Vakcína na COVID na báze MRNA-19: Sú nové, ale nie neznáme!

Abstrakt:

mRNA vakcíny využívajú mechanizmus, ktorý naše bunky využívajú na produkciu proteínov. Naše bunky produkujú proteíny na základe poznatkov obsiahnutých v našej DNA; každý gén kóduje jedinečný proteín. Genetická informácia je nevyhnutná, ale bunky ju nemôžu použiť, kým ju molekuly mRNA nepremenia na inštrukcie na produkciu špecifických proteínov. mRNA vakcinácie poskytujú mRNA inštrukcie pripravené na použitie na konštrukciu špecifického proteínu. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) a mRNA-1273 (Moderna) sú novo schválené vakcíny COVID-19 na báze mRNA, ktoré preukázali vynikajúcu ochranu a účinnosť. Celkovo existuje päť ďalších kandidátov na vakcínu na báze mRNA pre COVID-19 v rôznych fázach klinického vývoja. Táto recenzia je špecificky zameraná na vakcíny proti COVID{11}} na báze mRNA a zahŕňa jej vývoj, mechanizmus a klinické aspekty.

cistanche výhody pre mužov - posilnenie imunitného systému

Kľúčové slová:

vakcína proti COVID-19; mRNA vakcíny; vývoj vakcín; vakcíny založené na vektoroch

1. Úvod

Pandémia koronavírusovej choroby{{0}} (COVID-19) spôsobená koronavírusom ťažkého akútneho respiračného syndrómu-2 (SARS-CoV-2) sa rozšírila po celom svete. K dnešnému dňu je na celom svete 662 miliónov potvrdených prípadov COVID-19, vrátane 6,6 milióna úmrtí hlásených Svetovej zdravotníckej organizácii (WHO) [1]. Vírus postihuje viac ako 200 krajín sveta, pričom väčšina prípadov je hlásená v Brazílii, Rusku a Spojených štátoch amerických [2]. Prvá správa o vypuknutí COVID{12}} bola z mesta Wuhan v provincii Chu-pej v Číne 30. decembra 2019. Vo Wu-chane boli zaznamenané zhluky prípadov zápalu pľúc. Neskôr 7. januára 2020 sa zistilo, že pôvodcom je nový koronavírus (2019-nCoV). WHO nakoniec chorobu nazvala COVID-19 [3,4]. Odhadovaná úmrtnosť sa pohybuje od 0,5 do 1,5 %. SARS-CoV-2 patrí do rodinyCoronaviridaea poradieNidovirales. SARS-CoV-2 patrí medzi Betacoronavirus, ktorý má úzky genómový vzťah s dvoma vírusmi, SARS-CoV a koronavírusom blízkovýchodného respiračného syndrómu (MERS CoV). V porovnaní so SARS a MERS je SARS-CoV-2 vysoko nákazlivý. COVID-19 je závažné ochorenie celosvetového významu. Ochorenie nemožno liečiť špecifickými antivírusovými liekmi, kľúčom k prevencii šírenia ochorenia je prerušenie prenosového reťazca [5]. Na zníženie prevalencie a úmrtnosti sa používa hromadná imunizácia proti pandémii [6,7]. Od zverejnenia genómovej sekvencie SARS-CoV{10}} 11. januára 2020 sa študovalo viac ako 150 projektov imunizácie autorít. Hlavným cieľom očkovania je vyvolanie imunitnej odpovede, ktorá poskytuje dlhodobú ochranu pred závažnosťou ochorenia [8]. Ako vyhodnotil Paddy Ssentongo a kolegovia [9], účinnosť vakcíny (VE) proti všetkým infekciám SARS-CoV-2 klesla z 83 % v prvom mesiaci po dokončení prvej série očkovania na 22 % po 5 mesiacoch alebo viac . Podobne VE proti symptomatickému COVID{22}} klesla z 94 % v prvom mesiaci na 64 % počas štvrtého mesiaca po imunizácii. Celkovo bola VE proti ťažkému COVID-19 silná vo všetkých vekových skupinách, s úrovňou 90 % (95 % CI, 87 – 92 %) päť mesiacov alebo viac po úplnom očkovaní.

Koronavírus má na svojom povrchu obohatený (S) proteín; tento S proteín bude interagovať s receptor-väzbovou doménou receptora angiotenzín-konvertujúceho enzýmu (ACE) [10,11]. Väčšina kandidátov na vakcínu sa zameriava na tento proteín S vírusu [12]. Vakcína Pfizer BioNtech COVID-19-BNT162b2 je prvá imunizácia schválená Úradom pre kontrolu potravín a liečiv (FDA). Je založená na messenger RNA (mRNA) vyrobenej spoločnosťou Pfizer, ktorá získala povolenie na núdzové použitie pre osoby vo veku 12 až 15 rokov alebo staršie na prevenciu ochorenia COVID{11}}. US Food and Drug Administration (USFDA) schválila vakcínu Pfizer 23. augusta 2021 [13]. Rôzne štúdie uvádzajú, že imunizácia má účinnosť 89,1 % pri prevencii infekcie SARS-CoV-2; okrem toho vakcíny tiež znížili hospitalizáciu, úmrtia a úmrtia súvisiace s COVID{19}}a prevenciu prijatia na JIS. Kontrolovateľné šírenie SARS-CoV-2 možno dosiahnuť skôr, keď je veľká časť populácie zaočkovaná (napr. 70 – 80 %). Imunizácia výrazne znižuje výskyt COVID-19. Vakcína poskytuje silnú a účinnú imunitnú odpoveď na eradikáciu infekcie SARS-CoV-2 z ľudského tela. Ľudia, ktorí boli infikovaní, mali silnú odpoveď T-buniek na vírus, čo môže pomôcť pri ich schopnosti zotaviť sa z infekcie [14,15]. Neutralizácia zostala v silnej korelácii s ochranou pred symptomatickou infekciou s variantmi SARS-CoV-2 [16]. Očkovanie je teda stratégiou na kontrolu pandémie.

cistanche tubulosa - zlepšenie imunitného systému

Vakcíny COVID{0}} sa vyvíjajú na rôznych platformách. Živý atenuovaný vírus, inaktivované vakcíny, nereplikujúce sa vírusové vektory, RNA a DNA sú ich príkladmi. Rôzne typy vakcín s príkladmi sú uvedené na obrázku 1. Stratégiou vývoja vakcíny je použitie usmrteného vírusu SARS-CoV-2, ktorý nie je schopný replikácie, ale môže zostať neporušený v tele. Imunitný systém spustí svoju odpoveď proti vírusu tvorbou protilátok proti vírusu. COVAXIN® (BBV152) vyrábaný Bharat Biotech, Hyderabad, India a CoronaVac tiež známy ako sinovac® vyvinutý spoločnosťou Sinovac Biotech, Peking, Čína použil na vývoj vakcíny prístup inaktivovaného vírusu [17]. Nereplikujúci sa vírusový vektor je tiež technika prijatá spoločnosťami na výrobu vakcín. Adenovírus (Ads) je široko používaný vírusový vektor, ktorý má dvojvláknový genóm pôsobiaci ako pôvodca bežnej nádchy. Spoločnosť CanSino Biologics Tianjin, Čína vyvinula Ad5-nCoV (Convidecia®), ktorý kóduje celú dĺžku S-proteínu vírusu SARS-CoV-2. Vírusový vektor nemá replikačné vlastnosti, a preto nespôsobuje skutočné ochorenie. Akonáhle sa vírusová DNA dostane do tela, je prezentovaná na bunkách prezentujúcich antigén a vzniká proti nej imunitná odpoveď. Oxford/Astraneca použila adenovírus zo šimpanza (ChAdOx1), ktorý má potenciál minimalizovať interakciu s prevládajúcimi protilátkami proti adenovírusu. Vakcína sa nazýva AZD122 (Vaxzevria™). Výskumný inštitút Gamaleya, Moskva, Rusko vyvinul vakcínu Sputnik V™, ktorá je tiež vírusovým vektorom s rekombinantným ľudským sérotypom Ad26. Vakcínu Janssen vyrobila spoločnosť Johnson and Johnson, New Jersey, USA použitím rovnakého prístupu [18].

mRNA sa tiež považuje za nový prístup k formulácii vakcíny. mRNA vakcíny sú pre verejnosť novinkou, no vedci ich skúmali už dlho. Tieto mRNA vakcíny sú syntetizované z templátu DNA, ktorý kóduje spike proteín a sú zabalené do nosiča na báze lipoproteínov, aby sa urýchlil vstup mRNA do tela a zabránilo sa degradácii [19]. Keď sa vakcína podáva intramuskulárne, vstrekne sa do hlbších tkanív a molekuly mRNA vstúpia do bunky, čím sa uľahčí proces translácie [20]. Po vstupe do tela bude mRNA rozpoznaná ako antigén a bude aktivovaná humorálna imunitná odpoveď, ktorá bude stimulovať B bunky, aby sa vyvinuli na pamäťové B bunky. Tým pri sekundárnej expozícii antigénu; pamäťové B bunky neutralizujú a blokujú antigény [21]. FDA schválil vakcíny založené na mRNA, z ktorých jedna je Pfizer-BioNTech's, New York, NY, USA BNT162b2 (Comirnaty®) a ďalšia je Moderna™, Cambridge, MA, USA mRNA-1273 tiež známa ako Spikevax. FDA schválila mRNA-1273 na povolenie núdzového použitia (EUA) na použitie u ľudí vo veku 18 rokov a starších. Aktuálna recenzia poskytne podrobné informácie o vakcinológii a faktoch o COVID{11}}, vývoji vakcín na báze mRNA, o tom, ako vakcíny mRNA fungujú, o použitom zložení a zložkách, bezpečnosti a účinnosti a regulačných výzvach pre vakcíny.

