Extrakt z listov Ocimum Gratissimum bohatý na polyfenoly zabraňuje toxickým účinkom cyklofosfamidu na funkciu obličiek potkanov Wistar

Pre viac informácií kontaktujte:oscar.xiao@wecistanche.com

Abstraktné

Pozadie:Cyklofosfamid (CP) je jednou zo silných a lacných chemoterapií používaných v klinických podmienkach proti rôznym nádorom. Jeho spojenie s nefrotoxicitou však obmedzuje jeho terapeutické použitie. List Ocimum gratis simum je liečivá rastlina s početnými farmakologickými a terapeutickými účinkami, ako sú antioxidačné, protizápalové a antiapoptotické vlastnosti.

Metódy: Táto štúdia bola navrhnutá na vyhodnotenie ochranného účinku Ocimum gratissimum (OG) proti CP-indukovanej dysfunkcii obličiek u potkanov. Potkanom sa predliečilo 400 mg/kg telesnej hmotnosti listového extraktu Ocimum gratissimum (Ocimum G.) počas 4 dní a potom sa od 5. do 7. dňa súbežne podávalo 50 mg/kg telesnej hmotnosti CP spolu s Ocimum G. Markery funkcie obličiek a oxidačný stres, príjem potravy a vody, elektrolyty, aldosterón, infltrácia leukocytov, zápal a histopatologické zmeny.

Výsledky:V skupinách liečených CP sa pozoroval zjavný zápal obličiek a poškodenie obličiek. Avšak podávanie extraktu z listov Ocimum G. predchádzalo oxidačnému stresu, poraneniam obličiek, zmierňovalo zápal, zvyšovalo produkciu aldosterónu a redukovalo straty sodíkových iónov a vody u potkanov. Plazmatický kreatinín, močovina a koncentrácia albumínu v moči boli normalizované po podaní extraktu Ocimum G. u potkanov liečených CP. Ocimum G. tiež znížil plazmatické koncentrácie interleukínu-(IL)-6, C-reaktívneho proteínu a aktivitu myeloperoxidázy a malondialdehydu u potkanov liečených CP.

Záver: Ocimum G. zabránil poškodeniu obličiek a zlepšil funkciu obličiek inhibíciou zápalu a oxidantom indukovanej toxicity CP. Účinnosť Ocimum G. súvisí s prítomnosťou rôznych fytochemikálií v rastline.

Kľúčové slová:Antioxidant, kreatinín, cyklofosfamid, list Ocimum gratissimum, obličky, sodík.

Pozadie

Cyklofosfamid (CP) je antineoplastická zlúčenina, ktorá je spojená s dusíkatým yperitom. Používa sa v klinickom prostredí na liečbu širokého spektra nádorových ochorení a pri imunosupresívnej terapii po transplantácii orgánov, liečbe autoimunitných porúch, ako je reumatoidná artritída, Wegenerova granulomatóza a nefritický syndróm u detí [1]. Bez ohľadu na široké spektrum klinického použitia lieku je známe, že CP spôsobuje množstvo poranení orgánov závislých od dávky, čo preto obmedzuje jeho terapeutické použitie v klinickom prostredí. Keďže bolo známe, že je prospešný pri liečbe nefrotického syndrómu u detí [1], v niektorých predchádzajúcich štúdiách sa naopak uvádzalo, že vyvoláva poškodenie močového mechúra [2, 3] a spôsobuje renálnu toxicitu, keď sa používa nevhodne v dôsledku použitia CP. predávkovanie [4–6]. Aktívny metabolit CP, 4-hydroxycyklofosfamid, je čiastočne tautomerizovaný na aldosfosfamid, ktorý sa zase štiepi fosfatázou v obehu a živých bunkách a vedie k vzniku dvoch cytotoxických metabolitov, fosforamidového yperitu a akroleínu [6]. Terapeutický účinok fosforamidového yperitu sa už predtým uvádzal ako zodpovedný za protinádorové účinky [6], zatiaľ čo akroleín je zodpovedný za cytotoxické účinky CP, ako je hemoragická cystitída počas podávania lieku [2, 7]. Toxický metabolit CP poškodzuje živé tkanivá znížením endogénneho antioxidačného systému tkaniva prostredníctvom tvorby reaktívnych voľných kyslíkových radikálov, ktoré sú pre živé bunky mutagénne. Uvádza sa, že podávanie vysokej dávky CP zvyšuje peroxidáciu lipidov a spôsobuje zníženie endogénnych enzymatických a neenzymatických antioxidantov [7, 8]. Predchádzajúce štúdie popisovali prospešné využitie antioxidačných látok spolu s chemoterapiou pri prevencii vedľajších účinkov lieku na telesné tkanivá [7, 9, 10]. Antioxidačné látky ako kolaviron sa ukázali ako účinné pri prevencii kardiotoxicity CP u potkanov [11]. Teda kombináciaantioxidačné činidlospolu s chemoterapeutickými liekmi môže byť potenciálnym terapeutickým prístupom na prevenciu alebo zastavenie cytotoxického vývoja CP. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) je čeľaď Lamiaceae, ktorá patrí medzi bylinné druhy rastlín. V mnohých tropických krajinách (Ázia, India, Brazília a západná Afrika atď.) je známy ako klinček alebo africká bazalka. Vo veľkej miere sa vyskytuje v Nigérii [12]. Mnohé štáty tejto krajiny (Nigéria) používali Ocimum G. ako omáčku a zeleninovú polievku. Zistilo sa, že listy a listy Ocimum G. obsahujú polyfenoly a iné bioaktívne zlúčeniny [13, 14]. Rastliny Ocimum gratissimum sa používajú na liečbu rôznych chorôb, ako je hnačka, ulcerózna kolitída, horúčka a katar [14–17]. Rastlina má mnoho farmakologických výhod vďaka svojim protizápalovým, antioxidačným, antibakteriálnym, antidiabetickým a antimalarickým schopnostiam [14, 18–20]. Antimikrobiálna aktivita extraktu Ocimum G. bola testovaná in vitro proti rôznym ľudským patogénom ako Klebsiella pneumónia, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis atď. Antifungálna aktivita esenciálneho oleja Ocimum G Extrakty boli zaznamenané in vitro [19, 21, 22] a Ocimum G. bol použitý ako apelant proti komárom [23]. Nedávna štúdia na zvieratách naznačila dôležitosť ochranného účinku extraktov Ocimum G. pri prevencii nepravidelností krvného tlaku proti toxicite chloridu kobaltnatého [24], ako aj pri zmierňovaní srdcových abnormalít spojených s fibrózou pečene znížením regulácie interleukínu-6 signálnej dráhy [25] alebo vyvolaním antioxidačných účinkov [26]. Vodný extrakt z listov Ocimum G. preukázal antioxidačné účinky proti kardio-renálnemu poškodeniu vyvolanému chloridom kobaltnatým [24] a predchádzal žalúdočným vredom znížením sekrécie žalúdočnej kyseliny a ulceráciou [27]. Tiež kyselina ursolová z extraktov Ocimum G. preukázala aktivitu proti kosáčikovitá (28) a protirakovinovú (29, 30). Okrem toho sa ukázalo, že esenciálne oleje Ocimum G. vykazujú u potkanov vazorelaxačné vlastnosti závislé od endotelu [31]. Štúdie in vivo a in vitro hodnotili eugenol, liečivú zložku Ocimum G., na zníženie hladín glukózy v krvi prostredníctvom inhibície alfa-glukozidázy [32]. Okrem toho klinická štúdia preukázala farmakologickú primeranosť lieku Ocimum G. na to, aby vykazoval podobnú aktivitu ako chlórhexidín proti plaku a zápalu ďasien [33]. So všetkými týmito vlastnosťami Ocimum G. sme predpokladali, že Ocimum G. môže byť možným terapeutickým prostriedkom, keď sa má použiť spolu s CP na prevenciu alebo zastavenie nežiaducich účinkov CP. Táto štúdia bola preto navrhnutá tak, aby preskúmala priaznivé účinky extraktu z listov Ocimum gratissimum bohatého na polyfenoly na nefrotoxicitu vyvolanú CP u samcov potkanov Wistar.

Ak sa chcete dozvedieť viac, kliknite sem

Materiály a metódy

Injekcia cyklofosfamidu (200 mg/10 ml) bola získaná od Celon Laboratory (Hyderabad, India); injekcia ketamín hydrochloridu (50 mg/10 ml) bola zakúpená od Popular Pharmaceuticals Ltd., (Gazipur, Bangladéš); Testovacie súpravy na biochemické parametre boli získané od Randox Laboratories Limited, (Crumlin, Spojené kráľovstvo) atď. Boli zakúpené 1-difenyl-2-pikrylhydrazyl (DPPH), metanol, uhličitan sodný, Trolox a činidlo Folin-Ciocâlteu od spoločnosti Merck & Co., Kenilworth, NJ, USA. Medzi použité prístroje patrí plynová chromatografia-hmotnostný spektrometer (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonsko) a ultrafialový spektrofotometer (Beckman, DU 7400, USA), Soxhletov prístroj, rotačná odparka, mikroskop (Olympus CH; Olympus , Tokio, Japonsko); fotoaparát (Leica DM 750).

Príprava polyfenolového extraktu z listov Ocimum gratissimum

Listy Ocimum gratissimum boli zozbierané zo záhrady v Usi, štát Ekiti, Nigéria. Získali sa príslušné inštitucionálne povolenia na zber Ocimum gratissimum. Táto štúdia je v súlade s medzinárodnými, národnými a/alebo inštitucionálnymi smernicami pre použitie rôznych častí rastliny. Vzorky rastliny overil pán Omole, kurátor v herbári Katedry botaniky, Univerzita Obafemi Awolowo, Ile-Ife, kde bol kupónový exemplár (1945) uložený v herbári univerzity. Extrakt bohatý na polyfenoly bol získaný z listov Ocimum G. (900g) podľa našich predchádzajúcich metód extrakcie rastliny [14]. Na získanie konečného extrakčného produktu, extraktu bohatého na polyfenoly z listov Ocimum gratissimum (PREOG), sa použil metanol za zníženého tlaku pri 40 stupňoch s použitím rotačnej odparky. Výsledný koncentrát extraktu bol lyofilizovaný pomocou lyofilizátora. Zvyšok (8{{40}}},85 g) sa uchovával v Petriho miskách s tesne priliehajúcim krytom a skladoval sa pri -20 stupňoch, kým nebol potrebný pre štúdiu. Získaný extrakt Te OG bol rozpustený vo vode (0,2 ml/podanie) a podaný potkanom podľa navrhnutého dávkovania. Analýza plynovou chromatografiou-hmotnostná spektrometria (GC‑MS) OG extraktov Chemické zloženie získaného extraktu bolo kontrolované pomocou plynovej chromatografie-hmotnostnej spektrometrie (GC–MS). Chavez a kol. [34] metóda bola prijatá s miernou úpravou. Na stanovenie zlúčenín sa použila kapilárna kolóna z taveného oxidu kremičitého (hrúbka filmu 30 x 0,25 HP-5Ms, 0,25 μm) obsahujúca hélium ako nosný plyn (prietok 1/ml). Nastavila sa 40 stupňová teplota pece a udržiavala sa 5 minút a potom sa postupne zvyšovala o 3 stupne/min až na 270 stupňov. 60:1 bol nastavený ako deliaci pomer. Pre spojovacie časti a iónové zdroje bola nastavená teplota 180 stupňov a pre hmotnostný spektrometer bola nastavená teplota rozhrania 240 stupňov. Pre množstvo ionizačnej energie sa použilo 70 eV, zatiaľ čo režim nárazu elektrónov (EI) bol zvolený na vytvorenie stabilných a reprodukovateľných hmotnostných spektier a na priebeh vzoriek sa použil rozsah hodnôt 50–650 m/z. Čas oneskorenia MS pred skenovaním bol 5 minút. Získané zlúčeniny sú uvedené v tabuľke 2. Stanovenie celkového obsahu fenolov Celkový obsah fenolov (TPC) v extraktoch sa hodnotil pomocou techniky Folin-Ciocâlteu, ako je opísané v Gulcin et al. [35] s niekoľkými úpravami. Stručne, 100 ul (0,5 mg/ml) extraktov z Ocimum G. bohatých na polyfenol sa umiestnilo do samostatných hladkých skúmaviek. Do každej skúmavky obsahujúcej extrakt z Ocimum G. sa pridalo približne 500 μl (1 percento v/v) Folin-Ciocâlteu fenolového činidla a skúmavky sa nechali stáť 5 minút. a potom vortexovaný. Po ponechaní stáť počas 5 minút sa k alikvótom pridalo asi 400 ul (20 % hmotn./hmotn.) uhličitanu sodného, ​​ktoré sa potom inkubovali v tme pri teplote miestnosti počas 90 minút. Pre vývoj farby. Absorbancia každej zmesi bola hodnotená ultrafialovým spektrofotometrom (Beckman, DU 7400, USA) pri 765 nm. Ako slepý pokus sa použil roztok uhličitanu sodného bez akéhokoľvek pridania Folin-Ciocâlteu fenolového činidla. Pre kalibračnú krivku sa použili štandardy kyseliny galovej. TPC vzoriek boli stanovené z lineárnej regresie štandardov kyseliny galovej. Výsledky boli vyjadrené ako ekvivalent kyseliny galovej (GAE) na gram suchej hmotnosti extraktu Ocimum gratissimum (mg GAE/g). Postup sa uskutočnil v troch opakovaniach (n=3). Test zachytávania voľných radikálov DPPH Aktivita zachytávania voľných radikálov extraktu bola stanovená podľa metódy opísanej v RakMai et al. [36] s malými úpravami. Pridali sa asi 2 ml roztoku DPPH-metanol (180 μmol/l) a zmiešali sa s extraktom v koncentrácii 0,1 mg/ml. Alikvóty boli inkubované v tme pri 25 stupňoch. Absorbancia vzorky bola stanovená pomocou spektrofotometra pri 517 nm v rôznych časových intervaloch medzi 0 a 60 minútami. Alikvóty extraktov bez pridania roztoku DPPH-metanol boli použité ako slepé vzorky. Trolox, syntetický analógvitamínE sa použil ako pozitívna kontrola. Na vyhodnotenie čistiacich vlastností extraktov sa použila nižšie uvedená rovnica. Postup sa uskutočnil v troch vyhotoveniach (n=3). Kde vzorka je extrakt plus DPPH, Ablank je len extrakt, A kontrola je absorbancia kontrolného roztoku (obsahujúceho len DPPH). Starostlivosť o zvieratá Na štúdiu sa použilo dvadsaťosem (28) samcov potkanov Wistar s hmotnosťou 120-180 g. Tey bol získaný z Animal Holding College of Health Sciences, Univerzita Obafemi Awolowo, Ile-Ife. Všetky potkany boli držané v konvenčných klietkach počas 1 týždňa, aby sa aklimatizovali na podmienky prostredia pri 28-32 stupňoch, a bol im umožnený voľný prístup k potrave a čistej pitnej vode. Experiment bol schválený Etickým výborom pre výskum zdravia (HREC) Univerzity Obafemi Awolowo a štúdia bola opísaná v súlade s usmerneniami ARRIVE (zvieratá vo výskume: hlásenie experimentu in vivo) [37].

Cistanche proti únave

Histopatologické štúdie

Tkanivá boli narezané na {{0}}}μm hrubé rezy pomocou mikrotómu, fixované na sklíčka a zafarbené PAS. Sklíčka boli pozorované pod svetelným mikroskopom (Olym pus CH; Olympus, Tokio, Japonsko) a mikrofotografie boli urobené fotoaparátom Leica DM 750 pri upozorneniach ×400. Sekcia obličkových tkanív bola hodnotená certifikovaným patológom, ktorý bol slepý voči experimentálnemu protokolu. Glomerulárne poškodenie bolo hodnotené medzi stupňami 0 a 4 hodnotením mezangiálnej proliferácie, hrúbky bazálnej membrány a zmien fibrinoidov. Tubulárne poškodenie bolo hodnotené medzi stupňami 0 a 4 hodnotením vakuolárnej degenerácie, deskvamácie, tubulárnej degenerácie, proximálnej tubulárnej nekrózy a tvorby odliatku. Tubulointersticiálne zápalové infiltráty boli hodnotené medzi stupňami 0 a 2 hodnotením diverzity zápalových buniek v médiu a prítomnosti infiltrátov v epiteli tubulov (tabuľka 1) [44]. Celkové skóre poškodenia obličiek 0–2 predstavovalo žiadnu/miernu nefrotoxicitu, 3–6 strednú nefrotoxicitu a 7–10 ťažkú ​​nefrotoxicitu [44].

Výsledky

Analýza plynovou chromatografiou a hmotnostnou spektrometriou, obsah fenolov a kapacita zachytávania DPPH extraktu z listov Ocimum gratissimum Analýza GC–MS odhalila niektoré bioaktívne zlúčeniny extraktu z listov Ocimum gratissimum (tabuľka 2). Polyfenolický obsah extraktu bol rozpoznaný pomocou Folin-Ciocâlteuovej metódy (tabuľka 2). Celkový obsah fenolov (TPC) (80,36±0,50mg GAE/100g) získaný v extrakte z Ocimum G. odhalil, že extrakt z Ocimum gratissimum je bohatý na obsah fenolov. Schopnosť extraktu zachytávať DPPH bola tiež hodnotená výpočtom hodnoty IC50, ktorá sa vzťahuje na množstvo extraktu, ktoré je schopné zachytiť 50 percent voľných radikálov obsiahnutých v reakčnej zmesi. Hodnota IC50 (22,12 ± 0,43 mg/ml) extraktu bola vysoká a to znamenalo vysokúantioxidantaktivita listov Ocimum gratissimum. Funkcia vysokého obsahu fenolov v rastline sa teda ukázala v jej schopnosti zachytávať aktivitu voľných radikálov (tabuľka 2).

Účinok PREOG a cyklofosfamidu na klírens kreatinínu

Významné zníženie renálneho klírensu kreatinínu bolo pozorované v skupine so samotným CP v porovnaní s kontrolou (p<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>

Diskusia

V súčasnej štúdii existujú náznaky zvýšených hladín parametrov oxidačného stresu, ako je peroxidácia lipidov, peroxid vodíka (H2O2) a oxid dusnatý (NO), čo naznačuje, že membránové lipidy a proteíny obličiek potkanov liečených Len CP boli poškodené. Taktiež aktivity antioxidačných enzýmov, ako je superoxiddismutáza a kataláza a hladina neenzymatického antioxidantu, redukovaného glutatiónu, boli znížené v skupine liečenej samotným CP. Pokles antioxidantov v obličkových bunkách potkanov liečených samotným CP bol indikáciou nerovnováhy redox-homeostázy. Už skôr sa ukázalo, že CP indukuje oxidačné poškodenie, zápal a bunkovú nekrózu alebo apoptózu po aktivácii a podpore reaktívnych foriem kyslíka (ROS) prostredníctvom svojho metabolitu, akroleínu [7, 11, 14], ktoré následne spúšťajú deaktiváciu a zníženieantioxidačná obranakapacity postihnutých organizmov [10, 11, 45]. V tejto štúdii nadprodukcia ROS prevažuje nad endogénnymantioxidačná kapacitaspúšťa oxidačný stres a následne poškodzuje obličkové bunky potkanov liečených CP, čo bolo ovplyvnené zvýšenými hladinami markerov oxidačného stresu a zníženými hladinamiantioxidačné parametre. Histologický pohľad na tieto potkany tiež ukázal glomerulárne poškodenie a tubulárnu nekrózu obličkových buniek. Okrem toho, redoxná nerovnováha vyvoláva nadprodukciu prozápalových cytokínov [3, 14]. Pozorovaná nadprodukcia ROS spustila peroxidáciu lipidov a mobilizáciu prozápalových cytokínov a súčasne spôsobila zápalové poškodenie obličkových buniek. Hodnotenie IL-6 v tejto štúdii bolo významne zvýšené u potkanov liečených CP, čo naznačuje ataku oxidačného stresu a zápal obličkových buniek. Zistilo sa, že zvýšenie IL-6 spúšťa a/alebo stimuluje pečeň na spustenie reakcie akútnej fázy, ktorá vedie k zvýšeniu produkcie cirkulujúceho C-reaktívneho proteínu (CRP) a iných bioaktívnych mediátorov [46]. CRP bolo významne zvýšené u potkanov liečených CP a zvýšená hladina tohto biomarkera bola indikáciou včasného obranného systému proti infekciám, informáciám a poškodeniu tkaniva [47, 48]. Zvýšenie hladiny CRP v tejto štúdii ďalej potvrdilo podstupovanie zápalu u potkanov liečených samotným CP. Bolo pozorované, že CP spúšťa redukciu endogénnych antioxidantov v obličkách, ako je nadmerná utilizácia GSH obličkami v dôsledku akumulácie produktov metabolitov cyklofosfamidu v renálnych tubulárnych bunkách [9]. V dôsledku tohto procesu môžu obličky potkanov liečených samotným CP zosilniť imunitnú odpoveď proti jej bunkám, čo následne viedlo k zápalu, ako ukazuje zvýšenie plazmatického CRP. V súlade s tým, CP má potenciál vyvolať zápal a pravdepodobné imunologické poškodenie v obličkách potkanov liečených CP.

