Časť Ⅱ Zlepšenie hladiny dusíka močoviny v krvi a sérového kreatinínu pomocou novej kultivácie Cordyceps militaris

Výsledky

Kontrolné myši a myši s nefrektómiou boli liečené s mycéliom C. militaris a bez neho, raz denne orálnou sondou počas 30 dní. Počet vzoriek v každej liečbe bol 4 až 6 myší na skupinu. Percentuálny nárast telesnej hmotnosti a hodnoty dusíka močoviny v krvi (BUN), sérového kreatinínu, celkového proteínu a kyseliny močovej na 30. deň sú zhrnuté na obrázku 1. Na konci experimentov bol percentuálny nárast telesnej hmotnosti nižšie u uremických myší, ktoré podstúpili čiastočnú nefrektómiu (Nx, 0,66 ± 2,58 percenta) ako u kontrolných myší (Sham, 6,41 ± 2,92 percenta), čo ukazuje, že uremické myši zaznamenali spomalenie rastu počas experimentálneho obdobia. Telesné hmotnosti uremických myší s a bez liečby C. militaries sú uvedené na obrázkoch 1(a) a 2. Výsledky ukázali, že telesná hmotnosť v skupine HKS, HKS plus A alebo CM plus A bola znížená v porovnaní s telesnou hmotnosťou skupina Nx na 30. deň (obrázok 1(a)). Avšak žiadna zo skupín liečených C. militaris nevykazovala zjavné rozdiely v telesnej hmotnosti v porovnaní s uremickými kontrolnými myšami počas experimentálneho obdobia. Tieto údaje na obrázku 2 naznačujú, že ošetrenie mycélia C. militaris významne neovplyvnilo hmotnosť uremických myší.

Biochemické hodnoty v plazme sú uvedené na obrázkoch 1(b), 1(c) a 3. Ako sa očakávalo, BUN a sérový kreatinín boli významne vyššie (283-násobne a 1{6}}násobne, v uvedenom poradí) u uremických myší ako u kontrolných myší Nx, čo dokazuje, že tento model uremických myší presne odráža progresívne CKD (obrázky 1 (b) a 1 (c)). Hladiny BUN mali vzor znižovania na 10. deň u uremických myší kŕmených mycéliom C. militaris kultivovaným v médiu HKS (41 percent), HKS plus A (41 percent) a CM plus A (34 percent) v porovnaní s uremické kontrolné myši (Nx) (obrázok 3(a)). Hladina sérového kreatinínu bola znížená na 10. deň v skupine HKS plus A (35 percent) a na 30. deň v skupine HKS (14 percent) a CM plus A (13 percent) (obrázok 3(b)). Hladina sérového kreatinínu sa zvýšila v skupinách HKS (93 percent) a CM (41–53 percent) na 10. deň (obrázok 3(b)). Rozdiely v telesnej hmotnosti, celkovom proteíne a kyseline močovej sa nezistili medzi simulovanými a Nx myšami (údaje nie sú uvedené). Okrem toho, celkové hladiny proteínov boli podobné v rôznych skupinách, čo naznačuje, že ošetrenie C. militaris z rôznych kultivácií by mohlo zabrániť progresii CKD (obrázok 1(d)). Kyselina močová mala tiež podobné hladiny, s výnimkou skupiny CM, ktorá mala vyššie hladiny kyseliny močovej (obrázok 1(e)).

Na porovnanie účinkov rôznych skupín liečených mycéliom C. militaries na obličky sa skúmali histologické údaje od zdravých a uremických myší. Obrázok 4 ukazuje oblasti prierezu obličkových glomerulov u simulovaných a uremických myší s alebo bez ošetrenia mycélia C. militaris. Priemerná plocha prierezu glomerulov bola získaná výpočtom strednej plochy približne 8 až 15 jednotlivých glomerulov pomocou programu Image J. Medzi uremickými skupinami nie sú žiadne štatistické významnosti. V simulovanej kontrolnej skupine vykazovali rezy tkaniva obličiek normálnu morfológiu (obrázok 5(a)), zatiaľ čo rezy tkaniva obličiek z uremických myší vykazovali zväčšené glomeruly a rozšírené obličkové tubuly obklopené plochými epitelovými bunkami (obrázky 5(b)–5( f)). Plocha glomerulárneho prierezu bola výrazne väčšia u uremických myší (1.{10}}krát) ako u zdravých (sfalšovaných) myší. Nepravidelné usporiadanie tubulov a koloidných odliatkov v lúmene tubulov bolo prítomné aj v poranenej obličke. Zväčšenie zvyškových glomerulov ukazuje, že zvyšková oblička v tomto modeli uremických myší môže byť výsledkom dlhotrvajúceho vysokého hemodynamického tlaku a preťaženia metabolickým odpadom.

