Melatonín z mikroorganizmov, rias a rastlín ako možné alternatívy k syntetickému melatonínu, časť 1

Abstrakt: Výživové doplnky s melatonínom sa vo veľkej miere konzumujú na celom svete, pričom najväčšími spotrebiteľmi sú rozvinuté krajiny s odhadovaným ročným rastom približne 10 percent do roku 2027, najmä v rozvojových krajinách. Široké využitie melatonínu proti poruchám spánku a konkrétnym problémom, ako je jet lag, sa pridalo k ďalším aplikáciám, ako sú anti-aging, antistres, aktivácia imunitného systému, protirakovinové a iné, ktoré vyvolali jeho použitie, všeobecne bez lekárskeho predpisu. Chemický priemysel v súčasnosti pokrýva 100 percent potrieb trhu s melatonínom. Motivovaní odvetviami s prirodzenejšími spotrebiteľskými návykmi sa pred niekoľkými rokmi objavila možnosť získavania melatonínu z rastlín, nazývaného fytomelatonín. Nedávno farmaceutický priemysel vyvinul geneticky modifikované mikroorganizmy, ktorých schopnosť produkovať prirodzený melatonín v bioreaktoroch sa zvýšila. Táto práca sa zaoberá aspektmi chemickej a biologickej syntézy melatonínu na ľudskú spotrebu, najmä ako potravinového doplnku. Analyzujú sa výhody a nevýhody získavania melatonínu z mikroorganizmov a fytomelatonínu z rastlín a rias, ako aj výhody prírodného melatonínu, ktorý zabraňuje nežiaducim chemickým vedľajším produktom chemickej syntézy melatonínu. Nakoniec sa analyzujú ekonomické a kvalitatívne aspekty týchto nových produktov, z ktorých niektoré sú už na trhu.

Glykozid cistanche môže tiež zvýšiť aktivitu SOD v tkanivách srdca a pečene a výrazne znížiť obsah lipofuscínu a MDA v každom tkanive, účinne zachytáva rôzne reaktívne kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atď.) a chráni pred poškodením DNA. OH-radikálmi. Cystanche fenyletanoidové glykozidy majú silnú schopnosť zachytávať voľné radikály, vyššiu redukčnú schopnosť ako vitamín C, zlepšujú aktivitu SOD v suspenzii spermií, znižujú obsah MDA a majú určitý ochranný účinok na funkciu membrány spermií. Polysacharidy Cistanche môžu zvýšiť aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytoch a pľúcnych tkanivách experimentálne starnúcich myší spôsobenú D-galaktózou, ako aj znížiť obsah MDA a kolagénu v pľúcach a plazme a zvýšiť obsah elastínu. dobrý čistiaci účinok na DPPH, predĺženie doby hypoxie u starnúcich myší, zlepšenie aktivity SOD v sére a oddialenie fyziologickej degenerácie pľúc u experimentálne starnúcich myší Experimenty ukázali, že pri bunkovej morfologickej degenerácii má Cistanche dobrú antioxidačnú schopnosť a má potenciál byť liekom na prevenciu a liečbu chorôb starnutia kože. Zároveň má echinakozid v Cistanche významnú schopnosť vychytávať voľné radikály DPPH a dokáže vychytávať reaktívne formy kyslíka, predchádzať voľným radikálom vyvolanej degradácii kolagénu a má tiež dobrý reparačný účinok na poškodenie aniónom voľných radikálov tymínu.

Kliknite na Cistanche Side Effects Reddit

【Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Kľúčové slová: doplnky stravy; GMO; melatonín; mikroorganizmy; fytomelatonín; rastlinná surovina

