ČASŤ 2 Echinakozid inhibuje uvoľňovanie glutamátu potlačením Ca2 plus vstupu a proteínkinázy C závislé od napätia v termináloch cerebrokortikálnych nervov potkanov

Pre viac informácií kontaktujte:Joanna.jia@wecistanche.com

KLIKNITE SEM PRE ČASŤ 1

3. Diskusia

V tejto štúdii echinakozid, aktívna zlúčenina vHerba Cistancheinhibovali 4-aminopyridínom vyvolané uvoľňovanie glutamátu v nervových zakončeniach mozgovej kôry potkanov. Možné základné mechanizmy pre echinakozidom sprostredkovanú inhibíciu uvoľňovania glutamátu sú ďalej skúmané a diskutované tu.

Cistanche deserticola má mnoho účinkov, kliknite sem a dozviete sa viac

3.1. Mechanizmy, na ktorých je založená inhibícia uvoľňovania glutamátu sprostredkovaná echinakozidom Uvoľňovanie glutamátu

evokovaný 4-aminopyridínom obsahuje dve zložky: fyziologicky relevantnú zložku závislú od Ca2 plus, ktorá je produkovaná exocytózou synaptických vezikúl obsahujúcich glutamát; a Ca2 plus-nezávislá zložka, ktorá pochádza z predĺženej depolarizácie, ktorá spôsobuje membránový potenciálom sprostredkovaný posun ustáleného stavu glutamátového transportéra smerom von, čím ovplyvňuje cytosolický odtok glutamátu [31]. Tu sme to pozorovaliechinakozidneinhiboval významne 4-aminopyridínom vyvolané uvoľňovanie glutamátu v prítomnosti média bez Ca2 plus (nezávislé uvoľňovanie Ca2 plus). Ďalej pozorovanéechinakozid-sprostredkovanej inhibícii 4-aminopyridínom vyvolaného uvoľňovania glutamátu účinne zabránil bafilomycín A1 (ktorý vyčerpáva obsah glutamátu v synaptických vezikulách), ale nie DL-TBOA (ktorý neselektívne inhibuje všetky subtypy transportérov excitačných aminokyselín). Tieto výsledky tomu nasvedčujúechinakozidovplyvňuje Ca2 plus-závislú exocytózu uvoľňovania glutamátu bez ovplyvnenia Ca2plus-nezávislej cytozolickej efluxy glutamátu cez reverziu glutamátového transportéra plazmatickej membrány nervového terminálu. V synaptických termináloch inhibícia Na plus kanála alebo aktivácia K plus kanála stabilizuje excitabilitu membrány a následne znižuje evokovaný vstup Ca2 plus a uvoľňovanie neurotransmiterov [32,33]. Preto je základný potenciálny mechanizmusechinakozid-sprostredkovaná inhibícia uvoľňovania glutamátu zahŕňa zníženie synaptozomálnej excitability. Táto možnosť je však neudržateľná na základe dvoch pozorovaní: (1) 4-aminopyridínom vyvolaná depolarizácia membránového potenciálu, meraná farbivom DiSC3(5) citlivým na membránový potenciál, nebola ovplyvnená pridanímechinakozid; a (2) echinakozid neovplyvnil 4-aminopyridínom vyvolané Ca2 plus-nezávislé uvoľňovanie glutamátu, zložku uvoľňovania, ktorá závisí len od membránového potenciálu [31]. Ak účinok nie je spôsobený potlačením synaptozomálnej excitability, môže sa prejaviť znížením aktivity Ca2 plus kanálov Cav2.2 (N-typ) a Cav2.1 (P/Q-typ) spojeným s glutamátovou exocytózou v nervové zakončenia [34–36]. Používaním fura{15}} to demonštrujemeechinakozidvýznamne znižuje 4-aminopyridínom vyvolané zvýšenie koncentrácie Ca2 plus. Okrem toho naše údaje ukazujú, že inhibičný účinokechinakozidna 4-aminopyridínom vyvolané uvoľňovanie glutamátu sa znížilo zo 42,4 percent ˘ 2,3 percenta na 12,1 percent ˘ 3,9 percenta po expozícii blokátorom Cav2.2 (N-typ) a Cav2.1 (P/Q-typ) Ca2 plus kanály. Okrem toho sme to pozorovaliechinakozidpokračovala v signifikantnej inhibícii 4-aminopyridínom vyvolaného uvoľňovania glutamátu v prítomnosti intracelulárnych inhibítorov uvoľňovania Ca2 plus. Tieto výsledky naznačujú, že súčasné potlačenie aktivity Ca2 plus kanála Cav2.2 (typ N) a Cav2.1 (typ P/Q) je potenciálnym mechanizmom, ktorý je základomechinakozid-sprostredkovaná inhibícia uvoľňovania glutamátu. Kombinovaná aktivácia Cav2.2 (typ N) a Cav2.1 (typ P/Q) Ca2 plus kanálová aktivita však nemohla blokovať účinokechinakozidúplne. Na inhibícii sa teda môžu podieľať iné neidentifikované typy Ca2 plus kanálov alebo iné presynaptické dráhy. Napríklad GABAA receptory sú prítomné na presynaptickej úrovni a ukázalo sa, že ich aktivácia inhibuje Ca2 plus influx a uvoľňovanie glutamátu [37]. V tejto štúdii antagonisty GABAA receptora SR95531 a bikukulín neblokovali echinakozidom sprostredkovanú inhibíciu uvoľňovania glutamátu, čo naznačuje, že receptory GABAA sa nezúčastňujú na redukcii napäťovo závislej aktivity Ca2 plus kanála a na následnej inhibícii uvoľňovania glutamátu.