Diskusia

Umelé kultúry mycélia C. militaris sú v poslednom čase populárnou témou výskumu [22–27]. Napríklad výskumníci skúmali rôzne médiá na umelú kultiváciu mycélia C. militaris, ako je kukla priadky morušovej, tuhé ryžové médium, naklíčené sójové médium a sójový bujón [34–39]. Mnohé štúdie skúmali rôzne koncentrácie uhlíka a dusíka v médiách s cieľom preskúmať najlepšie podmienky pre rast mycélia C. militaris [40–45]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že mycélium C. militaris obsahuje špecifické farmakologicky aktívne zložky, ako je cordycepín, polysacharidy, ergosterol a manitol, a že ich možno efektívne využiť na rôzne medicínske účely alebo ako funkčné potraviny [46–48]. Skúmali sa aj rozdiely v štruktúrnej charakterizácii, imunomodulácii polysacharidov a antioxidačnej aktivite mycélia C. militaris pestovaného na rôznych médiách [49]. Súčasná štúdia sa zamerala na renoprotekčné vlastnosti mycélia C. militaris in vivo a porovnávala účinky mycélia C. militaris inkubovaného v nových médiách. Výsledky ukázali, že myši s poškodením obličiek liečené mycéliom C. militaris kultivovaným na médiu HKS alebo CM plus A mali známky zlepšenia funkcie obličiek. Médium HKS obsahuje kvasinkový extrakt a dvakrát viac peptónu ako médium CM; okrem toho má zjavný nedostatok glukózy. Médium HKS je médium s vysokým obsahom dusíka, zatiaľ čo médium CM je médium s vysokým obsahom uhlíka. Sme priekopníkmi v používaní médií HKS a CM na umelú kultiváciu mycélia C. militaris, aby sme pochopili rozdielne účinky, ktoré má médium s vysokým obsahom dusíka (HKS) a médium s vysokým obsahom uhlíka (CM) na biosyntetické zmeny. mycélia C. militaris.

Vitamín A je skupina organických látok rozpustných v tukoch, ktoré zahŕňajú retinol, retinal, kyselinu retinovú, niekoľko provitamínových karotenoidov a betakarotén [50]. Karotenoidy, ktoré sú prekurzormi vitamínu A, sú izoprenoidové molekuly syntetizované de novo fotosyntetickými rastlinami, hubami a riasami a sú zodpovedné za oranžové, žlté a (niektoré) červené farby rôznych druhov ovocia a zeleniny. Ukázalo sa, že vitamín A a jeho príbuzné deriváty inhibujú niekoľko biologických funkcií, vrátane rastu nádorov, angiogenézy, metastáz a bunkovej proliferácie, ako aj indukujú apoptózu a diferenciáciu buniek [51, 52]. Prítomnosť vitamínu A v médiu stimulovala biosyntézu -karoténu v Phycomyces blakesleeanus [53], čo naznačuje, že vitamín A je silným aktivátorom karotenogenézy v Phycomyces. Ako je znázornené na obrázku 3(b), na 30. deň v skupine CM plus A začalo mycélium C. militaris prejavovať inhibičný účinok na sérový kreatinín. Na rozdiel od toho liečba mycéliom C. militaris v skupine CM (bez vitamínu A) nemala žiadny inhibičný účinok na hladiny kreatinínu v sére. Okrem toho sa inhibičný účinok nepozoroval v mycélii C. militaris, keď sa vitamín A pridal do média KHS. .preto je funkcia vitamínu A v hubách nejasná. Máme podozrenie, že vitamín A môže poskytnúť materiál pre mycélium C. militaris na syntézu sekundárnych metabolitov a tým ovplyvniť apoptózu buniek. Úloha vitamínov v médiách by sa mala ďalej skúmať, aby sa podporila priemyselná produkcia mycélia C. militaris [54].

