Aký je spôsob, akým echinakozid, účinná zložka rastu buniek Cistanche Deserticola, adenokarcinómu pankreasu?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Echinakozid potláča rast buniek adenokarcinómu pankreasu indukciou apoptózy prostredníctvom mitogénom aktivovanej proteínkinázovej dráhy

WEI WANG, JINBIN LUO, YINGHUI LIANG a XINFENG LI

Abstraktné.

Klinické využitie prírodných produktov pochádzajúcich z tradičnej čínskej medicíny si získalo pozornosť v chemoterapeutikách proti rakovine.Echinakozid(ECH), jeden z fenyletanoidov, izolovaný zo stoniekCistanchesalsa (čínsky bylinný liek) má tkanivové ochranné a antiapoptotické účinky na centrálny nervový systém. Zostáva však do značnej miery neuchopiteľné, čiEchinakozid má tumor-supresívnu aktivitu. V tejto štúdii sa preukázalo, žeEchinakozidmôže výrazne inhibovať proliferáciu buniek adenokarcinómu pankreasu indukciou produkcie reaktívnych foriem kyslíka a narušením mitochondriálneho membránového potenciálu, a tým spúšťaťapoptóza. Ďalej sa objasnilo, žeEchinakozidpotláča rast nádorových buniek prostredníctvom modulácie aktivity MAPK. Na záver, táto štúdia odhaľuje novú funkciu ECH pri prevencii rozvoja rakoviny a naznačuje, že použitieEchinakozid by mohla byť potenciálnou chemoterapeutickou stratégiou pre rakovinu.

Echinakozid v cistanche znížiťrast buniek adenokarcinómu pankreasu

Úvod

Rakovina je život ohrozujúce ochorenie a jedna z hlavných príčin úmrtnosti na celom svete. Rakovinové bunky sú charakterizované inhibíciouapoptózanekontrolovaný rast a proliferácia a metastázy (1). Rozvoj rakoviny, často iniciovaný genetickými zmenami, je zložitý proces, ktorý zahŕňa interakcie medzi onkogénnymi proteínmi a nádorovými supresormi tvoriacimi zložitú signálnu sieť. Napríklad sa zistilo, že onkogén Myc je zosilnený alebo nadmerne exprimovaný pri rôznych typoch rakoviny a onkoproteín kódovaný Myc môže podporovať tumorigenézu riadením progresie bunkového cyklu, stimuláciou rastu buniek a indukciou angiogenézy (2). Onkogénne signály spúšťané Myc však môžu aktivovať supresorovú dráhu nádoru p53 prostredníctvom indukcie supresoru nádoru, ARF, ktorý zmierňuje onkogénnu E3-ligázovú myš s dvojitou minútou (MDM)2-sprostredkovanú degradáciu p53 ( 3). Ide o autoregulovaný, sebaochranný mechanizmus, ktorý bráni bunkám pred malígnou transformáciou. Je pozoruhodné, že p53 môže potlačiť aktivitu Myc transkripčnou aktiváciou napríklad miR-145, ktorá sa zameriava na Myc mRNA na umlčanie translácie (4, 5), čím sa vytvorí negatívna spätná väzba regulačnej slučky.

Najpriamejšou a najúčinnejšou stratégiou liečby rakoviny je zabíjanie rakovinových buniek. Ukázalo sa, že bežne používané protirakovinové lieky, ako je cisplatina (6), aktinomycín D (7) a adriamycín (8), inhibujú rast nádoru podporou apoptózy. V poslednej dobe sa čoraz viac dôkazov ukazuje, že množstvo prírodných produktov a derivátov z rastlín, najmä z liečivých rastlín používaných v tradičnej čínskej medicíne (TCM), vykazuje tumor-supresívnu funkciu indukciou apoptózy rakovinových buniek a má potenciál na klinické použitie. v terapii rakoviny (9). Napríklad prírodný antrachinónový emodín izolovaný z TČM, Radix rhizome Rhei, môže potlačiť rast mnohých typov rakovinových buniek (10, 11). Kamptotecín, odvodený z čínskeho „šťastného stromu“, Camptotheca acuminate, je cenným prírodným produktom, ktorý inhibuje ligáciu DNA po zlomoch reťazcov sprostredkovaných topo I (12). V ďalšej retrospektívnej populačnej kohortovej štúdii s celkovo 729 pacientkami s pokročilým karcinómom prsníka sa navrhlo, že terapia TCM môže prispieť k liečbe rakoviny. Z tejto kohorty bolo 115 pacientov užívateľmi TCM, zatiaľ čo 614 pacientov TCM neužívalo. Multivariačná analýza preukázala, že v porovnaní s neužívateľmi bolo používanie TCM spojené s výrazne zníženým rizikom mortality zo všetkých príčin (13). Všetky vyššie uvedené zistenia naznačovali, že TČM je dôležitým doplnkovým a alternatívnym liekom, ktorý možno použiť pri liečbe rakoviny.