Vstup Ca2 plus cez napäťovo závislé kanály Ca2 plus aktivuje niekoľko proteínkináz spojených s uvoľňovaním glutamátu v nervových zakončeniach vrátane mitogénom aktivovanej proteínkinázy, proteínkinázy C a proteínkinázy A. Tu demonštrujeme, že inhibítory proteínkinázy C účinne antagonizovaliechinakozid-sprostredkovaná inhibícia uvoľňovania glutamátu; napriek tomu bol mitogénom aktivovaný inhibítor proteínkinázy PD98059 alebo inhibítor proteínkinázy A H89 neúčinný. Okrem toho, že. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 13 4-aminopyridínom indukovanej fosforylácie proteínkinázy C sa znížila v synaptozómoch po predbežnom ošetreníechinakozidv koncentrácii účinnej na inhibíciu uvoľňovania glutamátu. Preto signálna dráhaechinakozid-sprostredkovaná inhibícia uvoľňovania glutamátu môže zahŕňať proteínkinázu C. Proteínkináza C je dôležitý intracelulárny signálny systém, ktorý je prítomný na presynaptickej úrovni a má kľúčovú úlohu pri exocytóze neurotransmiterov. Napríklad niekoľko synaptických proteínov zapojených do prenosu alebo náboru synaptickej vezikuly a exocytózy, ako je myristoylovaný substrát C kinázy bohatý na alanín, je fosforylovaných proteínkinázou C [38,39]. Tento proces fosforylácie možno zvýšiť depolarizáciou stimulovaným vstupom Ca2 plus, čo uľahčuje uvoľňovanie glutamátu [40]. Preto môžeme dôvodne špekulovať, že inhibičný účinokechinakozidna Ca2 plus vstup pozorovaný tu môže znížiť aktivitu proteínkinázy C a následne uvoľňovanie glutamátu.

