ČASŤ 1 Príprava a vyhodnotenie transdermálneho podávania fenyletanoidových glykozidov Cistanche Tubulosa na báze mikroemulzie

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

JIANHUA YANG1*, HUANHUAN XU1-3* a kol.

Abstraktné.

Primárnym cieľom tejto štúdie bolo vyvinúť novú mikroemulznú (ME) formuláciu na dodaniefenyletanoidový glykozid z cistanche(PG) na použitie v prípravkoch na zosvetľovanie pokožky a opaľovacích krémoch. Olejová fáza sa vybrala na základe rozpustnosti liečiva, zatiaľ čo povrchovo aktívna látka a kosurfaktant sa skrínovali a vybrali na základe ich solubilizačnej kapacity a účinnosti, s ktorou tvorili ME. Pseudoternárne fázové diagramy sa skonštruovali na vyhodnotenie oblastí ME a ako vehikulá sa vybralo päť formulácií ME olej vo vode. Na optimalizáciu ME formulácie a vyhodnotenie jej priepustnosti v porovnaní s fyziologickým roztokom sa uskutočnili in vitro experimenty s permeabilitou kožou. Fyzikálno-chemické vlastnosti optimalizovaného ME a permeačná schopnosť PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) dodané týmto MŽP. Optimalizovaná ME formulácia pozostávala z izopropylmyristátu (7 percent, hmotn.), Cremorphor EL (21 percent hmotn.), propylénglykolu (7 percent hmotn.) a vody (65 percent hmotn.). Kumulatívne množstvo PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) ktorý prenikal cez vyrezanú myšaciu kožu, keď bol prenášaný ME, bol ~ 1,68-násobok toho, keď bol PG prenášaný iba fyziologickým roztokom. Kumulatívne množstvo PG v mikroemulzii (4149,650±37,3 µg·cm-2 ) bolo výrazne vyššie ako množstvo PG vo fyziologickom roztoku (2288,63±20,9 µg· cm-2). Okrem toho koeficient priepustnosti ukázal, že optimalizovaná mikroemulzia bola účinnejším nosičom na transdermálne podanie PG ako kontrolný roztok (8,87 ± 0,49 cm/hx10-3 vs. 5,41±0,12 cm/hx10-3). Celkovo sa permeačná schopnosť PG prenášaného ME významne zvýšila v porovnaní s fyziologickým roztokom.

cistanche

Úvod

Herba cistanche,tonizujúca bylina bežne rozšírená v púštnych oblastiach sa často používa v tradičnej čínskej medicíne. K dnešnému dňu bolo vykonaných viacero štúdií na skúmanie jeho biofarmaceutických vlastností, vrátane zlepšenia pamäti, sexuálnej potencie, zachytávania voľných radikálov a aktivity proti starnutiu (1). Hlavnou zložkou H. cistanche jefenyletanoidový glykozid (PG). Predchádzajúce štúdie odhalili, že PG inhibuje aktivitu tyrozinázy, enzýmu obmedzujúceho rýchlosť syntézy melanínu v ľudskom tele (2). Okrem toho PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) sa uvádza, že je zodpovedný za vychytávanie 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylových radikálov (3) a ochranu keratinocytov pred ultrafialovým (UV) žiarením. Preto môže mať táto zložka potenciál pri depigmentácii kože. Miestna medikácia sa bežne používa v kozmetických oblastiach, pričom liečivo sa dodáva priamo na povrch tela (4). Mikroemulzie (ME) sú novým systémom na dodávanie liečiv, ktorý sa bežne skladá z oleja, povrchovo aktívnej látky, kosurfaktantu a vodnej fázy (5) a uvádza sa, že zlepšujú rýchlosť a absorpciu lipofilných liečiv (6). Okrem toho sa vzhľadom na jeho uspokojivú rozpustnosť, nízku dráždivosť kože a vysokú permeabilitu očakáva jeho použitie pri lokálnom podávaní liečiv (7,8). Pokiaľ je nám známe, bolo vykonaných niekoľko štúdií, kde sa PG dodával prostredníctvom lokálnej medikácie pomocou mikroemulzie. V tejto štúdii bol vytvorený nanoemulzný dodávací systém olej vo vode (O/W) na transdermálne podávanie a do nanoemulzie bol začlenený PG (9, 10). Medzitým sa príprava a charakterizácia nanoemulzie na báze PG uskutočnila skúmaním transdermálneho uvoľňovania in vitro.

