Neuroprotektívne vlastnosti 4-aminopyridínu

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Michael Dietrich, PhD, Hans-Peter Hartung, MD, PhD, FRCP, a Philipp Albrecht, MD

Abstraktné

Ako antagonista napäťovo riadených draslíkových (Kv) kanálov sa 4-aminopyridín (4-AP) používa ako symptomatická terapia pri niekoľkých neurologických poruchách. Zlepšenie zrakových funkcií a motorických schopností a zmiernenie únavy u pacientov s SM sa pripisuje 4-AP. Jeho formulácia s predĺženým uvoľňovaním (fampridín) bola schválená na symptomatickú liečbu poruchy chôdze pri SM. Priaznivé účinky boli vysvetlené blokádou axonálnych Kv kanálov, čím sa zvyšuje vedenie pozdĺž demyelinizovaných axónov. Avšak narastajúce množstvo dôkazov naznačuje, že 4-AP môže mať ďalšie vlastnosti nad rámec symptomatického spôsobu účinku. V tomto prehľade sumarizujeme predklinické a klinické údaje o možných neuroprotektívnych vlastnostiach 4-AP.

4-Aminopyridín pri neurologickom ochorení

Aminopyridíny sú skupinou monoamínových a diaminoderivátov pyridínu, ktoré inhibujú napäťovo riadené draslíkové (Kv) kanály. Najmä 2 širokospektrálne blokátory draslíkových kanálov 4-aminopyridín (4-AP) a 3,4-aminopyridín (3,4- DAP) boli použité ako nové výskumné látky pri rôznych neurologických ochoreniach. Aj keď 3,4-DAP je silnejším antagonistom draslíkových kanálov, 4-AP ľahšie prechádza hematoencefalickou bariérou1 a bol klinicky lepší u pacientov s SM, najmä pokiaľ ide o zlepšenie zrakových funkcií,2 únavu ,3 kognícia,4 a rýchlosť chôdze.1 Okrem toho sa uvádza, že 4-AP uľahčuje nervové vedenie pri neurologických ochoreniach iných ako MS.5,6

Účinky cistanche: Chráňte neuróny

V zdravých axónoch sú kanály Kv1.1 a Kv1.2 zoskupené blízko uzlov Ranviera.7 Tieto kanály sa po demyelinizácii obnažia a migrujú cez demyelinizovaný segment. Súčasne sa expresia týchto kanálov niekoľkonásobne zvyšuje.8 Toto nesprávne nasmerované prerozdelenie Kv kanálov zhoršuje prenos akčných potenciálov, čo vedie k trvalej invalidite. 4-AP blokuje tieto exponované draslíkové kanály, a preto zvyšuje prenos signálu.9,10 Kanál Kv1.3 bol objavený v ľudských T-bunkách11, zistilo sa, že je vysoko exprimovaný na zápalových infiltrátoch v mozgu MS12 a je exprimované na makrofágoch, mikrogliách a efektorových pamäťových T bunkách.13 Selektívne a neselektívne blokátory Kv1.3 kanála by tak mohli poskytnúť imunomodulačné vlastnosti inhibíciou bunkovej proliferácie a sekrécie prozápalových cytokínov.14 Štúdie pred rokom 2009 nedokázali preukázať 4-AP ako symptomatická liečba SM, pretože hladiny lieku v krvi u pacientov boli nepredvídateľné, pričom nadmerné dávky boli spojené s rizikom epileptických záchvatov a poruchou vedomia.15–18 Preto bol vyvinutý fampridín, formulácia 4-AP s predĺženým uvoľňovaním a bol následne schválený na symptomatickú liečbu poruchy chôdze pri SM.19–23 Zaujímavé je, že v poslednom čase narastajúce množstvo dôkazov naznačuje, že okrem týchto Ak sú potvrdené symptomatické účinky, 4-AP môže mať ďalšie ochranné vlastnosti.

