Viacsmerná aktivita bakuchiolu proti bunkovým mechanizmom starnutia tváre – experimentálne dôkazy pre holistický prístup k liečbe, časť 1

Abstraktné

Cieľ: Starnutie pokožky je multifaktoriálny proces zahŕňajúci tvorbu reaktívnych foriem kyslíka, následný zápal so zníženou životaschopnosťou epidermálnych a dermálnych buniek a následné poškodenie extracelulárnej matrice. Účinné spôsoby dermo-kozmetické liečby by mali v ideálnom prípade riešiť tieto charakteristické znaky holistickým prístupom. Tu sme určili zodpovedajúci profil aktivity bakuchiolu, meroterpénu získaného z rastlín, v rade štúdií in vitro, ex vivo a in vivo a porovnali sme ho s retinolom, ktorý sa v súčasnosti považuje za zlatý štandard v topickej kozmetike proti starnutiu.

Glykozid cistanche môže tiež zvýšiť aktivitu SOD v tkanivách srdca a pečene a výrazne znížiť obsah lipofuscínu a MDA v každom tkanive, účinne zachytáva rôzne reaktívne kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atď.) a chráni pred poškodením DNA. OH-radikálmi. Cystanche fenyletanoidové glykozidy majú silnú schopnosť zachytávať voľné radikály, vyššiu redukčnú schopnosť ako vitamín C, zlepšujú aktivitu SOD v suspenzii spermií, znižujú obsah MDA a majú určitý ochranný účinok na funkciu membrány spermií. Polysacharidy Cistanche môžu zvýšiť aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytoch a pľúcnych tkanivách experimentálne starnúcich myší spôsobenú D-galaktózou, ako aj znížiť obsah MDA a kolagénu v pľúcach a plazme a zvýšiť obsah elastínu. dobrý čistiaci účinok na DPPH, predĺženie doby hypoxie u starnúcich myší, zlepšenie aktivity SOD v sére a oddialenie fyziologickej degenerácie pľúc u experimentálne starnúcich myší Experimenty ukázali, že pri bunkovej morfologickej degenerácii má Cistanche dobrú antioxidačnú schopnosť a má potenciál byť liekom na prevenciu a liečbu chorôb starnutia kože. Zároveň má echinakozid v Cistanche významnú schopnosť vychytávať voľné radikály DPPH a dokáže vychytávať reaktívne formy kyslíka, predchádzať voľným radikálom vyvolanej degradácii kolagénu a má tiež dobrý reparačný účinok na poškodenie aniónom voľných radikálov tymínu.

Kliknite na Antioxidant Cistanche Tubulosa

【Ďalšie informácie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Metódy: Antioxidačná kapacita a sila bakuchiolu a retinolu boli analyzované meraním redukcie 2,2'-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH) prostredníctvom jeho absorpčného rozpadu a elektrónovej spinovej rezonančnej spektroskopie. Účinky na prostaglandín E2 (PGE2), inhibičný faktor migrácie makrofágov (MIF), fibroblastový rastový faktor 7 (FGF7), kolagén typu I a VII (COL1A1, COL7A1), hladiny fibronektínu (FN), ako aj metabolizmus vo vode rozpustného tetrazólia 1 (WST-1) boli stanovené v ľudských dermálnych fibroblastoch. Epidermálna regenerácia bola hodnotená s použitím in vitro modelu hojenia rán. Hladiny FN proteínu sa analyzovali ex vivo po ošetrení formuláciou obsahujúcou bakuchiol, retinol alebo vehikulum s použitím sacej blistrovej tekutiny. Zlepšenie stavu pokožky sa stanovilo in vivo v porovnávacej štúdii rozdelenej tváre po aplikácii bakuchiolu alebo vehikula.

