Časť Ⅰ: Možná relevancia rozpustného receptora luteinizačného hormónu počas vývoja a dospelosti u chlapcov a mužov
Apr 06, 2023
Jednoduché zhrnutie
Reprodukčné hormóny luteinizačný hormón (LH) a ľudský choriový gonadotropín (hCG), obidva agonisty receptora luteinizačného hormónu (LHCGR), sú nevyhnutné pre mužskú reprodukciu počas vývoja a dospelosti. lHCGR je exprimovaný a stimuluje produkciu testosterónu testikulárnymi Leydigovými bunkami. V tejto štúdii demonštrujeme, že rozpustný LHCGR je prítomný v krvi, moči a sperme zdravých chlapcov a mužov, ako aj u pacientov s aberáciami pohlavných chromozómov. Ukazujeme, ako cirkulujúce hladiny sLHCGR korelujú s pubertálnym vývojom, funkciou semenníkov a kvalitou spermií a demonštrujeme, že LHCGR sa uvoľňuje z ľudského negonadálneho tkaniva plodu. HCG sa uvoľňuje do séra cez semenníky a iné orgány, čo naznačuje možnú extragonadálnu úlohu LH alebo hCG u chlapcov a mužov.
Abstraktné
Luteinizačný hormón (LH) a ľudský choriový gonadotropín (hCG) sú agonisty receptora luteinizačného hormónu (LHCGR), ktorý reguluje mužskú reprodukčnú funkciu. lHCGR sa môže uvoľňovať do telesných tekutín. Chceli sme určiť, či je rozpustný LHCGR markerom funkcie gonád. Prierezové, pozdĺžne a intervenčné štúdie sa uskutočnili na 195 zdravých chlapcoch a mužoch a 396 mužoch s neplodnosťou, deficitom alebo Klinefelterovým syndrómom (KS) na prepojenie LHCGR meraného v sére, sperme, moči a pečeňových/obličkových tepnách s funkciou gonád. . lHCGR sa meral in vitro a in vivo na modeloch ľudského semenníkovitého tkaniva a bunkových línií, xenoštepových myších modeloch a výsledky ľudského Western blotu ukázali, že fragmenty LHCGR boli detegované v sére a gonádových tkanivách podobnej veľkosti pomocou troch rôznych protilátok. Dokonca aj po ľudských xenoimplantátoch LHCGR-ELISA nevykazovala žiadnu medzidruhovú skríženú reaktivitu alebo nešpecifické reakcie v myšom sére. Na rozdiel od toho sa sLHCGR uvoľnil do kultivačného média po kultivácii obličiek a nadobličiek ľudského plodu. Sérový sLHCGR bol významne nižší u zdravých chlapcov v puberte (p=0.0001). U zdravých mužov bol sLHCGR v sére negatívne korelovaný s pomerom inhibínu B/FSH (-0,004,p=0,027). U neplodných mužov sLHCGR v sperme negatívne koreloval so sérovým FSH (0,006, p=0,009), koncentráciou spermií (-3,5, p=0,003) a celkovým počtom spermií (-3.2, s.=0.007). Injekcia hCG znížila sLHCGR v sére a moči zdravých mužov (p < 0,01). Záverom možno povedať, že sLHCGR sa uvoľňuje do telesných tekutín a je spojený s pubertálnym vývojom a funkciou gonád. Cirkulujúci sLHCGR u samcov orchideí naznačuje, že sLHCGR v sére môže pochádzať z negonadálnych tkanív a môže fungovať v negonadálnych tkanivách. (Klinické skúšky: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).