Hodnotenie 4-AP pomocou modelov in vitro

In vitro boli neuroprotektívne účinky 4-AP pozorované na mnohých modeloch. Keď boli motorické neuróny (MN) diferencované z indukovaných pluripotentných kmeňových buniek pacientov s amyotrofickou laterálnou sklerózou nesúcich mutácie FUS a SOD1 génu vystavené 4-AP, nerovnováha iónových kanálov sa upravila, hladiny neuronálnej aktivity sa zvýšili, endoplazmatické retikulum stres sa zmenšil a aktivácia kaspázy sa oslabila. Mutantné MN vykazovali nižšie sodíkové prúdy a pomery Na plus / K plus, čo môže byť aspoň čiastočne dôvodom ich hyperexcitability. Toto sa zvrátilo po 4-liečbe AP, čo viedlo k zníženiu draslíkových prúdov a obnoveniu vzorcov spontánnej aktivity a synaptického vstupu v MN.{5}}Liečba AP znížila uvoľňovanie prozápalových mediátorov z ľudských mikroglií napadnutých amyloidom- beta a chránené kultivované hipokampálne neuróny potkana kúpali sa v supernatantoch z mikroglií ošetrených beta-amyloidom. Iné štúdie in vitro uviedli, že 4-AP zvýšila fosforyláciu proteínu viažuceho prvok odozvy cAMP chránenú pred bunkovým stresom glutamátom, NMDA a 3-nitropropiónovou kyselinou pôsobiacou na neuróny cerebelárnych granúl novorodencov potkanov. Glutamát vedie k zníženej životaschopnosti aj v bunkách predkondicionovaných 4-AP, ale bez významnej aktivácie kaspázy-3. Tieto pozorovania naznačujú, že 4-AP je primárne účinný proti nekrotickej excitotoxicite.27 Ukázalo sa tiež, že chráni primárne neurónové kultúry pred nedostatkom kyslíka a glukózy alebo pred toxicitou ouabaínu/DL-tri- -benzyloxyasparágovej kyseliny.28

neuroprotektívny účinok Cistanche

Predklinické štúdie in vivo na 4-AP

Niekoľko štúdií skúmalo ochranné účinky 4-AP v rôznych modeloch chorôb (tabuľka 1). V modeloch poškodenia periférnych nervov pri pomliaždení nervov profylaktická a skorá 4-liečba AP vyvolala obnovenie rýchlosti nervového vedenia, podporila remyelinizáciu a zväčšila axonálnu oblasť. Posledné pozorovania boli vysvetlené účinkami podobnými tým, ktoré sa objavujú po elektrickej stimulácii, napríklad zvýšením hladín neuronálneho neurotrofického faktora odvodeného z mozgu (BDNF). potkany indukovali poškodenie neurónov a zvýšenú mikrogliálnu aktiváciu. Zistilo sa, že denné podávanie 1 mg/kg 4-AP potláča mikrogliálnu aktiváciu a poskytuje neuroprotekciu. Pripisovalo sa to 4-schopnosti AP blokovať neinaktivačný smerom von usmerňujúci prúd K plus v aktivovaných mikrogliách a znižovať bunkovú produkciu prozápalových cytokínov.25 Výskumy využívajúce in vivo model hipokampálnej neurotoxicity vyvolanej kainátom odhalili silné neuroprotektívne účinky { {11}}AP, ktorá by mohla byť zrušená nekompetitívnym antagonistom NMDA receptora MK-801 a antagonistom adenozínu A1 8-cyklopentylteofylínom. Tieto pozorovania naznačujú, že NMDA receptory sú relevantné pre 4-AP sprostredkovanú ochranu v tomto modeli.30 ​​Na zvieracom modeli autoimunitnej neuropatie u potkanov Lewis 4-AP zlepšila klinickú závažnosť a patologické elektrofyziologické nálezy. Autori navrhli, že axonálna ochrana bola poskytnutá blokovaním sodíkom sprostredkovaných vnútorných prúdov v skorej fáze, pretože vysoké membránové potenciály v akútnej fáze zápalu môžu byť neurotoxické. V chronickej fáze sa nervové vedenie potenciálne zlepšilo blokovaním draslíkom sprostredkovaného vonkajšieho prúdu.1

Pri experimentálnej autoimunitnej encefalomyelitíde (EAE), modeli imunitne sprostredkovaného zápalu CNS replikujúceho hlavné črty SM, sa uvádza, že blokáda Kv kanála inhibuje aktiváciu T-buniek, potenciálne blokovaním kanálov podrodiny Kv1.3 a oslabením axonálnej demyelinizácie a degenerácia pôsobením na kanál K.3.1 na astroglii, čo potenciálne indukuje signál BDNF. ling. Pri EAE indukovanej proteolipidovým proteínom u myší SJL4-liečba AP významne zlepšila digitálne skóre, ktoré sa potvrdilo patologicky. Pozorovalo sa, že expresia gliálneho fibrilárneho kyslého proteínu bola u myší liečených 4-AP znížená a aktivácia T-buniek a polarizácia Th1/17 boli zmiernené. Avšak v chronickom modeli EAE indukovanej myelínovým oligodendrocytovým glykoproteínom (MOG) u myší C57BL/64-AP nezmenil priebeh EAE.5 Ďalšia štúdia tiež skúmala účinky {{19} }AP v modeli MOG-EAE u myší C57BL/6 a hlásili symptomatické, ale žiadne ochorenie modifikujúce účinky. Ani profylaktická, ani terapeutická liečba 4-AP nezmiernila závažnosť priebehu digitálnej EAE, zatiaľ čo zvieratá liečené {{25}AP vykazovali zlepšenú mobilitu hodnotenú pomocou analýzy odtlačkov prstov a rotarodov. Demyelinizácia miechy, poškodenie neurónov a zobrazenie zmien objemu mozgu MRI zostalo nezmenené. Proliferácia, IL17 alebo produkcia IFN-y CD4* T-buniek tiež neboli ovplyvnené.