Výsledky: Na rozdiel od retinolu, bakuchiol preukázal vysokú antioxidačnú účinnosť. Hladiny PGE2 a MIF boli významne znížené bakuchiolom aj retinolom. Bakuchiol, ale nie retinol, významne zvýšil hladiny proteínu FGF7. Hladiny metabolizmu WST-1 boli významne zvýšené bakuchiolom a retinolom. Aplikácia bakuchiolu a retinolu viedla k významnému zvýšeniu hladín proteínov COL1A1, COL7A1 a FN. Rany doplnené bakuchiolom, ale nie retinolom, vykazovali významné zvýšenie regenerácie epidermis. Klinicky plochy ošetrené prípravkom s obsahom bakuchiolu vykazovali štatisticky významné zvýšenie hodnôt proteínu FN po 4-týždňovej aplikácii v porovnaní s neošetrenými plochami a plochami ošetrenými vehikulom.

Záver: Tieto údaje poskytujú dôkaz o viacsmernej účinnosti bakuchiolu proti bunkovým znakom starnutia pokožky. Jeho profil aktivity zdieľa niektoré spoločné znaky s retinolom, ale v našich štúdiách demonštruje niekoľko doteraz neznámych pozitívnych účinkov, konkrétne stimuláciu kritickej zložky extracelulárnej matrice FN a zrýchlenú epidermálnu regeneráciu a hojenie rán.

KĽÚČOVÉ SLOVÁ

anti-aging, bakuchiol, opodstatnenosť tvrdenia in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, fyziológia/štruktúry kože

ÚVOD

Pre starnúcu pleť sú typické vrásky, nerovnomerná pigmentácia, drsnosť a ochabnutosť pokožky. Tieto klinické príznaky sú výsledkom štrukturálnych a metabolických zmien spôsobených procesmi vnútorného a vonkajšieho starnutia. Vnútorné starnutie sa pripisuje faktorom vrátane skrátenia telomér, chronického zápalu, jednoduchých mutácií mitochondriálnej DNA a voľných radikálov [1]. Staršia koža ďalej zahŕňa redukciu jej antioxidačných systémov[2]. Taktiež rýchlosť bunkovej proliferácie klesá v dôsledku biologického procesu starnutia, ktorý vedie k strate štruktúry a funkcie pokožky. Vonkajšie starnutie je primárne spúšťané UV žiarením a vplyvmi prostredia. Tieto urážky majú za následok poškodenie kože, ktoré zosilňuje chronologický pokles a urýchľuje starnutie kože. Ľudská pokožka ďalej počas starnutia stráca schopnosť vyrovnať sa so zápalovými stavmi, čo vedie k chronickému prozápalovému stavu.

Lokálna aplikácia retinoidov, ako je kyselina retinová, retinal alebo retinol, sa považuje za klinický zlatý štandard účinnej liečby proti starnutiu [3, 4]. Molekulárne mechanizmy retinoidov boli rozsiahle opísané [5–10]. Lokálne retinoidy účinne redukujú viditeľné známky starnutia, ako sú vrásky, ochabnutosť alebo drsnosť [4, 11] a znižujú depigmentáciu pokožky poškodenej svetlom vrátane Livedo reticularis a aktinických lentigínov [12]. Lokálna liečba retinoidmi však môže viesť k suchosti a podráždeniu kože v závislosti od koncentrácie [13]. Keďže aplikácia retinolu spôsobuje menšie nežiaduce reakcie v porovnaní s inými retinoidmi, ako je kyselina retinová [6, 14], je široko používanou aktívnou látkou v kozmetickej liečbe starnutia tváre.

Na rozdiel od retinolu, ktorý sa používa v produktoch starostlivosti o pleť od roku 1984 [15], bakuchiol získal pozornosť ako lokálna zlúčenina proti starnutiu len nedávno. Bakuchiol je meroterpén (obrázok 1), ktorý sa získava zo semien Psoralea corylifolia. V tradičnej indickej a čínskej medicíne sa používa po stáročia [16, 17] a je dobre znášaný [18]. Predpokladalo sa, že bakuchiol vykazuje funkcie podobné retinolu, keďže v modeli náhrady kože obe látky vykazujú podobné vzory génovej expresie in vitro [19] a zlepšenie kožného fotopoškodenia in vivo [20]. Preto sa tiež označuje ako funkčný analóg retinoidu rastlinného pôvodu [21]. Ďalšie štúdie preukázali antioxidačné [19, 22–24], protizápalové [19, 25–27], antibakteriálne [28], ako aj antiproliferatívne a protinádorové účinky [29, 30] bakuchiolu.

