Diskusia

Starnúca populácia naďalej celosvetovo rastie bezprecedentným tempom. Starnutie je spojené s poklesom bunkových funkcií, akumuláciou poškodenia a zvyšujúcou sa pravdepodobnosťou chronických ochorení, ktoré vedú ku kolapsu systému a prípadnej smrti [3–7]. Prevalencia patológií súvisiacich s vekom v neskoršom veku má významný vplyv na kvalitu života a náklady na zdravotnú starostlivosť. Existuje teda naliehavá potreba zásahov s účinnou aktivitou proti starnutiu, ktorú možno využiť ako geroprotektor na oddialenie starnutia a predĺženie zdravia.

Glykozid cistanche môže tiež zvýšiť aktivitu SOD v tkanivách srdca a pečene a výrazne znížiť obsah lipofuscínu a MDA v každom tkanive, účinne zachytáva rôzne reaktívne kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atď.) a chráni pred poškodením DNA. OH-radikálmi. Cystanche fenyletanoidové glykozidy majú silnú schopnosť zachytávať voľné radikály, vyššiu redukčnú schopnosť ako vitamín C, zlepšujú aktivitu SOD v suspenzii spermií, znižujú obsah MDA a majú určitý ochranný účinok na funkciu membrány spermií. Polysacharidy Cistanche môžu zvýšiť aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytoch a pľúcnych tkanivách experimentálne starnúcich myší spôsobenú D-galaktózou, ako aj znížiť obsah MDA a kolagénu v pľúcach a plazme a zvýšiť obsah elastínu. dobrý čistiaci účinok na DPPH, predĺženie doby hypoxie u starnúcich myší, zlepšenie aktivity SOD v sére a oddialenie fyziologickej degenerácie pľúc u experimentálne starnúcich myší Experimenty ukázali, že pri bunkovej morfologickej degenerácii má Cistanche dobrú antioxidačnú schopnosť a má potenciál byť liekom na prevenciu a liečbu chorôb starnutia kože. Zároveň má echinakozid v Cistanche významnú schopnosť vychytávať voľné radikály DPPH a má schopnosť vychytávať reaktívne formy kyslíka a zabraňovať degradácii kolagénu vyvolanej voľnými radikálmi a tiež má dobrý reparačný účinok pri poškodení aniónom voľných radikálov tymínu.

Kliknutím získate produkty Cistanche na maloobchodný predaj

【Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Bunkové starnutie je riadené sieťou vzájomne prepojených zložitých biologických procesov [8, 9]. Nedávne štúdie ukázali, že zásah do biologických procesov starnutia môže podstatne predĺžiť zdravú dĺžku života modelových organizmov, vrátane cicavcov [10, 14]. Chronologické starnutie pučiacich kvasiniek Saccharomyces cerevisiae je dobre zavedený modelový systém na určenie zásahov do starnutia ľudských postmitotických buniek [16–19].

Vyvinuli sme novú, rýchlu a lacnú kvantitatívnu metódu s názvom PICLS na meranie CLS pomocou (1) kvasinkových buniek inkubovaných s médiom a testovanými zlúčeninami na priehľadných 96-jamkových platniach; (2) fluorescenčné farbivo propidium jodid (PI), bunková nepriepustnosť, ktorá preniká len do mŕtvych buniek [23–25]; a (3) čítačku mikrodoštičiek na kvantitatívne odčítanie prežitia buniek. Je potrebné poznamenať, že meranie hustoty buniek (a rastu buniek) pri OD600nm možno vykonať na tej istej platni. Pre odumreté kvasinkové bunky na 96-jamkových doštičkách sme zistili vysokú lineárnu koreláciu medzi PI fluorescenciou a absorbanciou OD600nm v rámci optimálneho rozsahu hustoty buniek zodpovedajúceho 0,05–12 OD. Tento metodický prístup možno použiť na kvantifikáciu životaschopnosti buniek vo vysokovýkonných testoch.