Ak chcete kúpiť, kliknite semProdukty Cistanche

Dong a spol. preukázali účinok mycélia C. militaris na hladiny BUN a sérového kreatinínu u potkanov s diabetom indukovaným streptozotocínom [55]. Inhibičné účinky na BUN, kreatinín, kyselinu močovú a proteín odhalili ochranu extraktov C. militaris proti diabetickej nefropatii. Predpokladali, že extrakt z C. militaris má veľký potenciál na liečbu cukrovky. Yu a spol. skúmali účinok liečby Cordyceps militaris na zníženie poškodenia obličiek u myší s diabetickou nefropatiou 2. typu [56]. Uviedli, že hladina glukózy v krvi, markery renálnej dysfunkcie (napr. sérový kreatinín a pomer hmotnosti obličiek k telesnej hmotnosti) a patologické zmeny v obličkových tkanivách sa po liečbe významne zmiernili a zlepšili. Tu sme demonštrovali, že hladiny BUN u uremických myší boli inhibované mycéliom C. militaris kultivovaným v médiu HKS, HKS plus A alebo CM plus A po 10 dňoch a v médiu HKS alebo CM plus A po 30 dňoch ( Obrázok 3(a)). Okrem toho sme preukázali, že hladiny sérového kreatinínu boli inhibované mycéliom C. militaris kultivovaným v médiu HKS plus A po 10 dňoch a v médiu HKS alebo CM plus A po 30 dňoch (obrázok 3(b)). Zistili sme, že prášky mycélia C. militaris zozbierané z média HKS a CM plus A majú silnejší účinok na zníženie hladiny BUN a sérového kreatinínu na nápravu poškodenia obličiek u myší s CKD. Mycélium C. militaris zozbierané z rôznych médií môže pôsobiť rôznymi zlúčeninami, ktoré majú rôzne ochranné účinky na CKD. Celkovo možno povedať, že liečba mycéliom C. militaris môže zlepšiť biochemický index CKD, ale nedokázala opraviť poškodenia v tomto modeli uremických myší.

Khan a spol. využívaný emulgél s aspirínom na topickú aplikáciu [57]; tento koncept by sa dal ďalej aplikovať v našej štúdii. Navrhujeme, aby sa mycélium C. militaris vložilo do mikro/nanoguľôčok na aplikácie s riadeným uvoľňovaním liečiva. Okrem toho Fattepur a spol. a Zharif a kol. použiť etanolový extrakt z rastlín na štúdium toxikologickej, farmakologickej aktivity alebo synergického účinku antibiotík [58, 59]. Extrakcia bioaktívnych zlúčenín bola dobrým nápadom pre našu ďalšiu štúdiu. Preto navrhujeme, aby sa v budúcnosti použila a študovala etanolová extrakcia mycélia C. militaris.

Navrhujeme, aby sa budúce štúdie zamerali na podrobný molekulárny mechanizmus imunomodulačnej aktivity, histopatologické zmeny v obličkových tkanivách a novú formuláciu mycélia C. militaris.

Účinky Cistanche

Záver

Úspešne sme pozorovali renoprotektívne účinky mycélia C. militaris v nových médiách na myšiach s CKD. U mladých myší (približne 30 g) sa vykonala operácia obličiek na vyvolanie urémie. .is je prvá správa využívajúca štyri nové médiá (HKS, HKS plus A, CM a CM plus A médium) pre mycélia C. militaris. Každé médium mycélia C. militaries na CKD vykazuje špecifický účinok na BUN, sérový kreatinín, telesnú hmotnosť, celkový proteín a kyselinu močovú. Výsledky ukázali, že médium HKS mycélia C. militaris má najsilnejší účinok na zníženie hladiny BUN a sérového kreatinínu na nápravu poškodenia obličiek u myší s CKD. .e HKS plus Médium mycélia C. militaris bolo účinné na 10. deň, ale nebolo vhodné na dlhodobé používanie (napr. 30 dní). .e CM médium mycélia C. militaris nebolo odborníkom na inhibíciu účinkov na BUN alebo sérový kreatinín. CM plus Médium mycélia C. militaris má prijateľný účinok na uremické myši. Predpokladáme, že mycélium C. militaris kultivované v médiu HKS alebo CM plus A má potenciál byť novou funkčnou potravinou pre CKD.

Účinnosť Cistanche na chronické ochorenie obličiek

Chronické ochorenie obličiek (CKD) je celosvetovo závažným problémom verejného zdravia, ktorý postihuje milióny ľudí na celom svete. CKD je charakterizované postupným poklesom funkcie obličiek, čo často vedie ku konečnému štádiu renálneho ochorenia (ESRD). Napriek pokroku v konvenčnej medicíne v súčasnosti neexistuje žiadna účinná liečba na prevenciu alebo oddialenie progresie ESRD. Preto sa záujem venoval alternatívnym terapiám, ako je tradičná čínska medicína (TCM).