Nedávno sme preukázali, že okrem symptomatických účinkov na zvýšenie nervového vedenia môže 4-AP zabrániť neurodegenerácii sietnice počas experimentálnej optickej neuritídy (EAEON) indukovanej MOG peptidom u myší C5BL6.'Pomocou optickej koherentnej tomografie in vivo( OCT) zobrazovanie, testovanie vizuálnych funkcií a histologické hodnotenie sme pozorovali zníženie rozsahu degenerácie vnútorných vrstiev sietnice v modeloch EAEON, a to ako na profylaktické, tak aj terapeutické podávanie 4-AP. V tomto modeli 4-AP zosilnil účinky imunomodulačnej liečby modulátorom sfingozínového-1-fosfátového receptora fingolimodom, čo naznačuje nezávislé spôsoby účinku. Je rozumné predpokladať, že tento účinok nie je obmedzený na samotný fingolimod a je aplikovateľný na 4-AP kombinovanú s inými imunomodulačnými liekmi na SM. V našej štúdii histológia zrakového nervu odhalila, že na rozdiel od fingolimodu,4-AP nemal významný vplyv na mikrogliálnu aktiváciu a/alebo infiltráciu lymfocytov alebo makrofágov, čo naznačuje, že ochranné účinky nesúviseli s protizápalovým režimom akcie. V súlade s tým 4-ošetrenie AP neinterferovalo s indukciou EAE, overené testom restimulácie T-buniek. Okrem toho sme pozorovali významnú ochranu pred neurodegeneráciou sietnice pri liečbe 4-AP aj v modeli nezápalového rozdrvenia zrakového nervu, zatiaľ čo v tomto prípade fingolimod nemal žiadny účinok. Je zaujímavé, že in vitro 4-liečba AP nedokázala priamo ochrániť gangliové bunky sietnice. Namiesto toho histologické a in vitro experimenty ukázali 4-sprostredkovanú AP-sprostredkovanú stabilizáciu myelínových a oligodendrocytových prekurzorových buniek. Tento účinok bol spojený so zvýšeným prílevom vápnika a jadrovou translokáciou jadrového faktora aktivovaných T-buniek (NFAT). Už skôr sa ukázalo, že 4-AP reguluje homeostázu vápnika zvýšením hladín inozitoltrifosfátu, a tým spôsobuje uvoľňovanie vápnika z vnútrobunkových zásob vápnika. Na potvrdenie týchto stavov však môžu byť užitočné ďalšie štúdie o 4-AP v demyelinizačných modeloch, napríklad liečba kuprizónom alebo modely transgénnych myší s indukovateľnou abláciou oligodendrocytov. Existujúce štúdie na zvieracích modeloch demyelinizácie sa zameriavajú najmä na schopnosť 4-AP obnoviť akčný potenciál, chýbajú im však ďalšie výskumy oligodendrogliových buniek (obrázok).

Je dôležité spomenúť, že dávky potrebné na dosiahnutie týchto účinkov in vitro sú približne 100-1,000x vyššie ako koncentrácia dosiahnutá u pacientov. Preto môžu byť pre pozorovania in vivo a in vitro relevantné ďalšie alebo iné mechanizmy. Tieto zahŕňajú, ale nie sú obmedzené na, zníženú disipáciu energie demyelinizovaných axónov v dôsledku blokády úniku draslíka a silnejších ochranných a reparačných kapacít v mozgu nepriamo vyplývajúcich zo zvýšenej mobility a väčšieho cvičenia.