Materiály a metódy Reagencie.

Cremorphor EL a izopropylmyristát (IPM) boli zakúpené od Sigma Aldrich; Merck Millipore (Darmstadt, Nemecko). Etanol, kyselina olejová (OA) a Tween-80 boli zakúpené od Guangcheng Chemical Reagent Co., Ltd. (Tianjin, Čína). Etyloleát bol zakúpený od Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, Čína). Všetky použité chemikálie a rozpúšťadlá boli čistoty analytického činidla. Príprava a vyhodnotenie transdermálneho podávania fenyletanoidových glykozidov Cistanche tubulosa na báze mikroemulzie JIANHUA YANG1*, HUAN HUAN XU1-3*, SHANSHAN WU2, BOWIE JU2, DANDAN ZHU2, YAO YAN1, MEI WANG2 a JUMPING{9} } Katedra farmácie, Prvá pridružená nemocnica; 2 Department of Natural Medicines, College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang 830011; 3 Department of Pharmacy, Kanghua Hospital, Dongguan, Guangdong 523003, PR China Prijaté 2. decembra 2015; Prijaté 29. novembra 2016, DOI: 10.3892/MMR.2017.6147 Korešpondencia pre: Dr. Junping Hu, Katedra prírodných liečiv, Vysoká škola farmácie, Xinjiang Medical University, 393 Xinyi Road, Urumqi, Xinjiang 8300011, PR5 China E-mail:55 @yeah.net * Rovnaký príspevok Kľúčové slová: fenyletanoidový glykozid, mikroemulzia, transdermálne podávanie, zosvetľovač pokožky, opaľovací krém yang a kol.: ME-BASED PG PRE KOZMETICKÉ APLIKÁCIE 1110 Príprava PhGs. PhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) bol pripravený ako je rutinne opísané (11).

Sušené na vzduchuC. tubulosabol napájaný a extrahovaný perkoláciou s 80 percent EtOH. Perkolát sa odparil pod tlakom, nasledovala filtrácia zvyškovej tekutiny. Filtrát sa skoncentroval a chromatografoval na kolóne s makroporéznou živicou SP-825 s použitím 0, 30, 50, 70 a 90 percentného EtOH vo vode ako eluentov. Eluáty 30-50 percent EtOH sa skoncentrovali a vysušili, čím sa získala frakcia bohatá na PhG. UV spektrofotometria ukázala obsah PhG(fenyletanoidový glykozid z cistanche) bolo 87,6 percenta. Skríning olejov, povrchovo aktívnych látok a kosurfaktantov na ME. Uskutočnili sa testy rozpustnosti, aby sa vybrali vhodné zložky na prípravu ME formulácie s vysokou kapacitou náplne liečiva. V tomto procese sa nadbytočné množstvo PG pridalo do 4 ml každého z nasledujúcich činidiel: IPM, tekutý parafín, OA, Cremophor EL, Tween‑80, absolútny etanol, propylénglykol, glycerín a PEG400 , resp. Potom sa výsledná zmes recipročne pretrepávala pri 37 °C počas 72 hodín, nasledovala centrifugácia pri 12 830 xg počas 10 minút. Následne sa peleta resuspendovala v metanole a PG sa určilo pomocou UV spektrofotometrie pri 333 nm. Ako slepá kontrola slúžili vhodné zriedené roztoky olejov, povrchovo aktívnych látok a korozpúšťadiel v metanole. Konštrukcia fázového diagramu. Na získanie koncentračného rozsahu zložiek pre existujúcu hranicu mikroemulzie boli skonštruované pseudo ternárne fázové diagramy pomocou metódy vodnej titrácie, ako už bolo opísané (12). Boli pripravené trojfázové diagramy s hmotnostnými pomermi povrchovo aktívnej látky ku kosurfaktantu 1:3, 1:1 a 3:1. Olejová fáza a zmes povrchovo aktívnej látky sa potom zmiešali v hmotnostných pomeroch 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2 a 9:1. . Zmes oleja a povrchovo aktívnej látky sa homogénne zmiešala a po kvapkách sa zriedila čistenou vodou za magnetického miešania (300 otáčok za minútu) pri teplote miestnosti, kým sa nezískal transparentný ME. Koncentrácia zložiek bola zaznamenaná, aby sa doplnil pseudo ternárny fázový diagram. Na základe týchto diagramov boli vybrané vhodné koncentrácie materiálov na prípravu ME na báze PG. Príprava ME a vodného roztoku PG. Celkovo sa vybralo 5 ME (ME{41}}) podľa fázových diagramov s hmotnostným pomerom povrchovo aktívna látka:kosurfaktant 3:1 (tabuľka I). Mikroemulzné systémy boli pripravené zmiešaním oleja so zmesou povrchovo aktívnej látky a kosurfaktantu a voda bola pridaná presne do olejových fáz pomocou magnetického miešania (300 ot./min.) pri 37 °C. Systémy sa ekvilibrovali použitím jemného magnetického miešania počas 30 minút, po čom nasledovalo rozpustenie príslušného množstva PG pod ultrazvukom. Vodný roztok bol pripravený s rovnakým obsahom PG rozpusteným v čistenej vode. Charakterizácia mikroemulzie. Priemerná veľkosť kvapôčok a index polydisperzity ME boli hodnotené fotónovou korelačnou spektroskopiou (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, UK). Všetky vzorky sa zriedili vodou v pomere 1:5 a prefiltrovali sa cez 0,22 um filter. Test sa uskutočnil v termostatickej komore pri 25 °C v troch vyhotoveniach. Morfológia PG mikroemulzií bola pozorovaná pomocou transmisnej elektrónovej mikroskopie (JEM-100CXII; JEOL Ltd., Tokio, Japonsko). Stručne, jedna kvapka zriedenej vzorky bola nanesená na medenú mriežku potiahnutú filmom, po čom nasledovalo farbenie jednou kvapkou 2% vodného roztoku kyseliny fosfowolfrámovej.