Cistanche je liečivá rastlina s dlhou históriou používania v TČM. Po stáročia sa používa na tonizáciu obličiek, zlepšenie mužskej sexuálnej funkcie a zvýšenie dlhovekosti. Nedávny výskum naznačuje, že extrakt z Cistanche môže byť prísľubom ako alternatívna liečba CKD.

Výskum naznačuje, že extrakt z Cistanche má silné antioxidačné a protizápalové vlastnosti, ktoré môžu pomôcť chrániť pred oxidačným stresom a zápalom v obličkách. Štúdie ukázali, že Cistanche môže zlepšiť rýchlosť glomerulárnej filtrácie (GFR), znížiť proteinúriu a hematúriu a zabrániť fibróze obličiek. Predpokladá sa, že tieto účinky sú spôsobené rôznymi bioaktívnymi zlúčeninami prítomnými v Cistanche, vrátane fenyletanoidových glykozidov, iridoidov, lignanov a polysacharidov.

Štandardizované Cistanche

V štúdiách na zvieratách sa ukázalo, že extrakt z Cistanche odďaľuje progresiu CKD a zlepšuje funkciu obličiek. Napríklad jedna štúdia zistila, že liečba extraktom z Cistanche významne znížila hladiny bielkovín v moči a zmiernila štrukturálne poškodenie obličiek u zvierat s indukovaným CKD. Ďalšia štúdia na zvieratách zistila, že extrakt z Cistanche zlepšil GFR, znížil proteinúriu a apoptózu renálnych tubulárnych epiteliálnych buniek a znížil fibrózu obličiek u potkanov s CKD.

Klinické štúdie tiež poskytujú dôkazy podporujúce potenciálnu účinnosť Cistanche pri zlepšovaní funkcie obličiek u pacientov s CKD. V klinickom skúšaní vykonanom na 62 účastníkoch s CKD štádia 3 vykazovali tí, ktorí dostávali kapsuly s extraktom Cistanche, významné zlepšenie funkcie obličiek v porovnaní s tými, ktorí dostávali placebo. Podávanie extraktu Cistanche zvyšuje rýchlosť glomerulárnej filtrácie, znižuje proteinúriu a zlepšuje funkciu obličiek.

Zostávajú však niektoré otázky týkajúce sa ideálneho dávkovacieho režimu pre extrakt z Cistanche a jeho dlhodobého bezpečnostného profilu. Na stanovenie optimálnych dávok a presných mechanizmov účinku, ktoré sa podieľajú na terapeutických účinkoch Cistanche na CKD, je potrebný ďalší výskum.

Napriek sľubným výsledkom stále existujú obmedzenia, ktoré je potrebné vziať do úvahy pri zvažovaní extraktu z Cistanche ako alternatívnej liečby CKD. Po prvé, väčšina štúdií, ktoré sa doteraz vykonali, boli predklinickými alebo klinickými pilotnými štúdiami s malou veľkosťou vzorky a variabilným dizajnom štúdií. Okrem toho sa mnohé z týchto štúdií primárne uskutočňovali na zvieracích modeloch a nie na ľuďoch. Na stanovenie bezpečnosti a účinnosti Cistanche ako liečby CKD je potrebný rozsiahlejší a vysokokvalitný výskum. Okrem toho existuje potreba štandardizovanej prípravy Cistanche na zabezpečenie jednotnej kvality a účinnosti.

Záverom možno povedať, že extrakt z Cistanche má priaznivé účinky na funkciu obličiek a môže ponúknuť sľubnú alternatívnu terapiu pre pacientov trpiacich CKD. Zatiaľ čo sú potrebné ďalšie rozsiahle klinické štúdie, kým sa dajú urobiť definitívne odporúčania o terapeutickom potenciáli extraktu Cistanche, skoré údaje sú sľubné a naznačujú, že táto tradičná čínska medicína by sa mohla použiť ako súčasť holistického prístupu k liečbe CKD. Ako vždy, pacienti sa musia poradiť so svojím poskytovateľom zdravotnej starostlivosti o akýchkoľvek alternatívnych terapiách, ktoré zvažujú, aby sa vyhli nepriaznivým účinkom a zaistili bezpečnosť.