Kľúčové slová
LH receptor; puberta; rozvoj; neplodnosť;Výhody Cistanche; extra-gonadálne účinky; gonadotropíny; fetálna oblička; fetálna nadoblička; TCAM2; NTera2
Ak chcete kúpiť, kliknite semBylinný extrakt z cistanche
Úvod
Luteinizačný hormón (LH) a ľudský choriový gonadotropín (hCG) sú agonisty receptora luteinizačného hormónu (LHCGR), ktorý je nevyhnutný pre mužskú reprodukciu počas vývoja a dospelosti [1]. HCG je receptor spojený s G proteínom, o ktorom je známe, že je exprimovaný v Leydigových, granulárnych luteíne a membránových bunkách a je silným regulátorom produkcie pohlavných steroidov [1]. hCG je silný a perzistentný agonista, ale je fyziologicky dôležitý len počas vývoja plodu [2]. Okrem niektorých druhov rakoviny zárodočných buniek a rakoviny pankreasu sa hCG v dospelosti nevytvára, hoci skoršia štúdia zistila nízku pulzačnú sekréciu hypofýzového hCG u dospelých mužov a žien. hCG sa používa na liečbu žien na vyvolanie ovulácie počas liečby neplodnosti, u mužov na stimuláciu syntézy testosterónu a potenciálnej spermatogenézy u hypogonadálnych mužov alebo ako diagnostický test na endogénnu produkciu testosterónu [4]. Ablácia myšacieho LH receptora (LHCGR) vedie k dramatickému zníženiu kvality testosterónu a spermy [5] a niekoľko výskumných skupín identifikovalo mutácie a SNP v LHCGR, čo dokazuje jeho dôležitosť pre ľudskú reprodukčnú funkciu [6-8].
Gén LHCGR sa nachádza na chromozóme 2 a pozostáva z 11 exónov, z ktorých exóny 1-10 kódujú extracelulárne štrukturálne domény a exón 11 kóduje 7 transmembránových a intracelulárnych štrukturálnych domén [9]. Existuje niekoľko izoforiem LHCGR, pričom sa predpokladá, že jedna z nich je vylučovaná, pretože jej chýba transmembránová kotva [10]. Ďalšou možnosťou je, že uvoľňovanie LHCGR do telesných tekutín je závislé na enzymatickom štiepení proteínov na bunkovej membráne, ako sú štiepené ADAM, MMP a iné známe transmembránové proteíny. Ukázalo sa, že hCG špecificky upreguluje MMP-2 a MMP{8}} [11,12] a niekoľko štúdií preukázalo posttranskripčnú reguláciu LHCGR [13,14]. Rozpustný LHCGR (LHC) bol meraný v ženskom sére a folikulárnej tekutine pomocou platformy ELISA [15,16]. Špecifickosť protilátok použitých v teste ELISA bola overená expresiou rôznych fragmentov LHCGR v bunkách CHO na lokalizáciu epitopu a detekciu expresie v ľudskej placente [15-17]. sLHCGR bol detegovaný v sére pomocou LC-MS/MS [18]. sérové koncentrácie sLHCGR u žien boli spojené s liečbou neplodnosti, preeklampsiou, predčasným pôrodom a tehotenstvom u detí s implantáciou Downovho syndrómu [15,16], ale doteraz neboli potvrdené inými výskumnými skupinami. Pokiaľ je nám známe, sLHCGR nebol nikdy opísaný v telesných tekutinách zdravých mužov, vyvíjajúcich sa dospievajúcich chlapcov alebo mužov s aberáciami pohlavných chromozómov. sLHCGR môže fungovať v mužskom obehu ako marker gonadálnej funkcie prostredníctvom vysokoafinitného väzbového transportu alebo zmeny aktivity LH alebo hCG.
Materiály a metódy
1. Kohorty
Mladí muži zo všeobecnej populácie
V Dánsku musia všetci zdraví mladí muži starší ako 18 rokov absolvovať fyzické vyšetrenie, aby sa zistilo, či sú vhodní na vojenskú službu. Od roku 1996 bolo každý rok vyšetrených na kvalitu spermy približne 300 brancov, ktorí predstavujú všeobecnú populáciu. Všetci poskytli vzorky semena, vyplnili dotazník, nechali si urobiť ultrazvukové vyšetrenie semenníkov a odobrali vzorky krvi. Do aktuálnej štúdie boli zahrnuté vzorky séra a spermy z biobanky, ako aj ultrazvukové hodnotenia a informácie o BMI a veku od 148 mužov skúmaných v rokoch 2013 a 2014 (schválenie etickej komisie: H-KF-289428).