Na účinné zlepšenie a oddialenie multifaktoriálnych procesov starnutia pokožky je potrebné riešiť rôzne bunkové mechanizmy integrovaným prístupom. Bakuchiol súčasne moduluje rôzne ciele, čo z neho robí v tomto ohľade sľubnú zlúčeninu. Keďže oxidačný a zápalový stres úzko súvisí so starnutím kože, ich prevencia pomocou bakuchiolu môže podporiť celkový stav pokožky. Avšak kvalita súčasných vedeckých dôkazov bola nedávno kriticky zhodnotená [31]. V tomto kontexte sme určili (i) antioxidačné a (ii) protizápalové kapacity bakuchiolu a retinolu a skúmali sme ich schopnosť zlepšiť bunkový metabolizmus a syntézu rastového faktora 7 zhrnutú ako (iii) bunková aktivita. Ďalej sme analyzovali, či bakuchiol a retinol ovplyvňujú expresiu určitých (iv) zložiek ECM a zlepšujú (v) epidermálnu regeneráciu a reepitelizáciu. Nakoniec sa uskutočnila in vivo štúdia na overenie klinickej schopnosti bakuchiolu proti starnutiu v ľudskej koži.

MATERIÁLY A METÓDY

Testovacie materiály

Bakuchiol bol získaný od Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Spojené štáty americké). Retinol bol zakúpený od Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Spojené štáty americké). Pre experimenty s bunkovou kultúrou boli obe testované látky čerstvo zriedené v DMSO (Merck, Darmstadt, Nemecko). Pre zásobné roztoky DMSO bola aplikovaná koncentrácia testovaných látok 1000-násobne vyššia ako najvyššia koncentrácia aplikovaná v bunkovej kultúre, čím sa získalo 0,1 % DMSO v médiu alebo pufri. Ďalšie riedenia sa uskutočnili s použitím média alebo pufra s 0,1 % DMSO. Všetky experimenty s bunkovou kultúrou sa teda uskutočňovali v prítomnosti 0,1 percenta DMSO. Pre štúdie in vivo bol topický retinol formulovaný v rovnakom vehikule ako bakuchiol.

In vitro štúdie

Stanovenie antioxidačnej kapacity

Bakuchiol, retinol (oba aplikované v konečnej koncentrácii 100 uM) alebo vysoko štandardný trolox (Merck, konečná koncentrácia 25 uM) sa zriedili v DMSO. Stručne, 30 μl týchto zlúčenín (10-krát vyššia koncentrácia ako konečná testovacia koncentrácia) sa pridalo do 96-jamkovej platne s plochým dnom. Následne sa do každej jamky rýchlo pridalo 270 ul 39 ug/ml DPPH (Merck, zriedený v zmesi voda/etanol 1:1), čím sa získala konečná koncentrácia 10 percent DMSO. Ako kontrola bol roztok DPPH inkubovaný s DMSO bez testovaných látok. Ďalej sa uskutočnili slepé kontroly inkubáciou bakuchiolu alebo retinolu s vodou/etanolom (1:1) alebo len so zmesou voda/etanol (1:1) obsahujúcou 10 percent DMSO v neprítomnosti DPPH. Po 10, 30 a 60 minútach sa merala absorbancia pri 524 nm pomocou multimódovej čítačky mikrodoštičiek Spark (Tecan, Männedorf, Švajčiarsko). Signály slepých kontrol boli odčítané.