Echinakozid(ECH) je fenyletanoid izolovaný zo stoniekCistanchessalsa, čínsky bylinný liek, ktorý je dôležitou surovou drogou používanou ako antisérum a činidlo proti únave (14). Zistilo sa, že niektoré fenyletanoidy majú vlastnosti zachytávajúce voľné radikály a chránia pred toxickými zraneniami vyvolanými oxidačným stresom (15). Okrem toho viac biologických vlastnostíEchinakozidodvtedy boli objasnené. Napríklad ECH môže zachrániť zvýšené hladiny zápalových cytokínov a zlepšiť pľúcne histopatologické abnormality u myší s akútnym poškodením pľúc (16, 17). tiežEchinakozid Ukázalo sa, že má ochranné účinky na nervové tkanivo a zlepšuje poruchy správania u myších modelov Parkinsonovej choroby (18). Predovšetkým sa zistilo, že ECH podporuje bunkovú proliferáciu a inhibujeapoptózav myších črevných epiteliálnych bunkách MODE-K (19). Potenciálnej úlohe ECH v prevencii rakoviny sa však doteraz venovala menšia pozornosť.

V tejto štúdii sa skúmalo, čiEchinakozid liečba ovplyvňuje rast a proliferáciu nádorových buniek a čiEchinakozidindukuje apoptózu, zvyšuje produkciu reaktívnych foriem kyslíka (ROS) a znižuje mitochondriálny membránový potenciál (MMP) a následne potláča rast nádorových buniek. Okrem toho sa táto štúdia zamerala na identifikáciu molekulárnych mechanizmov zodpovedných za inhibíciu rastu buniek sprostredkovanú ECH.

Materiály a metódy

Bunková línia, činidlo a protilátky.

Bunky adenokarcinómu pankreasu SW1990 (ATCC, Manassas, VA, USA) sa kultivovali v Dulbeccovom modifikovanom Eagle médiu doplnenom 10 percentami fetálneho hovädzieho séra, 50 U/ml penicilínu a 0,1 mg/ml streptomycínu pri 37 °C v zvlhčená atmosféra s 5 percentami CO2.Echinakozidbol zakúpený od Jrdun Biotechnology Corp. (Shanghai, Čína). Protilátky proti AKT, P-AKT, ERK, P-ERK, JNK, p-JNK, P38, p-P38 a GAPDH boli zakúpené od Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA); anti-Bax a anti-Bcl-2 boli zakúpené od Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, USA); a anti-Caspase{10}} bola zakúpená od spoločnosti Abcam (Shanghai, Čína).

Test životaschopnosti buniek.

Na vyhodnotenie rýchlosti rastu nádorových buniek sa použila súprava Cell Counting {{0}} (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD, USA) podľa pokynov výrobcu. Bunkové suspenzie boli naočkované v množstve 5 000 buniek na jamku s ošetrením ECH počas 0, 12, 24, 48 alebo 72 hodín na 96-jamkové kultivačné platne. Inhibícia rastu buniek sa stanovila pridaním činidla WST{10}} zo súpravy CCK-8 v konečnej koncentrácii 10 percent do každej jamky a absorbancia vzoriek sa merala pri 450 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Multikan MK3; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA).

Farbenie Hoechst 33342.