Obrázok 1. Rôzne typy vakcín proti infekcii COVID-19. (Vytvorené pomocou BioRender.com s prístupom 31. decembra 2022)

2. Vakcinológia a fakty o COVID-19

V decembri 2019 bola v Číne nahlásená skupina jedincov trpiacich pľúcnymi poruchami z neidentifikovaného dôvodu. Čínske centrum pre kontrolu a prevenciu chorôb (CDC) potom skúmalo neistotu v prípadoch súvisiacich s pneumóniou a ich pôvod odberom vzoriek z tela pacienta, ktoré boli detegované pomocou polymerázovej reťazovej reakcie v reálnom čase [22]. Neskôr bola príčina pľúcnej poruchy známa a zistilo sa, že ju spôsobil koronavírus, ktorý sa ďalej nazýval SARS-CoV-2 (ťažký akútny respiračný syndróm) alebo COVID-19. Odvtedy sa zmenila na globálnu pandémiu. Patrí do skupiny -koronavírusov. Štrukturálne je to obalený, nesegmentovaný, patriaci do podrodu Sarbecovirus a podčeľade Orthocoronavirinae. Genomický materiál prítomný v jeho štruktúre je jednovláknová pozitívna RNA sekvencia [23]. Vyskytujú sa predovšetkým v hostiteľoch vtákov a cicavcov. Genomická štruktúra koronavírusu je znázornená na obrázku 2, ktorý predstavuje, že vírusová štruktúra obsahuje spike proteíny s podjednotkami S1 a S2 na vonkajšej membráne. RNA vírusový genóm je zapuzdrený vo vnútri membrány spolu s nukleokapsidom. Môžeme teda povedať, že existujú štyri štrukturálne proteíny, tj spike proteín (S), nukleokapsidový proteín (N), membránový proteín (M) a obalový proteín (E) [24]. Okrem toho sú prítomné aj neštrukturálne proteíny (Nsp), ktorých je celkovo šestnásť. Hrotové proteíny sú prominentné receptorové väzbové miesta, kde môžu proteíny interagovať s receptormi prítomnými v tele [25]. S1 podjednotka zahŕňa receptor viažucu doménu (RBD), kde sa angiotenzín-konvertujúci enzým II viaže na spike proteín. Pozostáva tiež z N-terminálnej domény (NDT). Podjednotka S2 obsahuje fúzne proteíny (FP) a transmembránové proteíny (TM) [26]. Po vstupe vírusu do hostiteľských buniek vedie k fúzii a odstráneniu povlaku vírusovej membrány, po ktorej nasleduje transkripcia a translácia mRNA, ktorá je nevyhnutná na vytvorenie vírusovej zostavy, ktorá potom exodusuje z hostiteľa cez exocytózu a infikuje iné bunky. Vstup vírusových častíc do iných buniek tela vedie k stimulácii imunitnej odpovede a tvorbe protilátok [27].

Obrázok 2. Genomická štruktúra koronavírusu. (Vytvorené pomocou BioRender.com s prístupom 31. decembra 2022).

V celosvetovom meradle sú očkovania široko používané a sú účinné pri znižovaní úmrtnosti. Na základe spoľahlivých vedeckých poznatkov a poznatkov možno zlepšiť hodnotenie bezpečnosti a účinnosti vakcín a hodnotenie ich príjmu [28]. Vakcíny sa vyvinuli z tradičných vakcín, ako sú živé oslabené alebo usmrtené vakcíny, na podjednotkové vakcíny a napokon homológne alebo heterológne imunizačné stratégie prime-boost [29]. Rôzne očkovacie stratégie sú znázornené na obrázku 3. V staroveku sa ukázalo, že živé oslabené vakcíny sú záchrancom proti rôznym patogénnym vírusom a považujú sa za bezpečné proti miliónom populácií, no často sa zanedbávajú. Mnohé vakcíny vrátane MMR (osýpky, mumps, ružienka) a vakcíny proti ovčím kiahňam sú živé oslabené vakcíny [25,30]. Oslabené formy vírusu možno dosiahnuť jeho vystavením nepriaznivým podmienkam alebo genetickými modifikáciami. Tento typ vakcíny, konkrétne orálna vakcína proti detskej obrne (OPV), sa môže podávať neinvazívnymi cestami. Naproti tomu usmrtené vakcíny, ktoré sú inaktivovanými verziami vírusov, majú obmedzenú aplikáciu z hľadiska imunologickej odpovede, ale v súčasnosti používaná indická vakcína COVAXIN®, vyrábaná spoločnosťou Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, India používa inaktivovanú verziu vírus vo svojej vakcíne [31]. Inaktivovaný vírus je dostatočne schopný na to, aby si zachoval konformitu epitómu, ktorá pomáha pri modulácii humorálnej imunitnej odpovede [32].

Obrázok 3. Interakcia vakcín s hostiteľskými bunkami a vírusovou časticou. (Vytvorené pomocou BioRender.com s prístupom 31. decembra 2022)

Najnovšie technológie, ako sú vakcíny založené na mRNA alebo vakcíny založené na vektoroch, ich maximálne využívajú pre bezpečnosť a účinnosť vakcín proti COVID{2}} [33]. Vakcíny založené na vektoroch sú tiež známe ako heterológne prime-boost očkovanie, ktoré pomáha pri indukcii bunkových aj humorálnych imunitných reakcií, zatiaľ čo živé podjednotkové vakcíny vyvolávajú iba humorálnu odpoveď [34–39]. Podľa štúdie 5–10-násobné zvýšenie imunitnej odpovede sprostredkovanej T bunkami v prípade vakcíny na báze heterológneho vektora v porovnaní s rovnakou formuláciou, pripravenou pomocou homológneho prístupu [40]. Preto sú vakcíny založené na vektoroch, menovite na báze DNA a RNA, výhodnejšie ako vakcíny založené na podjednotkách, často sa považujú za robustnejšie v porovnaní s vakcínami RNA a sú účinné, pretože kódujú vrcholový proteín vírusovej štruktúry. V prípade vírusu Chikungunya koimunizačná stratégia využívajúca DNA a vírusom podobné častice vytvorila lepšiu imunitnú odpoveď v štúdiách na zvieratách [41]. DNA vakcíny niekedy vyžadujú špecializované dodávacie systémy, ako je elektroforéza, mikroihlové polia a systémy založené na nosiči, ako sú lipozómy, aby sa zvýšila permeabilita. Mikroguľôčky na báze kyseliny polymliečnej a kyseliny glykolovej boli formulované na podanie HIV-1 DNA vakcíny intramuskulárnou cestou [42]. Vakcíny na báze DNA však vytvárajú slabú imunitnú odpoveď a často vyžadujú ďalšie dávkovanie. Toto možno prekonať použitím vakcín na báze mRNA [25,43].

cistanche tubulosa - zlepšenie imunitného systému

3. Vývoj vakcíny na báze mRNA

Predtým sa na formuláciu vakcíny používali rôzne formy RNA, vrátane in vitro transkribovanej mRNA, siRNA (malá interferenčná RNA), aptamérov na báze RNA, riboswitchov, antisense molekúl a neskôr mRNA. Povedomie o mediátorovej ribonukleovej kyseline, tj mRNA, pochádza z jej základnej, navyše ekonomickej tvorby, jej prechodného pohybu a pomalého rozpadu v cieľových bunkách a jej bezpečnostné výhody kontrastujú s DNA terapeutikami, pretože nekoordinuje ľudský genóm, inhibuje inzerciu mutagenézou a je okamžite dostupný pre interpretáciu na proteín v bunkovej cytoplazme [44]. Začiatkom 90. rokov výskumníci veľa pracovali, aby uspeli vo vývoji vakcín na báze mRNA. Boli uskutočnené rôzne experimenty in vitro a výsledky ukázali následnú produkciu požadovaných proteínov; preto sa dospelo k záveru, že keďže mRNA je dostatočne schopná produkovať proteíny, môže byť pravdepodobným terapeutickým režimom na liečbu ochorenia [45]. Podľa Martinona a kol. bola mRNA vakcína na báze nukleoproteínu na liečbu chrípky syntetizovaná in vitro transkripciou a bola inkorporovaná do lipozomálnych vezikúl. Výsledky preukázali indukciu cytotoxických T-buniek a protilátok in vivo [46]. Odvtedy došlo k progresívnemu vývoju v používaní mRNA ako terapeutického nástroja vďaka jej významnej účinnosti, ľahkému zväčšeniu a nákladovej efektívnosti, čo je primárna požiadavka na liečbu vysoko nákazlivých ochorení a terapiu rakoviny. Nedávne výskumné štúdie odhalili, že terapie založené na mRNA významne chránili myši pred symptómami Chikungunya a udržiavali požadované hladiny protilátok po dvoch dávkach [47]. Vakcíny na báze RNA sa zameriavajú na imunitné bunky tela tak, že menia ich funkcie, zameriavajú sa na ribozómy na transláciu, čím vytvárajú imunitnú odpoveď [19].