Okrem toho nemožno vylúčiť imunomodulačné mechanizmy 4-AP, najmä preto, že znížená aktivácia T-buniek a polarizácia Th1/17 bola preukázaná v PLP-indukovanej EAE u myší SJL.3 Okrem toho predklinické štúdie iných modelov chorôb zistili oslabená aktivácia a znížené uvoľňovanie prozápalových mediátorov mikrogliami. Tieto kontroverzné výsledky poukazujú na rôzne patologické mechanizmy rôznych zvieracích modelov, kde sú imunitné bunky viac či menej náchylné na liečebné stratégie. Nezrovnalosti medzi našimi výsledkami a predchádzajúcimi správami iba o symptomatických účinkoch v EAE indukovanej MOG peptidom u myší C57BL6“ možno aspoň čiastočne vysvetliť (1) rozdielmi v dávkovaní, pretože iní používali dávky 100 ug a 600 ug/myš/deň, keďže sme podávali 250 ug/myš/deň; (2) trvanie liečby (40, 60 a 90 dní podľa Göbela a kol.,* Moriguchiho a kol.,3 a Dietricha a kol., „v tomto poradí); a (3) množstvo MOG použitého na imunizáciu, pretože sme použili 200 ug MOG na myš, zatiaľ čo iní použili iba 100 ug MOG na myš. Nedávny výskum sa zameriava na úlohu črevnej mikroflóry pri ovplyvňovaní indukcie a závažnosti EAE zmenou rovnováhy efektorových a regulačných T a B buniek. Mikrobióm hlodavcov sa môže medzi zvieratami líšiť, čo vedie k rozdielom v závažnosti EAE, priebehu a možno aj v reakcii na terapeutiká. Celkovo by tieto faktory mohli zodpovedať za heterogenitu výsledkov štúdie.

neuroprotektívny účinok Cistanche

Klinický prístup k 4-AP u pacientov s SM

Niekoľko klinických štúdií od 80. rokov už naznačilo priaznivé účinky 4-AP u ľudí s SM. Okrem iného identifikovali zlepšenie motorických40-2 a vizuálnych funkcií-44 a únavy.5-7 Obmedzenia štúdie, absencia homogénneho dizajnu štúdie a malý počet pacientov zakazovali schválenie {{ 5}}AP riadnymi autoritami a vedú k off-label používaniu už viac ako 3 desaťročia.4 Na druhej strane, niektoré z týchto štúdií uľahčili vývoj formulácie s predĺženým uvoľňovaním (SR-4-AP alebo fampridín), pretože zistili, že plazmatické hladiny pôvodnej zlúčeniny s okamžitým uvoľňovaním sú nekonzistentné a nepredvídateľné. Prvú klinickú štúdiu so SR-4-AP vykonali v roku 1997 Schwid et al.,49 ktorá preukázala výrazné zlepšenie rýchlosti chôdze a trend k zlepšeniu svalovej sily.

Technologický systém s predĺženým uvoľňovaním bol vyvinutý spoločnosťou Elan Pharmaceuticals. Použil takzvaný matricový systém absorpcie liečiva, ktorý pozostáva z patentovanej polymérnej matrice, ktorá riadi uvoľňovanie difúziou a eróziou gastrointestinálnymi enzýmami. To viedlo k nižším maximálnym plazmatickým hladinám liečiva a dlhšiemu trvaniu účinku.1 Spočiatku sa SR-4-AP testovala v 4 štúdiách. V roku 2007 Goodman a spol.1 vykonali s 36 pacientmi s SM postupné 5 mg prírastky od 10 do 40 mg dvakrát denne. V časovom teste chôdze 25 nôh (T25FW) nebola pozorovaná žiadna významná zmena, zatiaľ čo post hoc analýza prevádzajúca údaje na rýchlosť chôdze (ft/s) dosiahla významnosť. Okrem toho sa pozorovalo zlepšenie únavy, ktorú sám uviedol. V štúdii porovnávajúcej dávky v roku 2008 (randomizovaná, dvojito zaslepená, placebom kontrolovaná) Goodman et al.2 prijali 206 pacientov, ktorí dostávali placebo alebo dávky 10, 15 alebo 20 mg dvakrát denne. Post hoc analýza porovnávajúca zlepšenie rýchlosti chôdze opäť zistila výrazne lepšie výsledky pre všetky liečebné skupiny jednotlivo a pre všetkých pacientov liečených SR-4-AP v porovnaní s placebom. Sila svalov sa zlepšila u skupín liečených 10-mg a 15-mg, ale nie u skupín liečených 20 mg v porovnaní s pacientmi s placebom. V 2 následných Ⅲ klinických štúdiách (21-týždňová dvojito zaslepená placebom kontrolovaná randomizovaná štúdia, 301 pacientov a 14-týždenná dvojito zaslepená placebom kontrolovaná štúdia, 239 pacientov) s 10 mg dvakrát denne, pacienti boli rozdelení do skupiny reagujúcich a nereagujúcich, definovaných konzistentným zlepšením na T25FW. V oboch štúdiách bolo zvýšenie rýchlosti chôdze významné v porovnaní so skupinou nereagujúcich alebo placebom. Okrem toho došlo k zlepšeniu skóre 12-Item MS Walking Scale (MSWS-12) pre respondentov.2122