Zdraví chlapci pred a po puberte
Copenhagen Adolescence Study je kombinovaná prierezová a longitudinálna štúdia zdravých dánskych detí [20]. Z náhodne vybraných verejných škôl bolo pozvaných na účasť 6203 detí. Celkový počet účastníkov bol 2020 detí. Pozdĺžne sledovanie 209 detí (101 chlapcov) sa vykonávalo každých 6 mesiacov a zahŕňalo fyzické vyšetrenie, Tannerovo hodnotenie pubertálnych štádií a vzorky krvi a moču. Do tejto štúdie bolo zahrnutých 36 chlapcov s dlhodobým sledovaním na posúdenie sLHCGR počas puberty (klinická štúdia: NTC01411527).
Neplodní muži bez závažných komorbidít
Copenhagen-Bone-Gonad Study je kohortová štúdia 307 neplodných mužov bez závažných komorbidít, ktorí navštevovali našu mužskú kliniku v rokoch 2011 až 2015, z toho celkovo 1427 mužov [21,22]. Všetci muži boli odoslaní na našu kliniku z dôvodu nízkej kvality semena a túžby po rodičovstve. Všetci podstúpili fyzikálne vyšetrenie vrátane ultrazvuku semenníkov, odobrali vzorky krvi a poskytli vzorky spermy. Špecialista získal ich podrobnú anamnézu. Vedci sledovali mužov 150 dní a užívali vitamín D alebo placebo, ako už bolo opísané. Všetky údaje poskytnuté v tejto štúdii boli z počiatočnej návštevy pred intervenciou a všetky zahrnuté premenné boli vopred definované (klinická štúdia: NCT01304927).
Štandardizované Cistanche
Muži a chlapci s Klinefelterovým syndrómom a pacienti s anorchiou
Z našej mužskej kliniky sme identifikovali 64 chlapcov a mužov s Klinefelterovým syndrómom (KS), 47 postpubertálnych a 16 predpubertálnych, definovaných podľa Tannerovho stagingu. Pre všetkých sme mali k dispozícii presné chromozomálne aberácie, anamnézu, nástup puberty a informácie o sére. 7 chlapcov podstúpilo dlhodobé sledovanie s pravidelným klinickým hodnotením a odberom krvi pred a počas nástupu puberty.
Zahrnuli sme aj 8 mužov s normálnym počtom chromozómov, ktorým boli odstránené bilaterálne semenníky pre predchádzajúce stavy: karcinóm semenníkov zo zárodočných buniek (n=4), difúzny karcinóm prostaty (n=1), bilaterálny kryptorchizmus a detská orchiektómia ( n=1), bilaterálna neoplázia zárodočných buniek in situ (n=1) a pokročilá rakovina semenníkov po odstránení zostávajúcich semenníkov v dôsledku traumy (n=1).
Dospelí podstupujúce meranie prietoku Splanchnicus
Zahrnuli sme troch mužov a tri postmenopauzálne ženy s normálnou funkciou pečene, ktorí boli prijatí pre podozrenie na mezenterickú ischémiu a boli poslaní na meranie viscerálneho prietoku krvi, ale nevykazovali žiadnu mezenterickú ischémiu. Krvné vzorky sa odoberali súčasne z pečene, obličiek, stehennej žily a príslušnej tepny (schválenie etickej komisie: H.18048245)
Intervenčná štúdia: Zdraví muži vystavení ľudskému chorionovému gonadotropínu
Jedenásť zdravých mužov bolo prijatých na účasť na klinickej intervencii prostredníctvom oznámenia dánskeho Rigshospitalet. Dobrovoľníci boli liečení 5 000 IU ľudského chorionického gonadotropínu a ich maximálna produkcia endogénneho testosterónu bola meraná porovnaním základných vzoriek krvi a moču s následnými vzorkami odobratými 8, 24 a 72 hodín po injekcii hCG (klinická štúdia: NCT03418896).