Imunizácia založená na mRNA obsahuje jednovláknovú mRNA, ktorá kóduje požadovaný antigén. Môžu byť prenášané ako nahá mRNA alebo zapuzdrené do vhodných nosičových systémov na uľahčenie dodania do buniek. Akonáhle mRNA vstúpi do bunky, je preložená do štruktúr na báze proteínov prirodzenými mechanizmami bunky. Ďalej sa podrobí posttranslačným modifikáciám, aby sa získal požadovaný proteín a generuje imunitnú odpoveď, ako je určené signálnymi peptidmi [44,48]. Vakcíny na báze mRNA čelia minimálne dvom prekážkam: jadrovej degradácii pri injekcii zvieratám a vrodenej imunogenicite podobnej ako antigén [49]. Aby sa tento problém prekonal, pseudouridín (Ψ) je dobre známa modifikácia RNA. Ψ nahradiť uridín in vitro transkribovanou (IVT) mRNA, čo je vysoko prevládajúci a prirodzene sa vyskytujúci nukleotid vo všetkých bunkách s RNA. Očkovanie proti COVID{10}} vyrábané spoločnosťami Moderna a Pfizer-BioNTech pozostáva z nového modifikovaného Ψ s účinnosťou až 90 % proti symptómom [50]. Vakcíne vyvinutej spoločnosťou CureVac NV pritom chýbala Ψ-modifikovaná mRNA a klinické štúdie potvrdili účinnosť iba 48 % [51].

Počas translačného procesu primárne existujú dve rôzne kategórie mRNA vakcín, a to neamplifikujúca mRNA (NMR) a samoamplifikujúca mRNA (SMR). Pracovný mechanizmus neamplifikujúcej sa mRNA a samoamplifikujúcej mRNA je vysvetlený na obrázku 4. Štrukturálne, ako je znázornené na obrázku 5, obe štruktúry majú CAP, 50 a 30 nepreložených oblastí (UTR), otvárací rámec (ORF), a spoločný konský chvost [52,53].

Obrázok 4. Kategórie mRNA. (Vytvorené pomocou BioRender.com s prístupom 31. decembra 2022)

Okrem toho má SMR replikázu ako segment, ktorý pomáha pri amplifikácii mRNA intracelulárne. Ďalej sú segmenty translatované ribozómami za vzniku požadovaných proteínov. Vylučované proteíny vedú k vytvoreniu imunitnej odpovede [54]. SMR sú porovnateľne väčšie ako NMR a aniónové molekuly. Nedávne štúdie samoreplikujúcej sa RNA ukázali lepšiu in vitro subgenómovú expresiu neštrukturálnych proteínov replikónu venezuelskej konskej encefalitídy (VEE), keď boli pozorované rôzne mutácie. V súčasnosti prebieha podobná štúdia klinickej štúdie zameraná na glykoproteín besnoty pomocou samoamplifikačnej RNA vírusu VEE-Sindbis formulovanej do nanoemulzií [55]. Hlavné kritické atribúty kvality (CQA), ktoré definujú účinnosť terapií mRNA, sú zhrnuté v tabuľke 1 [54].

Obrázok 5. Optimalizácia sekvencie mRNA. (Upravené z [56] s právami a povoleniami).

Tabuľka 1. CQA pre mRNA vakcíny.

Výroba mRNA je dvojkrokový proces, ktorý zahŕňa produkciu a čistenie. V systémoch výroby mRNA nie sú prítomné žiadne nečistoty, keďže neobsahuje žiadne suroviny pochádzajúce zo zvierat alebo buniek, výroba je relatívne bezpečnejšia [65]. Produkcia sekvencie mRNA môže byť jednokrokový enzymatický proces alebo dvojkrokový enzymatický proces. Analóg uzáveru sa používa v prípade jednokrokového výrobného procesu, ktorý sa všeobecne používa v laboratórnom meradle. Proces je potom dokončený purifikáciou, ktorá zahŕňa separáciu s použitím chromatografických techník, ako je znázornené na obrázku 6. Dvojkroková enzymatická reakcia na produkciu mRNA zahŕňa in vitro transkripciu templátu DNA za vzniku sekvencie RNA polymerázy [66]. Takto vytvorený templát mRNA sa môže uzavrieť s použitím krycieho enzýmu vakcínie a donoru metylu. Produkcia mRNA je relatívne vysoká a v priemyselnom meradle je ťažké dosiahnuť reprodukovateľnosť [67].

Obrázok 6. Výrobný proces sekvencie mRNA. (Vytvorené pomocou BioRender.com s prístupom 1. januára 2023)

4. Ako fungujú mRNA vakcíny?

mRNA je nestabilná negatívne nabitá molekula, ktorá je zapuzdrená v lipidických nanočasticiach. Prostredníctvom endocytózy sa tieto lipidické nanočastice dostávajú do buniek. Po vstupe do cytoplazmy sú tieto endozómy okamžite nasmerované do lyzozómov na degradáciu. Štúdie ukazujú, že ionizovateľné lipidy hrajú dôležitú úlohu pri úniku endozómov a uvoľňovaní mRNA. Hlavná skupina lipidov je protónovaná v kyslom prostredí endozómov a tento katiónový stav je následne pripojený k aniónovej hlave fosfolipidu v endozomálnej membráne. Hydrofóbny koniec katiónového lipidu a fosfolipidu sa potom predĺži, naruší dvojvrstvovú fosfolipidovú štruktúru a umožní mRNA uniknúť do cytoplazmatického kompartmentu. Ribozómy po uvoľnení transformujú mRNA na proteíny. Tento proteín môže aktivovať imunitnú odpoveď dvoma spôsobmi: (1) Proteazóm degraduje tieto proteíny na peptidy, ktoré sú potom prezentované ako antigén na bunkovom povrchu molekulami MHC (hlavný histokompatibilný komplex) triedy I, ktoré sa viažu na TCR (T bunkový receptor) na aktiváciu CD8+ T buniek, ktoré zabíjajú infikované bunky; samotný proteín môže aktivovať imunitnú odpoveď dvoma spôsobmi. (2) Extracelulárne vylučované proteíny sú pohltené APC (bunkami prezentujúcimi antigén) a degradované na peptidy, ktoré sú prezentované na bunkovom povrchu pomocou MHC triedy II a rozpoznávané CD4+ T bunkami, ktoré vylučujú cytokíny na produkciu bunkovej reakciu a koaktiváciu B buniek na produkciu humorálnej imunitnej reakcie, ako je znázornené na obrázku 7. Okrem toho mRNA vakcíny dodávali dvojvláknovú a jednovláknovú RNA, ktorá sa viaže na TLR (Toll-like receptor) v endozóme, čo vedie k stimulácia mnohých génov stimulovaných IFN{10}} (interferón typu I), čím sa aktivujú antivírusové vrodené imunitné odpovede.

Obrázok 7. Mechanizmus, ktorým mRNA vakcína vyvoláva imunitu voči hostiteľovi. (Vytvorené pomocou BioRender.com s prístupom 1. januára 2023)

5. Aspekty formulácie vakcín na báze mRNA

Akonáhle sa transkribovaná mRNA vstrekne, bude exprimovať proteíny v tele. Imunologická odpoveď je pozorovaná v dôsledku exprimovaného proteínu z mRNA. Tento proces je prevažne základom vývoja mRNA vakcíny [68].

5.1. DNA šablóna

Prvoradým krokom je identifikácia antigénu z cieľového patogénu. Vývoj imunizácie mRNA vyžaduje pridanie kódovaného antigénu do templátu DNA, čo pomôže pri translácii mRNA in vitro. Špecifický antigén bude produkovaný in vivo transkripciou transkribovanej mRNA, ktorá sa dostane len do cytoplazmy; to pomôže vyvolať imunitnú odpoveď. Plazmidová DNA (pDNA) obsahuje promótorovú sekvenciu so silnou afinitou k DNA-dependentnej RNA polymeráze, ako je T7, SP6 alebo T3, ako aj vhodnú sekvenciu pre mRNA konštrukt. Enzým bude prechádzať pozdĺž templátu a predlžovať transkript RNA, až kým nedosiahne koniec templátu [69].