3.2. Terapeutické dôsledky

Excitotoxicita, patologický proces spôsobený nadmerným uvoľňovaním glutamátu a aktiváciou glutamátových receptorov, je hlavnou príčinou smrti neurónov pri akútnych a chronických poruchách mozgu, ako je mŕtvica, traumatické poranenie mozgu, Parkinsonova a Alzheimerova choroba [13,41] a terapeutické stratégie. zahŕňajúce inhibíciu uvoľňovania glutamátu môžu byť sľubnými neuroprotektívnymi stratégiami na liečenie takýchto chorôb.Echinakozidbolo potvrdené, že preniká hematoencefalickou bariérou (BBB) ​​a vykazuje neuroprotektívne účinky v rôznych in vivo modeloch neurotoxicity [8,10–12,42]. Hoci mechanizmus týchto neuroprotektívnych účinkov nie je úplne objasnený, bolo popísaných niekoľko možných mechanizmov vrátane inhibície zápalovej odpovede, stabilizácie mitochondriálnej funkcie, antioxidácie, zachytávania voľných radikálov a napodobňovania neurotrofickej funkcie [5,9,12,42]. V súčasnej štúdii môže schopnosť echinakozidu znižovať uvoľňovanie glutamátu z nervových zakončení čiastočne vysvetliť jeho neuroprotektívny mechanizmus. Či však tento účinok prispieva k zjavnému terapeutickému potenciálu echinakozidu pri mozgových poruchách spojených s glutamátovou excitotoxicitou, si vyžaduje ďalší výskum.

4. Materiály a metódy

4.1. Chemikálie

Fura-2-acetoxymetylester (Fura{1}}AM) a 3',3',3'-dipropyltiadikarbocyanín jodid [DiSC3(5)] boli zakúpené od Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). ω-konotoxín MVIIC, rotttlerin,2-[1-(3-dimetylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl)maleimid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahydro-13-metyl-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrolo[3,{ {27}}c]karbazol-12-propánnitril (Go6976) a N-[2-(p-brómcinnamylamino)etyl]-5-izochinolínsulfónamid (H89) boli zakúpené od TocrisBioscience (Bristol, UK). Echinakozid, dantrolén, DL-treo-beta-benzyl-oxyaspartát (DL-TBOA),7-chlór-5-(2-chlorofén)-1,5-dihydro -4,1-benzotiazepín-2(3H)-ón (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoxyfenyl)-4 H-1-benzopyrán-4-ón) (PD98059), etylénglykol bis(-aminoetyléter)-N,N,N1,N1-tetraoctová kyselina (EGTA) a všetky ostatné činidlá boli zakúpené od Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Zvieratá

Boli použité dvojmesačné samce potkanov Sprague-Dawley. Zvieratá boli chované v štandardných podmienkach prostredia (22 ˘ 1 ˝C; 50 percent relatívna vlhkosť; 12-hodinový cyklus svetlo/tma) a bol im umožnený neobmedzený prístup k potrave a vode. Zvieratá boli usmrtené dekapitáciou a mozgová kôra bola rýchlo odstránená pri 4 °C. Experimentálne postupy schválil Fu Jen Institutional Animal Care and Utilization Committee (A10259) v súlade s National Institute of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Vyvinulo sa maximálne úsilie na minimalizáciu utrpenia zvierat a na použitie minimálneho počtu zvierat potrebných na dosiahnutie spoľahlivých výsledkov.

4.3. Synaptozomálne prípravky

Synaptozómy boli purifikované z mozgovej kôry potkanov na diskontinuálnych Percollových gradientoch, ako bolo opísané vyššie [43,44]. Stručne povedané, tkanivo sa homogenizovalo v médiu obsahujúcom 0,32 M sacharózu (pH 7,4), homogenát sa centrifugoval 10 min pri 3000ˆ g (5{{25 }}00 otáčok za minútu v rotore JA 25.5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) a 4 °C a supernatant sa znova centrifugoval 12 minút pri 14 500ˆ g ( 11,000 ot./min v rotore JA 25.5). Peleta sa jemne resuspendovala v 0,32 M sacharóze (pH 7,4) a alikvot tejto synaptozomálnej suspenzie (2 ml) sa umiestnil na 3 ml Percoll diskontinuálny gradient obsahujúci 0,32 M sacharózu, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiotret, 3 percentá, 10 percent a 23 percent Percoll (pH 7,4). Po odstredení pri 32 500 ˆ g (16 500 ot./min v rotore JA 20.5) počas 7 minút pri 4 ˝C sa synaptozómy izolovali z 10 % až 23 % pásov Percoll a zriedili sa na konečný objem 30 ml. HEPES pufrovacieho média (140 mM NaCI, 5 mM KCI, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2 x 6H20, 1,2 mM Na2HP04, 10 mM glukózy a 10 mM HEPES (pH 7,4)). Po ďalšej centrifugácii pri 27,000ˆg (15 000 ot./min v JA 25.5) počas 10 minút sa synaptozómová peleta resuspendovala v 3 ml HEPES pufrovacieho média a obsah proteínu sa stanovil pomocou Bradfordovho testu. Nakoniec sa 0,5 mg suspenzie synaptozómov zriedilo v 10 ml tlmivého média HEPES a centrifugovalo pri 3000ˆg (5000 ot./min v rotore JA 20.1) počas 10 minút. Supernatant bol zlikvidovaný a pelety obsahujúce synaptozómy boli uložené na ľade a použité do 4 až 6 hodín.

4.4. Uvoľňovanie glutamátu

Uvoľňovanie glutamátu sa testovalo online fluorimetriou, ako už bolo opísané [45,46]. Synaptozomálne pelety boli resuspendované v pufrovom médiu HEPES (0,5 mg/ml) a predinkubované pri 37 °C počas 10 minút v prítomnosti 16 uM hovädzieho sérového albumínu, aby sa naviazali akékoľvek voľné mastné kyseliny uvoľnené zo synaptozómov počas predinkubácie. Alikvóta 2-ml synaptozómov sa preniesla do miešanej kyvety obsahujúcej 2 mM NADP plus, 50 jednotiek glutamátdehydrogenázy a 1,2 mM CaCl2 a FL fluorescencia NADPH sa merala v Perkin-Elmer LS{{ 14}} spektrofluorimeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) pri excitačných a emisných vlnových dĺžkach 340 a 460 nm. Keďže synaptozómy nie sú prístupné elektrickej stimulácii, na stimuláciu uvoľňovania glutamátu sa použil blokátor draslíkových kanálov 4-aminopyridín. 4-aminopyridín destabilizuje membránový potenciál a predpokladá sa, že spôsobuje opakovanú spontánnu depolarizáciu závislú od Na plus kanálov, ktorá sa tesne približuje in vivo depolarizácii synaptického terminálu, čo vedie k aktivácii napäťovo závislých Ca2 plus kanálov a uvoľneniu neurotransmiterov [47 ]. Údaje sa získavali v 2-sekundových intervaloch. Na konci každého experimentu sa pridal štandard exogénneho glutamátu (5 nmol). Hodnota zmeny fluorescencie FL produkovanej pridaním štandardu sa použila na výpočet uvoľneného glutamátu ako nanomólov glutamátu na miligram synaptozomálneho proteínu (nmol/mg). Hodnoty uvoľňovania uvedené v texte sú hladiny dosiahnuté v ustálenom stave po 5 minútach depolarizácie (nmol/mg/5 min). Kumulatívne údaje sa analyzovali pomocou tabuliek Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, USA) a MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Potenciál plazmovej membrány

Potenciál plazmatickej membrány bol stanovený farbivom citlivým na membránový potenciál, DiSC3(5) [48]. Synaptozómy sa resuspendovali v tlmivom médiu HEPES a 2 ml alikvóty sa preniesli do miešanej kyvety obsahujúcej 5 uM DiSC3(5) pri 37 °C v spektrofluorometri Perkin–Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Potom, čo sa zmes nechala ekvilibrovať počas 3 minút, bola stanovená fluorescencia FL pri excitačných a emisných vlnových dĺžkach 646 a 674 nm. Údaje sa zbierali v 2-sekundových intervaloch. Kumulatívne údaje sa analyzovali pomocou MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) a vyjadrili sa vo fluorescenčných jednotkách FL.

4.6. Cytosolický Ca2 plus koncentrácia ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C sa meral pomocou indikátora Ca2 plus fura-2. Synaptozómy (0,5 mg/ml) sa predinkubovali v tlmivom médiu HEPES obsahujúcom 5 µM fura-2 a 0,1 mM CaCl2 počas 30 minút pri 37 °C v miešanom teste trubica. Po nanesení fura{12}} sa synaptozómy centrifugovali v mikrocentrifúge počas 30 s pri 3000ˆg (5000 ot./min.). Synaptozomálne pelety sa resuspendovali v tlmivom médiu HEPES a synaptozomálna suspenzia sa miešala v kyvete s termostatom v spektrofluorometri Perkin-Elmer LS{17}} (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Po 3 minútach sa pridal CaCl2 (1 mM) a ďalšie prídavky sa uskutočnili po ďalších 10 minútach. Fluorescenčné údaje boli zhromaždené pri excitačných vlnových dĺžkach 340 a 380 nm (emisná vlnová dĺžka 505 nm) v 2-sekundových intervaloch. [Ca2 plus]C (nM) sa vypočítal pomocou kalibračných postupov [49] a rovníc opísaných vyššie [50]. Kumulatívne údaje sa analyzovali pomocou MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western blotting

Synaptozómy sa homogenizovali v lyzovacom pufri (10 mM HEPES pufor, pH 7,4), 1 % Triton X-100 a zmesi inhibítora proteázy. Lyzáty sa vyčerili centrifugáciou a koncentrácia proteínu sa stanovila pomocou súpravy na testovanie proteínov (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Rovnaké množstvá proteínov boli oddelené elektroforézou na polyakrylamidovom géli s dodecylsulfátom sodným (SDS-PAGE) a prenesené na nitrocelulózovú membránu. Membrány boli blokované Tris-pufrovaným fyziologickým roztokom, ktorý obsahoval 5 percent nízkotučného mlieka a inkubované s vhodnou primárnou protilátkou (fosfo-proteínkináza C (panvica), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) cez noc pri 4 ˝C. Po troch premytiach v Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku sa potom na membránu pôsobilo sekundárnou protilátkou konjugovanou s chrenovou peroxidázou (1:3000) počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Membrány sa potom premyli aspoň trikrát s Tris-pufrovaným fyziologickým roztokom a vizualizovali sa použitím vylepšeného chemiluminiscenčného systému (Amersham, Buckinghamshire, UK). Alikvotná časť vzoriek bola nanesená a testovaná s anti-PKC protilátkou na detekciu PKC ako kontrola nanášania. Úroveň expresie alebo fosforylácie bola hodnotená hustotou pásu, ktorá bola kvantifikovaná denzitometriou. Denzitometrická kvantifikácia pásov bola analyzovaná pomocou softvéru Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Štatistická analýza

Údaje sa získali z jedného synaptozomálneho prípravku a neboli navzájom nezávislé. Na testovanie významnosti účinku lieku oproti kontrole sa použil dvojstranný Studentov t-test. Keď bolo potrebné ďalšie porovnanie (napríklad či druhé ošetrenie ovplyvnilo účinok echinakozidu), použila sa jednosmerná ANOVA nasledovaná Tukeyho testom. Analýza bola dokončená pomocou softvéru SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Údaje sú vyjadrené ako priemer ˘ SEM; významnosť bola vyhodnotená pri p < 0,05="" pre="" všetky="" štatistické="">

5. Závery

Toto je prvá štúdia, ktorá to dokazujeechinakozidinhibuje uvoľňovanie glutamátu z cerebrokortikálnych synaptozómov potkanov znížením Ca2 plus influx cez Cav2.2 a Cav2.1 kanály a táto inhibícia uvoľňovania je pravdepodobne závislá od supresie proteínkinázy C, aspoň čiastočne. Toto zistenie je cenné, pretože poskytuje nový pohľad na mechanizmy účinku echinakozidu v mozgu.

Poďakovanie:Táto práca bola podporená grantom Ministerstva vedy a techniky (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Príspevky autora:Tzu Yu Lin a Su Jane Wang navrhli a navrhli experimenty; Cheng Wei Lu vykonal experimenty; Cheng Wei Lu a Shu Kuei Huang analyzovali údaje; Su Jane Wang napísala noviny.

Konflikt záujmov:Autori nedeklarujú žiadny konflikt záujmov.