V otvorenom rozšírenom skúšaní týchto štúdií sa preukázalo, že klinické zlepšenie sa po vysadení lieku stratilo, ale vrátilo sa 2 týždne po opätovnom začatí liečby SR-4-AP.Ampyra/Fampyra, tabletová forma SR{ {3}}AP získala úplné schválenie Úradom pre potraviny a liečivá v januári 2010 na zlepšenie chôdze u pacientov s SM, ale len podmienečné povolenie na uvedenie na trh v roku 2011 od Európskej agentúry pre lieky (EMA). Na základe uvedených skúšok bolo schválenie podmienené poskytnutím dlhodobejších údajov o účinnosti a bezpečnosti. Preto sa začala prieskumná fáza II (MOBILE) a fáza I potvrdzujúca štúdia (ENHANCE).

V prieskumnej štúdii MOBLE so 132 účastníkmi sa zistilo zlepšenie globálneho dojmu zmeny pacienta (PGIC), MSWS-12 a rýchlosti Timed Up and Go (TUG)23 Na vyhodnotenie dlhodobej účinnosti a bezpečnosti Uskutočnila sa SR-4-AP, potvrdzujúca štúdia ENHANCE (10 mg dvakrát denne u 646 pacientov s SM). Okrem zlepšení hlásených v štúdii MOBILE autori zistili významné zlepšenie u pacientov liečených SR-4-AP na 29-Položkovej škále vplyvu na MS.5 EMA následne udelila bezpodmienečné schválenie SR{ {11}}AP na liečbu pacientov s SM s poruchami chôdze. Pozorovacia štúdia fázy ENABLE s 901 pacientmi preukázala, že liečba SR-4-AP je prospešná pre pacientov s SM prostredníctvom sebapociťovaného fyzického fungovania a psychického zdravia v prostredí reálneho sveta2 (tabuľka 2).

Na základe sľubných predklinických údajov o ochrane pred neurodegeneráciou sietnice opísaných vyššie naša skupina vykonala retrospektívnu, multicentrickú štúdiu OCT, aby pozdĺžne porovnala neurodegeneráciu sietnice medzi 52 pacientmi na kontinuálnej 4-terapii AP a 51 kontrolami, ktoré sa zhodovali so všetkými relevantnými premennými pomocou preddefinovaného porovnávacieho algoritmu. V súlade s experimentálnymi údajmi sa počas súbežnej 4-AP terapie znížila degenerácia vrstvy nervových vlákien makuly sietnice v priebehu 2 rokov. Tieto zistenia však musia byť potvrdené v nezávislých a ideálne prospektívnych kohortových štúdiách, najmä preto, že veľkosť účinku bola nízka a miera stenčenia peripapilárnej vrstvy nervových vlákien sietnice a stenčovania makulárnych gangliových buniek/vnútornej plexiformnej vrstvy sa medzi skupinami významne nelíšila. . Tieto nezrovnalosti ochranného účinku 4AP iba ​​na mRNFL, ale ani v pRNFL, ani v McGill, sa nedajú ľahko vysvetliť. Je dôležité spomenúť, že keďže 4AP je licencovaný len na zlepšenie poruchy chôdze u pacientov s EDSS 3.5-5, analyzované miery zmien boli skúmané v neskorších štádiách ochorenia a bez akútnej optickej neuritídy. V takomto prostredí sa vyskytujú len veľmi jemné zmeny sietnice a na zistenie účinkov liečby by boli potrebné veľké kohorty. Retrospektívna štúdia u pacientov preto určite nebola dostatočne silná na to, aby spoľahlivo odhalila účinky ochrannej liečby, a nie je prekvapením, že iba jeden z výsledkov bol pozitívny. mRNFL bola možno najcitlivejšia vrstva na detekciu účinkov liečby.

Stručne povedané, rastúci počet dôkazov in vivo naznačuje, že 4-AP, okrem svojich dobre známych symptomatických účinkov, prevenciou neurodegenerácie môže modifikovať priebeh ochorenia EAEON a možno aj pacientov s SM. Predbežné dôkazy in vitro naznačujú zapojenie hladín bunkového vápnika a dráhy NFAT, ale sú potrebné ďalšie výskumy na objasnenie presných molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom neuroprotektívneho účinku 4-AP pri imunitne sprostredkovanej zápalovej demyelinizácii. Tieto zistenia môžu mať výrazný vplyv na stratégie liečby SM, ak sa potvrdia v prospektívnej randomizovanej kontrolovanej klinickej štúdii.