Bunky (60 percent konfluencie) boli ošetrené prípravkom Hoechst 33342 (Beyotime Institute of Biotechnology, Haimen, Čína) s konečnou koncentráciou 1 ug/ml, inkubované v inkubátore pri teplote 37 °C počas 15 minút, dvakrát premyté fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom, fixované v 4 percentnom paraformaldehyde počas 30 minút pri teplote miestnosti a namontovať na sklíčka. Morfologické zmeny bunkových jadier boli pozorované pod fluorescenčným mikroskopom (Olympus BX51, Melville, NY, USA). Normálne jadrá boli okrúhle a sfarbené svetlomodro, zatiaľ čo apoptotické jadrá boli scvrknuté a zafarbené svetlomodro.

Analýza fluorescenčne aktivovaného triedenia buniek (FACS).

Na posúdenieapoptózafluoresceín izotiokyanát (FITC)-Annexin VApoptózaDetekčná súprava (BD Biosciences, Shanghai, Čína) bola použitá podľa pokynov výrobcu. Stručne, 5x104 bunky sa premyli ľadovo studeným PBS, resuspendovali sa v 0,1 ml väzbového pufra (Beyotime Institute of Biotechnology) a zafarbili sa 10 ml FITC-konjugovaného annexinu V (10 mg/ml) a 10 ml propídiumjodidu (PI) (50 mg/ml). Po inkubácii počas 15 minút pri teplote miestnosti v tme a pridaní 400 ml väzbového pufra sa bunky analyzovali prietokovým cytometrom (C6; BD Biosciences, Shanghai, Čína).

Meranie reaktívnych foriem kyslíka (ROS).

Na vyhodnotenie produkcie ROS sa použila súprava reaktívnych druhov kyslíka (Vigorous Biotechnology, Peking, Čína) podľa pokynov výrobcu. V stručnosti, bunky (80 percent konfluencie) boli zozbierané a premyté PBS pred farbením roztokom dihydroetídia (DHE) (Beyotime Institute of Biotechnology). Bunky sa potom analyzovali prietokovou cytometrickou analýzou.

Meranie mitochondriálneho membránového potenciálu (MMP).

Na detekciu zmien v MMP sa použila súprava tetrametylrodamín metylesteru (TMRM) Assay kit (ImmunoChemistry Technologies, Bloomington, MN, USA). V stručnosti, bunky (80 percent konfluencie) boli zozbierané, premyté PBS a farbené TMRM počas 15-20 minút v 37 °C inkubátore. Bunky sa potom raz premyli PBS a podrobili sa prietokovým cytometrickým analýzam.

Imunoblotovacie analýzy.

Bunky (8 0 percent konfluencie) boli zozbierané a lyzované v RIPA pufri (Jrdun Biotechnology) pozostávajúcom z 50 mM Tris-HCl, pH 7,4; 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 percento NP-40, 1 percento kyseliny deoxycholovej sodnej a 0,1 percenta SDS a čerstvo pridané inhibítory proteazómu. Rovnaké množstvá čistého bunkového lyzátu sa použili na imunoblotovaciu analýzu, ako už bolo opísané (20).

Štatistická analýza.

Kvantitatívne údaje sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka. Štatistické rozdiely boli vyhodnotené nepárovým Studentovým t-testom pomocou štatistického softvéru SPSS 15.0. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Výsledky

Echinakozid potláča rast nádorových buniek. Aj keď to bolo hlásenéEchinakozid vykazuje ochrannú úlohu inhibíciouapoptózaa zápalových signálov v somatických bunkách, ako sú neurónové a črevné epitelové bunky (16-19), zostáva nepolapiteľné, či ECH riadi rast a proliferáciu rakovinových buniek. Aby sa to otestovalo, vykonal sa test prežitia buniek ošetrením buniek SW1990, odvodených z adenokarcinómu pankreasu stupňa II, titrovanými dávkami ECH, ako je znázornené na obr. -závislým spôsobom počas 5-dňového kultivačného obdobia (obr. 1).

Echinakozid spúšťa apoptózu. Ako strataapoptózaje jedným z hlavných príčinných mechanizmov, ktoré sú základom nekontrolovanej proliferácie buniek rakoviny pankreasu (21), táto štúdia vykonala súbor experimentov na určenie, či ECH spúšťa apoptózu. Po prvé, farbením jadier nádorových buniek pomocou Hoechst 33342 sa preukázalo, že výsledkom ECH jeapoptózaspôsobom závislým od dávky (obr. 2A). Okrem toho sa vykonali analýzy FACS s použitím farbenia Annexin V/PI, aby sa ďalej potvrdil apoptotický účinok tyEchinakozid (obr. 2B). Priemerné percento apoptotických buniek bolo 1,1 percenta za normálnych kultivačných podmienok, zatiaľ čo toto percento sa významne zvýšilo na 10,6, 21,4 a 51,3 percenta v reakcii na liečbu ECH v závislosti od dávky (obr. 2C). Tieto výsledky spolu s testom životaschopnosti buniek znázorneným na obr. 1 to dokazujúEchinakozidliečba potláča proliferáciu nádorových buniek spúšťanímapoptóza.