Priemerné priemery kvapôčok mikroemulzií boli stanovené pomocou fotónovej korelačnej spektroskopie (BI{{0}}SM; Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY, USA) pri teplote miestnosti. Viskozita vozidiel ME bola meraná pri 25 °C pomocou digitálneho viskozimetra NDJ-8S (Shanghai Precision and Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, Čína) s č. 1 rotor nastavený na 60 ot./min. stanovenie pH. Hodnoty pH ME boli stanovené pri 25 °C pomocou digitálneho acidimetra Phs-3C (Shanghai REX Instruments Factory, Shanghai, Čína). Indexy lomu boli merané termostatickým Abbe refraktometrom (Optical Instrument Factory, Shanghai, Čína). Príprava kožných tkanív. Samce myší Kunming s hmotnosťou 20 g boli zakúpené od Experimental Animal Center of Xinjiang Medical University (Xinjiang, Čína). 10 myší (vo veku 6 týždňov) bolo podrobených adaptívnemu kŕmeniu počas 1 týždňa v cykle 12 h svetlo/12 h tma, pri izbovej teplote (24 ± 2 °C), s vlhkosťou 50 ± 15 percent. Všetky zvieratá mali prístup k štandardnej strave a vode. Vlasy boli odstránené elektrickým strojčekom. Po konečnej anestézii chloralhydrátom (10 percent) subkutánnou injekciou sa z brušnej oblasti vyrezali kožné tkanivá a odstránil sa podkožný tuk a spojivové tkanivo. Tkanivá sa umiestnili cez noc do chladničky pri 4 °C. Protokoly štúdie schválila Etická komisia Lekárskej univerzity v Xinjiang (Xinjiang, Čína). Štúdia permeácie in vitro. Permeačné experimenty sa uskutočňovali tak, ako bolo opísané vyššie (12). Vyrezaná koža bola upnutá medzi donorovú a receptorovú komoru vertikálnej difúznej cely s účinnou difúznou plochou 2,8 cm2. Receptorová komora bola naplnená čerstvým, normálnym fyziologickým roztokom. Difúzna bunka sa udržiavala na 37 °C pomocou recirkulujúceho vodného kúpeľa a roztok v receptorových komorách sa kontinuálne miešal pri 200 ot./min. Potom sa testovaná formulácia (1,0 ml) jemne umiestnila do donorovej komory. Následne sa odobrali 3 ml roztoku v receptorovej komore a nahradili sa rovnakým objemom čerstvého normálneho fyziologického roztoku vo vopred stanovených intervaloch (0, 2, 4, 6, 8, 10 a 24 h). Vzorka získaná z receptorovej komory sa použila na stanovenie PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche)hladiny pomocou UV spektroskopie pri vlnovej dĺžke 333 nm. Kumulatívne množstvo PG, ktoré preniklo cez vyrezanú myšaciu kožu, sa vypočítalo podľa nasledujúceho vzorca:

Kde Qn bolo akumulované množstvo v danom čase t, Cn je koncentrácia liečiva v prijímacom roztoku v každom čase odberu vzoriek, Ci je koncentrácia liečiva vo vzorke, S je účinná difúzna plocha (S{{0 }}.8 cm2) a V0 a Vi sú objemy roztoku zberača a vzorky. Kumulatívne množstvo (Qn) PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche)permeovaný bol vynesený ako funkcia času (t) pre každú formuláciu. Rýchlosť permeácie PG v rovnovážnom stave (Jss, ug/cm-2/h-1) cez kožu myši sa vypočítala zo sklonu lineárnej časti grafov Qnversus času. Koeficient priepustnosti (Kp, cm/h) sa vypočítal podľa nasledujúceho vzorca:

Kde Kp je koeficient permeability, Jss je eflux vypočítaný v ustálenom stave a C0 predstavuje koncentráciu liečiva, ktorá zostala konštantná vo vehikule. Štúdia retencie kože. Nasledujúce časti podrobne opisujú porovnanie ex vivo permeačného správania, kumulatívneho množstva, permeačnej rýchlosti, koeficientu permeability a charakteristík retencie pokožky medzi optimalizovanými ME formuláciami (obsah PG, 2 percentá, w/w) a vodným roztokom. Na konci permeačného experimentu sa pomocou homogenizačnej metódy stanovila zvyšková hladina liečiva v koži. Po premytí normálnym fyziologickým roztokom sa koža narezala na malé rezy a umiestnila sa do sklenenej skúmavky obsahujúcej 3 ml metanolu v ľadovom kúpeli. Vzorka sa homogenizovala rýchlosťou 12000 ot./min. rpm počas 2 minút a potom centrifugujte pri 12 830 xg horizontálne počas 30 minút pri 25 °C. Supernatant prešiel cez mikroporézny filter (0,45 um) a PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche)hladiny v supernatante boli stanovené UV spektroskopiou pri vlnovej dĺžke 333 nm. Štúdia stability. Fyzikálna stabilita ME nabitého PG bola skúmaná prostredníctvom čírosti, analýzy veľkosti častíc a fázovej separácie, ktorá bola pozorovaná pri 2–8 °C a pri teplote miestnosti počas 3 mesiacov. Centrifugácia sa uskutočnila pri 12 830 xg počas 30 minút pri 25 °C, aby sa zhodnotila fyzikálna stabilita ME. Separácia fáz a koncentrácia PG sa skúmali mesačne, aby sa posúdila optimálna skladovacia teplota. Chemická stabilita bola hodnotená na formuláciách naplnených liečivom, skladovaných pri 2‑8 °C a pri teplote miestnosti, s obsahom PG stanoveným UV spektrofotometriou pri 333 nm. Test citlivosti kože. Testy citlivosti kože sa uskutočnili na králikoch (s hmotnosťou 2,02,5 kg), aby sa vyhodnotil dráždivý potenciál lokálnej aplikácie vyvinutej formulácie, ako bolo opísané vyššie (13). Deväť holandských králikov (vo veku 16 týždňov, vážiace 2.0-2,5 kg; 5 samcov a 4 samice) bolo získaných z Experimental Animal Center of Xinjiang Medical University. Zvieratá sa podrobili adaptívnemu kŕmeniu počas 1 týždňa v cykle 12 h svetlo/12 h tma, pri teplote miestnosti (24 ± 2 °C), s vlhkosťou 50 ± 15 percent. Všetky zvieratá mali prístup k štandardnej strave a vode. Na obetovanie bola použitá vzduchová embólia. Protokoly použité v tejto štúdii boli schválené etickým výborom lekárskej univerzity Xinjiang (Xinjiang, Čína). Chĺpky na chrbte boli odstránené ~ 24 hodín pred podaním ME formulácií. Zvieratá boli rozdelené do nasledujúcich skupín: skupina s optimalizovaným ME (n=3) s topickým podávaním optimalizovaného ME obsahujúceho 2 percentá (w/w) PG; skupina s PG soľným roztokom (n=3), s topickým podávaním soľného roztoku obsahujúceho 2 percentá (w/w) PG; a kontrolná skupina s fyziologickým roztokom (n=3), ktorej sa lokálne podával normálny fyziologický roztok. Podávanie sa uskutočňovalo dvakrát denne počas 5 dní. Zvieratá boli pozorované na akékoľvek známky svrbenia alebo zmien na koži, vrátane erytému, papule, šupinatosti a suchosti (14). Po vysadení lieku pokračovalo pozorovanie pri jednorazovom alebo viacnásobnom podaní počas 3 dní. Skóre podráždenia testovanej oblasti sa vyhodnotilo posúdením rozsahu erytému a edému podľa nasledujúcich kritérií: 1, žiadna viditeľná reakcia; 2, mierna reakcia; 3, mierna reakcia a 4, ťažká reakcia (15,16). Nakoniec sa celkové skóre podráždenia pre každý stav vypočítalo pomocou nasledujúcej rovnice:

Štatistická analýza. Údaje sú prezentované ako priemer ± štandardná odchýlka. Analýza údajov sa uskutočnila pomocou jednosmernej analýzy rozptylu, po ktorej nasledoval test najmenej významného rozdielu. Údaje boli analyzované pomocou softvéru SPSS verzie 19.0 (IBM SPSS, Armonk, NY, USA). P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Výsledky a diskusia

Skríning olejov, povrchovo aktívnych látok a ko-povrchovo aktívnych látok na ME. PG(fenyletanoidový glykozid z cistanche)bol takmer nerozpustný v kvapalnom parafíne a kyseline olejovej, ale mierna rozpustnosť bola pozorovaná v IPM (tabuľka II). IPM zvyšuje koeficient difúzie v koži a vedie k zvýšeniu koeficientu permeácie (17,18). Okrem toho sa IPM bežne vyberá na prípravu ME vďaka svojim dobre známym vlastnostiam zvyšujúcim permeáciu a biokompatibilite. Výber povrchovo aktívnej látky je rozhodujúci pre úspešnú formuláciu ME, pretože prispieva k zníženiu medzifázového napätia vytvorením filmu na rozhraní oleja a vody (19). V tejto štúdii PG vykazoval vyššiu rozpustnosť v Cremophore-EL (40,193 mg/ml; tabuľka II) v porovnaní s Tween-80 (28,051 mg/ml; tabuľka II). Preto bol CremophorEL vybraný na použitie v ďalších štúdiách kvôli jeho profilu rozpustnosti a nízkej úrovni toxicity ako neiónovej povrchovo aktívnej látky. Okrem toho jeho vodný roztok preukázal dobrú rozpustnosť PG. Najvyššia rozpustnosť PG medzi spolupôsobiacimi povrchovo aktívnymi látkami bola pozorovaná v propylénglykole (48,714 mg/ml; tabuľka II). Okrem toho má propylénglykol schopnosť vytvárať ME s IPM a CremophorEL. Celkovo sa na formuláciu ME s obsahom PG použili IPM, CremophorEL a propylénglykol ako olejová fáza, povrchovo aktívna látka a spolupôsobiaca povrchovo aktívna látka. Konštrukcia pseudoternárnych fázových diagramov. V tejto štúdii boli vytvorené fázové diagramy na výber koncentračného rozsahu zložiek pre mikroemulzie a označené oblasti označujú čistú oblasť O/WME (obr. 1). Už skôr bol zaznamenaný úzky vzťah medzi hydratačným účinkom stratum corneum a dermálnou permeáciou (20) a termodynamická aktivita liečiv pri ME bola významnou hnacou silou uvoľňovania a prenikania liečiv do kože (20,21 ). Termodynamická aktivita liečiv v ME s nižším obsahom zmesi povrchovo aktívnych látok sa ukázala ako dôležitá hnacia sila pre uvoľňovanie a penetráciu liečiva do kože (22,23).