Extrakt z cistanche

Referencie

[36] Y. Ji, A. Su, G. Ma a kol., "Porovnanie bioaktívnych zložiek a účinkov na črevnú mikrobiotu in vitro fermentáciou medzi Ophicordyceps sinensis a Cordyceps militaris," Journal of Functional Foods, zv. 68, ID článku 103901, 2020.

[37] P. Aramwit, N. Bang, J. Ratanavaraporn, T. Nakpheng a T. Srichana, "Protirakovinový cordycepin produkovaný Cordyceps militaris rastúci na mŕtvej larve Bomby more priadky morušovej", Journal of Agricultural Science, zv. 6, s. 41–53, 2014.

[38] X. Li, Q. Liu, W. Li a kol., "Prelom v umelom pestovaní čínskeho cordycepsu vo veľkom meradle a jeho vplyv na vedu, ekonomiku a priemysel," Critical Reviews in Biotechnology , zv. 39, č. 2, s. 181–191, 2019.

[39] F. Wu, H. Yan, X. Ma a kol., "Porovnanie štrukturálnej charakterizácie a biologickej aktivity kyslých polysacharidov z Cordyceps militaris kultivovaných s rôznymi médiami," World Journal of Microbiology and Biotechnology, zv. 28, č. 5, s. 2029–2038, 2012.

[40] Y. Ohta, J.-B. Lee, K. Hayashi, A. Fujita, DK Park a T. Hayashi, "In vivo anti-chrípková vírusová aktivita imunomodulačného kyslého polysacharidu izolovaného z Cordyceps militaries pestovaných na naklíčených sójových bôboch," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 55, č. 25, s. 10194 – 10199, 2007.

[41] SK Das, M. Masuda, M. Hatashita, A. Sakurai a M. Sakakibara, "Optimalizácia kultivačného média na produkciu cordycepínu s použitím mutantu Cordyceps militaris získaného ožiarením iónovým lúčom," Process Biochemistry, zv. 45, č. 1, s. 129–132, 2010.

[42] Y.-X. Gu, Z.-S. Wang, S.-X. Li a Q.-S. Yuan, "Účinok viacerých faktorov na akumuláciu nukleozidov a báz v Cordyceps militaris," Food Chemistry, zv. 102, č. 4, s. 1304–1309, 2007.

[43] X.-B. Mao, T. Eksriwong, S. Chauvatcharin a J.-J. Zhong, "Optimalizácia zdroja uhlíka a pomer uhlík/dusík pre produkciu cordycepínu ponorenou kultiváciou medicinálnej huby Cordyceps militaris," Process Biochemistry, zv. 40, č. 5, s. 1667–1672, 2005.

[44] B. Chen, Y. Sun, F. Luo a C. Wang, "Bioaktívne metabolity a potenciálne mykotoxíny produkované hubami cordyceps: prehľad bezpečnosti," Toxins, vol. 12, č. 6, str. 410, 2020.

[45] V. Kaushik, A. Singh, A. Arya, SC Sindhu, A. Sindhu a A. Singh, "Zvýšená produkcia cordycepínu v Ophiocordyceps sinensis pomocou rastových doplnkov za ponorených podmienok," Biotechnology Reports, vol. 28, ID článku e00557, 2020.

[46] A. Suparmin, T. Kato, H. Takemoto a EY Park, "Metabolické porovnanie vzdušného a ponoreného mycélia vytvoreného v tekutej povrchovej kultúre Cordyceps militaris," Microbiology open, zv. 8, č. 9, ID článku e00836, 2019.

[47] H.-W. Lou, Y. Zhao, H.-B. Tang a kol., "Analýza transkriptómu Cordyceps militaris odhaľuje gény spojené so syntézou karotenoidov a identifikáciou funkcie génu Cmtns," Frontiers in Microbiology, zv. 10, str. 2105, 2019.

[48] ​​L. Wu, H. Sun, Y. Hao a kol., "Chemická štruktúra a inhibícia -glukozidázy polysacharidov z Cordyceps militaris s rôznymi vývojovými štádiami," International Journal of Biological Macromolecules, zv. 148, s. 722 – 736, 2020.

[49] PH Leung, S. Zhao, KP Ho a JY Wu, "Chemické vlastnosti a antioxidačná aktivita exopolysacharidov z mycéliovej kultúry huby Cordyceps sinensis Cs-HK1," Food Chemistry, zv. 114, č. 4, s. 1251–1256, 2009.