5.2. Capping Enzym

Pre účinnú transláciu mRNA z templátu DNA je veľmi dôležité zakrytie na 50 konci mRNA. Okrem toho je na ochranu mRNA pred degradáciou, génovou expresiou a náborom ribozómov potrebný 50 caping v zrelej mRNA. 5 0 -50 -trifosfátový mostík spája 50 uzáverov eukaryotickej mRNA s 7-metylguanozínom (m7G) (m7GpppN). Nová ko-transkripčná technika, ktorá využívala súpravu s čistým uzáverom na presné pridanie prirodzenej 50 cap1 štruktúry na počiatočné miesto počas IVT reakcií, urobila generovanie 50 cap1 mRNA pomocou T7 polymerázy bežne používanú capping metódu s dobrou transláciou a minimálnou reaktogenicitou. V mRNA vakcínach COVID-19 BNT162b1 sa 5 0 uzávery pridali pomocou metódy čistých uzáverov [70]. mRNA transkribovaná analógom cap má poly 1 koniec a 30 (poly-A) koniec je prítomný na 30 koncoch eukaryotickej mRNA. Tento poly A chvost vykonáva funkcie transportu, translácie a stability mRNA. 30 poly A chvost a 50 čiapočka vytvoria stabilnú štruktúru uzavretej slučky s komplexom eIF4F na začiatok translačného procesu. Vakcína BioNTech mRNA má vďaka svojim 120 nukleotidom (nt) v 30 poly(A) chvoste vynikajúcu stabilitu a účinnosť translácie [71].

5.3. Nukleotidtrifosfátové substráty (NTP)

Keď sú DNA plazmidy integrované s T7 polymerázou a nukleotidovými trifosfátmi, mRNA sa prekladá efektívnejšie a produkuje sa viac výťažkov. Po podaní vakcíny vzniká obava z imunogenicity. Pri aktivácii downstream signalizácie telo rozpozná vírusové RNA a zareaguje na ne. Toto rozpoznávanie jednovláknovej a dvojvláknovej RNA je pomocou endozomálnych receptorov, ako sú receptory podobné Toll (TLR3), TLR7 a TLR8. Dvojvláknová a 50 -trifosfátom modifikovaná RNA je rozpoznávaná génom I indukovateľným kyselinou retinovou (RIG-1) cytosolického receptora a proteínom 5 spojeným s diferenciáciou melanómu (MDA{12}}). Alergické reakcie a anafylaktický šok boli hlásené, keď sa imunitný systém tela aktivoval nekontrolovaným spôsobom. Táto nadmerná stimulácia imunitného systému na molekulárnej úrovni obmedzí transláciu proteínov, expresiu antigénov a účinnosť vakcíny. Toto obmedzenie možno prekonať modifikáciami nukleobáz. N1-metyl pseudouridín, modifikovaná nukleobáza, zvýši produkciu proteínu a zníži aktiváciu TLR3. Modifikované nukleotidy prostredníctvom RIG-1 ovplyvňujú nielen interakciu proteín-RNA, ale tiež znižujú schopnosť mRNA šíriť imunologické signály. Účinnosť translácie mRNA na proteín sa zlepšila vďaka N1-metylpseudouridínu. Rýchla iniciácia translácie koordinovane zvýši polčas mRNA [50].

cistanche tubulosa - zlepšenie imunitného systému

Kliknite sem pre zobrazenie produktov Cistanche Enhance Immunity

【Požiadať o viac】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Komponenty lipidových nanočastíc na dodávanie mRNA

V porovnaní so všetkými ostatnými vakcínami sa mRNA vakcíny vyvíjajú relatívne rýchlo a sú účinnejšie. Avšak najväčšou výzvou pri výrobe mRNA vakcín je ich slabá stabilita. Stabilita vakcíny a jej kapacita liečiť infekciu COVID-19 sú znížené, pretože vakcína sa po pôrode rýchlo rozkladá ribonukleázami, pričom vznikajú rozpadnuté zložky, ktoré sa vylučujú obličkami. Na riešenie tohto problému môže byť mRNA formulovaná s lipidovými nanočasticami (LNP). Vakcína mRNA-LNP bude chrániť mRNA pred predčasnou degradáciou a uľahčí cytoplazmatické dodanie do buniek prezentujúcich antigén [72]. Lipidy sú dokonalými činidlami na dodávanie mRNA do cytosolického miesta, pretože ich fúzia je kompatibilná s membránami lipidových buniek; čo vedie k cielenému a účinnému uvoľneniu mRNA. LNP sú nanočastice s priemerom menším ako jeden mikrón, ktoré obsahujú dva alebo viac lipidov v rôznych pomeroch. LNP sa líšia od lipozómov kvôli prítomnosti lipidových zložiek v jadre ako diskontinuálnej zmesi. LNP, ktoré prešli formuláciou, majú multilamelárnu vezikulárnu štruktúru, homogénny obal jadra a nanoštruktúrované jadro [73]. V jadre LNP je prítomná voda, ktorá vystavuje mRNA interakcii s vodným médiom. Ako je znázornené na obrázku 8, mRNA sa nachádza vo vnútri LNP, čo ju chráni pred vonkajším prostredím. Najbežnejšie zloženie, ktoré tvorí systémy mRNA LNP, sú katiónový/ionizovateľný lipid, fosfolipid ("pomocný lipid"), cholesterol a polyetylénglykol (PEG). Fyzikálno-chemické vlastnosti vo vnútri dodávacieho systému LNP, ako je účinnosť enkapsulácie, vonkajší povrchový náboj, veľkosť častíc a tvar, sa dajú ľahko modifikovať úpravou lipidového zloženia. Pomery zložiek sa upravujú v závislosti od požadovaného cieľového tkaniva [74].

Obrázok 8. Štruktúra lipidových nanočastíc používaných na účinné dodávanie mRNA. (Vytvorené pomocou BioRender. com s prístupom 1. januára 2023)

5.4.1. Katiónové lipidy

S amínovou skupinou, ktorá dodáva čistý kladný náboj, hydrofóbny reťazec a väzbovú skupinu, ktorá umožňuje pripojenie hydrofilnej skupiny k hydrofóbnemu reťazcu, katiónové lipidy vykazujú amfifilné vlastnosti. Majú permanentný kladný náboj na svojej polárnej hlave, ktorý pomáha pri interakcii s negatívne nabitými nukleovými kyselinami, čím sa zvyšuje účinnosť zachytávania. Endozomálny únik LNP systému a bunková absorpcia je tiež zvýšená kvôli čistému pozitívnemu náboju. Na podávanie mRNA sa skúmali katiónové lipidy, ionizovateľné lipidy a iné typy lipidov. V porovnaní s neionizovateľnými katiónovými lipidmi, ionizovateľné lipidy, ktoré sú pozitívne nabité pri nízkom pH a pri fyziologickom pH zostávajú neutrálne, sú pomerne menej toxické v dôsledku zmien pH. Vo vnútri bunkovej membrány sú nabité kladne a v krvnom obehu majú nenabité vlastnosti. Vakcína BNT162b2 obsahuje katiónový lipid ALC-0315, zatiaľ čo mRNA-1273 obsahuje SM-102; pri nízkom pH sú oba lipidy protónované, čo ľahko vytvorí komplex s mRNA. Prúd mRNA vo vode sa kombinuje s lipidovou zmesou v etanole pomocou mikrofluidného zariadenia. Aby sa zachytila ​​negatívne nabitá mRNA, zložky týchto dvoch prúdov sa rýchlo kombinujú a vytvárajú nanočastice [75]. Pre vakcínu BNT162b2 sú molárne pomery katiónový lipid: PEG-lipid: cholesterol: DSPC (46,3:1,6:42,7:9,4) a pre mRNA -1273 je (50:1,5:38,5:10). Nanočastice majú priemer 80–100 nm a na jednu lipidovú nanočasticu pripadá približne 100 molekúl mRNA [73].

5.4.2. Polyetylénglykolové (PEG) lipidy

Pre stabilitu koloidov a prevenciu väzby proteínov na nanočastice sa používajú polyetylénglykolové lipidy. Poskytujú dlhší systémový obeh minimalizovaním klírensu nanočastíc. LNP môžu spôsobiť fyzickú agregáciu v roztoku, čo môže zväčšiť veľkosť častíc LNP, a PEG lipidy môžu prekonať možno aj problém predčasného uvoľnenia zapuzdrenej mRNA. Okrem toho sa zvýši aj skladovacia stabilita LNP [76].

5.4.3. Cholesterol

Pre transfekciu buniek a stabilizáciu LNP má cholesterol životne dôležitú úlohu. Nižšia teplota prechodu sa dosiahne, keď sa obsah cholesterolu v LNP zvýši, čo pomôže pri uvoľňovaní mRNA z LNP a jej translokácii cez endozomálnu membránu [77]. V štúdii uskutočnenej Zhangom a kol. boli modifikované lipozómy formulované s použitím cholesterolom modifikovaného katiónového peptidu DP7 spolu s dioleoyl-3-trimetylamóniumpropánom (DOTAP) ako nosičom na dodávanie mRNA. Lipozómy sa pripravili technikou hydratácie filmu a potom sa vyhodnotila ich transfekčná účinnosť. In vitro štúdie transfekcie odhalili zvýšenie účinnosti transfekcie so zvýšením koncentrácie peptidu DP7. Okrem toho in vivo protinádorové štúdie ukázali, že komplex má lepšiu účinnosť proti nádoru [78].