The decreased concentration of surfactant in dispersed systems may also increase the rate of drug release and its permeation in the skin (24,25). Thus, the water content ranged between 50 and 70%, while that of the surfactant and cosurfactant ranged between 20 and 45%. The microemulsion domain was determined by visual inspection for clarity and fluidity. The rest of the region in the phase diagrams represents turbid and conventional emulsions based on visual observation (Fig. 1). No liquid crystalline structure was observed using the cross polarizer. The area of the O/W ME region was expanded following the increase of the Km value (Fig. 1). These findings were consistent with previous studies, which demonstrated that a higher level of surfactant reduces interfacial tension of the colloidal solution more effectively, thereby improving the fluidity of the interface and increasing the entropy of the system (21,24). Thus, it is reasonable to speculate that the effect of CremophorEL on ME regions depends on the other ME components, especially the cosurfactant. The combination of short to medium carbon chain length alcohols, including propylene glycol, with single-chain surfactants, may lower interfacial tension due to increased fluidity at the interface. Additionally, medium carbon chain length alcohols may induce elevation of miscibility of the aqueous and oily phases due to the partitioning behavior between the two phases. Finally, in the presence of a Km ratio of 3:1, the ratio of the surfactant mixture to oil was 1:9 or 2:8. MEs prepared with a ratio of surfactant mixture to oil >2:8 boli zakalené a nestabilné (obr. 2).

Konečné zloženia ME1‑5 sú uvedené v tabuľke I. Príprava a charakterizácia ME. Fyzikálne vlastnosti ME1-5 sú uvedené v tabuľke III. Disperzné systémy boli makroskopicky identické, homogénne a transparentné, bez akýchkoľvek precipitátov. Stredná veľkosť kvapiek týchto ME sa pohybovala medzi 30},56 a 79,21 nm (obr. 3; tabuľka III), pričom hodnoty indexu polydisperzity sa pohybovali medzi 0,187 a 0,321 (Tabuľka III). To naznačovalo rovnomerné ME s úzkou distribúciou veľkosti. Okrem toho sa veľkosť kvapiek zväčšovala úmerne s obsahom oleja, ale zmenšovala sa s obsahom zmesi povrchovo aktívnych látok. Tento jav možno pripísať expanzii jadra ME oleja a vysokej koncentrácii povrchovo aktívnej látky, ktorá silne znižuje medzifázové napätie oleja a vody, aby sa zmenšila veľkosť kvapiek. Okrem toho sa zvýšila viskozita ME v dôsledku zvýšenej hladiny povrchovo aktívnej látky a zníženia vody. Hodnoty pH všetkých ME spadali do vhodného rozsahu 5.{15}}.5 (tabuľka III), a tak boli kompatibilné s hodnotami kožných tkanív. Pokiaľ ide o fyzikálnu stabilitu, v žiadnom z testovaných ME sa nepozorovala žiadna separácia fáz, lámanie alebo zrážanie liečiva, čo naznačuje, že ME mali uspokojivú termodynamickú stabilitu proti centrifugácii. Test rozpustnosti farbiva odhalil, že vo vode rozpustné farbivo (metyloranž) sa rovnomerne distribuuje v celom systéme ME, čo znamená, že vytvorený ME bol typu O/W (údaje nie sú uvedené). Mikrofotografie odhalili samostatné jednotlivé kvapky ME5 s guľovitým obrysom (obr. 4). Exvivo štúdia permeácie kožou. Permeačné profily všetkých testovaných vehikúl sledovali kinetiku uvoľňovania nultého rádu (26,27) a ME5 poskytoval najvyšší transdermálny tok PG (86,795±0,23 µg/cm{{28 }} /h-1; Obr. 5; Tabuľka III). V tejto štúdii boli stanovené účinky obsahu oleja a zmesi povrchovo aktívnych látok na permeáciu PG pokožkou. Výsledky ukázali, že povrchovo aktívne látky zvyšujú permeáciu kožou zvýšením fluidity membrány, solubilizáciou liečiva a extrakciou lipidu zo stratum corneum. Rýchlosť permeácie ME5 (86,795±0,23µg/cm-2/h-1) sa výrazne zvýšila v porovnaní s rýchlosťami permeácie ME1 (69,57±{ {48}},78, P=0.0094), ME2 (44,326±0,84, P{{50}} .0052), ME3 (79,859±0,12, P=0,039) a ME4 (58,332±0,39 µg/cm-2/h-1 , P=0.0063, obr. 5; tabuľka III) To bolo v súlade s výsledkami predchádzajúcej štúdie, v ktorej sa termodynamická aktivita nákladu ME liekov môže znižovať so zvýšením hladín povrchovo aktívnych látok (12,28 ). Viskozita ME5 (30,43±0,12 mPa.s) bola nižšia v porovnaní s ostatnými ME1 (80,51±0,87 mPa.s, P=0,0076), ME2 (47,52±0,54 mPa.s, P{{88 }}.0089), ME3 (60,49±1,34 mPa.s, P=0.0094) a ME4 (43,27±0,21 mPa.s, P=0.0059).