Konflikty záujmov: Autori nevyhlasujú žiadny konflikt záujmov.

Referencie

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analýza fenyletanoidových glykozidovHerba cistanchepomocou RP-HPLC. Acta Pharm. Sin. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Synergické antioxidačné účinky alkamidov, derivátov kyseliny kávovej a polysacharidových frakcií z Echinacea purpurea na in vitro oxidáciu ľudských lipoproteínov s nízkou hustotou. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodulácia sprostredkovaná bylinným sirupom obsahujúcim štandardizovaný extrakt z koreňa Echinacea: Pilotná štúdia na zdravých ľudských subjektoch o expresii cytokínového génu. Fytomedicína 2014, 21, 1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. On, WJ; Fang, TH; Tu, PF Pokrok vo výskume farmakologických aktivít echinakozidu. Čína J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH Echinakozid zachraňuje neurónové bunky SHSY5Y pred apoptózou indukovanou TNFalfa. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505,11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotektívne aktivity fenyletanoidových glykozidov z Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinakozid chráni pred 6-mitochondriálnou dysfunkciou indukovanou hydroxydopamínom a zápalovými odpoveďami v bunkách PC12 prostredníctvom zníženia produkcie ROS. Evid. Založený doplnok. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Prechodná expozícia echinakozidu je dostatočná na aktiváciu signalizácie Trk a ochranu neurónových buniek pred rotenónom. J. Neurochem. 2013 124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Neuroprotektívne účinky echinakozidu v myšom MPTP modeli Parkinsonovej choroby. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Účinky echinakozidu na histiocentrálne hladiny aktívnej hmoty u potkanov s oklúziou strednej cerebrálnej artérie. Biomed. Environ. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, ČR; Lin, HC; Su, MH Reverzia vodnými extraktmi zCistanche tubulosaz behaviorálnych deficitov v modeli potkanov podobných Alzheimerovej chorobe: Relevantnosť pre ukladanie amyloidu a funkciu centrálneho neurotransmitera. Doplnok BMC. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Neurotrofické a neurozáchranné účinky echinakozidu v subakútnom MPTP myšom modeli Parkinsonovej choroby. Brain Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamát ako neurotransmiter v mozgu: prehľad fyziológie a patológie. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; No, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Koenzým Q10 inhibuje glutamátovú excitotoxicitu a mitochondriálne zmeny sprostredkované oxidačným stresom v myšom modeli glaukómu. Vyšetrovať. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Vápnik a excitotoxické poškodenie neurónov. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamátové receptory, neurotoxicita a neurodegenerácia. Pflugers. Arch. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molekulárne mechanizmy excitotoxickej smrti neuronálnych buniek sprostredkovanej glutamátovým receptorom. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotekcia antagonistami glutamátového receptora proti záchvatom indukovanej excitotoxickej bunkovej smrti v starnúcom mozgu. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Neuroprotektívne účinky NMDA a antagonistov metabotropného glutamátového receptora skupiny I proti neurodegenerácii indukovanej homocysteínom v potkanom hipokampe: Štúdia in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Úloha excitotoxicity pri neurodegeneratívnom ochorení: dôsledky pre terapiu. Pharmacol. Ther. 1999, 81, 163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW Terapeutické prístupy založené na glutamáte: Klinické štúdie s antagonistami NMDA. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, JM Neuroprotektant minocyklín potláča glutamátergickú neurotransmisiu a signalizáciu Ca2 plus v hipokampálnych neurónoch. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantín potláča uvoľňovanie glutamátu prostredníctvom inhibície napäťovo závislého vstupu Ca2 plus a proteínkinázy C v nervových zakončeniach mozgovej kôry potkanov: mechanizmus nezávislý od NMDA receptora. Neurochem. Int. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Nekompetitívny antagonista metabotropného glutamátového 5 receptora (E)-2-metyl-6-styryl-pyridín (SIB1893) potláča uvoľňovanie glutamátu prostredníctvom inhibície napäťovo závislého Ca2 plus vstupu do cerebrokortikálnych nervových zakončení potkana (synaptozómy). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Rýchla metóda na izoláciu synaptozómov na Percollových gradientoch. Brain Res. 1986, 372, 115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, uvoľňovanie glutamátu závislého od proteínu PG SNARE z astrocytov. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Terapeutické prístupy založené na glutamáte: Zacielenie na transportný systém glutamátu. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Ca2 plus kanál/ryanodínový receptor sarkoplazmatického retikula: Modulácia endogénnymi efektormi, liekmi a chorobnými stavmi. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1-51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Proteínkinázou C delta sprostredkovaná cytotoxicita 6-hydroxydopamínu prostredníctvom trvalej aktivácie kinázy 1/2 regulovanej extracelulárnym signálom v bunkách PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, nový inhibítor proteínkinázy. Biochem. Biophys. Res. komun. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, GR; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Na vápniku závislé a nezávislé uvoľňovanie glutamátu zo synaptozómov monitorované kontinuálnou fluorometriou. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Spojenie neurotransmiterových receptorov s iónovými kanálmi v mozgu. Science 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presynaptická inhibícia vyvolaného uvoľňovania neurotransmiterov. Trendy Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Farmakologická charakterizácia presynaptických vápnikových kanálov pomocou subsekundových biochemických meraní synaptozomálnej neurosekrécie. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferenciálne spojenie vápnikových kanálov typu N a P/Q s glutamátovou exocytózou v mozgovej kôre potkanov. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vázquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presynaptická modulácia uvoľňovania glutamátu sa zameriava na rôzne vápnikové kanály v cerebrokortikálnych nervových zakončeniach potkanov. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Dlhý, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN Nervový terminál GABAA receptory aktivujú signalizáciu závislú od Ca2 plus/kalmodulínu na inhibíciu napäťovo riadeného prítoku Ca2 plus a uvoľňovania glutamátu. J. Biol. Chem. 2009 284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angle, JM; čierna, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL Regulácia transepiteliálnej rezistencie závislá od PKC: Úlohy MLC a MLC kinázy. Am. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peters, C. Regulácia sekrécie neurotransmiterov proteínkinázou C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, GR; Pocock, JM Fosforylácia synapsínu I a MARCKS v nervových zakončeniach je sprostredkovaná vstupom Ca2 plus cez kanál Ca2 plus citlivý na Aga-GI, ktorý je spojený s glutamátovou exocytózou. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovič, TP; Urenjak, J. Zmenený glutamátergický prenos pri neurologických poruchách: Od vysokého extracelulárneho glutamátu k nadmernej synaptickej účinnosti. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinakozid inhibuje amyloidnú fibriláciu HEWL a chráni pred neurotoxicitou indukovanou Ap. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulín inhibuje uvoľňovanie glutamátu v cerebrokortikálnych nervových zakončeniach potkanov. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidín inhibuje uvoľňovanie glutamátu a vykonáva neuroprotekciu proti excitotoxicite vyvolanej kyselinou kainovou v hipokampe potkanov. Neurotoxikológia 2015, 2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, GR; Sihra, TS synaptozómy majú exocytotickú zásobu glutamátu. Nature 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistaminikum, inhibuje uvoľňovanie glutamátu v cerebrokortikálnych nervových zakončeniach potkanov. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Opakované akčné potenciály v izolovaných nervových zakončeniach v prítomnosti 4-aminopyridínu: Účinky na cytosolický voľný Ca2 plus a uvoľňovanie glutamátu. J. Neurochem. 1989,53,1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Iónová závislosť membránového potenciálu a odozvy spojené s glutamátovým receptorom v synaptoneurozómoch, ako sa meria s cyanínovým farbivom, DiSC2 (5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Lokalizovaný vstup Ca2 plus prednostne ovplyvňuje proteínovú defosforyláciu, fosforyláciu a uvoľňovanie glutamátu. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Nová generácia indikátorov Ca2 plus s výrazne zlepšenými fluorescenčnými vlastnosťami. J. Biol. Chem. 1985, 260,3440-3450. [PubMed]