Stanovenie antioxidačnej sily

HDF sa naočkovali na {{0}}jamkové platne s 150 000 bunkami/jamku v 2 ml média obsahujúcom 10 percent teľacieho séra a inkubovali sa 24 hodín. Následne sa staré médium vyhodilo a bunky sa ošetrili médiom obsahujúcim 2 percentá teľacieho séra a bakuchiol alebo retinol v konečnej koncentrácii 10 uM. Kontrolné HDF boli doplnené 0,1 percenta DMSO bez bakuchiolu alebo retinolu. Slepé kontroly boli uskutočnené inkubáciou média bez buniek. Po 24 hodinách sa upravené médium prenieslo do rotačných kolón Vivaspin proteínového koncentrátora (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Nemecko) a skoncentrovalo sa približne 10--krát. Objemy všetkých supernatantov média sa vyrovnali opätovným pridaním prietoku. Hladiny proteínu FGF7 v koncentrovanom upravenom médiu sa analyzovali pomocou komerčne dostupnej súpravy ELISA podľa pokynov výrobcu (Bio-Techne GmbH). Merania sa uskutočňovali pomocou multimódovej čítačky mikrodoštičiek Spark (Tecan). Signály získané od slepých kontrol sa odčítali a hladiny proteínu FGF7 sa normalizovali na celkový počet buniek, ktorý sa určil pomocou počítadla buniek (Scepter, Merck).

Stanovenie metabolizmu WST-1

HDF sa naočkovali na {{0}}jamkové platne s 3 000 bunkami/jamku v 100 μl médiu obsahujúcom 10 percent teľacieho séra a inkubovali sa 24 hodín. Vyčerpané médium sa vyhodilo a bunky sa ošetrili 100 ul média obsahujúceho retinol alebo bakuchiol v konečnej koncentrácii 1 uM alebo 10 uM. Kontrolné HDF boli doplnené 0,1 percenta DMSO bez bakuchiolu alebo retinolu. Ako ďalšia kontrola boli bunky ošetrené 10 percentným tritónom-X (Merck). Slepé kontroly boli uskutočnené inkubáciou média bez buniek. Po 72 hodinách sa bunky zafarbili pomocou komerčne dostupného činidla na proliferáciu buniek WST-1 podľa pokynov výrobcu (Merck). Absorbancia sa merala pri 450 a 620 nm s použitím čítačky mikrodoštičiek Tecan infinity M200 (Tecan). Rozdiel v týchto meraniach sa použil na analýzu. Signály slepých kontrol boli odčítané.

Stanovenie hladín proteínov COL1A1 a COL7A1

HDF sa naočkovali na {{0}}jamkové platne s 10  000 bunkami/jamka v 100 μl médiu obsahujúcom 10 percent teľacieho séra a inkubovali sa 24 hodín. Bakuchiol alebo retinol sa zriedili v 100 μl média bez teľacieho séra a doplnili sa do súčasného média v konečnej koncentrácii 1 μM alebo 10 μM. Kontrola bola doplnená 100 ul média bez séra poskytujúceho koncentráciu 0,1 percenta DMSO zodpovedajúcu ošetreniu retinolom a bakuchiolom. Ako vysoký štandard sa aplikovalo 10 ng/ml transformujúceho rastového faktora- (TGF-) a 11 ug/ml askorbátu sodného (obe Merck). Slepé kontroly boli uskutočnené inkubáciou média bez buniek. Po 4 hodinách sa analyzovali hladiny proteínov COL1A1 a COL7A1 v upravenom médiu pomocou komerčne dostupných súprav ELISA podľa pokynov výrobcu (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Spojené štáty americké). Merania sa uskutočňovali pomocou multimódovej čítačky mikrodoštičiek Spark (Tecan). Signály slepých kontrol boli odčítané. Hladiny proteínov COL1A1 a COL7A1 sa normalizovali na celkové množstvo proteínu bunkového lyzátu, ktoré sa určilo s použitím komerčne dostupnej testovacej súpravy s kyselinou bicinchonínovou (Thermo Fisher Scientific) podľa pokynov výrobcu. Predpokladom pre použitie výsledkov bola pozitívna reakcia buniek na vysoký štandard TGF- a askorbát sodný.