2. Myši, ľudské tkanivo a bunkové línie
Dva kmene ľudských buniek rakoviny semenníkov NTera{0}} a TCam{1}}, reprezentujúce embryonálny karcinóm a seminóm, sa použili a kultivovali, ako už bolo opísané [23].
Séra sa odobrali od nahých myší bez tumoru (WT) a nahých myší s xenoštepom TCam{1}} liečených vektorom, LH alebo hCG (Inšpektorát pre experimenty na zvieratách, Kodaň, Dánsko, číslo licencie: 2012-15-2934-00051) .
Ľudské fetálne tkanivá v prvom trimestri boli odobraté z tkanív darovaných žien po plánovaných potratoch. Fetálne obličky a fetálne nadobličkové tkanivo boli kultivované v suspenzných kvapkových modeloch, ako je opísané vyššie, a médium bolo odobraté na analýzu [24,25] (schválenie etickej komisie: H-1-2012-007).
Vzorky semenníkov dospelých sa získali od mužov s rakovinou semenníkov po ovariektómii (schválenie etickej komisie: H{{0}}). Peritumorálne tkanivo obsahujúce nezhubné oblasti sa skladovalo pri - 80◦ C alebo fixovalo cez noc pri 4 °C vo formalíne alebo modifikovanom Stieveovom fixatíve (200 ml 37 % formaldehydu, 40 ml kyseliny octovej v 1 1 0,05 M fosfátu pufor, pH 7,4).
3. Biochemické analýzy
Detekcia celkového sLHCGR v sére, sperme, moči a rôznych kultivačných médiách sa uskutočnila v procese validácie pomocou súprav ELISA od New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) s použitím protilátky LHR029 proti ľudskému LHCGR a meraním všetkých z týchto opakovane. test ELISA mal detekčný limit 0,01 pmol/ml a maximálnu hladinu 15,55 Šesť mužov z bežnej populácie s hladinami sLHCGR nad hornou hranicou detekcie malo svoje vzorky nariedené a premerané, pričom vykazovali hladiny až do 30 pmol/ml. výkonnosť platformy ELISA bola podrobne opísaná vyššie [15-17].
Doplnky Cistanche
Nastavili sme tiež dva rôzne interné testy ELISA, ktoré nastavili naši laboratórni technici, a všetky ďalšie činidlá poskytla spoločnosť Origin Biomarkers Ltd, Spojené kráľovstvo, podľa ich navrhovaného nastavenia [26]. Po prvé, cirkulujúci sLHCGR naviazaný na hCG bol detegovaný pomocou sendvičových súprav ELISA s protilátkami 5A10C9 (ProMab) a am{16}}{{20}}}904pun ( OriGene) namierené proti LHCGR a hCG. Po druhé, podobne sme použili internú ELISA na stanovenie celkových arteriálnych a venóznych vzoriek pečene, obličiek a dolnej končatiny od šiestich dospelých sLHCGR, kde sme použili rovnakú protilátku LHR0}29 (NBCL Holland) proti sLHCGR. Testovali sa dva rôzne protokoly. Všetky merania sLHCGR opísané v tomto článku sa uskutočnili pomocou NBCL ELISA, s výnimkou komplexu hCG-sLHCGR a arteriálnych/venóznych vzoriek z orgánov opísaných vyššie. U zdravých chlapcov sa testosterón analyzoval pomocou súpravy RIA potiahnutej DPC (Diagnostic Products, Los Angeles, CA) s limitom detekcie (LOD) 0,23 nmol/l a CV 8,6 percent pomocou časovo rozlíšenej imunofluorescencie. (Delfia; Wallac, Turku, Fínsko), detekčný limit bol 0,20 nmol/l s CV 6,4 percenta. U dospelých sa testosterón a globulín viažuci pohlavné hormóny (SHBG) analyzovali chemiluminiscenčným imunotestom (Access, Beckman Coulter, USA) s LOD 0,35 nmol/l a 0,33 nmol/l. Hladiny FSH a LH v sére a moči sa merali pomocou časovo rozlíšenej imunofluorescencie (Delfia; Wallac, Turku, Fínsko) s detekčnými limitmi 0,06 a 0,05 IU/l, v uvedenom poradí, a CV a lt; obe po 5 percent. Test inhibínu B sa uskutočnil pomocou špecifického bilaterálneho enzýmového imunotestu (inhibín B genII, Beckman Coulter, USA) CV <11 percent. Pre AMH sme použili enzýmový imunotest Beckman Coulter (Immunotech, Beckman Coulter, Marseille, Francúzsko) a CV <8 percent. Nakoniec sa IGF1 a IGF-BP3 stanovili pomocou chemiluminiscenčného testu imunodiagnostického systému IDS-iSYS s CVs 10 percent a 9 percent, v danom poradí. Voľný estradiol sa vypočítal pomocou Mazerovej konštanty a voľný testosterón (FT) sa vypočítal pomocou Vermeulenovho vzorca [27,28].