účinok Cistanche

Referencie

1. Leussink VI, Montalban X, Hartung HP. Obnovenie axonálnej funkcie pomocou 4-aminopyridínu: klinická účinnosť pri roztrúsenej skleróze a mimo nej. CNS lieky 2018;32:637–651.

2. Horton L, Conger A, Conger D a kol. Účinok 4-aminopyridínu na zrak u pacientov so sklerózou multiplex s optickou neuropatiou. Neurológia 2013;80:1862–1866.

3. Morrow SA, Rosehart H, Johnson AM. Účinok Fampridinu-SR na kognitívnu únavu v randomizovanej dvojito zaslepenej krížovej štúdii u pacientov s MS. Mult Scler Relat Disord 2017;11:4–9.

4. Brat SD, Filli L, Geissler O, a kol. Pozitívne účinky fampridínu na kogníciu, únavu a depresiu u pacientov so sklerózou multiplex nad 2 roky. J Neurol 2018; 265:1016–1025.

5. Hayes KC, Blight AR, Potter PJ a kol. Predklinická štúdia 4-aminopyridínu u pacientov s chronickým poranením miechy. Paraplégia 1993;31:216–224.

6. Iaci JF, Parry TJ, Huang Z, a kol. Dalfampridín zlepšuje senzomotorickú funkciu u potkanov s chronickými deficitmi po oklúzii strednej cerebrálnej artérie. Mŕtvica 2013;44: 1942–1950.

7. Trimmer JS, Rhodes KJ. Lokalizácia napäťovo riadených iónových kanálov v mozgu cicavcov. Annu Rev Physiol 2004;66:477–519.

8. Rodr´ ıguez-Rangel S, Bravin AD, Ramos-Torres KM, Brugarolas P, S´anchez Rodr´ ıguez JE. Štúdie vzťahu medzi štruktúrou a aktivitou štyroch nových blokátorov 4-aminopyridínových K(plus) kanálov. Sci Rep 2020; 10:52.

9. Bostock H, Sears TA, Sherratt RM. Účinky 4-aminopyridínu a tetraetylamóniových iónov na normálne a demyelinizované nervové vlákna cicavcov. J Physiol 1981;313:301-315.

10. Huynh W, Pickering H, Howells J, a kol. Účinok fampridínu na axonálnu excitabilitu pri roztrúsenej skleróze. Clin Neurophysiol 2016;127:2636–2642.

11. DeCoursey TE, Chandy KG, Gupta S, Cahalan MD. Napäťovo riadené K plus kanály v ľudských T lymfocytoch: úloha v mitogenéze? Príroda 1984;307:465–468.

12. Rus H, Pardo CA, Hu L, a kol. Napäťovo riadený draslíkový kanál Kv1.3 je vysoko exprimovaný na zápalových infiltrátoch v mozgu s roztrúsenou sklerózou. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:11094–11099.

13. Wang X, Li G, Guo J a kol. Kanál Kv1.3 ako kľúčový terapeutický cieľ pre neurozápalové ochorenia: stav techniky a ďalej. Front Neurosci 2019;13:1393.

14. Wulffff H, Calabresi PA, Allie R, a kol. Napäťovo riadený Kv1.3 K(plus) kanál v efektorových pamäťových T bunkách ako nový cieľ pre MS. J Clin Invest 2003;111:1703–1713.

15. Burton JM, Bell CM, Walker SE, O'Connor PW. 4-toxicita aminopyridínu s neúmyselným predávkovaním u štyroch pacientov so sklerózou multiplex. Neurológia 2008;71: 1833–1834.

16. Johnson NC, Morgan MW. Nezvyčajný prípad toxicity 4-aminopyridínu. J Emerg Med 2006;30:175–177.

17. Schwam E. Závažné náhodné predávkovanie 4-aminopyridínom v dôsledku chyby v lekárni. J Emerg Med 2011;41:51–54.

18. Etemadifar M, Saboori M, Chitsaz A, et al. Účinok fampridínu na riziko záchvatov u pacientov so sklerózou multiplex. Relatívna porucha sklerózy 2020;43:102188.

19. Goodman AD, Cohen JA, Cross A, a kol. Fampridín-SR pri roztrúsenej skleróze: randomizovaná, dvojito zaslepená, placebom kontrolovaná štúdia s rozsahom dávok. Mult Scler 2007; 13:357–368.