Existuje niekoľko dôležitých inovácií spojených s PICLS: (i) PICLS je v súčasnosti jedinou metódou na kvantifikáciu CLS bez prerastania. Z protokolu je odstránený kritický krok náročný na čas a zdroje, a preto je PICLS prvým skutočným vysokovýkonným skríningom (HTS) pre chemické činidlá a kultivačné podmienky na meranie CLS. (ii) Metodická myšlienka PICLS môže byť vo všeobecnosti formulovaná ako metóda založená na platni, kde (a) podiel mŕtvych/prežívajúcich buniek a (b) celkové množstvo buniek sa priamo určuje súčasne z tej istej platne s optickou intenzitou meracie zariadenie (bežne dostupná čítačka platní). V tejto práci sme použili 96-jamkové platne, ale 384-jamkové platničky sa tiež zdajú byť použiteľné (s možnou mierou zníženou citlivosťou v dôsledku menšieho množstva kultúry). Môže sa použiť akékoľvek farbivo, ktoré rozlišuje mŕtve a prežívajúce bunky a ktoré má fluorescenciu alebo absorpciu v kanáli, ktorý neinterferuje so všeobecným meraním hustoty buniek (napr. prostredníctvom absorpcie pri OD600nm). Aplikovali sme propidium jodid, ktorý selektívne označuje mŕtve bunky, ale to nie je kritické pre PICLS.

Obr. 7 Testovanie účinku 2,5-anhydro-D-manitolových analógov na chronologickú životnosť kvasiniek. Prototrofný kmeň kvasiniek (CEN.PK113-7D) bol pestovaný v syntetickom definovanom médiu s rôznymi koncentráciami 2,5-bezvodého-Dmanitolu (2,5-AM), D-fruktózy , D-manitol, D-maltóza a D-sorbitol v 96-jamkových doštičkách pri 30 stupňoch . Bunkový rast OD600nm sa meral v rôznych časových bodoch 24 hodín, 48 hodín a 72 hodín pomocou čítačky mikrodoštičiek a grafu sa vyniesla proti rôznym koncentráciám 2,5-AM, fruktózy, manitolu, maltózy a sorbitolu. B Chronologická životnosť (CLS) rôznych koncentrácií buniek inkubovaných s 2,5-AM, fruktózou, manitolom, maltózou a sorbitolom bola stanovená pomocou fluorescenčnej metódy založenej na propídiumjodidu. Kvantifikovalo sa prežitie buniek v rôznych chronologických vekových bodoch a časový bod rastu 72 hodín sa považoval za deň 1. C CLS zostarnutých buniek sa stanovilo metódou rastu v kvapalnom médiu YPD. Časový bod rastu 72 hodín sa považoval za deň 1. V rôznych chronologických bodoch veku sa 3-μl kultúra preniesla do druhej 96-jamkovej platne obsahujúcej 200 μl média YPD. Výrastok OD600nm v kvapalnom médiu YPD sa meral po inkubácii počas 24 hodín pri 30 stupňoch pomocou čítačky mikrodoštičiek. Graf je vynesený vo vzťahu ku dňu 1. D Rast v YPD tekutom médiu 96-jamkovej platne bol odfotografovaný po inkubácii počas 24 hodín pri 30 stupňoch. E V rôznych chronologických vekových bodoch boli na agarovej platni YPD nanesené 3-μl kultúry. Výrastok sa fotografoval po inkubácii počas 48 hodín pri 30 stupňoch. Všetky údaje predstavujú priemer ± SD.; *P<0.05, **P<0.01, and  ****P<0.0001 based on two-way ANOVA followed by Dunnett's multiple comparisons tests (B and C). n.s, non-significant 

Poznamenávame, že čierne mikrodoštičky sa zvyčajne odporúčajú na fluorescenčné testy, pretože tento materiál čiastočne potláča autofluorescenciu. Metódu sme však hodnotili na čírych mikroplatniach a zistili sme podobnú účinnosť ako pri čiernych mikroplatniach. Keďže čierne mikrodoštičky sú spojené s vysokými nákladmi, je to významná výhoda pre rozsiahle projekty skríningu s vysokou priepustnosťou.

Našu vyvinutú metódu sme overili pomocou známych zásahov proti starnutiu, ako je podávanie rapamycínu a obmedzenie kalórií [10–16] reprodukovaním ich účinku na CLS kvasiniek. Tieto výsledky naznačujú, že naša metóda je účinná pri identifikácii nových zásahov proti starnutiu. Využili sme náš novo vyvinutý protokol na skríning chemických látok na identifikáciu nových zlúčenín proti starnutiu (obr. 8). Identifikovali sme 2,5-anhydro-D-manitol (2,5-AM), ktorý rozširuje CLS kvasiniek. Na základe našich výsledkov odporúčame používať 2,5-AM samostatne alebo v kombinácii s inými zásahmi proti starnutiu.

2,5-AM je analóg fruktózy a oba cukry môžu vstúpiť do glykolytickej dráhy. Glykolýza je metabolický proces, pri ktorom je glukóza najprv fosforylovaná hexokinázou za vzniku glukózo-6-fosfátu (G6P). Fosfoglukoizomeráza interkonvertuje G6P na fruktóza-6-fosfát (F6P), ktorý sa ďalej metabolizuje na rôzne medziprodukty glykolýzy, vrátane pyruvátu, ktorý vstupuje do mitochondriálneho cyklu TCA. Rovnako ako glukóza, fruktóza je tiež fosforylovaná hexokinázou za vzniku F6P. Fosfofruktokináza konvertuje F6P na fruktózu-1,{10}}bisfosfát (FBP), ktorý sa ďalej metabolizuje na rôzne následné glykolytické medziprodukty. 2,5-AM môže byť tiež fosforylovaný hexokinázou za vzniku 2,5-AM- 6-fosfátu (2,5-AM6P) [39–41]. Okrem toho fosfofruktokináza konvertuje 2,5-AM6P na 2,5-AM- 1,6-bisfosfát (2,5-AMBP). Avšak 2,{31}}AMBP sa nemôže ďalej metabolizovať na následné glykolytické medziprodukty [39–41].

Keďže 2,{1}}AM je analóg fruktózy, skúmali sme, či môže fruktóza predĺžiť aj životnosť kvasiniek. Nepozorovali sme však aktivitu fruktózy proti starnutiu pri predlžovaní CLS kvasiniek. Manitol a maltóza môžu tiež vstúpiť do glykolýzy a metabolizovať sa na následné glykolytické medziprodukty. Skúmali sme aj vplyv manitolu a maltózy na životnosť kvasiniek. Fruktóza, manitol a maltóza tiež nie sú schopné predĺžiť CLS kvasiniek.

V prípade sorbitolu, iného ešte nemetabolizovaného cukru, bolo predtým hlásené, že ovplyvňuje CLS vo veľmi vysokých koncentráciách (18 percent ekvivalentných 1 M) [20, 45], chceli sme objasniť, či anti-aging aktivita 2,{{7 }}AM môže byť spôsobené zvýšenou osmolaritou kultivačného média. Naše experimenty ukázali, že sorbitol nedokáže zvýšiť CLS kvasiniek pri nižších koncentráciách, ktoré sú účinné v prípade 2,{9}} ráno. Keďže sorbitol vyžaduje vyššie koncentrácie na zvýšenie CLS kvasiniek, mechanizmus proti starnutiu 2,5-AM je nezávislý od účinkov osmolarity. Tieto zistenia odhalili, že aktivita 2,5-AM proti starnutiu je špecifická a nie je paralelná s niekoľkými ďalšími analógmi s podobnou chemickou štruktúrou.

Zostáva však preskúmať, ako 2,{1}}AM predlžuje životnosť. Bude zaujímavé preskúmať, či 2,5-AM priamo moduluje znaky starnutia [8]. TORC1 a AMPK sú komplexy snímajúce glukózu zapojené do procesu starnutia [32, 43]. Avšak chronologická životnosť predĺžená inhibíciou TORC1 je znížená, keď je inhibovaná AMPK. Glukóza a glykolytické medziprodukty regulujú aktivitu TORC1 a AMPK [34, 46, 47]. 2,5-Zistilo sa, že AMBP inhibuje aktivitu aldolázy, ktorá katalyzuje premenu FBP na glyceraldehyd-3-fosfát (G3P) a dihydroxyacetónfosfát (DHAP) [39, 40]. DHAP je interkonvertovaný na G3P triosefosfát izomerázou. Nedávne dôkazy naznačujú, že DHAP je dôležitá molekula glukózového signálu, ktorá aktivuje TORC1 [48].