Analýza spermií
Zdraví mladí muži a neplodní dospelí účastníci poskytli vzorky spermy a získali informácie o trvaní ejakulačnej abstinencie. Analýza spermy bola vykonaná vyškolenými technikmi, ako už bolo opísané [19]. Objem spermy sa odhadol vážením. Na posúdenie životaschopnosti spermií sa 10 μl dobre premiešaných replikátov spermy umiestnil na sklíčka a skúmal sa pod mikroskopom × 4{10}}0x pri zahrievanej časti na 37 °C. Spermie boli klasifikované ako pokročilý životaschopný (trieda WHO a plus B), neprogresívny životaschopný (trieda C) alebo neaktívny (trieda D). Použil sa priemer dvoch hodnotení životaschopnosti. Na vyhodnotenie koncentrácie spermií sa vzorky zriedili v destilovanom vodnom roztoku 0,6 mol/l NaHC03 a 0,4 percenta (obj./obj.) formaldehydu a potom sa vyhodnotili pomocou Bürker-Türkovho hemocytometra a použil sa priemer hodnotení. Počítali sa iba spermie s chvostom. Nakoniec boli pripravené stery a zafarbené Pap farbením a morfológia spermií bola hodnotená striktne podľa kritérií [29].
Western blotting
Ľudské testikulárne tkanivo sa homogenizovalo v lyzačnom pufri, zriedilo sa v nanášacom pufri SDS a potom sa zahrievalo na 95 °C počas 5 minút. Vzorky boli nanesené na 4-20 percent prefabrikovaných polyakrylamidových gélov (BioRad, kat. č. 456-8096) a prebiehali pri 100 V počas 1 hodiny, aby sa oddelili proteíny. Na detekciu sLHCGR v sére sa pred nanesením vzoriek na gél odstránili albumín a IgG pomocou súpravy na odstránenie albumínu/IgG od Pierce (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA, kat. č. 89875). po gélovej elektroforéze boli proteíny prenesené na polyvinylidéndifluoridové membrány pomocou mokrého blotru (BioRad). Membrány sa uzavreli v tris-pufrovanom fyziologickom roztoku a 5% odstredenom sušenom mlieku na 1 hodinu, potom sa inkubovali cez noc pri 4 °C s primárnymi protilátkami a 1 hodinu pri RT so sekundárnymi protilátkami. Membrány sa premyli zosilnenou chemiluminiscenciou (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrát, kat. č. 34095) a fotodetektorom so zobrazovacím systémom chemiDoc MP (BioRad, kat. č. 17001402). Na detekciu LHCGR v tkanive a sére sa použili tri rôzne protilátky: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, rovnaká protilátka ako v súprave ELISA na sérum (LHR029) a Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA, SC- 26341). -2 mikroglobulín sa použil ako kontrola načítania.