5.4.4. Iné pomocné látky

mRNA vakcíny sú zložené zo stabilizátorov, napr. Trometamín, ktorý tlmí pH na udržanie pH 7–8, Soli: Pomáha vyrovnávať kyslosť vo vašom tele, Cukor, ktorý pomáha molekulám udržať si tvar počas mrazenia, pôsobí ako kryoprotektant a udržuje dlhodobú stabilitu lipidovej nanočastice-mRNA formulácie [73]. Súhrn kľúčových zložiek používaných vo vakcínach na báze mRNA je uvedený v tabuľkách 2 a 3.

Tabuľka 2. Kľúčové zložky používané vo vakcínach na báze mRNA.

Tabuľka 3. Formulačné zložky mRNA vakcín Pfizer a Moderna.

5.5. Iný doručovací systém pre mRNA

5.5.1. Polymérne nanočastice

Polymérne nanočastice môžu byť syntetizované zo syntetických alebo prírodných polymérov, ako je PLGA [poly (kyselina mliečna-ko-glykolová)], chitosan, PLA (kyselina polymliečna), polykaprolaktón, želatína a poly-alkyl-kyanoakryláty. Tieto polymérne nanočastice môžu zapuzdrovať hydrofóbne a hydrofilné zlúčeniny a proteíny, majú dlhú trvanlivosť; a môže modifikovať dodávanie terapeutických zlúčenín. RNA môže byť zapuzdrená v katiónových polyméroch s hydrofóbnou modifikáciou [80,81].

5.5.2. Katiónové nanoemulzie

Katiónové nanoemulzie sa ukázali ako účinný prostriedok na dodávanie nukleových kyselín. Katiónové lipidy prítomné v nanoemulziách sú dôležité pre komplexy s nukleovou kyselinou prostredníctvom elektrostatických interakcií a zlepšujú účinnosť transfekcie nukleovej kyseliny a jej stabilitu. Štúdie odhaľujú, že systém dodávania katiónových nanoemulzií mRNA zvyšuje imunitnú odpoveď náborom imunitných buniek a podnecovaním bunkových odpovedí na protilátky a T-primáty pri pomerne nízkych dávkach [80,82].

5.5.3. Nanočastice oxidu kremičitého

Mezoporézne nanočastice oxidu kremičitého pozostávajú z matrice amorfného oxidu kremičitého s dobre usporiadanou pórovitosťou v mezoporéznom rozsahu. Tieto nanočastice majú veľké povrchové plochy s veľkými objemami pórov a ich povrch možno ľahko modifikovať určitými kladne nabitými zvyškami, aby účinne transportovali negatívne nabitú RNA. Navyše, cielené dodanie RNA môže byť možné pripojením špecifických ligandov na povrch [81]. Podľa štúdie Adama a spol. bola na COVID formulovaná nosová vakcína na báze modifikovaných poréznych mikročastíc kremíka (mPSM) pre COVID-19. Formulácia viedla k zvýšeniu počtu pomocných T buniek (Th1) a imunitných reakcií a mPSM spôsobil príjem antigénov nazálnou cestou. Zistilo sa, že vírusová záťaž sa významne znížila [83].

5.5.4. Uhlíkové a zlaté nanomateriály

Uhlíkové nanorúrky, nanočastice zlata, oxid nanografenu a kvantové bodky sú syntetizované nanoštruktúry, ktoré majú tiež potenciál dodávať RNA do cieľového miesta a tiež ju chrániť pred degradáciou [81].

6. Výzvy pre skladovanie vakcíny

Stabilita a požiadavky na skladovanie sú hlavným problémom mRNA vakcín. Stabilita závisí od faktorov, ako sú pomocné látky, pH a teplota. Vakcína COVID{0}} od spoločnosti BioNTech/Pfizer sa musí skladovať pri teplote -80 ◦C a má trvanlivosť až 6 mesiacov, zatiaľ čo vakcínu COVID-19 od spoločnosti Moderna je potrebné skladovať pri teplote -20 ◦C a má rovnakú trvanlivosť. Vakcína BioNTech/Pfizer vyžaduje pri preprave balenie so suchým ľadom. Distribúcia oboch vakcín v chudobných krajinách sveta je náročná, keďže mRNA vakcíny je potrebné skladovať pri ultra nízkych teplotách. Tieto požiadavky sú drahé av regiónoch sveta s obmedzenými zdrojmi sú opatrenia zložité. Jedným z problémov je vývoj termostabilnej mRNA vakcíny, ktorá je klinicky účinná a môže sa uchovávať dlhší čas bez veľkých nákladov na skladovanie. Podľa odporúčaní EMA na skladovanie sú mRNA vakcíny vyrobené spoločnosťami Moderna a BioNTech stabilné, keď sú zmrazené až 6 mesiacov pri teplote -25 ◦C, až 30 dní pri teplote chladničky (4 ◦C) a až 6 hodín pri izbovej teplote [ 84].

7. Bezpečnosť a účinnosť mRNA vakcín

7.1. Bezpečnosť vakcín na báze mRNA

Hodnotenie výsledkov súvisiacich s bezpečnosťou sa uskutočnilo pre mRNA vakcíny. Otvorená štúdia mRNA-1273 s eskaláciou dávky 1. fázy sa uskutočnila na účastníkoch vo veku od 18 do 70 rokov alebo starších [85]. Štúdia sa uskutočnila v dvoch skupinách, v ktorých účastníci vo veku 18 – 55 rokov dostali dávku vakcíny 250 µg a starší jedinci dostali dávku 25 µg alebo 100 µg. Po očkovaní boli pozorované vyžiadané lokálne a systémové nežiaduce udalosti, nevyžiadané nežiaduce udalosti, závažné nežiaduce udalosti a vývoj nových chronických zdravotných stavov. Výsledky nepreukázali vývoj závažných nežiaducich účinkov. Najtypickejšie hlásené nežiaduce reakcie boli bolesti hlavy, únava, myalgia, triaška a bolestivosť v mieste vpichu. Ukázalo sa, že hladiny neutralizačných protilátok korelujú s obranou proti rôznym vírusom u ľudí a s obranou proti SARS-CoV-2 v prípade zvierat. Vakcína mRNA-1273 u starších dospelých produkovala vysoké hladiny väzbových a neutralizačných protilátok a trendy závislé od času a dávky boli podobné odpovediam u mladších dospelých. Reakcie po druhej vakcinácii boli porovnateľné s odpoveďami u pacientov, ktorí sa zotavili z COVID-19 a darovali rekonvalescentné sérum, vrátane niektorých kriticky chorých. Starší pacienti, ktorí dostávali dávku 100 µg, vykazovali vyššiu protilátkovú a T-bunkovú odpoveď v porovnaní s tými, ktorí dostali 25 µg a odpoveď bola identická s reakciou u účastníkov vo veku 18 až 55 rokov, ktorí dostali dávku 100 µg. Pacienti starší ako 56 rokov potrebujú dostať druhú dávku vakcíny, aby dosiahli neutralizačné protilátky. Po podaní posilňovacej dávky sa titre protilátok rýchlo zvyšujú. Kľúčové bezpečnostné výsledky vakcín Moderna a Pfizer pozorované počas rôznych klinických štúdií sú uvedené v tabuľke 4.

Tabuľka 4. Štúdie bezpečnosti a účinnosti mRNA vakcín v klinických štúdiách

Tabuľka 4. Pokr.

Po druhej dávke očkovacej látky sa frekvencia lokálnych a systémových reakcií reaktogenity zvýšila a boli primárne stredne závažné. Výskyt erytému bol zistený u troch účastníkov a trval 5 až 7 dní. Vyžiadané systémové nežiaduce udalosti, ako je horúčka a únava, sa vyskytli výrazne v staršej podskupine. Všetky tieto zistenia naznačujú, že vyžiadané alebo nevyžiadané nežiaduce udalosti boli mierne až stredne závažné. Preto bola mRNA-1273 ďalej testovaná v štúdiách fázy 2/3 na posúdenie bezpečnosti a účinnosti vo väčších populáciách [95]. Klinická štúdia fázy 3 bola randomizovaná, stratifikovaná, pozorovateľom zaslepená a placebom kontrolovaná štúdia, do ktorej sa zapojilo 30 420 dobrovoľníkov vo veku 18 rokov alebo starších, ktorí boli náhodne pridelení tak, aby dostali vakcínu (0,5 ml so 100 µg dávka) alebo placebo. Lokálne reakcie počas 7 dní po imunizácii, systémové nežiaduce udalosti, neočakávané nežiaduce reakcie po 28 dňoch podávania dávky a akékoľvek významné nežiaduce udalosti boli sledované na posúdenie bezpečnosti. Vyžiadané nežiaduce účinky prevládali v mRNA- 1273 v porovnaní so skupinou s placebom (84,2 % vs. 19,8 %). Niektoré z najviac pozorovaných udalostí boli bolesť v mieste vpichu po očkovaní, erytém, citlivosť a indurácia. Tieto udalosti vymizli do 4 – 5 dní po očkovaní. Po druhej dávke si skupina mRNA-1273 vyžiadala systémové príhody, ktoré sa stali závažnejšími. Prítomnosť reakcií z precitlivenosti sa vyskytla u 1,5 % a 1,1 % účastníkov v skupine s vakcínou a placebom. Okrem týchto sťažností neboli po podaní vakcíny vznesené žiadne obavy o bezpečnosť [106].

Tretia dávka vakcíny bola potrebná z dôvodu slabnúcej ochrany po dvoch injekciách mRNA SARS CoV{0}} a zavedení variácií. Po podaní tretej dávky mRNA vakcíny ľuďom, ktorí predtým dostali základnú sériu mRNA-1273 v štúdii fázy 1, bola hodnotená ich skorá bezpečnosť a imunogenicita. Prierezová štúdia vykonaná v Neapole (Taliansko) hodnotila pripravenosť na preočkovanie vakcínou COVID-19. V tejto skupine bola prijateľnosť posilňovacej dávky takmer 86 %. Okrem toho starší ľudia s lepším zdravotným stavom po hlavnej sérii vakcín, tí, ktorí žijú s priateľmi alebo rodinnými príslušníkmi, ktorí boli pozitívne testovaní na COVID-19, a tí, ktorí dostali informácie o ochorení od oficiálnych verejných inštitúcií, boli ochotní získať posilňovaciu dávku. dávka [107].

Bivalentná vakcinácia obsahovala 25 mcg každej mRNA-1273 a mRNA-1273.351, zatiaľ čo posilňovacie vakcíny obsahovali 100 mcg mRNA-1273 a 50 mcg mRNA-1273 .351, ktorý kóduje spike proteín beta variantu. Tretia dávka mRNA vakcíny preukázala primeranú reaktogenitu a bezpečnosť. V porovnaní s maximálnymi odpoveďami po druhej dávke boli vakcináciou vyvolané zvýšenia titrov väzbových a neutralizačných protilátok voči variantom D614G, Beta a Delta podobné alebo väčšie. Bolo zaznamenané, že neutralizačné a väzbové protilátky boli neustále redukované. Detekcia protilátok však bola u účastníkov 10–11 mesiacov (pred treťou dávkou) bez ohľadu na vek a počiatočnú dávku primárnej série (napr. 25, 50, 100 a 250 µg). Bolesť v mieste vpichu, únava, myalgia a triaška boli najčastejšie hlásenými nežiaducimi účinkami po tretej dávke mRNA vakcíny a frekvencia týchto udalostí bola porovnateľná medzi tromi režimami booster vakcíny (monovalentný prototyp, monovalentný variant a bivalentné skupiny ). Pri použití monovalentných alebo bivalentných beta variantných vakcín nebola pozorovaná žiadna špecifická výhoda alebo nevýhoda v bunkových odpovediach na epitopy v beta-mutovaných peptidoch. Všetky tieto zistenia podporujú súčasný návrh, že na poskytnutie rozsiahlej imunologickej krížovej ochrany medzi variantmi sa použije monovalentný prototyp mRNA{18}} [95]. Podľa prieskumu podávanie heterológneho BNT162b2 (BNT) u účastníkov s primárnou aktiváciou ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) preukázalo imunogenicitu, ktorá nie je horšia ako homológne podávanie BNT (primárne aj posilňovacie boli vakcíny BNT, BNT/BNT), s tolerovateľnou reaktogenitou a väčšie reakcie T buniek. V porovnaní s homológnou vakcináciou ChA dOX1 (ChAd/ChAd) vyvolala vakcinácia heterológnou ChAd/BNT silnejšiu imunogenicitu (ChAd/BNT vs. ChAd/ChAd, pomer titrov protilátok: 9,2) [108].

Skúška fázy 1 pre BNT162b2 sa uskutočnila na 76 účastníkoch; boli randomizovaní tak, aby dostali 10 µg, 30 µg a 100 µg dávky vakcíny a druhej skupine bolo podané placebo. 58,3 % jedincov, ktorí dostávali 10 µg a 100 % 30 µg a 100 µg, pociťovalo po prvej dávke bolesť vyvolanú lokálnou reakciou v mieste vpichu. Závažnosť všetkých lokálnych reakcií bola mierna až stredne závažná. Únava a bolesť hlavy v BNT162b2 boli bežné systémové udalosti. Okrem toho boli pozorované aj triaška, bolesť svalov a bolesť kĺbov. Pri zvyšujúcich sa dávkach boli systémové príhody hlásené viac po podaní druhej dávky. Celkovo 50,0 percent účastníkov, ktorí dostali buď 10 alebo 30 g BNT162b1, 58,3 percenta osôb, ktoré dostali 100 g BNT162b1, a 11,1 percenta príjemcov placeba uviedlo, že mali nežiaduce udalosti. Neboli hlásené žiadne závažné nežiaduce udalosti [109].

V klinickej štúdii očkovacej látky The Pfizer/BioNTech (BNT162b2), ktorá bola medzinárodnou, placebom kontrolovanou, pozorovateľom zaslepenou, randomizovanou a kľúčovou štúdiou účinnosti, bolo náhodne rozdelených 43 548 účastníkov vo veku 16 rokov alebo starších. Celkom 21 720 dobrovoľníkom bolo podaných 30 µg na dávku BNT162b2 a 21 728 dobrovoľníkom placebo. Na stanovenie bezpečnostného profilu BNT162b2 boli hodnotené charakteristiky, ako je bolesť v mieste vpichu, ktorá je krátkodobá, mierna až stredná v prípade závažnosti, únava a bolesť hlavy. Dve injekcie BNT162b2 alebo placeba boli podané všetkým účastníkom podľa randomizácie s odstupom 21 dní do deltového svalu [98]. Lokálne reakcie u tých, ktorí dostali vakcínu BNT162b2, boli hlásené viac v porovnaní so skupinou s placebom. Mierna až stredná bolesť v mieste vpichu bola najčastejšou sťažnosťou zaznamenanou medzi príjemcami BNT162b2 do jedného týždňa. Silná bolesť bola hlásená u menej ako 1 % populácie. Bolesť bola pozorovaná menej u starších účastníkov v porovnaní s mladšími. Menej bolo pozorované začervenanie alebo opuch. Po podaní druhej dávky boli lokálne reakcie menej hlásené [110].

Mladší účastníci, ktorí dostali vakcínu, sa stretli so systémovými príhodami viac ako starší príjemcovia. Únava a bolesť hlavy (59 % a 52 %) boli najčastejšie hlásené udalosti a veľmi menej očkovaných jedincov (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Účinnosť mRNA vakcín

Pri hodnotení účinnosti mRNA-1273 bola primárnymi cieľovými ukazovateľmi vakcíny účinnosť pri prevencii symptomatickej infekcie COVID-19 po 14 dňoch od druhej dávky vakcíny. Ako sekundárny koncový bod sa použila prevencia závažnej infekcie COVID-19 s pretrvávajúcimi príznakmi. Výsledky po očkovaní ukazujú, že 11 prípadov COVID-19 bolo v očkovanej skupine a 185 prípadov v skupine s placebom, čo naznačuje 94,1 % účinnosť mRNA-1273 vakcíny na liečbu symptomatického COVID-19 . Pre sekundárne koncové body účinnosti sa vykonalo hodnotenie prevencie závažného ochorenia COVID{11}}. Výsledky ukázali 100% účinnosť vakcíny, keďže 30 účastníkov s vírusovou infekciou bolo v skupine s placebom. Štúdia vykonaná v Katare preukázala účinnosť vakcíny (VE) mRNA-1273 95,7 % proti závažnej, kritickej alebo smrteľnej infekcii COVID{16}}. Po 14 dňoch alebo väčších ako 14 dní od prvej dávky bola účinnosť 88,1 % proti variantu B.1.1.7 (alfa) a po druhej dávke bola 100 %. 61,3 % a 96,4 % VE bolo hlásených po prvej a druhej dávke imunizácie proti kmeňu B.1.351 (beta). Preto je vakcína celkom úspešná ako proti kmeňu, či už symptomatickému alebo asymptomatickému, tak aj proti akejkoľvek hospitalizácii a úmrtiu na COVID{31}}, dokonca aj po jednorazovej dávke [112].

Prvou primárnou bola účinnosť vakcíny BNT162b2 (VE) proti potvrdenému COVID-19 s nástupom najmenej 7 dní po druhej dávke u jedincov, ktorí nemali virologický alebo sérologický dôkaz infekcie SARS-CoV-2 koncový bod. Druhý primárny koncový ukazovateľ meral účinnosť u účastníkov s dôkazom predchádzajúcej infekcie a bez nej a prevenciu závažnej infekcie COVID-19. Vo výskume s celkovým počtom 36 523 ľudí sa v očkovanej skupine vyskytlo 8 prípadov COVID{10}} so začiatkom 7 dní po druhej dávke v porovnaní so 162 prípadmi v skupine s placebom. To ukazuje 95% účinnosť vakcíny. Avšak pozorovaná VE proti vírusovému ochoreniu bola 52 % medzi prvou a druhou dávkou a 91 % počas prvých 7 dní po dávke 2, čím sa dosiahla úplná účinnosť proti ochoreniu s nástupom najmenej 7 dní po dávke 2. Iba 1 z 10 závažných prípadov COVID{22}}, ktoré boli pozorované po prvej dávke, sa vyskytol v skupine, ktorá dostala očkovanie. Toto pozorovanie je v súlade s vynikajúcou celkovou účinnosťou proti všetkým pacientom s COVID{23}}. Dva prípady infekcie sa vyskytli u príjemcov vakcíny medzi pacientmi s hypertenziou a 44 prípadov v skupine s placebom. Tento prípad uvádza 94,6 % účinnosti vakcíny u pacientov s hypertenziou. Vakcína BNT162b2 teda spĺňa primárne aj sekundárne cieľové ukazovatele účinnosti u očkovaných účastníkov [113]. Okrem infekcie SARS-CoV-2 jednorazovou dávkou vakcíny BNT162b2 bola predpokladaná účinnosť očkovania proti symptomatickému ochoreniu s delta variantom (B.1.617.2) približne 36 %. Po dvoch dávkach bola VE asi 88 percent [114].

cistanche rastlina zvyšujúca imunitný systém

8. Regulačné výzvy

Regulačná veda je základom, na ktorom sa prijímajú regulačné rozhodnutia. Jeho primárnym cieľom je vyvinúť nové metódy, nástroje a normy na hodnotenie bezpečnosti, účinnosti, kvality a výkonu regulovaných produktov vo všetkých fázach ich životného cyklu [115]. mRNA vakcíny čelia rovnakým druhom regulačných prekážok ako akýkoľvek iný typ vakcíny, vrátane potreby preukázať bezpečnosť a účinnosť v predklinických štúdiách, klinických štúdiách a postmarketingovom sledovaní, ako aj udržiavať vysoký štandard pre suroviny používané pri výrobe a konzistencia výroby. Testovanie vakcín sa vo veľkej miere spolieha na spoľahlivosť a reprodukovateľnosť enzýmov, nukleotidov a lineárnych templátov DNA [116]. Surové zložky, ako sú lipidy, by mali byť prísne regulované a mala by sa preukázať ich čistota. Pri vytváraní šablóny lineárnej DNA by sa mali dodržiavať súčasné správne výrobné postupy (cGMP). Na zabezpečenie najvyššej kvality liečivej látky je nevyhnutné sledovať percento uzavretej a polyadenylovanej mRNA, počet krátkych transkriptov a prítomnosť dvojvláknovej RNA. Polyadenylácia a zakrytie 50-koncovej mRNA zaisťuje stabilitu a efektívnu transláciu [21]. Účinnosť translácie je úzko spojená s poly (A) chvostom [114]. Kvantifikácia množstva mRNA zapuzdrenej v častici a určenie distribúcie veľkosti častíc je pre liečivý produkt rozhodujúce, pretože umožňuje výrobcovi zabezpečiť jednotnosť výroby. Monitorovanie sa zvyčajne vykonáva na množstve charakteristík, vrátane tých, ktoré sa týkajú stability, identity a sterility. Jedným z problémov pre vývojárov vakcín, regulátorov a používateľov je tepelná stabilita mRNA vakcín [115]. Bežné vakcinácie sa podrobujú záťažovému testovaniu, vrátane dlhodobého vystavenia zvýšeným teplotám, aby sa určila ich stabilita za rôznych podmienok skladovania. Toto je potrebné vykonať aj pri mRNA vakcínach, kde je potrebné vyhodnotiť nielen stabilitu molekuly mRNA, ale aj zachovanie štruktúry samotnej vakcínovej častice. Protokoly testovania integrity pre jednotlivé zložky mRNA vo viaczložkových vakcínach mRNA stále potrebujú vývoj. Identifikácia vakcíny s nukleovou kyselinou je určená jej sekvenciou. Vo všeobecnosti je sekvencia prvého DNA plazmidu použitého ako templát dostatočná na vakcináciu mRNA. Je to preto, že DNA je okamžite preložená do RNA. Nie je známe, že sekvenovanie mRNA, či už priamo alebo jej premenou na cDNA a následným sekvenovaním tejto DNA, poskytuje akékoľvek ďalšie informácie. Aj keď chybovosť RNA polymeráz je podstatne vyššia ako chybovosť DNA polymeráz, uvedené chybovosti 1 chyba na 104 – 105 nukleotidov by bolo ťažké odhaliť v RNA kvôli náhodnej povahe chýb. Na základe súčasného výskumu, ktorý naznačuje, že mRNA vakcíny poskytujú ochrannú imunitu na zvieracích modeloch, sa nezdá, že by táto chybovosť zmenila tvorbu imunogénneho antigénu. Kvantifikácia lipidov sa môže uskutočniť pomocou LC-MS/MS [116]. Ak sa proteín preloží príliš rýchlo, nemusí sa správne zložiť do funkčného antigénu, čo môže mať neželaný dôsledok zníženia účinnosti vakcíny.

9. Diskusia

V roku 2021 si mRNA vakcíny získali pozornosť pre svoju kritickú pozíciu v reakcii farmaceutického priemyslu na COVID-19. Na rozdiel od tradičných vírusových vakcín, ktoré používajú oslabené, nereplikujúce sa kópie vírusov na zobrazenie antigénov a vyvolanie imunitnej odpovede, stratégia mRNA využíva optimalizované jednovláknové molekuly mRNA, ktoré môžu poskytnúť biologickú indukciu. Akonáhle budete mať vakcínu, bunky ju prijmú, „prečítajú“ sekvenciu mRNA a vytvoria spike proteín. Keďže vášmu telu chýbajú bielkoviny, ktoré sa podobajú tomuto hrotu, váš imunitný systém to interpretuje ako škodlivé a zaútočí proti nemu. Okrem toho, ak ste infikovaní koronavírusom neskôr, imunitný systém si zapamätá spike proteín a dokonca ho rozpozná. Pozoruhodné tempo, akým boli vyvinuté a verejne dostupné prvé dve vakcíny COVID{4}} v USA, podporuje názor, že mRNA vakcíny od spoločností Pfizer a Moderna dostali povolenie na núdzové použitie od FDA v decembri 2020-menej ako rok po tom, čo čínski vedci oznámili zloženie génov koronavírusu. Hlavnou výhodou očkovacích technológií založených na mRNA je ich potenciál rýchlej modifikácie pre rôzne choroby, pretože spracovanie cieľového antigénu je „outsourcované“ hostiteľskými bunkami, čo znamená, že na navrhnutie vakcíny sa používa iba genetický kód antigénu. kandidáta. Čas medzi výmenou genetickej štruktúry SARS-CoV-2 čínskou vládou a prepravou kandidáta na vakcínu spoločnosťou Moderna do Národného inštitútu zdravia (NIH) v Spojených štátoch na účely prvej fázy štúdie bol iba 44 dní. mRNA vakcínové vakcíny historicky nezískali regulačné povolenie na použitie u ľudstva kvôli vnímanému nedostatku klinických skúšok pre túto metódu, ako aj technickým problémom súvisiacim so stabilitou a distribúciou produktu. S takýmto nárastom mRNA vakcín na trhu sú možné presnejšie rady, ktoré pomôžu pri vývoji a hodnotení nových mRNA vakcín. Kontrola je ďalšou oblasťou, kde je veda o mRNA vakcíne v plienkach. V súčasnosti neexistujú žiadne oficiálne usmernenia amerického Úradu pre kontrolu potravín a liečiv alebo Európskej liekovej agentúry pre mRNA vakcíny, aj keď sú tieto lieky dostatočne bezpečné na veľké klinické skúšky.

10. Záverečné poznámky a vyhliadky do budúcnosti

Pred rokom 2020 nebola mRNA vo svete vakcín známym vedeckým pojmom. Viac ako rok od začiatku katastrofickej globálnej pandémie COVID{2}} zaznamenali klinické programy založené na mRNA výrazný nárast podpory zo strany širokej verejnosti aj veľkých farmaceutických spoločností. Viac ako 80 miliónov Američanov bolo zaočkovaných proti SARS CoV-2-vírusu, ktorý spôsobuje COVID-19, a to pomocou prevratných možností technológie mRNA. „Oblasť vakcín sa kvôli COVID-19 navždy zmenila a navždy pokročila,“ hovorí Dan Barouch, MD, Ph.D., riaditeľ Centra pre virológiu a výskum vakcín na Harvard Medical School. Väčšinou v situácii vakcíny COVID-19 je vlákno mRNA navrhnuté tak, aby produkovalo jedinečný „špičkový proteín“ koronavírusu, ktorý vytvára imunitnú odpoveď, ktorá by mohla chrániť pred infekciou skutočným vírusom. Vakcíny vyvinuté spoločnosťami Moderna a Pfizer/BioNTech boli jedinými vakcínami na báze mRNA, ktoré získali núdzové schválenie od kľúčových regulačných orgánov, a reálne dôkazy z globálneho spustenia COVID{12}} by boli rozhodujúce pre potvrdenie ich dlhodobej účinnosti a bezpečnostné prvky proti koronavírusu a niektorým ďalším vírusovým agensom. Doručenie mRNA založené na exozómoch bude tiež budúcnosťou terapeutík založených na mRNA [117, 118]. Väčšinou s dôsledkami technológie založenej na mRNA, ktoré sú zjavné, keď sa tieto vakcíny prvej generácie začínajú nasadzovať globálne, v súčasnosti dochádza k rozmachu klinického výskumu mRNA pre infekčné choroby a priemyselní výskumníci očakávajú nárast záujmu o platformy mRNA pre iné terapeutické oblasti. , najmä onkológie, ale aj nezvyčajné autoimunitné stavy a gény neurózy.