Glykolytický fux je ohrozený, keď je ovplyvnená syntéza G3P a DHAP, čo vedie k nižšej produkcii ATP. Je zaujímavé, že AMPK sa aktivuje, keď je ohrozený energetický stav buniek a inhibuje rast buniek inhibíciou TORC1 [46, 47]. Antagonistický vzťah AMPK a TORC1 je teda účinnou metabolickou adaptáciou na zabezpečenie rovnováhy bunkovej homeostázy pre zdravé bunky. Hoci sme nepozorovali účinok 2,5-AM na rast buniek (obr. 6 a 7). Tieto zistenia vylúčili akýkoľvek glukózový reštrikčný účinok, ktorý by ohrozil rast buniek (obr. 5), avšak predĺžili životnosť s fenotypom pomalého rastu [49]. Predĺženie životnosti rapamycínom však nevyžaduje vyššiu dávku, než ohrozuje rast buniek (obr. 4). Preto nemôžeme vylúčiť možnosť aktivity proti starnutiu 2,{14}}AM prostredníctvom TORC1/AMPK alebo nezávisle od TORC1/AMPK.

Na rozdiel od inhibičného účinku 2,5-AMBP na aldolázu sa uvádza, že aktivuje pyruvátkinázu, posledný enzým glykolýzy [39–41]. Pyruvátkináza katalyzuje konverziu fosfoenolpyruvátu na pyruvát, jeden zo zdrojov na generovanie NAD plus (nikotínamid adenín dinukleotid). NAD plus je dôležitý metabolit, ktorý reguluje niekoľko bunkových procesov a funkcií kritických pre udržanie zdravých buniek a predĺženie životnosti [50, 51]. Pyruvát je tiež hlavným substrátom pre mitochondriálne reakcie na generovanie rôznych metabolitov stavebných blokov na syntézu životne dôležitých prvkov, vrátane aminokyselín, nukleových kyselín a ATP, v podstate pre prežitie buniek a zdravé starnutie [52–55]. Pokles mitochondriálnej aktivity je skutočne spojený so starnutím a chorobami súvisiacimi s vekom [53–56]. Nedávno bol 2,{12}}AM navrhnutý ako potenciálne liečivo na liečbu rakoviny akútnej myeloidnej leukémie (AML) [57].

Ako vedľajšiu poznámku sme našu novú metódu nazvali PICLS (metóda CLS založená na PI) so zreteľom na slovné hračky „pickles“. Zatiaľ čo všetky prvky nášho nového protokolu už boli nezávisle popísané inde, ich „fermentovaná“ kombinácia robí meranie jednoduchým, lacným a napokon pripraveným na vysokú priepustnosť.

Na záver sme vyvinuli kvantitatívnu metódu na meranie chronologickej dĺžky života kvasiniek a identifikovali sme 2,5-AM ako novú zlúčeninu proti starnutiu. V súčasnosti prebieha štúdia na skúmanie mechanizmov aktivity proti starnutiu 2,5-AM.

Materiály a metódy

Kvasinkový kmeň, médiá a chemikálie

V tejto štúdii bol použitý prototrofný kmeň CEN.PK{0}}D genetické pozadie [35, 36]. Štandardne bohaté médium YPD (1 % Bacto kvasinkový extrakt, 2 % Bacto peptón a 2 % glukóza), YPD agar (2,5 % Bacto agar) a syntetické definované (SD) médium obsahujúce 6,7 g/l kvasinkovej dusíkatej bázy so síranom amónnym bez aminokyselín (DIFCO) a 2 percent glukózy. Zásobný roztok rapamycínu (Enzo) bol pripravený v dimetylsulfoxide (Sigma). Konečná koncentrácia DMSO nepresiahla 1 percento v žiadnom teste. 2,5-anhydro-D-manitol (Santa Cruz), D-fruktóza (Sigma), D-manitol (Sigma), D-maltóza (Sigma) a D-sorbitol (Sigma), pracovné koncentrácie pripravené čerstvé prášok sa priamo rozpustí v médiu a sterilizuje sa filtráciou.

Podmienky rastu kvasiniek

Kvasinkový kmeň bol získaný zo zmrazeného glycerolového zásobného roztoku na YPD agarovom médiu pri 30 stupňoch. Kvasinky rástli v SD médiu cez noc pri 30 stupňoch s trepaním pri 220 ot./min. Bunky pestované cez noc sa zriedili na OD600nm~0,2 v čerstvom SD médiu, aby sa iniciovali experimenty s chronologickou životnosťou.