Imunohistochémia
Imunohistochémia sa uskutočnila tak, ako už bolo opísané [25]. Stručne povedané, rezy boli fixované modifikovaným fixačným prostriedkom Stiff, odparafínované a rehydratované. Extrakcia antigénu sa uskutočnila v autokláve obsahujúcom citrátový extrakčný pufor (10 mM, pH 6.0). Endogénna peroxidáza bola blokovaná 3 % (obj./obj.) H202 v metanole počas 30 minút. Medzi každým krokom boli rezy premyté v TBS. Rezy sa inkubovali s 0,5 percentným konským sérom BSA počas 30 minút, potom nasledovala inkubácia cez noc s dvoma rôznymi primárnymi protilátkami počas 1 hodiny pri teplote miestnosti (LHR029 pre WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC- 25828). Rezy boli inkubované so sekundárnymi protilátkami počas 30 minút. Obrázky boli vizualizované aminoetylkarbazolom (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Negatívne kontroly boli bez primárnych protilátok. Žiadna z negatívnych kontrol nebola zafarbená. Kontrafarbenie sa uskutočnilo Mayerovým hematoxylínom a montáž sa uskutočnila pomocou Aquatex. Rezy boli hodnotené na mikroskope Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Melville, NY, USA). Konečná analýza sa uskutočnila pomocou softvéru NDPview verzie 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, Iwata City, Japonsko.
Prínosy extraktu z cistanche pre obličky
LITERATÚRA
1. Dufau, ML Receptor luteinizačného hormónu. Annu. Physiol. 1998, 60, 461-496.
2. Rao, CV Diferenciálne vlastnosti väzby ľudského chorionického gonadotropínu a ľudského luteinizačného hormónu na plazmatické membrány corpora lutea hovädzieho dobytka. Acta Endocrinol. 1979, 90, 696-710.
3. Odell, WD; Griffin, J. Pulzujúca sekrécia ľudského chorionického gonadotropínu u normálnych dospelých. N. Engl. J. Med. 1987, 317, 1688–1691.
4. Bang, AK; Nordkap, L.; Almstrup, K.; Priskorn, L.; Petersen, JH; Rajpert-De Meyts, E.; Andersson, A.-M.; Juul, A.; Jørgensen, N. Dynamické GnRH a testovanie hCG: Stanovenie nových diagnostických referenčných úrovní. Eur. J. Endocrinol. 2017, 176, 379–391.
5. Zhang, FP; Poutanen, M.; Wilbertz, J.; Huhtaniemi, I. Normálny prenatálny, ale zastavený postnatálny sexuálny vývoj myší s knockoutovaným receptorom luteinizačného hormónu (LuRKO). Mol. Endocrinol. 2001, 15, 172–183.
6. Bruysters, M.; Christin-Maitre, S.; Verhoef-Post, M.; Sultan, C.; Auger, J.; Faugeron, I.; Larue, L.; Lumbroso, S.; Themmen, APN; Bouchard, P. Nová zostrihová mutácia LH receptora je zodpovedná za mužský hypogonadizmus so subnormálnou produkciou spermií v proposite a za neplodnosť s pravidelnými cyklami u postihnutej sestry. Hum. Reprod. 2008, 23, 1917–1923.
7. Latronico, AC; Arnhold, IJP Inaktivačné mutácie receptora ľudského luteinizačného hormónu u oboch pohlaví. Semin. Reprod. Med. 2012, 30, 382–386.
8. Simoni, M.; Tüttelmann, F.; Michel, C.; Böckenfeld, Y.; Nieschlag, E.; Gromoll, J. Polymorfizmy génu receptora luteinizačného hormónu/chorionického gonadotropínu: Asociácia s mal-zostupnými semenníkmi a mužskou neplodnosťou. Farmakogenet. Genom. 2008, 18, 193–200.
9. Ascoli, M.; Fanelli, F.; Segaloff, DL Lutropín/choriogonadotropínový receptor, perspektíva z roku 2002. Endokr. Rev. 2002, 23, 141–174.
10. Tena-Sempere, M.; Zhang, FP; Huhtaniemi, I. Pretrvávajúca expresia skrátenej formy mediátora receptora luteinizačného hormónu ribonukleovej kyseliny v semenníkoch potkana po selektívnej deštrukcii Leydigových buniek etylénmetánsulfonátom. Endokrinológia 1994, 135, 1018–1024.