20. Goodman AD, Brown TR, Cohen JA, et al. Porovnávacia štúdia dávky fampridínu s predĺženým uvoľňovaním pri roztrúsenej skleróze. Neurológia 2008;71:1134–1141.

21. Goodman AD, Brown TR, Krupp LB a kol. Perorálny fampridín s predĺženým uvoľňovaním pri roztrúsenej skleróze: randomizovaná, dvojito zaslepená, kontrolovaná štúdia. Lancet 2009;373: 732–738.

22. Goodman AD, Brown TR, Edwards KR, a kol. Štúdia fázy 3 perorálneho dalfampridínu s predĺženým uvoľňovaním pri roztrúsenej skleróze. Ann Neurol 2010;68:494–502.

23. Hupperts R, Lycke J, Short C, a kol. Fampridín s predĺženým uvoľňovaním a chôdza a rovnováha pri SM: randomizovaná kontrolovaná štúdia MOBILE. Mult Scler 2016;22:212–221.

24. Naujock M, Stanslowsky N, Bufffler S, a kol. 4-Aminopyridínom indukovaná aktivita zachraňuje hypoexcitabilné motorické neuróny z pluripotentných kmeňových buniek vyvolaných pacientom s amyotrofickou laterálnou sklerózou. Kmeňové bunky 2016;34:1563–1575.

25. Franciosi S, Ryu JK, Choi HB, Radov L, Kim SU, McLarnon JG. Širokospektrálne účinky 4-aminopyridínu na moduláciu amyloidom beta1-42-indukovanej bunkovej signalizácie a funkčných reakcií v ľudských mikrogliách. J Neurosci 2006;26:11652–11664.

26. Li S, Wei D, Mao Z, a kol. Návrh, syntéza, imunocytochemické vyhodnotenie a molekulárne dokovanie niekoľkých derivátov 4-aminopyridínu ako potenciálnych neuroprotektívnych činidiel na liečbu Parkinsonovej choroby. Bioorg Chem 2017;73:63–75.

27. Smith AJ, Tauskela JS, Stone TW, Smith RA. Predkondicionovanie s 4-aminopyridínom chráni neuróny cerebelárnych granúl pred excitotoxicitou. Brain Res 2009;1294: 165–175.

28. Tauskela JS, Aylsworth A, Hewitt M, Brunette E, Blondeau N. Zlyhanie a záchrana neuroprotekcie vyvolanej predkondicionovaním pri ťažkých inzultoch podobných mŕtvici. Neurofar mykológia 2016;105:533–542.

29. Tseng KC, Li H, Clark A, a kol. 4-Aminopyridín podporuje funkčné zotavenie a remyelinizáciu pri akútnom poškodení periférnych nervov. EMBO Mol Med 2016;8:1409–1420.

30. Ogita K, Okuda H, Watanabe M, Nagashima R, Sugiyama C, Yoneda Y. In vivo liečba blokátorom K plus kanála 4-aminopyridínom chráni pred kainátom indukovanou smrťou neurónových buniek prostredníctvom aktivácie NMDA receptorov u myší hippocampus. Neuropharmacology 2005;48:810–821.

31. Moriguchi K, Miyamoto K, Kusunoki S. 4-Aminopyridín zlepšuje experimentálnu autoimunitnú neuritídu u potkanov Lewis. J Neuroimmunol 2017;305:72–74.

32. Schmalhofer WA, Bao J, McManus OB, a kol. Identifikácia novej triedy inhibítorov napäťovo riadeného draslíkového kanála, Kv1.3, s imunosupresívnymi vlastnosťami. Biochemistry 2002;41:7781–7794.

33. Varga Z, Company T, Papp F, a kol. Expresia draslíkových kanálov v ľudských CD4 plus regulačných a naivných T bunkách od zdravých jedincov a pacientov so sklerózou multiplex. Immunol Let 2009;124:95–101.

34. Jukkola P, Gu Y, Lovett-Racke AE, Gu C. Potlačenie zápalovej demyelinizácie a degenerácie axónov prostredníctvom inhibície Kv3 kanálov. Front Mol Neurosci 2017;10:344.

35. Moriguchi K, Miyamoto K, Fukumoto Y, Kusunoki S. 4-Aminopyridín zlepšuje relapsujúcu-remitujúcu experimentálnu autoimunitnú encefalomyelitídu u myší SJL/J. J Neuroimmunol 2018;323:131–135.

36. Gobel K, Wedell JH, Herrmann AM, a kol. 4-Aminopyridín zlepšuje mobilitu, ale nie priebeh ochorenia na zvieracom modeli roztrúsenej sklerózy. Exp Neurol 2013;248: 62–71.