Referencie

1. KTO. Panel WHO Coronavirus (COVID-19) 2023. Dostupné online: https://covid19.who.int/ (prístup 17. januára 2023).

2. Pal, R.; Yadav, U. COVID-19 Pandémia v Indii: Súčasný scenár a strmé stúpanie vpred. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alexander, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: Vznik, šírenie, možné liečby a globálna záťaž. Predné. Verejné zdravie 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Vplyv COVID-19 na onkologickú starostlivosť: Aktualizácia. Vakcíny 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): Prehľad literatúry. J. Infect. Verejné zdravotníctvo 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Chavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Staršia populácia a pacienti s oslabenou imunitou: Vplyv na varianty SARS-CoV-2 a výsledky liečby. Biologics 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. Chavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Imunopeptidomika a iné imunologické štúdie. Vaccines 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO Stratégie očkovania proti SARS-CoV-2: Komplexný prehľad kandidátov fázy 3. Npj Vaccines 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Sun, A.; Ba, DM; Nunez, J.; rodič, LJ; Chinchilli, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Účinnosť vakcíny proti infekcii, symptomatickému a ťažkému COVID-19: Systematický prehľad a metaanalýza. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. Chavda, VP; Vora, LK; Vihol, DR COVAX-19® Vakcína: Úplne blokuje prenos vírusu na neimunitných jedincov. Clin. Complement Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. Chavda, VP; Vora, LK; Pandya, AK; Patravale, VB Intranazálne vakcíny proti SARS-CoV-2: Od výziev k potenciálu v manažmente COVID-19. Drug Discov. Dnes 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. Kaur, SP; Gupta, V. COVID{1}} Vaccine: Komplexná správa o stave. Virus Res. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Prehľad vakcín proti COVID-19 schválených v Spojených štátoch amerických na núdzové použitie. J. Clin. Med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Účinnosť vakcín proti COVID{2}} v reálnom svete: prehľad literatúry a metaanalýza. Int. J. Infect. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. Alagoz, O.; Sethi, AK; Patterson, BW; Čurpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. The Impact of Vaccination to Control COVID{1}} Burden in the United States: A Simulation Modeling Approach. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, AK; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP titre neutralizačných protilátok ako prediktorov ochrany proti variantom SARS-CoV-2 a vplyvu zosilnenia: metaanalýza. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; a kol. COVID-19: Aktualizácie vývoja vakcíny proti koronavírusu. Predné. Immunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID{1}} Priekopníci vakcíny a ich nanotechnologický dizajn. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, vakcíny NA Messenger na báze RNA: Minulé, súčasné a budúce smerovanie v kontexte pandémie COVID-19. Adv. Drug Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; a kol. Závažný akútny respiračný syndróm – koronavírus-2 Spike (S) kandidáti na proteínovú vakcínu: Súčasný stav a vyhliadky do budúcnosti. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, RH MRNA vakcíny proti COVID-19: Čo, prečo a ako. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Song, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; a kol. Nový koronavírus od pacientov s pneumóniou v Číne, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, MY; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Štruktúra, biológia a vývoj terapie založenej na štruktúre. Predné. Bunka. Infikovať. Microbiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, VP; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Nucleic Acid Vaccines for COVID-19: Paradigm Shift in the Vaccine Development Arena. Biologics 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. Chavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. DNA Vaccines for SARS-CoV-2: Toward Third-Generation Vaccination Era. Expert Rev. Vaccines 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Štrukturálna biológia SARS-CoV-2 a dôsledky pre terapeutický vývoj. Nat. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK hostiteľská imunitná odpoveď a imunobiológia ľudskej infekcie SARS-CoV-2. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43.–53. [CrossRef]

28. Astúria, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Advanced Vaccinology Education: Landscaping its Growth and Global Footprint. Vaccine 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Stratégia vakcíny Prime-Boost proti vírusovým infekciám: Mechanizmy a výhody. Vaccine 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM Mal by svet okamžite spolupracovať na vývoji zanedbaných živých oslabených vakcín proti COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

31. Chavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. The Vaccine World of COVID-19: Príspevok Indie. Vaccines 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Vakcíny Bae, YS COVID{1}} (prehodnotené) a orálny-mukozálny vektorový systém ako potenciálna platforma vakcín. Vakcíny 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Lesser, K.; Whittaker, GR Očkovanie proti COVID-19: referenčné hodnoty v oblasti verejného zdravia a prenosu vírusov. Verejné zdravotníctvo 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. Je stratégia posilňovacej dávky dostatočná pre omikrónový variant SARS-CoV-2? Vaccines 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Replikujúce vírusové vektorové vakcíny pre COVID-19: Potenciálna ulica vo vakcinačnej aréne. Vírusy 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID-19 Návrh vakcíny a stratégia očkovania pre vznikajúce varianty. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. Chavda, VP; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Nedávny prehľad manažmentu COVID-19: diagnostika, liečba a očkovanie. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. Chavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uverský, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 a očkovanie: mýty verzus veda. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. The Delta and Omicron Variants of SARS-CoV-2: What We Know So Far. Vaccines 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. DNA Vaccines: Developing New Strategies against Cancer. J. Biomed. Biotechnol. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Song, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; a kol. Spoločná imunizácia s CHIKV VLP a DNA vakcínami vyvoláva u myší sľubnú humornú odozvu. Predné. Immunol. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Bezpečnosť a komparatívna imunogenicita HIV-1 DNA vakcíny v kombinácii s plazmidovým interleukínom 12 a vplyv intramuskulárnej elektroporácie na aplikáciu. J. Infect. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, viceprezident; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Dodávkové systémy pre vakcíny založené na nanočasticiach. Vaccines 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. Vakcíny MRNA: minulosť, súčasnosť, budúcnosť. Asian J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. Zamotaná história vakcín proti MRNA. Príroda 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined In vivo aplikácia RNA vedie k indukcii špecifických cytotoxických T lymfocytov a protilátok. Eur. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

47. Kose, N.; Fox, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; a kol. MRNA zapuzdrená v lipidoch kódujúca silne neutralizujúcu ľudskú monoklonálnu protilátku chráni pred infekciou Chikungunya. Sci. Immunol. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapeutika založená na MRNA – vývoj novej triedy liekov. Nat. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. Imunitná odpoveď T buniek proti SARS-CoV-2. Nat. Immunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Modifications in a Emergency: The Role of N1-methylpseudouridine in COVID-19 Vaccines. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gábor, JJ; a kol. Účinnosť a bezpečnosť kandidáta na vakcínu CVnCoV SARS-CoV-2 MRNA v desiatich krajinách v Európe a Latinskej Amerike (HERALD): Randomizovaná, pozorovateľom zaslepená, placebom kontrolovaná štúdia fázy 2b/3. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

52. Blakney, AK; Ip, S.; Geall, AJ Aktualizácia vývoja vakcíny s vlastným zosilňovaním MRNA. Vaccines 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. New Hopes in Vaccine Technology: mRNA Vaccines. Microbiol. Bul. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Prísľub MRNA vakcín: Biotechnologická a priemyselná perspektíva. Npj Vaccines 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Samoamplifikačné RNA vakcíny pre infekčné choroby. Gene. Ther. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Princípy navrhovania optimálnej lipidovej nanočasticovej vakcíny MRNA. Curr. Opin. Biotechnol. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. In vitro evolúcia vylepšených replikónov RNA pre imunoterapiu. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Prispôsobenie vakcíny MRNA na vyváženie vrodenej/adaptívnej imunitnej odpovede. Trends Mol. Med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. Ukážka, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR Design and Variant Effect Prediction from a Massively Parallel Translation Assay. Nat. Biotechnol. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, TV Inhibícia prekladu členmi rodiny IFIT je určená ich schopnosťou selektívne interagovať s 50 -koncovými oblasťami Cap0-, Cap1- a 50 Ppp-MRNA. Nucleic Acids Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; a kol. Čiapočkové analógy modifikované 1,2-ditiodifosfátovou skupinou chránia MRNA pred odviečkovaním a zvyšujú jej translačný potenciál. Nucleic Acids Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; a kol. Analógy MRNA Cap nahradené v tetrafosfátovom reťazci s CX2: Identifikácia O-CCl2 ako prvej premosťujúcej modifikácie, ktorá poskytuje odolnosť proti odviečkovaniu bez narušenia prekladu. Nucleic Acids Res. 2017, 45, 8661 – 8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Tales of Detailed Poly (A) Tails. Trends Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Organizačné princípy náboru eukaryotických ribozómov. Annu. Chem. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. Veľké posolstvo posla pre očkovanie. Expert Rev. Vaccines 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC MRNA Vaccines Manufacturing: Výzvy a úzke miesta. Vaccine 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: The Inexpensive Biopharmaceutical. J. Multidiscip. Ing. Sci. Technol. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Román, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. The COVID-19 Vaccine Development Landscape. Nat. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA ako transformačná technológia pre vývoj vakcín na kontrolu infekčných chorôb. Mol. Ther. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]