11. Fluhr, H.; Bischof-Islami, D.; Krenzer, S.; Licht, P.; Bischof, P.; Zygmunt, M. Ľudský choriový gonadotropín stimuluje matricové metaloproteinázy-2 a -9 v cytotrofoblastických bunkách a znižuje tkanivový inhibítor metaloproteináz-1, -2 a -3 v decidualizovaných bunkách endometriálne stromálne bunky. Fertil. Sterilné. 2008, 90, 1390–1395.
12. Licht, P.; Fluhr, H.; Neuwinger, J.; Wallwiener, D.; Wildt, L. Je ľudský choriový gonadotropín priamo zapojený do regulácie ľudskej implantácie? Mol. Bunka. Endocrinol. 2007, 269, 85–92.
13. Li, Y.-X.; Guo, X.; Gulappa, T.; Menon, B.; Menon, KMJ SREBP hrá regulačnú úlohu pri expresii mRNA receptora LH/hCG v ľudských granulosa-luteínových bunkách. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2019.
14. Menon, KMJ; Menon, B.; Wang, L.; Gulappa, T.; Harada, M. Molekulárna regulácia expresie gonadotropínového receptora: Vzťah k metabolizmu sterolov. Mol. Bunka. Endocrinol. 2010, 329, 26–32.
15. Chambers, AE; Griffin, C.; Naif, SA; Mills, I.; Mills, WE; Syngelaki, A.; Nicolaides, KH; Banerjee, S. Kvantitatívne testy ELISA pre komplex LHCGR rozpustný v sére a hCG-LHCGR: Potenciálna diagnostika pri skríningu tehotenstva v prvom trimestri na mŕtve narodenie, Downov syndróm, predčasný pôrod a preeklampsiu. Reprod. Biol. Endocrinol. 2012, 10, 113.
16. Chambers, AE; Nayini, KP; Mills, WE; Lockwood, GM; Banerjee, S. Cirkulujúci LH/hCG receptor (LHCGR) môže identifikovať pacientov pred liečbou IVF s rizikom OHSS a slabej implantácie. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 161.
17. Chambers, AE; Stanley, PF; Randeva, H.; Banerjee, S. Uvoľňovanie rozpustného receptora LH/hCG (LHCGR) z transfekovaných buniek a explantátov placenty sprostredkované mikrovezikulami. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 64.
18. Gao, HJ; Chen, YJ; Zuo, D.; Xiao, MM; Li, Y.; Guo, H.; Zhang, N.; Chen, RB Kvantitatívna proteomická analýza pre vysoko výkonný skríning diferenciálnych glykoproteínov v sére hepatocelulárneho karcinómu. Cancer Biol. Med. 2015, 12, 246–254.
19. Priskorn, L.; Nordkap, L.; Bang, AK; Krause, M.; Holmboe, SA; Egeberg Palme, DL; Krídlo, SB; Mørup, N.; Carlsen, E.; Joensen, OSN; a kol. Priemerný počet spermií zostáva nezmenený napriek zníženiu fajčenia matiek: Výsledky z veľkej prierezovej štúdie s každoročným výskumom počas 21 rokov. Hum. Reprod. 2018, 33, 998–1008.
20. Sørensen, K.; Aksglaede, L.; Petersen, JH; Juul, A. Nedávne zmeny v načasovaní puberty u zdravých dánskych chlapcov: asociácie s indexom telesnej hmotnosti. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010, 95, 263–270.
21. Blomberg Jensen, M.; Lawaetz, JG; Petersen, JH; Juul, A.; Jørgensen, N. Účinky suplementácie vitamínu D na kvalitu spermy, reprodukčné hormóny a živú pôrodnosť: Randomizovaná klinická štúdia. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2018, 103, 870–881.