37. Dietrich M, Koska V, Hecker C, et al. Ochranné účinky 4-aminopyridínu pri experimentálnej optickej neuritíde a roztrúsenej skleróze. Mozog 2020;143:1127–1142.

38. Grimaldi M, Atzori M, Ray P, Alkon DL. Mobilizácia vápnika z vnútrobunkových zásob, zosilnenie prechodov vápnika vyvolaných neurotransmitermi a kapacitný vstup vápnika 4-aminopyridínom. J Neurosci 2001;21:3135–3143.

39. van Diemen HA, Polman CH, Koetsier JC, van Loenen AC, Nauta JJ, Bertelsmann FW. 4-Aminopyridín u pacientov so sklerózou multiplex: dávkovanie a hladina v sére súvisiace s účinnosťou a bezpečnosťou. Clin Neuropharmacol 1993;16:195–204.

40. Davis FA, Stefoski D, Rush J. Perorálne podávaný 4-aminopyridín zlepšuje klinické príznaky roztrúsenej sklerózy. Ann Neurol 1990;27:186–192.

41. Stefoski D, Davis FA, Faut M, Schauf CL. 4-Aminopyridín zlepšuje klinické príznaky roztrúsenej sklerózy. Ann Neurol 1987;21:71–77.

42. Stefoski D, Davis FA, Fitzsimmons WE, Luskin SS, Rush J, Parkhurst GW. 4- Aminopyridín pri roztrúsenej skleróze: dlhodobé podávanie. Neurológia 1991;41: 1344–1348.

43. Jones RE, Heron JR, Foster DH, Snelgar RS, Mason RJ. Účinky 4-aminopyridínu u pacientov so sklerózou multiplex. J Neurol Sci 1983;60:353-362.

44. van Diemen HA, Polman CH, van Dongen TM, a kol. Účinky 4-aminopyridínu na klinické príznaky roztrúsenej sklerózy: randomizovaná, placebom kontrolovaná, dvojito zaslepená, skrížená štúdia. Ann Neurol 1992;32:123–130.

45. Polman CH, Bertelsmann FW, van Loenen AC, Koetsier JC. 4-aminopyridín pri liečbe pacientov so sklerózou multiplex. Dlhodobá účinnosť a bezpečnosť. Arch Neurol 1994;51:292–296.

46. ​​Romani A, Bergamaschi R, Candeloro E, Alfonsi E, Callieco R, Cosi V. Únava pri roztrúsenej skleróze: multidimenzionálne hodnotenie a odpoveď na symptomatickú liečbu. Mult Scler 2004;10:462–468.

47. Rossini PM, Pasqualetti P, Pozzilli C, a kol. Únava pri progresívnej roztrúsenej skleróze: výsledky randomizovanej, dvojito zaslepenej, placebom kontrolovanej krížovej štúdie s perorálnym 4-aminopyridínom. Mult Scler 2001;7:354–358.

48. Hauser SL, Johnston SC. 4-aminopyridín: nový život pre starú drogu. Ann Neurol 2010; 68:A8–A9.

49. Schwid SR, Petrie MD, McDermott MP, Tierney DS, Mason DH, Goodman AD. Kvantitatívne hodnotenie 4-aminopyridínu s predĺženým uvoľňovaním na symptomatickú liečbu roztrúsenej sklerózy. Neurológia 1997;48:817–821.

50. Goodman AD, Bethoux F, Brown TR, a kol. Dlhodobá bezpečnosť a účinnosť dalfampridínu pri poruche chôdze u pacientov so sklerózou multiplex: výsledky otvorených predĺžení dvoch klinických štúdií fázy 3. Mult Scler 2015;21:1322–1331.

51. Hobart J, Ziemssen T, Feys P a kol. Posúdenie klinicky významných zlepšení v samostatne hlásenej schopnosti chôdze u účastníkov so sklerózou multiplex: výsledky z randomizovanej, dvojito zaslepenej, fázy III ENHANCE štúdie fampridínu s predĺženým uvoľňovaním. CNS lieky 2019;33:61–79.

52. Macdonell R, Nagels G, Lapland DA, a kol. Zlepšený vplyv roztrúsenej sklerózy na zdravie pacientov: štúdia ENABLE PR-fampridínu. Mult Scler 2016;22: 944–954.

53. Noble M, Tseng K-CC, Li H, Elfar JC. 4-Aminopyridín ako jediné činidlo na diagnostiku a liečbu ťažkého poranenia rozdrvením nervu. Mil Med 2019;184(suppl 1):379–385.