1. Úvod

Melatonin (N-acetyl-5-methoxytryptamine) is widely used around the world as a  dietary supplement. In general, melatonin is used as a sleep aid supplement, a mild tranquilizer, a generalist antioxidant, and an anticancer and anti-aging component, among others [1]. According to the American Psychiatric Association (APA), approximately one-third of adults suffer from insomnia during their lifetime [2]. It manifests itself in ongoing problems falling asleep and staying asleep. Therefore, it is very likely that the use of synthetic melatonin will spread. In 2019, the global production of synthetic melatonin,  which was around 4000 tons, accounted for around 1.3 billion USD. This vast market is fully assisted by the chemical melatonin, whose synthesis process is very cheap, effective, and,  therefore, lucrative. The melatonin market is expected to grow at a CAGR (compound annual growth rate) of >10 percent počas nasledujúcich 5 rokov. S týmto značným nárastom dopytu boli problémy s nespavosťou spôsobené pandémiou COVID{2}} veľmi dôležité [3]. Najvyššiu spotrebu má Severná Amerika, za ňou nasleduje Európa. Globálny trh s melatonínom je kontrolovaný hlavne niekoľkými významnými spoločnosťami, ako sú BASF, Aspen Pharmacare Australia, Nature's Bounty, Pfizer Inc., Natrol LLC, Aurobindo Pharma a Biotics Research Co. Upozorňujeme, že spotreba melatonínu na lekárske účely zahŕňa približne 50 percent vyrobeného syntetického melatonínu; zvyšok má chemické a priemyselné aplikácie [2,4].

Z biologického hľadiska je melatonín molekulou široko rozšírenou vo všetkých ríšach živých organizmov [5]. Bola objavená v roku 1958 v epifýze kravy [6] a neskôr u ľudí [7], je jednou z najviac študovaných biomolekúl a sú známe jej viaceré funkcie, najmä u cicavcov [8,9], ale aj u rýb. [10–12], hydiny [13,14] a bezstavovcov [15]. V živočíšnych a ľudských bunkách pôsobí melatonín ako antioxidant – relevantná úloha mu bola prisúdená v roku 1993 [16–18]. Melatonín pôsobí ako zaujímavý ochranca buniek v stresových situáciách, pri rôznych fyziologických aspektoch u ľudí a podľa viacerých štúdií prispieva k zlepšeniu rôznych chorôb a dysfunkcií. Obrázok 1 ukazuje niektoré ochranné a regulačné účinky melatonínu u ľudí a predstavuje melatonín ako zaujímavú pleiotropnú molekulu, ktorá vyniká svojím významom, úlohou melatonínu pri regulácii metabolizmu lipidov a glukózy, indukciou nočnej inzulínovej rezistencie a denného inzulínu citlivosť. Zdá sa, že tento účinok súvisí s nočným hladovaním a denným kŕmením, čím sa bráni nadmernému prírastku hmotnosti [19]. Zdôrazňujeme tiež jeho úlohu ako antionkogénneho činidla, ktoré inhibuje rast, proliferáciu a metastázy niekoľkých nádorov. Liečba nádorov melatonínom zlepšila citlivosť na chemoterapiu a rádioterapiu, pričom pôsobí ako synergická molekula pri kontrole rakovinových buniek. Okrem toho melatonín zmierňuje akútne poškodenie normálnych buniek, chráni ich pred toxicitou liečiva, pravdepodobne zvýšením imunitných reakcií [20–22]. Medzi dysfunkcie a choroby, kde sa skúmali priaznivé účinky melatonínu, patria neurologické, ako je Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, fibromyalgia, depresia, porucha pozornosti s hyperaktivitou, autizmus a migrény; kardiovaskulárne zdravotné problémy, vrátane hypercholesterolémie, hypertenzie, metabolického syndrómu a glykemickej nerovnováhy; gastrointestinálne zdravotné problémy, ako je gastroezofageálny reflux, vredy a syndróm dráždivého čreva; imunologické zdravotné problémy, ako je roztrúsená skleróza, autoimunitné reakcie (atletický stres, toxický stres, psoriáza atď.), sepsa, COVID-19 atď. [3,23–26]; a okrem iného aj osteopéniu [27], sarkopéniu [28], preeklampsiu, fertilitu, syndróm polycystických ovárií a menopauzu [29–32]. Avšak aj keď je melatonín molekulou, ktorá bola široko študovaná od 50. rokov 20. storočia, uskutočnené štúdie si vyžadujú viac klinických a rozsiahlych dvojito zaslepených štúdií na objasnenie jeho niekedy mätúceho pleiotropného účinku [33,34].

Avšak melatonín je dobre známy ako hormón, ktorý reguluje spánok. Jeho oscilujúce hladiny v prietoku krvi podľa periód svetla a tmy (cirkadiánne rytmy) v dôsledku uvoľňovania melatonínu epifýzou je jedným z najviac preštudovaných a známych aspektov tejto molekuly. Zvýšenie hladín melatonínu v krvi počas prvej periódy spánku na približne 150–220 pólov/ml pôsobí na iniciáciu spánku, znižuje latenciu a fragmentáciu spánku a zvyšuje trvanie a kvalitu spánku [1,35,36]. Melatonín pôsobí ako vnútorný synchronizátor cirkadiánneho cyklu spánok-bdenie a sezónneho rytmu. V tomto zmysle sa melatonínom liečilo mnoho porúch spánku, vrátane syndrómu oneskorenej spánkovej fázy, poruchy spánku pri nočnej zmene, sezónnej afektívnej poruchy, porúch spánku u nevidomých a starnúcich a patofyziologických porúch detí, s pozoruhodným zlepšením kvality spánku. 37 – 41]. Najrozšírenejšou poruchou liečenou melatonínom je pásmová choroba – rozfázovanie rytmov spánku a bdenia po transoceánskych letoch [42–45]. Dôraz v štúdiách na jeho úlohu ako regulátora spánku pravdepodobne spôsobil nedostatok štúdií o jeho možnej úlohe v mnohých ďalších fyziologických a klinických aspektoch.

Melatonín v rastlinách, takzvaný fytomelatonín, bol objavený súčasne tromi výskumnými skupinami v rôznorodom rastlinnom materiáli v roku 1995 [46–48]. Pojem fytomelatonín, ktorý označuje melatonín rastlinného pôvodu (rastliny a riasy), sa používa na jeho odlíšenie od živočíšneho a/alebo syntetického melatonínu. Tento termín je veľmi rozšírený a neustále sa používa v štúdiách fytochémie, fyziológie rastlín, botaniky, chémie potravín atď. o rastlinnom melatoníne. V rastlinách je fytomelatonín tiež pleiotropnou molekulou, ktorá má viacero úloh v rôznych fyziologických reakciách (obrázok 1). Regulácia melatonínom takých aspektov, ako je fotosyntéza, vrátane pohlcovania CO2 prieduchom a hospodárenia s vodou, metabolizmu sacharidov, lipidov, dusíka a síry a metabolizmu jednoduchých fenolov, flavonoidov a terpenoidov, preukázala zásadný záujem o základné a technické procesy vegetatívneho (klíčenie, rast rastlín, zakoreňovanie, vetvenie atď.) a reprodukčný vývoj, vrátane plodnosti, partenokarpie, vývoja semien a plodov, dozrievania, starnutia a konzervácie plodov a rezaných kvetov [49–53]. Vo všeobecnosti melatonín reguluje tieto procesy pôsobením siete rastlinných hormónov, pričom reguluje niekoľko biosyntéznych, katabolických a transkripčných faktorov, ktoré súvisia s rastlinnými hormónmi [54–56]. Jedným z aspektov najväčšieho agronomického a biotechnologického záujmu je úloha fytomelatonínu ako promótora tolerancie voči biotickým a abiotickým stresom [57–68] (obrázok 1). V súčasnosti je fytomelatonín prezentovaný ako zaujímavý ekologický nástroj na kontrolu biologických chorôb a na uľahčenie odolnosti / adaptácie rastlín na zmenu klímy / proti zmene klímy.

2. Biosyntéza melatonínu

Melatonín je acetylovaná zlúčenina odvodená od serotonínu. Oba indolové amíny sa syntetizujú z aminokyseliny tryptofán biosyntetickou cestou, ktorá bola rozsiahlo študovaná na zvieratách aj rastlinách [69,70]. V rastlinách sa tryptofán premieňa na tryptamín pomocou enzýmu tryptofándekarboxyláza (TDC) (obrázok 2). Tryptamín sa potom premení na 5-hydroxytryptamín (serotonín) tryptamínovou 5-hydroxylázou (T5H), enzýmom, ktorý bol rozsiahlo študovaný v ryži a ktorý by mohol pôsobiť s mnohými substrátmi, hoci to nebolo študované do hĺbky. Serotonín je N-acetylovaný serotonín N-acetyltransferázou (SNAT). N-acetylserotonín je potom metylovaný acetylserotonínmetyltransferázou (ASMT) – hydroxyindol-O-metyltransferázou – ktorá vytvára melatonín. V rastlinách môže byť metylácia N-acetylserotonínu tiež uskutočnená pomocou O-metyltransferázy kyseliny kávovej (COMT), triedy enzýmov, ktoré môžu pôsobiť na rôzne substráty, vrátane kyseliny kávovej a kvercetínu [71]. Serotonín môže byť tiež transformovaný na 5-metoxytryptamín pomocou ASMT/COMT za vzniku melatonínu po pôsobení SNAT. Táto cesta by nastala v starobe a/alebo stresových situáciách [70,72]. Okrem toho sa melatonín môže generovať prostredníctvom tvorby N-acetyltryptamínu pomocou SNAT, ktorý by sa pomocou T5H premenil na N-acetylserotonín [73], hoci táto cesta nebola preukázaná, pravdepodobne preto, že T5H je najmenej študovaný enzým tejto dráhy. (Obrázok 2). Je zaujímavé, že v rastlinách ryže boli identifikované až štyri gény kódujúce históndeacetylázy (DAC), ktoré dokážu zvrátiť kroky zo serotonínu na N-acetylserotonín a z 5-metoxytryptamínu na melatonín. DAC, exprimovaný v chloroplastoch, vykazoval enzýmovú aktivitu voči N-acetylserotonínu, N-acetyltryptamínu a melatonínu, s najvyššou deacetylázovou aktivitou pre N-acetyltyramín [74].

V živočíšnych bunkách sa serotonín tvorí z 5-hydroxytryptofánu po postupnom pôsobení tryptofánhydroxylázy (TPH) a TDC. Hoci TPH nebol v rastlinách detegovaný, prítomnosť 5-hydroxytryptofánu naznačuje, že určitá enzymatická aktivita, ako je aktivita TPH, pôsobí v rastlinných bunkách v menšom rozsahu. Okrem toho sa melatonín môže generovať tvorbou 5-metoxytryptamínu, najmä v stresových podmienkach, ako navrhujú viacerí autori, čo naznačuje, že biosyntéza melatonínu môže v porovnaní so živočíšnymi bunkami sledovať rôzne alternatívne cesty s väčšou schopnosťou adaptácie. k metabolickým zmenám v rastlinách [72,75]. Všetky menované enzýmy boli detegované a charakterizované v ryži a Arabidopsis, okrem TPH, ktorý je dobre známy u zvierat, ale nie u rastlín. Niektorí autori však navrhli, že T5H môže pôsobiť ako hydroxyláza s nízkou substrátovou špecifickosťou a je schopná pôsobiť vo všetkých opísaných hydroxylačných krokoch [70,76–79]. Túto rovnakú širokú substrátovú špecifickosť možno pripísať aj enzýmom SNAT, ASMT a COMT. Medziprodukty melatonínu sú produkované v rôznych subcelulárnych kompartmentoch, ako je cytoplazma, endoplazmatické retikulum, mitochondrie a chloroplasty, ktoré určujú následné enzymatické kroky [80,81].

U mikroorganizmov existuje len málo štúdií o biosyntéze melatonínu [82]. Saccharomyces a baktérie (Geobacillus, Bacillus a Pseudomonas) produkovali serotonín aj melatonín v rôznych koncentráciách [83–89]. Okrem toho produkciu melatonínu doložili iní autori v kultúrach kvasiniek Pichia kluyveri, Saccharomyces cerevisiae a S. uvarum a baktérií (Agrobacterium, Pseudomonas, Variovorax, Bacillus a Oenococcus) [85,90,91] a skôr u fotosyntetických baktérií Rhodospirillum rubrum [92] a Erythrobacter longus [93] a Escherichia coli [94].