Na analýzu hladín proteínu COL7A1 po predĺženej inkubačnej dobe sa HDF naočkovali na 96-jamkové platne s 3 000 bunkami/jamku v 100 μl médiu obsahujúcom 10 percent teľacieho séra. Všetky ošetrenia, kontroly a analýza sa uskutočnili tak, ako je opísané vyššie, s výnimkou, že bakuchiol a retinol sa použili iba v konečnej koncentrácii 10 uM. Bunky sa zozbierali, keď sa dosiahla subkonfluencia, najmä po 72 alebo 96 hodinách.

Stanovenie hladín FN proteínu

HDF sa naočkovali na {{0}}jamkové platne s 10 000 bunkami/jamku v 100 μl médiu obsahujúcom 10 percent teľacieho séra a inkubovali sa 24 hodín. Staré médium bolo nahradené médiom obsahujúcim 2 percentá teľacieho séra a bakuchiol alebo retinol v konečnej koncentrácii 10 uM. Kontrola bola doplnená 0,1 percenta DMSO bez bakuchiolu alebo retinolu. Slepé kontroly boli uskutočnené inkubáciou média bez buniek. Po 24 hodinách sa analyzovali hladiny FN proteínu v upravenom médiu pomocou komerčne dostupnej súpravy ELISA podľa pokynov výrobcu (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Spojené štáty americké). Merania sa uskutočňovali pomocou multimódovej čítačky mikrodoštičiek Spark (Tecan). Signály slepých kontrol boli odčítané. Hladiny proteínu FN sa normalizovali na celkové množstvo proteínu bunkového lyzátu, ktoré sa určilo ako je uvedené vyššie.

Stanovenie epidermálnej regenerácie v in vitro modeli hojenia rán

Experimenty sa uskutočnili tak, ako bolo opísané vyššie [34]. Na liečbu modelov hojenia rán sa bakuchiol alebo retinol zriedil v DPBS a pridal sa v konečnej koncentrácii 100μM do oblasti rany (5 μl na ranu). Referenčné rany boli doplnené rovnakým množstvom DPBS obsahujúcim 0,1 percenta DMSO bez bakuchiolu alebo retinolu. Ďalšie rany boli ponechané neošetrené ako ďalšia kontrola. Modely hojenia rán sa inkubovali 43 hodín pri 95 percentnej vlhkosti, 5 percentách CO2 a 37 stupňoch. Následne boli vzorky rýchlo zmrazené v izopentáne predchladenom kvapalným dusíkom a skladované pri -80 stupňoch. Reepitelizácia sa hodnotila v hematoxylínom a eozínom zafarbených rezoch kryostatu meraním dĺžky regenerovanej epidermy pomocou mikroskopu Leica DMLS (10×), kamery Leica MC 170 HD CCD a softvéru Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemecko). Kvantifikácia sa uskutočnila zaslepeným spôsobom.

In vivo štúdie I a II

Pri oboch štúdiách in vivo sa dodržiavali odporúčania súčasnej verzie Helsinskej deklarácie a usmernenia Medzinárodnej konferencie o harmonizácii správnej klinickej praxe ako použiteľné pre kozmetickú štúdiu. Protokol štúdie I bol schválený nezávislou etickou komisiou Freiburg (feki kód 08/2610). V oboch štúdiách všetci dobrovoľníci poskytli písomný informovaný súhlas. Subjekty mali zdravú pokožku, patrili k Fitzpatrickovej pokožke typu I až III a začiatok alebo zmena hormonálnej medikácie bola vylučovacím kritériom.

Počas 10-dňového prípravného obdobia a počas celého obdobia štúdie sa od subjektov vyžadovalo, aby sa zdržali vystavenia UV žiareniu v testovacích oblastiach. Činnosti podporujúce pot boli zakázané 24 hodín pred plánovaným hodnotením.