[50] AS Hombali, JA Solon, BT Venkatesh, NS Nair a JP Peña-Rosas, „Fortifikácia základných potravín vitamínom A na nedostatok vitamínu A“, Cochrane Database of Systematic Reviews, zv. 5, ID článku CD010068, 2019.

[51] F. Alizadeh, A. Bolhassani, A. Khavari, SZ Bathaie, T. Naji a SA Bidgoli, "Retinoidy a ich biologické účinky proti rakovine," International Immunopharmacology, zv. 18, č. 1, s. 43–49, 2014.

[52] N. Bushue a Y.-JY Wan, "Retinoid pathway and cancer therapeutics," Advanced Drug Delivery Reviews, zv. 62, č. 13, s. 1285–1298, 2010.

[53] MJ Ruiz-Hidalgo, EP Benito, G. Sandmann a AP Eslava, "Gén fytoéndehydrogenázy Phycomyces: regulácia jeho expresie modrým svetlom a vitamínom A," Molecular and General Genetics MGG, zv. 253, č. 6, s. 734–744, 1997.

[54] N. Chitsaz, L. Dehghani, M. Rezvani, V. Shaygannejad, F. Khorvash a N. Esmalian-Afyouni, „Porovnávacie hodnotenie doplnku vitamínu D o glykemických indexoch pri autoimunitných ochoreniach“, Biointerface Research v Applied Chemistry, zv. 6, s. 1627–1630, 2016.

[55] Y. Dong, T. Jing, Q. Meng a kol., "Štúdie o antidiabetických aktivitách extraktu Cordyceps militaris u diabetických potkanov Sprague-Dawley vyvolaných diétou streptozotocínom," BioMed Research International, zv. 2014, ID článku 160980, 11 strán, 2014.

[56] S.-H. Yu, NK Dubey, W.-S. Li a kol., "Liečba Cordyceps militaris zachováva funkciu obličiek u myší s diabetickou nefropatiou typu 2," PLoS One, zv. 11, č. 11, ID článku e0166342, 2016.

[57] J. Khan, S. Norfarhani, RK Sahu a kol., "Vývoj a hodnotenie topického emulgélu aspirínu s použitím rôznych polymérnych báz," Research Journal of Pharmacy and Technology, zv. 13, č. 12, s. 6300 – 6304, 2020.

[58] S. Fattepur, KC Nilugal, TT Darshan a kol., "Toxikologická a farmakologická aktivita etanolových extraktov z Catharanthus roseus u pokusných zvierat," International Journal of Medical Toxicology & Legal Medicine, zv. 21, č. 3- 4, s. 141 – 144, 2018.

[59] N. Sharif, F. Santosh, CN Kiran, A. Fadli, A. Ibrahim a G. Nizam, "Synergický účinok etanolového extraktu z listov melastoma malabataricum a antibiotík," International Journal of Medical Toxicology & Legal Medicine, zv. 21, č. 3-4, s. 167 – 170, 2018.

Chih-Hui Yang, 1,2,3Wen-Shuo Kuo,4 Jun-ShengWang,2Yi-Ping Hsiang,3,5Yu-Mei Lin,1,6 Yi-Ting Wang, 1,6 Fan-Hsuan Tsai,6 Chun- Ting Lee,6,7 Jiun-Hua Chou,1 Huei-Ya Chang,1 Lung-Shuo Wang, 6,8 Shu-Chi Wang, 6,9 a Keng-Shiang Huang 6

1 Katedra biologickej vedy a technológie, Univerzita I-Shou, Kaohsiung, Taiwan

2 Taiwan Instrument Research Institute, National Applied Research Laboratories, Hsinchu, Taiwan

3 Farmaceutické oddelenie nemocnice E-Da, Kaohsiung, Taiwan

4 School of Chemistry and Materials Science, Nanjing University of Information Science and Technology, Nanjing, Čína

5 Katedra biotechnológie a chemického inžinierstva, Univerzita I-Shou, Kaohsiung, Taiwan

6 School of Chinese Medicine for Post-Baccalaureate, I-Shou University, Kaohsiung, Taiwan

7 Klinika čínskej medicíny Amulette, Taipei, Taiwan

8 Oddelenie čínskej medicíny, Sin-Lau Hospital, Tainan, Taiwan

9 Lekárska fakulta pre medzinárodných študentov, Univerzita I-Shou, Kaohsiung, Taiwan