Echinakozid stimuluje produkciu reaktívnych foriem kyslíka (ROS). Ukázalo sa, že niekoľko chemoterapeutických liekov proti rakovine, ako je doxorubicín a cisplatina, sú silnými generátormi ROS, ktoré zohrávajú kľúčovú úlohu pri indukcii apoptózy za fyziologických a patologických podmienok (22). Skúmalo sa teda, či liečba ECH môže regulovať aj produkciu ROS. Na otestovanie sa v tejto štúdii na vyhodnotenie produkcie ROS použil DHE, ktorý sa môže oxidovať, aby sa vytvorilo etídium, ktoré interkaluje s DNA. Zistilo sa, že podobne ako iné protirakovinové lieky,Echinakozid tiež stimuluje produkciu ROS v závislosti od dávky, ako ukazuje zvýšená intenzita fluorescencie po liečbe ECH (obr. 3).

Echinakozidznižuje MMP. Ukázalo sa, že mitochondriálna dysfunkcia sa podieľa na indukcii apoptózy. Ukázalo sa, že otvorenie pórov prechodu mitochondriálnej permeability indukuje depolarizáciu transmembránového potenciálu a uvoľnenie proapoptotických faktorov (23). Preto sa testovalo, čiEchinakozid by mohla vyvolať stratu MMP v nádorových bunkách vykonaním testu TMRM, čo je dobre zavedený prístup, pretože intenzita fluorescencie TMRM je úmerná membránovému potenciálu. Bolo preukázané, žeEchinakozid liečba významne znižuje MMP v závislosti od dávky (obr. 4).

Echinakozid riadi rast nádorových buniek prostredníctvom mitogénom aktivovanej proteínkinázy (MAPK), ale nie signálov AKT. Na ďalšie skúmanie molekulárneho základuEchinakozid-sprostredkovaná smrť nádorových buniek, skúmala sa aktivita niekoľkých životne dôležitých signálnych dráh, ako sú MAPK a AKT (24,25), ktoré kontrolujú prežitie a smrť buniek. MAPK sú evolučne konzervované, prolínom riadené Ser/Thr proteínkinázy, vrátane extracelulárnych signálom regulovaných kináz (ERK), c-Jun NH{6}}terminálnej kinázy (JNK) a členov rodiny p38, ktoré sú aktivované prostredníctvom troch -vrstvové kinázové signálne kaskády (26,27). V tejto štúdii sa hodnotila expresia MAPK a AKT, ako aj ich aktivovaných fosforylovaných foriem a ukázalo sa, žeEchinakozid výrazne potláča aktivitu JNK a ERK1/2, ale zvyšuje aktivitu p38 (obr. 5). Predovšetkým sa preukázalo, že aktivita AKT, ktorá je tiež kriticky dôležitá pre bunkovú proliferáciu, nie je ovplyvnená liečbou ECH (obr. 5). Okrem toho sa ukázalo, že liečba ECH zvyšuje expresiu Bax a kaspázy-3 a zároveň znižuje expresiu Bcl{6}} (obr. 5), čo je v súlade s obr. 2. Výsledky teda naznačujú, žeEchinakozidspúšťa apoptózu nádorových buniek cestou MAPK.

cistancheechinakozidk anti-apoptóze

Diskusia

Pokiaľ je nám známe, toto je prvá štúdia, ktorá to ukazujeEchinakozid má tumor-supresívnu funkciu spúšťanímapoptóza(Obr. 2), podporuje produkciu ROS (Obr. 3) a indukuje depolarizáciu mitochondriálneho membránového potenciálu (Obr. 4), čo následne vedie k inhibícii rastu nádorových buniek (Obr. 1). Ďalej sa ukázalo, že molekulárny základ smrti nádorových buniek sprostredkovanej ECH nastáva reguláciou signálnych dráh MAPK (obr. 5). Tieto zistenia demonštrujú novú funkciu ECH pri prevencii tumorigenézy, a teda naznačujú, že môže byť kandidátom na liečbu rakoviny.