Záver

Na záver, výsledky zo súčasných zistení ukázali, že extrakt z Ocimum gratissimum bohatý na polyfenoly zabránil nežiaducim vedľajším účinkom CP na funkciu obličiek prostredníctvom zníženia oxidačného stresu, zabránil nadprodukcii prozápalových cytokínov a infltrácii leukocytov a zlepšil antioxidačné enzymatické aktivitu obličkových tkanív. Okrem toho sa potvrdilo, že CP indukoval zníženie sekrécie aldosterónu a uľahčil nadmernú stratu sodíka a vody močom u potkanov. Avšak extrakt z Ocimum G. zlepšil renálnu funkciu, zvýšil produkciu aldosterónu a zabránil nadmernej strate sodíka a vody u potkanov liečených CP. Prítomnosť polyfenolu a antioxidantov v listoch Ocimum gratissimum z neho robí perfektného kandidáta na liečbu a/alebo prevenciu nefrotoxického účinku cyklofosfamidu.

Referencie

1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Anti-neoplastické látky. In: Harnam JG, Libmirde LE, redakcia. Goodman a Gilman sú farmakologickým základom terapeutík. 10. vyd. New York: McGraw Hill; 2001. s. 1389–459.

2. Chabner BA, a kol. Antineoplastické činidlá. In: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, redaktori. Goodman a Gilman sú farmakologickým základom terapeutík. 11. vyd. New York: McGraw Hill; 2006. s. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Cytoprotektívne účinky lipozómu kyseliny glycyrrhetínovej proti cystitíde vyvolanej cyklofosfamidom prostredníctvom inhibície zápalového stresu. Int Immunopharmacol. 2018;54:139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. Ochranné účinky spiruliny pri nefrotoxicite a urotoxicite vyvolanej cyklofosfamidom u potkanov. Basic Transl Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin chráni pred hepatotoxicitou a nefrotoxicitou vyvolanou cyklofosfamidom prostredníctvom modulácie oxidačného stresu, zápalu, apoptózy, autofágie a poškodenia DNA. Environ Sci Pollut Res Int. 2018;25(21):20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W a kol. Metabolizmus a transport oxazafosforínov a klinické dôsledky. Drug Metab Rev. 2005;37:611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. Zníženie regulácie redoxnej nerovnováhy a signalizácie iNOS/NF-ĸB/kaspázy-3 suplementáciou zinkom zabraňuje urotoxicite hemoragickej cystitídy vyvolanej cyklofosfamidom u potkanov. Life Sci. 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. Kyselina galová zlepšuje neurotoxicitu vyvolanú cyklofosfamidom u potkanov Wistar prostredníctvom aktivity zachytávania voľných radikálov a zlepšenia antioxidačného obranného systému. J Diet Suppl. 2016;13:402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Účinky perorálneho glutamínu na nefrotoxicitu vyvolanú cyklofosfamidom u potkanov. Hum Exp Toxicol. 2010;30(7):616–23.
10. Šerif IO. Neuroprotektívny mechanizmuskvercetínproti urotoxicite vyvolanej cyklofosfámom: účinok na oxidačný stres a zápalové markery. J Cell Biochem. 2018;119(9):7441–8. 11. Omole JG a kol. Ochranný účinok kolavironu na srdcovú toxicitu vyvolanú cyklofosfamidom u potkanov. J Evid Based Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Histopatologické štúdie toxicity Ocimum gratissimum zanechávajú extrakt na niektorých orgánoch králikov. Afr J Biomed Res. 2003;6:21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Fytochemická zložka a antioxidačná aktivita extraktu z listov Ocimum gratissimum. Sci Res Essays. 2007;2:163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A a kol. Extrakt z listov Ocimum gratissimum bohatý na polyfenoly zlepšuje kolitídu prostredníctvom zmiernenia poškodenia sliznice hrubého čreva a regulácie produkcie prozápalových cytokínov a oxidačného stresu u potkanov. Biomed Pharmacother. 2018;103:812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Protihnačkové účinky extraktu z listov Ocimum gratissimum u pokusných zvierat. J Ethnopharmacol. 1999;68:327–30.