Analýza chronologickej životnosti

Experimenty s chronologickou životnosťou (CLS) sa uskutočňovali na {{0}}jamkových platniach s celkovým počtom 20{{10}}} µL kvasinkovej kultúry, ako bolo opísané vyššie [58]. Bunkové inokulum sa prenieslo do 96-jamkovej platne obsahujúcej sériovo dvojnásobne zriedené koncentrácie (0–10 nM) rapamycínu. Na kalorický reštrikčný test boli pripravené bunkové inokulá v SD médiu obsahujúcom 2 percentá, 0,5 percenta a 0,25 percenta glukózy a prenesené na 96-jamkové platne. Podobne sa bunkové inokulum prenieslo do 96-jamkových platní obsahujúcich sériovo dvojnásobne riedené koncentrácie (0–8 mM) 2,5-anhydro-D-manitolu, D-fruktózy, D-manitolu, D-maltóza a D-sorbitol. Bunky sa inkubovali pri 30 stupňoch a rast sa meral v rôznych časových bodoch. Časový bod rastu 72 hodín sa považoval za deň 1 pre test CLS. Prežitie buniek sa kvantifikovalo v rôznych vekových bodoch tromi rôznymi prístupmi: (i) metóda založená na fluorescencii propidium jodidu, (ii) rast v kvapalnom médiu YPD a (iii) test bodkovania.

i) Metóda založená na fluorescencii propidium jodidu:Podrobné postupy na vývoj prístupu založeného na fluorescencii propidium jodidu (PI) sú uvedené v časti výsledkov. Na test CLS sa {{0}}}ul kvasinkových buniek v rôznych vekových časoch prenieslo do druhej 96-jamkovej platne. Bunky sa premyli a inkubovali v 100 ul 1 x PBS s PI (5 ug/ml) počas 15 minút v tme. Na kvantitatívnu analýzu boli zahrnuté pozitívne a negatívne kontroly vzoriek. Pozitívna kontrola (bunky varené pri 100 stupňoch počas 15 minút) sa zafarbili PI a spracovali na tej istej 96-jamkovej platni. Vzorky bez buniek zafarbených PI slúžili ako negatívna kontrola. Po inkubácii sa bunky premyli a resuspendovali v 100 ul PBS. Odčítanie fluorescencie vzorky (excitácia pri 535 nm, emisia pri 617 nm) a OD600 nm sa merali pomocou čítačky mikrodoštičiek (BioTek). Intenzita fluorescencie každej vzorky bola normalizovaná pomocou OD600nm. Normalizovaná intenzita fluorescencie každej vzorky sa odpočítala od signálu pozadia nezafarbenej negatívnej vzorky. Získaná intenzita fluorescencie vzorky pozitívnej kontroly (uvarené mŕtve bunky) sa považovala za 0 percent prežitia buniek. Potvrdili sme smrť bunky b, ktorá jej umožnila rásť v médiu. Prežitie buniek v rôznych časových bodoch vzoriek sa vypočítalo b normalizáciou intenzity fluorescencie s pozitívnou kontrolnou vzorkou (varené bunky).

kde Iij(535nm∕617nm) je intenzita fluorescencie nameraná v jamke s doštičkovými súradnicami i a j s excitáciou pri 535 nm a emisiou pri 617 nm, ID(535nm∕617nm) je fluorescenčná intenzita nameraná pre bunku so 100-percentnou smrťou bunky zafarbené s PI, IC (535nm~617nm) je intenzita fluorescencie nameraná pre bunky bez PI a príslušné hodnoty OD sú absorpciou nameranou pre príslušné bunky pri 600 nm normalizovanou na počet buniek.

(ii) Rast v tekutom médiu YPD:Kvasinková stacionárna kultúra (3-μl) v rôznych časových bodoch veku bola prenesená na druhú 96-jamkovú platňu obsahujúcu 200 μl YPD média a inkubovaná počas 24 hodín pri 30 stupňoch . Rast (OD600nm) starých buniek sa meral pomocou čítačky mikrodoštičiek. Kvantifikácia prežitia buniek pre každý vekový bod bola stanovená vo vzťahu ku dňu 1 (považované za 100-percentné prežitie buniek), ako bolo opísané vyššie [19, 20, 58].

(iii) Test bodkovania:Kvasinková stacionárna kultúra (3 ul) rôznych vekových časových bodov bola nanesená na YPD agarovú platňu a inkubovaná počas 48 hodín pri 30 stupňoch . Rast starých buniek na agarovej platni YPD sa fotografoval pomocou zobrazovacieho systému BioRad GelDoc.

Analýza dát

Štatistická analýza všetkých výsledkov, ako je stredná hodnota, štandardné odchýlky, korelácia (R2), významnosť a grafické znázornenie, sa uskutočnila pomocou softvéru GraphPad Prism v.9.3.1. Výsledky sa štatisticky porovnávali s použitím bežnej jednosmernej ANOVA a dvojcestnej ANOVA, po ktorej nasledovalo viacnásobné porovnanie Dunnettovým post hoc testom alebo Sidakovým post hoc testom. Vo všetkých grafoch sú hodnoty P zobrazené ako *P<0.05,  **P<0.01, ***P<0.001, and ****P<0.0001 were considered significant. n.s, non-significant.

PoďakovanieMA a FE autora sú vynálezcami dvoch patentových prihlášok (10202201534P a 10202201536U), ktoré zahŕňajú časť práce opísanej v tomto článku.

Autorský príspevokMA koncipoval projekt, vykonal experimenty a analyzoval údaje. FE spolukoncipovala projekt, vyhodnocovala dáta a navrhla stratégiu. MA a FE napísali prácu a všetci autori prácu skontrolovali a súhlasili s jej konečnou verziou.

FinancovanieTúto prácu podporil Bioinformatics Institute (BII), A*STAR Career Development Fund (C210112008) a grant Global Healthy Longevity Catalyst Awards (MOH-000758–00).

vyhlásenia

Konkurenčné záujmyAutori nedeklarujú žiadne konkurenčné záujmy.

Otvorený prístupTento článok je licencovaný na základe Creative Commons Attribution 4.{1}} Medzinárodná licencia, ktorá povoľuje používanie, zdieľanie, adaptáciu, distribúciu a reprodukciu na akomkoľvek médiu alebo formáte, ak uvediete pôvodného autora (autorov) ) a zdroj, uveďte odkaz na licenciu Creative Commons a uveďte, či boli vykonané zmeny. Obrázky alebo iný materiál tretích strán v tomto článku sú zahrnuté v licencii Creative Commons článku, pokiaľ nie je uvedené inak v úverovom limite k materiálu. Ak materiál nie je zahrnutý v licencii Creative Commons k článku a vaše zamýšľané použitie nie je povolené zákonnými predpismi alebo prekračuje povolené použitie, budete musieť získať povolenie priamo od držiteľa autorských práv.

Referencie

1. das nações Unidas, O. Organizácia Spojených národov, Ministerstvo hospodárskych a sociálnych vecí, Populačná divízia (2019). Vyhliadky svetovej populácie, hlavné body (ST/ESA/SER.A/423). 2019.

2. Robine J. Starnutie populácie: žijeme dlhšie, ale sme zdravší? Organizácia Spojených národov, Ministerstvo hospodárstva a sociálnych vecí, Populačná divízia, UN DESA/ POP/2021/TP/NO. 2. (2021).

3. Niccoli T, Partridge L. Starnutie ako rizikový faktor chorôb. Curr Biol. 2012.

4. Hou Y, a kol. Starnutie ako rizikový faktor neurodegeneratívnych ochorení. Nat Rev Neurol. 2019.

5. Harman D. Proces starnutia: hlavný rizikový faktor pre choroby a smrť. Proc Natl Acad Sci USA A. 1991.

6. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Čeliť globálnym výzvam starnutia. Príroda. 2018.

7. Fontana L, Kennedy BK, Longo VD. Lekársky výskum: liečba starnutia. Príroda. 2014.

8. López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, Serrano M, Kroemer G. Charakteristické znaky starnutia. Bunka. 2013.

9. Kennedy BK a kol. Geroscience: Spojenie starnutia s chronickými chorobami. Bunka. 2014.

10. Partridge L, Fuentealba M, Kennedy BK. Snaha spomaliť starnutie prostredníctvom objavovania liekov. Nat Rev Drug Discovery. 2020.

11. Mattison JA, a kol. Kalorické obmedzenie zlepšuje zdravie a prežitie opíc rhesus. Nat Commun.

12. Bitto A, a kol. Prechodná liečba rapamycínom môže predĺžiť životnosť a dĺžku zdravia u myší stredného veku. Elife. 2016.

13. Fontana L, Partridge L. Podpora zdravia a dlhovekosti prostredníctvom stravy: od modelových organizmov po ľudí. Bunka. 2015.

14. Zhang Y, Zhang J, Wang S. Úloha rapamycínu pri predlžovaní zdravotného stavu prostredníctvom oneskorenia starnutia orgánov. Age Res Rev. 2021.

15. Selvarani R, Mohammed S, Richardson A. Vplyv rapamycínu na starnutie a choroby súvisiace s vekom – minulosť a budúcnosť. GeroScience. 2021.

16. Fontana L, Partridge L, Longo VD. Predĺženie zdravého života z kvasiniek na ľudí. Veda. 2010.

17. Zimmermann A, a kol. Kvasinky ako nástroj na identifikáciu zlúčenín proti starnutiu. FEMS Yeast Res. 2018.

18. Longo VD, Shadel GS, Kaeberlein M, Kennedy B. Replikatívne a chronologické starnutie u Saccharomyces cerevisiae. Cell Metab. 2012.

19. Powers RW, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy BK, Fields S. Predĺženie chronologickej dĺžky života v kvasinkách zníženou signalizáciou TOR dráhy. Genes Dev. 2006.

20. Murakami CJ, Burtner ČR, Kennedy BK, Kaeberlein M. Metóda pre vysokovýkonnú kvantitatívnu analýzu chronologickej dĺžky života kvasiniek. J Gerontol. Ser. A Biol. Sci. Med. Sci. (2008).

21. Teng X, Hardwick JM. Kvantifikácia geneticky riadenej bunkovej smrti u pučiacich kvasiniek. Metódy Mol Biol. 2013.

22. Garay E, a kol. Profilovanie prežitia v stacionárnej fáze s vysokým rozlíšením odhaľuje faktory dlhovekosti kvasiniek a ich genetické interakcie. PLoS Genet. 2014.

23. Alfatah M, a kol. Hypokulozid, zlúčenina podobná sfingoidnej báze z Acremonium, narúša integritu membrány kvasinkových buniek. Sci Rep. 2019.

24. Alfatah M, a kol. Krajina chemicko-genetických interakcií mono-(2-etylhexyl)-ftalátu pomocou chemogenomického profilovania v kvasinkách. Chemosféra. 2019.

25. Kwolek-Mirek M, Zadrag-Tecza R. Porovnanie metód používaných na hodnotenie životaschopnosti a vitality kvasinkových buniek. FEMS Yeast Res. 2014.

26. Chadwick SR, a kol. Súbor nástrojov na rýchle kvantitatívne hodnotenie chronologickej dĺžky života a prežitia v Saccharomyces cerevisiae. Trafc. 2016.

27. Pereira C, Saraiva L. Interferencia médií starnutia na hodnotenie chronologickej dĺžky života kvasiniek farbením propidium jodidom. Folia Microbiol. (Praha). (2013).

28. Lamming DW, Ye L, Sabatini DM, Baur JA. Rapalogs a inhibítory mTOR ako terapeutiká proti starnutiu. J Clin Investig. 2013.

29. Arriola Apelo SI, Lamming DW. Rapamycín: Inhibítor starnutia sa objavuje z pôdy Veľkonočného ostrova. Gerontologické časopisy - Séria A Biologické vedy a lekárske vedy. 2016.

30. Wilkinson JE, a kol. Rapamycín spomaľuje starnutie u myší. Starnúca bunka. 2012.

31. Saxton RA, Sabatini DM. mTOR signalizácia v raste, metabolizme a chorobe. Bunka. 2017;168:960–76.

32. Johnson SC, Rabinovich PS, Kaeberlein M. MTOR je kľúčovým modulátorom starnutia a chorôb súvisiacich s vekom. Príroda. 2013.

33. González A, hala MN. Snímanie živín a signalizácia TOR u kvasiniek a cicavcov. EMBO J. 2017;36:397–408.

34. Alfatah M, a kol. TORC1 reguluje transkripčnú odpoveď na glukózu a vývojový cyklus prostredníctvom Tap42-Sit4-Rrd1/2 dráhy v Saccharomyces cerevisiae. BMC Biol. 2021.

35. Van Dijken JP, a kol. Medzilaboratórne porovnanie fyziologických a genetických vlastností štyroch kmeňov Saccharomyces cerevisiae. Enzyme Microb Technol. 2000.

36. Müller M, a kol. Zbierka prototrofných delečných mutantov pre kvasinkovú metabolomiku a systémovú biológiu. Nat Biotechnol. 2012.