Výskumník preukázal správnu aplikáciu formulácií s použitím množstva, ktoré zodpovedalo obvyklému režimu starostlivosti o pokožku subjektov.

Štúdia I: Ex vivo stanovenie hladín FN proteínu

Z 52 subjektov žien, ktoré boli zaradené do tejto štúdie kontrolovanej vehikulom, dokončilo štúdiu 33 subjektov a do analýzy údajov boli zahrnuté údaje 31 subjektov (30–64 rokov, priemerný vek: 50,9 rokov). Výpadky sa vyskytli v dôsledku pandémie SARS-CoV-2 a osobných dôvodov (13 osôb), ako aj v dôsledku reakcií na inkompatibilitu (päť osôb, spôsobené liečbou retinolom). Retinolom sprostredkované reakcie inkompatibility, ako aj problémy s odberom vzoriek spôsobili rôzny počet subjektov testovaných na každý stav (podrobnosti nájdete vo výsledkoch).

Sedem dní pred plánovaným hodnotením bolo zakázané používanie produktov starostlivosti o pleť, čistiacich prostriedkov a mydiel na predlaktie. V prvý deň štúdie sa na vnútorných predlaktiach vytvorili štyri testovacie oblasti. Na dvoch testovacích plochách sa aplikovali dve formulácie verum tak, aby obsahovali {{0}},5 percent bakuchiolu alebo 0,15 percenta retinolu. V stanovisku, ktoré zverejnil Vedecký výbor pre bezpečnosť spotrebiteľov v roku 2016, sa aplikovaná koncentrácia retinolu považovala za kozmetickú úpravu [35]. V ďalších dvoch testovacích oblastiach sa použilo zodpovedajúce vehikulum alebo sa plocha ponechala neošetrená. Umiestnenie liečebných miest bolo permutované. Po 4 týždňoch aplikácie testovaných formulácií dvakrát denne sa dobrovoľníci vrátili do testovacieho ústavu. V každej testovanej oblasti sa vytvorili tri sacie blistre (priemer 7 mm), ako bolo opísané vyššie [36, 37]. Stručne povedané, na testovacie oblasti sa umiestnili na zákazku vyrobené prísavky s blistermi a aplikovalo sa vákuum 550–850 mbar. Po približne 90 až 150 minútach, keď sa vytvorili sacie pľuzgiere, sa vákuum uvoľnilo a tekutina sa z blistra odsala pomocou ihly s mierkou 24-. Tekutiny boli okamžite zmrazené na -80 stupňov na suchom ľade až do analýzy. Hladiny FN proteínu boli kvantifikované vo vzorkách tekutiny z nasávaných blistrov pomocou komerčne dostupnej súpravy ELISA (R&D Systems). Merania sa uskutočňovali pomocou multimódovej čítačky mikrodoštičiek Spark (Tecan). Hladiny FN sa normalizovali na celkové hladiny proteínov vzoriek tekutiny z nasávaných pľuzgierov, ktoré sa určili ako je uvedené vyššie.

Štúdia II: In vivo stanovenie zlepšenia stavu kože

Celkovo bolo do tejto porovnávacej štúdie rozdelenej tváre kontrolovanej vehikulom zaradených 43 dobrovoľníčok. Podľa lekárskych hodnotení vykazovali subjekty zmiešané typy pleti (suchá, normálna, mastná a zmiešaná pleť). Štúdiu dokončilo 34 subjektov (39–66 rokov, priemerný vek: 56,2 roka), ktorí boli zaradení do analýzy. Výpadky boli spôsobené technickými problémami a nesúladom (osem subjektov), ​​ako aj reakciami na nekompatibilitu (jeden subjekt spôsobený liečbou vehikulom a bakuchiolom).