22. Blomberg Jensen, M.; Gerner Lawaetz, J.; Andersson, A.-M.; Petersen, JH; Nordkap, L.; Bang, AK; Ekbom, P.; Joensen, OSN; Prætorius, L.; Lundstrøm, P.; a kol. Nedostatok vitamínu D a nízky ionizovaný vápnik sú spojené s kvalitou semena a hladinami pohlavných steroidov u neplodných mužov. Hum. Reprod. 2016, 31, 1875–1885.
23. Lorenzen, M.; Nielsen, JE; Andreassen, CH; Juul, A.; Toft, BG; Rajpert-De Meyts, E.; Daugaard, G.; Blomberg Jensen, M. Receptor luteinizačného hormónu je vyjadrený v nádoroch testikulárnych zárodočných buniek: Možné dôsledky pre rast nádoru a prognózu. Rakoviny 2020, 12, 1358.
24. Eldrup, E.; Theilade, S.; Lorenzen, M.; Andreassen, CH; Poulsen, KH; Nielsen, JE; Hansen, D.; El Fassi, D.; Berg, JO; Bagi, P.; a kol. Hyperkalcémia po injekciách kozmetického oleja: Odhalenie etiológie, patogenézy a závažnosti. J. Bone Miner. Res. 2020, 36, 322–333.
25. Jørgensen, A.; Macdonald, J.; Nielsen, JE; Kilcoyne, KR; Perlman, S.; Lundvall, L.; Langhoff Thuesen, L.; Juul Hare, K.; Frederiksen, H.; Andersson, A.-M.; a kol. Uzlová signalizácia reguluje vývoj zárodočných buniek a vytváranie semenných povrazcov v ľudskom fetálnom semenníku. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.
26. Chambers, AE; Fairbairn, C.; Gaudoin, M.; Mills, W.; Woo, I.; Pandian, R.; Stanczyk, FZ; Chung, K.; Banerjee, S. Rozpustný LH-HCG receptor a estradiol ako prediktory tehotenstva a živého pôrodu pri IVF. Reprod. Biomed. Online 2019, 38, 159–168.
27. Vermeulen, A.; Verdonck, L.; Kaufman, JM Kritické hodnotenie jednoduchých metód na odhad voľného testosterónu v sére. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999, 84, 3666-3672.
28. Mazer, NA Nová tabuľková metóda na výpočet voľných sérových koncentrácií testosterónu, dihydrotestosterónu, estradiolu, estrónu a kortizolu: S názornými príkladmi z mužskej a ženskej populácie. Steroidy 2009, 74, 512-519.
29. Menkveld, R.; Stander, FS; Kotze, TJ; Kruger, TF; van Zyl, JA Hodnotenie morfologických charakteristík ľudských spermií podľa prísnejších kritérií. Hum. Reprod. 1990, 5, 586-592.
Li Juel Mortensen1, Mette Lorenzen1, Anne Jørgensen2, Jakob Albrethsen2, Niels Jørgensen2Søren Møller3,4, Anna-Maria Anderssonová2, Anders Juul2,4a Martin Blomberg Jensen1,5
1. Skupina endokrinológie skeletu, minerálov a gonád, Univerzitné oddelenie rastu a reprodukcie, Rigshospitalet, 2100 Kodaň, Dánsko; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)
2. Katedra rastu a reprodukcie a Medzinárodné centrum pre výskum a výskum v oblasti endokrinného narušenia mužskej reprodukcie a zdravia detí (EDMaRC), Rigshospitalet, Univerzita v Kodani, Blegdamsvej 9, 2100 Kodaň, Dánsko; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (NJ); Anna-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)
3. Centrum pre funkčné a diagnostické zobrazovanie a výskum, Oddelenie klinickej fyziológie a nukleárnej medicíny 260, Nemocnica Hvidovre, 2650 Kodaň, Dánsko; Soeren.Moeller@regionh.dk
4. Katedra klinickej medicíny, Fakulta zdravotníckych vied, Univerzita v Kodani, 2200 Kodaň, Dánsko
5. Divízia výskumu kostí a minerálov, Harvard School of Dental Medicine/Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA