzu. N Engl J Med. 2019;381:1001–1010.
5. Chen N, Hao C, Liu BC, a kol. Roxadustat na liečbu anémie u pacientov podstupujúcich dlhodobú dialýzu. N Engl J Med. 2019;381:1011–1022.
6. Schodel J, Ratcliffe PJ. Mechanizmy signalizácie hypoxie: nové implikácie pre nefrológiu. Nat Rev Nephrol. 2019;15:641–659.
7. Pan SY, Chiang WC, Chen YM. Cesta od erytropoetínu k Nobelovej cene za rok 2019: zamerajte sa na faktory vyvolané hypoxiou vobličky. J Formos Med Assoc. 2021;120:60–67.
8. Lin SL, Kiseleva T, Brenner DA a kol. Pericyty a perivaskulárne fibroblasty sú primárnym zdrojom buniek produkujúcich kolagén pri obštrukčných ochoreniachfibrózaobličky. Am J Pathol. 2008;173:1617–1627.
9. Pan SY, Chang YT, Lin SL. Mikrovaskulárne pericyty v zdravých a chorých obličkách. Int J Nephrol Renovasc Dis. 2014;7:39–48.
10. Humphreys BD, Lin SL, Kobayashi A, a kol. Sledovanie osudu odhaľuje pericytový a nie epiteliálny pôvod myofibroblastov vfibróza obličiek. Am J Pathol. 2010;176:85–97.
11. Kramann R, Schneider RK, DiRocco DP, a kol. Perivaskulárne Gli1þ progenitory sú kľúčovými prispievateľmi k poraneniu vyvolanému orgánufibróza. Cell Stem Cell. 2015;16:51–66.
12. Schrimpf C, Xin C, Campanholle G, a kol. Pericyte TIMP3 a ADAMTS1 modulujú vaskulárnu stabilitu poobličkyzranenie. J Am Soc Nephrol. 2012;23: 868–883.
13. Lemos DR, Marsh G, Huang A, a kol. Udržiavanie vaskulárnej integrity pericytmi je nevyhnutné pre normálny stavobličkyfunkciu. Am J Physiol Renálny Physiol. 2016;311:F1230–F1242.
14. Chang YT, Yang CC, Pan SY, a kol. Inhibícia DNA metyltransferázy obnovuje produkciu erytropoetínu vo fibrotických myších obličkách. J Clin Invest. 2016;126:721–731.
15. Chou YH, Pan SY, Shao YH a kol. Metylácia v pericytoch po akútnom poranení podporuje chronickéobličkychoroba. J Clin Invest. 2020;130:4845–4857.
16. Chang FC, Chou YH, Chen YT a kol. Nové pohľady na prechod pericytemyofibroblastov a terapeutické ciele vrenálna fibróza. J Formos Med Assoc. 2012;111:589–598.
17. Souma T, Nezu M, Nakano D, a kol. Syntéza erytropoetínu v renálnych myofibroblastoch je obnovená aktiváciou signalizácie hypoxie. J Am Soc Nephrol. 2016;27:428–438.
18. Asada N, Takase M, Nakamura J, et al. Základom je dysfunkcia fibroblastov extrarenálneho pôvodurenálna fibrózaa renálna anémia u myší. J Clin Invest. 2011;121:3981–3990.
19. Wu CF, Chiang WC, Lai CF a kol. Transformujúci rastový faktor beta-1 stimuluje profibrotickú epiteliálnu signalizáciu na aktiváciu prechodu pericyt-myofibroblast pri obštrukčnýchfibróza obličiek.Am J Pathol. 2013;182:118–131.
20. Chen YT, Chang FC, Wu CF a kol. Signalizácia receptora rastového faktora odvodeného od krvných doštičiek aktivuje prechod pericyt-myofibroblast pri obštrukčných a postischemickýchobličkyfibróza. Kidney Int. 2011;80:1170–1181.
21. Lin SL, Chang FC, Schrimpf C, a kol. Zacielenie na krížovú komunikáciu medzi endotelom a pericytom inhibíciou signalizácie receptora VEGF zoslabujeobličkymikrovaskulárna zriedkavosť afibróza. Am J Pathol. 2011;178:911–923.
22. Ren S, Johnson BG, Kida Y a kol. LRP-6 je koreceptor pre viaceré fibrogénne signálne dráhy v pericytoch a myofibroblastoch, ktoré sú inhibované DKK-1. Proc Natl Acad Sci USA A. 2013;110:1440–1445.
23. Kawakami T, Mimura I, Shoji K, et al. Hypoxia afibrózavchronické ochorenia obličieke: kríženie v pericytoch. Kidney Int Suppl. 2014;4:107–112.
24. Kapitsinou PP, Jaffe J, Michael M, et al. Preischemické zacielenie prolylhydroxylácie HIF inhibujefibrózaspojené s akútobličkyzranenie. Am J Physiol Renálny Physiol. 2012;302:F1172–F1179.
25. Schley G, Klanke B, Kalucka J, et al. Mononukleárne fagocyty organizujú renoprotekciu sprostredkovanú inhibíciou prolylhydroxylázy pri chronickej tubulointersticiálnej nefritíde. Kidney Int. 2019;96:378–396.
26. Uchida L, Tanaka T, Saito H a kol. Účinky inhibítora prolylhydroxylázy naobličkya kardiovaskulárne komplikácie u potkanieho modelu chronického ochorenia obličiek. Am J Physiol Renálny Physiol. 2020;318:F388–F401.
27. Sugahara M, Tanaka S, Tanaka T, a kol. Inhibítor prolylhydroxylázovej domény chráni pred metabolickými a súvisiacimi poruchamiobličkyochorenie u obéznych diabetických myší 2. typu. J Am Soc Nephrol. 2020;31:560–577.
28. Higgins DF, Kimura K, Bernhardt WM a kol. Hypoxia podporuje fibrogenézu in vivo prostredníctvom HIF{1}} stimulácie epitelového-mezenchymálneho prechodu. J Clin Invest. 2007;117:3810–3820.
29. Pritchett TL, Bader HL, Henderson J, a kol. Podmienená inaktivácia myšacieho von Hippel-Lindauovho nádorového supresorového génu vedie k rozsiahlym hyperplastickým, zápalovým a fibrotickým léziám v obličkách. Onkogén. 2014;34:2631.
30. Kapitsinou PP, Sano H, Michael M, a kol. Endoteliálny HIF-2 sprostredkuje ochranu a zotavenie z ischémieobličkyzranenie. J Clin Invest. 2014;124:2396–2409.
31. Ding M, Cui S, Li C, a kol. Strata nádorového supresora Vhlh vedie k upregulácii Cxcr4 a rýchlo progresívnej glomerulonefritíde u myší. Nat Med. 2006;12:1081–1087.
32. Ding M, Coward RJ, Jeansson M, a kol. Regulácia hypoxiou indukovateľného faktora 2-a je nevyhnutná pre integritu glomerulárnej bariéry. Am J Physiol Renálny Physiol. 2013;304:F120–F126.
33. Norman JT, Clark IM, Garcia PL. Hypoxia podporuje fibrogenézu v ľudských obličkových fibroblastoch. Kidney Int. 2000;58:2351–2366.
34. Wang Z, Tang L, Zhu Q a kol. Hypoxiou indukovateľný faktor-1alfa prispieva k profibrotickému účinku angiotenzínu II v obličkových medulárnych intersticiálnych bunkách.ObličkyInt. 2011;79:300–310.
35. Koury MJ, Haase VH. Anémia vobličkychoroba: využitie reakcií hypoxie na liečbu. Nat Rev Nephrol. 2015;11:394–410.
36. Fabian SL, Penchev RR, St-Jacques B, a kol. Aktivácia dráhy Hedgehog-Gli počasfibróza obličiek.Am J Pathol. 2012;180:1441–1453.
37. Lin SL, Castano AP, Nowlin BT a kol. Ly6Chigh monocyty kostnej drene sa selektívne získavajú zranenýmobličkya diferencovať sa na funkčne odlišné populácie. J Immunol. 2009;183:6733–6743.
38. Delle H, Rocha JR, Cavaglieri RC, a kol. Antifibrotický účinok tamoxifénu v modeli progresívneho renálneho ochorenia. J Am Soc Nephrol. 2012;23:37–48.
39. Falke LL, Broekhuizen R, Huitema A, a kol. Tamoxifén na indukciu Crerekombinácie môže zmiasťfibrózaštúdie na samičkách myší. J Cell Commun Signal. 2017;11:205–211.
40. Greenwald AC, Licht T, Kumar S, a kol. VEGF rozširuje erytropoézu prostredníctvom indukcie erytropoetínu nezávislej od hypoxie v nekanonických perivaskulárnych stromálnych bunkách. J Exp Med. 2019;216:215–230.
41. Broeker KAE, Fuchs MAA, Schrankl J, et al. Rôzne subpopulácieobličkyintersticiálne bunky produkujú erytropoetín a faktory podporujúce okysličenie tkaniva v reakcii na hypoxiu in vivo.ObličkyInt. 2020;98:918–931.