Zdá sa, že v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae, na rozdiel od rastlín a zvierat, nedochádza k biosyntéze 5-hydroxytryptofánu z tryptofánu. Je zaujímavé, že niekoľko opísaných štádií sa zdá byť reverzibilných u S. cerevisiae, ako napríklad medzi 5-hydroxytryptofánom a serotonínom, N-acetylserotonínom a melatonínom a 5-metoxytryptamínom a melatonínom [90,95], ako je podrobne uvedené na obrázku 2. V Bacillus amyloliquefaciens SB-9 a Pseudomonas fluorescens RG11, 5- hydroxytryptofán, serotonín a N-acetylserotonín, ale nebol detegovaný žiadny tryptamín [85,{12}}]. Na vytvorenie kmeňa Escherichia coli produkujúceho melatonín sa teda použilo niekoľko génov bakteriálneho pôvodu. Napríklad sa testoval gén DDC kódujúci dekarboxylázu aromatickej L-aminokyseliny z Candidatus Koribacter versatile Ellin 345 a Draconibacterium orientale a gén AANAT kódujúci alkylamín N-acetyltransferázu zo Streptomyces griseofuscus [96,97]. Nepochybne sú potrebné ďalšie štúdie na objasnenie kompletných biosyntetických dráh melatonínu v rôznych prokaryotických a eukaryotických mikróboch [82].

3. Biologický melatonín verzus syntetický melatonín

Spočiatku sa melatonín získaval pre experimentálne a klinické štúdie zo zvieracích zdrojov (hlavne z epifýzy a moču), s následným rizikom prenosu vírusov [98,99]. Tieto techniky boli stiahnuté, keď bolo možné melatonín získať chemickou syntézou [100]. V súčasnosti sa všetok melatonín používaný na priemyselné a lekárske účely získava pomocou metód chemickej syntézy. Tieto metódy, ktoré v 80. rokoch predstavovali vážne problémy, vrátane úmrtí v dôsledku prítomnosti vedľajších produktov syntézy z tryptofánu [101], sú dnes oveľa bezpečnejšie a efektívnejšie. Avšak melatonínové prípravky opísali prítomnosť celého radu nežiaducich vedľajších produktov v dôsledku ich toxickej povahy. Obrázok 3 ukazuje tri z najbežnejšie používaných spôsobov chemickej syntézy melatonínu a vedľajších produktov, ktoré vznikajú pri jeho syntéze [102]. Syntéza melatonínu z derivátov tryptofánu (obrázok 3, schéma A) vytvára toxické vedľajšie produkty, ktoré niekedy spôsobujú závažné ochorenia, ako je syndróm eozinofílie-myalgie [101,103,104], zatiaľ čo najaktuálnejšie metódy (obrázok 3, schéma B) syntéza melatonínu z ftalimidu [105] vyvoláva vážne pochybnosti o toxicite niekoľkých vedľajších produktov, ktoré vznikajú [106]. Okrem toho Fischer indolové reakcie z alylamínu (obrázok 3, schéma C) predstavujú nebezpečné a toxické reaktanty [107].

Na druhej strane, získavanie melatonínu z iných než živočíšnych biologických zdrojov je prezentované ako silný záväzok do budúcnosti, nie nahradiť syntetický melatonín, ale byť prirodzenejším doplnkovým a alternatívnym zdrojom [108].

4. Stratégie na získanie biologického melatonínu

Melatonín je prítomný vo všetkých známych biologických druhoch, od prokaryotov po eukaryoty, vrátane kvasiniek, rias, húb a rastlín, ako aj živočíchov [80,109–111]. Nižšie sú uvedené metodológie vyvinuté v mikroorganizmoch a rastlinách ako možných zdrojoch prirodzeného melatonínu.

4.1. Melatonín z mikroorganizmov

a. Saccharomyces

Prvý prístup k produkcii biologického melatonínu nedávno urobila skupina dánskej farmaceutickej spoločnosti Novo Nordisk s použitím geneticky modifikovaných Saccharomyces cerevisiae (tabuľka 1, produkt #1). Germann a spolupracovníci skonštruovali rekombinantnú melatonínovú dráhu v kmeni kvasiniek, ktorý obsahoval heterológne gény kódujúce niekoľko enzýmov biosyntézy melatonínu a dráhy podporujúce kofaktor [112]. Transgénne kvasinky kodifikovali rôzne gény z Rattus norvegicus, Lactobacillus ruminis, Pseudomonas aeruginosa, Homo sapiens, Schistosoma mansoni, Bos Taurus a Salmonella enterica. Kŕmením kvasiniek iba glukózou a acetyl Co-A produkcia melatonínu dosiahla 14,5 mg·l −1 po 76 hodinách. Napriek tomu je podľa iných autorov potrebné riešiť niektoré problémy, ako je vysoká akumulácia N-acetylserotonínu v kvasinkových bunkách, nevyvážená génová expresia a identifikácia niektorých potenciálnych toxických medziproduktov [113].