37. Alvers AL, a kol. Autofágia je potrebná na predĺženie chronologickej dĺžky života kvasiniek rapamycínom. Autofágia. 2009.

38. Zhang JH, Chung TDY, Oldenburg KR. Jednoduchý štatistický parameter na použitie pri hodnotení a validácii vysokovýkonných skríningových testov. J Biomol Screen. 1999.

39. Riquelme PT, Wernette Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Regulácia metabolizmu uhľohydrátov 2,5-anhydro-D-manitolom. Proc Natl Acad Sci USA A. 1983.

40. Riquelme PT, Wernette-Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Mechanizmus účinku 2,5-anhydro-D-manitolu v hepatocytoch. Účinky fosforylovaných metabolitov na enzýmy metabolizmu uhľohydrátov. J. Biol. Chem. (1984).

41. Riquelme PT, Kneer NM, Wernette-Hammond ME, Lardy HA. Inhibícia glykolýzy 2,5-anhydromanitolom v izolovaných potkaních hepatocytoch a Ehrlichových ascitových bunkách. Proc Natl Acad Sci USA A.

42. Hardie DG. AMP-aktivované/SNF1 proteínkinázy: konzervovaní strážcovia bunkovej energie. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007.

43. Burkewitz K, Zhang Y, Mair WB. AMPK v spojení energetiky a starnutia. Cell Metab. 2014.

44. McCartney RR, Chandrashekarappa DG, Zhang BB, Schmidt MC. Genetická analýza rezistencie a citlivosti na 2-deoxyglukózu u Saccharomyces cerevisiae. genetika. 2014.

45. Burtner CR, Murakami CJ, Kennedy BK, Kaeberlein M. Molekulárny mechanizmus chronologického starnutia v kvasinkách. Bunkový cyklus. 2009.

46. ​​Lin SC, Hardie DG. AMPK: snímanie glukózy, ako aj stavu bunkovej energie. Cell Metab. 2018.

47. González A, hala MN, Lin SC, Hardie DG. AMPK a TOR: jin a jang snímania bunkových živín a kontroly rastu. Cell Metab. 2020.

48. Orozco JM, et al. Dihydroxyacetón fosfát signalizuje dostupnosť glukózy pre mTORC1. Nat Metab. 2020.

49. Aguiar-Oliveira MH, Bartke A. Nedostatok rastového hormónu: zdravie a dlhovekosť. Endocr Rev. 2019.

50. Orlandi I, Alberghina L, Vai M. Nikotínamid, nikotínamid ribozid a kyselina nikotínová – objavujúce sa úlohy v replikatívnom a chronologickom starnutí v kvasinkách. Biomolekuly. 2020.

51. Covarrubias AJ, Perrone R, Grozio A, Verdin E. NAD plus metabolizmus a jeho úlohy v bunkových procesoch počas starnutia. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021.

52. Spinelli JB, Haigis MC. Mnohostranné príspevky mitochondrií k bunkovému metabolizmu. Nat Cell Biol. 2018.

53. Berry BJ, Kaeberlein M. Energetický pohľad na gerovedu: mitochondriálna protonmotorická sila a starnutie. Gero-Science. 2021.

54. Sun N, Youle RJ, Finkel T. Mitochondriálny základ starnutia. Mol Cell. 2016.

55. Kauppila TES, Kauppila JHK, Larsson NG. Cicavčie mitochondrie a starnutie: aktualizácia. Cell Metab. 2017.

56. Bratic A, Larsson NG. Úloha mitochondrií pri starnutí. J Clin Investig. 2013.

57. Chen WL, a kol. Zvýšená utilizácia fruktózy sprostredkovaná SLC2A5 je jedinečný metabolický znak akútnej myeloidnej leukémie s terapeutickým potenciálom. Cancer Cell. 2016.

58. Jing JL, Ning TCY, Natali F, Eisenhaber F, Alfatah M. Suplementácia železa odďaľuje starnutie a predlžuje životnosť buniek prostredníctvom potenciácie mitochondriálnej funkcie. Bunky 11, (2022).

Poznámka vydavateľaSpringer Nature zostáva neutrálny, pokiaľ ide o jurisdikčné nároky v publikovaných mapách a inštitucionálnych afiliáciách.

【Ďalšie informácie: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】