Väčšina protirakovinových liečiv môže vyvolať apoptózu nádorových buniek, starnutie a/alebo zastavenie bunkového cyklu, čo vedie k inhibícii rastu a proliferácie nádorových buniek. Zastavenie bunkového cyklu je bunková odpoveď na signály mierneho stresu, ktoré umožňujú bunkám opraviť poškodenú DNA pred začatím replikatívnej syntézy DNA alebo mitózy, zatiaľ čo apoptóza a starnutie (trvalé zastavenie bunkového cyklu) nastávajú v reakcii na stresové signály, ktoré eliminujú neopraviteľné alebo malígne bunky. 28,29). Preto iba apoptotický účinokEchinakozid na nádorových bunkách sa v tejto štúdii hodnotila, pretože zabíjanie rakovinových buniek je hlavným kritériom na hodnotenie účinnosti protirakovinovej látky. Predovšetkým sa preukázalo, že ECH indukuje expresiu Bax (obr. 5), proapoptotického génu, transkripčne aktivovaného nádorovým supresorom p53 (30). Preto stojí za to vyskúšať, čiEchinakozid môže aktivovať signálnu dráhu p53. Ak áno, ECH môže tiež vyvolať p53-závislé zastavenie bunkového cyklu, starnutie, apoptózu alebo autofágiu. V tejto štúdii bola objasnená tumor-supresívna funkcia ECH v bunkovej línii adenokarcinómu pankreasu SW1990. Sú však potrebné ďalšie štúdie pozorujúce viac bunkových línií rakoviny pankreasu. Ukázalo sa, že mutácie v onkogénnom proteíne RAS a tumor supresorovom p53 sú spojené so vznikom rakoviny pankreasu (31); bunková línia SW1990 však neobsahuje žiadnu mutáciu p53, podľa databázy p53 IARC. Preto je dôležité preskúmať, čiEchinakozid môže ovplyvniť rast a proliferáciu iných bunkových línií rakoviny pankreasu s rôznymi mutáciami p53. Okrem toho by bolo zaujímavé určiť, či je ECH schopná podporovať apoptózu a inhibovať rast iných typov nádorov.

Elevácia ROS a zníženie MMP, ktoré boli spôsobenéEchinakozid liečbe, sa ukázali ako nevyhnutné priapoptózaindukcia (22). Okrem toho sa zistilo, že ROS môže indukovať oxidáciu mitochondriálnych pórov, čo prispieva k uvoľňovaniu cytochrómu c, medziproduktu v apoptóze, v dôsledku narušenia MMP (22). Zostáva teda určiť, či ECH narúša MMP nepriamo prostredníctvom indukcie ROS. Okrem toho sa tiež ukázalo, že oxidačný stres vyvolaný ROS sa podieľa na modulácii nespočetných signálov riadiacich rast buniek, vrátane p53, NF-κB, HIF a PI3K (32). Zostáva určiť, či a ak áno, ako ECH reguluje tieto dôležité signálne dráhy. Najmä oxidačný stres spôsobuje rôzne neurodegeneratívne ochorenia v dôsledku vysokej spotreby kyslíka, slabých antioxidačných systémov a vlastností terminálnej diferenciácie centrálneho nervového systému (33). Viaceré štúdie to však dokázaliEchinakozidmá ochranné a antiapoptotické účinky na nervové tkanivo. V tomto ohľade je rozumné predpokladať, že ECH môže znížiť produkciu ROS v terminálne diferencovaných nervových bunkách. Zostáva teda tiež určiť, či regulácia produkcie ROS pomocou ECH závisí od stavu diferenciácie buniek. Súčasné výsledky spolu s ďalšími štúdiami teda odhaľujú, že ECH, široko používaný TCM, môže byť dôležitou chemoterapeutickou stratégiou nielen pri liečbe neurodegeneratívnych ochorení, ale aj malígnych karcinómov.

V poslednej dobe sa čoraz viac pozornosti venuje využívaniu TCM v liečbe rakoviny. Potenciál prírodných produktov z liečivých rastlín používaných v TČM uznala vedecká komunita aj v západnom svete (9). Je potrebné vynaložiť úsilie na objasnenie základných mechanizmov účinku týchto prírodných produktov, čo môže nakoniec viesť k vývoju účinných a bezpečných liekov na liečbu rakoviny.

Záverom, táto štúdia demonštrovala nádorovú inhibičnú funkciuEchinakozid a tiež rozpracúva molekulárny základEchinakozid-sprostredkovaná supresia nádoru, čo naznačuje potenciálne klinické použitieEchinakozid v terapii rakoviny.

echinakozidv cistanche

Poďakovanie

Táto štúdia bola financovaná a podporená z Kľúčového programu vedeckého výskumu FMU (grant č. 09ZD014). Autori by chceli poďakovať spoločnosti Biomedworld (Shanghai, Čína) za pomoc s úpravou rukopisu.

OdEchinakozidpotláča rast buniek adenokarcinómu pankreasu indukciouapoptózaprostredníctvom mitogénom aktivovanej proteínkinázovej dráhy prostredníctvom WEI WANG, JINBIN LUO, YING HUI LIANG a XINFENG LI

---SPRÁVY MOLEKULÁRNEJ MEDICÍNY 13: 2613-2618, 2016 DOI: 10.3892/mmr.2016.4867

Referencie

1. Hanahan D a Weinberg RA: Charakteristické znaky rakoviny: Ďalšia generácia. Bunka 144: 646-674, 2011.

2. Alderton GK: Transkripcia: Transkripčné účinky MYC. Nat Rev Cancer 14: 513, 2014.

3. Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ a Roussel MF: Myc signalizácia prostredníctvom supresora nádoru ARF reguluje p53-závislúapoptózaa zvečnenie. Genes Dev 12: 2424-2433, 1998.

4. Sachdeva M, Zhu S, Wu F, Wu H, Walia V, Kumar S, Elble R, Watabe K a Mo YY: p53 potláča c-Myc prostredníctvom indukcie miR supresora nádoru-145. Proc Natl Acad Sci USA 106: 3207-3212, 2009.

5. Liao JM, Cao B, Zhou X a Lu H: Nové poznatky o funkciách p53 prostredníctvom jeho cieľových mikroRNA. J Mol Cell Biol 6: 206-213, 2014.

6. Zamble DB a Lippard SJ: Cisplatina a oprava DNA v chemoterapii rakoviny. Trends Biochem Sci 20: 435-439, 1995.

7. Kleeff J, Kornmann M, Sawhney H a Korc M: Aktinomycín D indukujeapoptózaa inhibuje rast buniek rakoviny pankreasu. Int J Cancer 86 399-407, 2000.

8. Tacar O, Sriamornsak P a Dass CR: Doxorubicín: Aktualizácia protirakovinového molekulárneho pôsobenia, toxicity a nových systémov dodávania liekov. J Pharm Pharmacol 65: 157-170, 2013.

9. Efferth T, Li PC, Konkimalla VS a Kaina B: Od tradičnej čínskej medicíny k racionálnej terapii rakoviny. Trends Mol Med 13: 353-361, 2007.

10. Yim H, Lee YH, Lee CH a Lee SK: Emodin, derivát antrachinónu izolovaný z odnoží Rheum palmatum, selektívne inhibuje aktivitu kazeínkinázy II ako kompetitívny inhibítor. Planta Med 65: 9-13, 1999.

11. Zhang L, Chang CJ, Bacus SS a Hung MC: Potlačená transformácia a indukovaná diferenciácia buniek rakoviny prsníka nadmerne exprimujúcich HER{1}}/neu emodínom. Cancer Res 55: 3890-3896, 1995.

12. Pommier Y: Inhibítory topoizomerázy I: kamptotecíny a ďalšie. Nat Rev Cancer 6: 789-802, 2006.

13. Lee YW, Chen TL, Shih YR, Tsai CL, Chang CC, Liang HH, Tseng SH, Chien SC a Wang CC: Doplnková terapia tradičnej čínskej medicíny zlepšuje prežitie u pacientov s pokročilým karcinómom prsníka: Populačná štúdia. Rakovina 120: 1338-1344, 2014.

14. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Namba T a Kadota S: Akteozid inhibujeapoptózapri poškodení pečene vyvolanom D-galaktozamínom a lipopolysacharidmi. Life Sci 65: 421-430, 1999.

15. Gao JJ, Igarashi K a Nukina M: Aktivita zachytávania radikálov fenylpropanoidových glykozidov v Caryopteris incana. Biosci Biotechnol Biochem 63: 983-988, 1999.

16. Zhang Y, Xing J, Ai T, Wen T, Guan L a Zhao J: Ochranaechinakozidproti akútnemu poškodeniu pľúc spôsobenému kyselinou olejovou u potkanov. Free Radic Res 41: 798-805, 2007.

17. Li X, Gou C, Yang H, Qiu J, Gu T a Wen T:Echinakozidzlepšuje akútne poškodenie pečene vyvolané D-galaktozamínom a lipopolysacharidom u myší prostredníctvom inhibícieapoptózaa zápalom. Scand J Gastroenterol 49: 993-1000, 2014.

18. Zhao Q, Gao J, Li W a Cai D: Neurotrofické a neurozáchranné účinkyEchinakozidv subakútnom MPTP myšacom modeli Parkinsonovej choroby. Brain Res 1346: 224-236, 2010.

19. Jia Y, Guan Q, Guo Y a Du C:Echinakozidstimuluje bunkovú proliferáciu a zabraňuje apoptóze buniek v intestinálnych epitelových bunkách MODE-K up-reguláciou expresie transformujúceho rastového faktora-1. J Pharmacol Sci 118: 99-108, 2012.

20. Liao P, Wang W, Shen M, Pan W, Zhang K, Wang R, Chen T, Chen Y, Chen H a Wang P: Pozitívna spätná väzba medzi EBP2 a c-Myc reguluje transkripciu rDNA, bunkovú proliferáciu, a tumorigenéza. Cell Death Dis 5: e1032, 2014.

21. Westphal S a Kalthoff H: Apoptóza: Ciele pri rakovine pankreasu. Mol Cancer 2: 6, 2003.

22. Simon HU, Haj-Yehia A a Levi-Schaffer F: Úloha reaktívnych foriem kyslíka (ROS) vapoptózaindukcia.Apoptóza5: 415-418, 2000.

23. Ly JD, Grubb DR a Lawen A: Mitochondriálny membránový potenciál (delta psi(m)) pri apoptóze; aktualizácie.Apoptóza8: 115-128, 2003.

24. Munshi A a Ramesh R: Mitogénom aktivované proteínkinázy a ich úloha v reakcii na žiarenie. Genes Cancer 4: 401-408, 2013.

25. Abraham AG a O'Neill E: PI3K/Akt-sprostredkovaná regulácia p53 pri rakovine. Biochem Soc Trans 42: 798-803, 2014.

26. Turnaj C: 2 tváre signalizácie JNK pri rakovine. Genes Cancer 4: 397-400, 2013.

27. Koul HK, Pal M a Koul S: Úloha transdukcie signálu p38 MAP kinázy v solídnych nádoroch. Genes Cancer 4: 342-359, 2013.

28. Brady CA a Attardi LD: p53 na prvý pohľad. J Cell Sci 123: 2527-2532, 2010.

29. Carvajal LA a Manfredi JJ: Ďalší bod v rozhodovaní o živote a smrti na ceste supresorom nádorov p53. EMBO Rep 14: 414-421, 2013.

30. Miyashita T a Reed JC: Tumorový supresor p53 je priamym transkripčným aktivátorom ľudského génu Bax. Bunka 80: 293-299, 1995.

31. Morton JP, Timpson P, Karim SA, Ridgway RA, Athineos D, Doyle B, Jamieson NB, Oien KA, Lowy AM, Brunton VG a kol.: Mutantný p53 poháňa metastázy a prekonáva zastavenie rastu/starnutie pri rakovine pankreasu. Proc Natl Acad Sci USA 107: 246-251, 2010.

32. Schieber M a Chandel NS: Funkcia ROS v redoxnej signalizácii a oxidačnom strese. Curr Biol 24: R453-R462, 2014.

33. Li J, OW, Li W, Jiang ZG a Ghanbari HA: Oxidačný stres a neurodegeneratívne poruchy. Int J Mol Sci 14: 24438-24475, 2013.