b. Escherichia coli

V druhom prístupe, tentoraz s použitím transgénne modifikovanej kultúry Escherichia coli (tabuľka 1, produkt #2), Novo Nordisk oznámil biologickú produkciu melatonínu z heterológneho kmeňa skonštruovaného z rekombinantnej E. coli, vrátane niekoľkých génov, ako je gén TDC z Candidatus Koribacter versatile, gén SNAT zo Streptomyces griseofuscus a ľudský gén ASMT. Okrem toho boli niektoré gény súvisiace s tryptofánom blokované alebo deletované, aby sa zabránilo nežiaducej represii, degradácii a exportu [96,97]. Po niekoľkých zlepšeniach kmeňa a kŕmení minerálnymi soľami, vitamínmi a antibiotikami kultivované bunky generovali melatonín v množstve ~ 1 g·l −1 s použitím glukózy ako jediného zdroja uhlíka a až 2 g·l −1 v bunkách kŕmených tryptofánom, so zanedbateľným množstvom vedľajších produktov. Podľa autorov teda môžu byť tieto GMO kmene E. coli základom pre budúcu biologicky komerčnú produkciu melatonínu pomocou mikrobiálnych bunkových tovární. Napriek tomu môže byť použitie transgénnych organizmov na výrobu látok na ľudskú spotrebu problematické, ak je cieľom priniesť prírodný produkt senzibilizovanému spotrebiteľovi alebo spotrebiteľovi anti-GMO.

c. Baktérie mliečneho kvasenia

Melatonín sa vyrábal aj priemyselne mikrobiálnou fermentáciou, ako sa uvádza v [114]. Biosyntéza melatonínu bola riadená multikmeňovou baktériou mliečneho kvasenia, ako je Lactobacillus sp. (L. brevis, acidophilus, bulgaricus, casei poddruh. saké, fermentum, helveticus subspec. jogorti, plantarum); Bifidobacterium sp. (B. breve spp. breve, longum spp. infantis); Enterococcus sp. (E. faecalis TH10); a Streptococcus thermophilus. Produkty vyrobené touto technológiou sú predávané spoločnosťou Quantum Nutrition Labs (Texas, USA) ako Melatonin Drops, Qultured™, obsahujúce 8 mg kvasinkového melatonínu (tabuľka 1, produkt č. 3).

d. Chlorella

Produkt vyrobený z rias je Herbatonin® (tabuľka 1, produkt č. 4), formulovaný v tabletkách obsahujúcich 0,3 alebo 3 mg fytomelatonínu, hoci v Európe sa predáva v dávkach 0,3 a 1,9 mg podľa zákonov EÚ. Táto formulácia obsahuje niekoľko rastlinných druhov, ako je ryža (Oryza sativa L.) a lucerna (Medicago sativa L.), spolu so zelenou riasou Chlorella pyrenoidosa a C. vulgaris. Naše údaje ukazujú, že tieto mikroriasy neobsahovali viac ako 2–15 ng·g DW-1 [115] a sprievodné rastlinné druhy obsahujú veľmi nízke hladiny fytomelatonínu, 1–5 ng·g-1 v ryži a 16 ng·g. -1 v lucerne [116]. Prítomnosť chlorelly naznačuje, že fytomelatonín sa získava hlavne kultiváciou zelených rias v bioreaktoroch, ktoré môžu byť kŕmené prekurzormi, ako je tryptofán, podobným spôsobom ako v Achillea millefolium [117], aj keď neexistujú žiadne publikované údaje o metóde získanie týchto extraktov bohatých na fytomelatonín, iba ich biochemická charakterizácia [118]. Neexistujú ani údaje o kontrole prítomnosti cyanotoxínov v týchto extraktoch z dôvodu možnej kontaminácie cyanobaktériami (modrozelené riasy). Tieto cyanotoxíny majú niekoľko nežiaducich účinkov súvisiacich okrem iného s karcinogenitou, hepatotoxicitou a neurotoxicitou. Detekcia cyanotoxínov v niektorých doplnkoch výživy pre riasy teda posilňuje potrebu lepšej kontroly kvality [119,120].

【Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】