Dva týždne pred začiatkom štúdie a počas celého trvania štúdie sa od dobrovoľníkov požadovalo, aby sa zdržali používania samoopaľovacích prípravkov alebo intenzívnych kozmetických ošetrení tváre (napr. odstraňovanie povrchových vrstiev kože). Počas 10-dňového prípravného obdobia a počas štúdie boli subjekty požiadané, aby sa zdržali vykonávania permanentného make-upu, ošetrenia mihalníc a obočia, očných masiek a náplastí. Tri dni pred prvým hodnotením boli subjekty požiadané, aby sa zdržali používania produktov starostlivosti o tvár. Večer pred plánovaným známkovaním boli subjekty povinné prestať nanášať dekoratívnu kozmetiku.

V prvých 7 dňoch 10-dňovej fázy predbežného kondicionovania subjekty dostali nádobu s krémom s obsahom krému s vehikulom (chýbali akékoľvek informácie o obsahu) a nanášali si ho dvakrát denne na celú tvár. Na začiatku dobrovoľníci vykonali samohodnotenie. Vizuálne hodnotili najmä celkový vzhľad pokožky tváre pozorovaním jej sviežosti a žiarivosti, ako aj akýchkoľvek známok starnutia pokožky. Použila sa vizuálna analógová stupnica v rozsahu od 1 (veľmi unavená, zostarnutá) do 10 (veľmi svieža, bez známok starnutia). Potom subjekty dostali dve zaslepené tégliky krému obsahujúce verum (vehikulum obsahujúce 0,5 percent bakuchiolu) alebo vehikulum, v danom poradí, bez akejkoľvek špecifikácie obsahu. Počas obdobia štúdie 12 týždňov bola jedna tvárová strana ošetrovaná dvakrát denne verum, zatiaľ čo druhá tvárová strana bola ošetrovaná dvakrát denne vehikulom. Pridelenie ošetrení na testované miesta bolo permutované. Po 12 týždňoch pravidelného používania dobrovoľníci opäť vykonali samohodnotenie, ako je uvedené vyššie.

Štatistická analýza

Štatistické analýzy boli vykonané pomocou Microsoft Excel pre Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Spojené štáty americké), SAS Software Package pre Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Nemecko) a GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego , Kalifornia, Spojené štáty americké).

Normálna distribúcia údajov bola hodnotená pomocou Shapiro-Wilkovho testu. Ak sa potvrdila normálna distribúcia, uskutočnila sa analýza rozptylu s opakovaným meraním (RM-ANOVA) s post hoc párovým porovnaním. Ak bola hypotéza normality zamietnutá, Blom-transformované poradia pôvodných údajov sa hodnotili pomocou RM-ANOVA s post-hoc párovým porovnaním, alebo sa pôvodné údaje hodnotili pomocou testu poradia podľa Wilcoxona. Všetky štatistické testy boli obojstranné na hladine významnosti alfa=0,05.

VÝSLEDKY

In vitro štúdie

Stanovenie antioxidačných účinkov

Na analýzu (i) antioxidačných účinkov bakuchiolu a retinolu sme vykonali dva rôzne testy s použitím DPPH ako molekuly detektora.

Antioxidačná kapacita

Antioxidačná kapacita bola stanovená meraním redukcie DPPH prostredníctvom jeho absorpcie. Vysoko štandardný Trolox vykazoval výrazne zvýšenú antioxidačnú kapacitu v porovnaní s kontrolou (p=0.0000 pre všetky uvedené časové body), čo potvrdzuje správne meranie (obrázok 2a). Pokiaľ ide o kontrolu, absorbancia vo vzorkách ošetrených bakuchiolom bola tiež významne znížená vo všetkých skúmaných časových bodoch (10 minút: p=0.0003, 30 a 60 minút: p=0.{11}} ) vykazujúce zvýšenú antioxidačnú kapacitu. Naopak, Retinol nevykazoval žiadnu významnú antioxidačnú kapacitu v porovnaní s kontrolou.

【Ďalšie informácie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】