Ochranný účinok panduratínu A na apoptózu ľudských renálnych proximálnych tubulárnych buniek indukovanú cisplatinou a akútne poškodenie obličiek u myší
Mar 18, 2022
Pozadie:Cisplatina je účinná chemoterapia, ale jej hlavný vedľajší účinok je akútpoškodenie obličiek, obmedzuje jeho použitie. Pandurát A, bioaktívna zlúčenina extrahovaná z Boesenbergia rotunda, vykazuje niekoľko biologických aktivít, ako sú antioxidačné účinky. Táto štúdia skúmala nefroprotektívny účinok pandurátu A na indukciu cisplatinypoškodenie obličiek.Metódy: Skúmali sme účinok pandurátu A na toxicitu cisplatiny u myší a kultúr ľudských obličkových buniek pomocou buniek RPTEC/TERT1. Výsledky: Výsledky ukázali, že pandurát A zlepšuje renálnu toxicitu indukovanú cisplatinou u myší aj buniek RPTEC/TERT1 znížením apoptózy. Myši liečené jednou intraperitoneálnou (ip) injekciou cisplatiny (20 mg/kg telesnej hmotnosti (BW)) vykazovaliobličkovéporanenie tubulov a narušenéfunkcie obličiekako preukázalo histologické vyšetrenie a zvýšený kreatinín v sére. Zlepšilo sa orálne súbežné podávanie pandurátu A (50 mg/kg telesnej hmotnosti).funkcie obličieka zlepšil saobličkovépoškodenie tubulov cisplatiny inhibíciou aktivácie kinázy regulovanej extracelulárnym signálom (ERK)1/2 a kaspázy 3. V ľudských renálnych proximálnych tubulárnych bunkách je apoptóza buniek indukovaná cisplatinou aktiváciou proapoptotických proteínov (ERK1/2 a kaspázy 3), a zníženie antiapoptotického proteínu (Bcl-2). Tieto účinky sa významne zlepšili spoločnou liečbou s pandurátom A. Je zaujímavé, že pandurát A nezmenil intracelulárnu akumuláciu cisplatiny. Nezmenila protirakovinovú účinnosť cisplatiny v bunkových líniách ľudského hrubého čreva alebo nemalobunkového karcinómu pľúc. Závery: Táto štúdia zdôrazňuje, že pandurát A má potenciálny ochranný účinok na nefrotoxicitu cisplatiny.
Kľúčové slová:chemoterapia; akútne poškodenie obličiek; panduratín A; ľudský renálny proximálny tubul; anti-apoptóza; obličkové; obličky
CISTANCHE ZLEPŠÍ DIALÝZU OBLIČIEK/RENÁL
ÚVOD
Nefrotoxicita vyvolaná liekmi je hlavným problémom v klinickom prostredí, pretože použitie nefrotoxických liekov je často nevyhnutné. Nefrotoxicita môže byť definovaná poškodením obličiek vrátane poškodenia glomerulov a poškodenia tubulov vedúcich k poškodeniu funkcie obličiek.1) Bežné lieky spojené spoškodenie obličieksú protizápalové látky, antibiotiká a chemoterapeutiká, ako je cisplatina.2–4) Cisplatina je širokospektrálne vysokoúčinné chemoterapeutikum.5) Približne jeden z troch pacientov liečených cisplatinou však trpí nefrotoxicitou6,7) a nerovnováha elektrolytov.8,9) Nefrotoxicita vyvolaná cisplatinou je charakterizovaná poškodením proximálneho tubulu, vaskulárnym poškodením a zápalom.4) Akumulácia cisplatiny v obličkových bunkách indukuje viaceré dráhy, ktoré podporujú bunkovú smrť. Reaktívne formy kyslíka (ROS) boli identifikované ako kľúčový mediátor nefrotoxicity cisplatiny.10,11) Okrem toho ROS indukuje nefrotoxicitu prostredníctvom aktivácie mitogénom aktivovaných proteínkináz (MAPK).10,12,13) Niekoľko štúdií uvádza, že cisplatina sám môže priamo stimulovať extracelulárnu signálom regulovanú kinázu (ERK)1/2 (člen MAPK) in vitro aj in vivo. 14,15)
Niektoré fytochemikálie zlepšujú nefrotoxicitu vyvolanú cisplatinou inhibíciou akumulácie ROS a apoptózy.16–18) Hoci nefroprotektívne účinky týchto fytochemikálií boli hlásené v predklinických štúdiách, stále neexistujú žiadne schválené lieky z fytochemikálií na nefrotoxicitu cisplatiny (pozri podrobnosti v prehľade).19 ) Súčasná klinická prax poskytuje iba podpornú liečbu na obnovenie funkcie obličiek.20) Preto je stále dôležité hľadať účinné látky na prevenciu alebo liečbu nefrotoxicity vyvolanej cisplatinou. Pandurát A je zaujímavá fytochemikália. Ide o cyklohexanolový chalkón izolovaný z Boesenbergia rotunda, rastliny používanej v tradičnej medicíne a potravinárstve.21) Panduratín A preukázal prevenciu alebo liečbu oxidačného stresu, zápalu a metabolických ochorení.22,23) Poranenie proximálnych tubulov obličiek spôsobené cisplatina je aspoň čiastočne sprostredkovaná zvýšeným oxidačným stresom a zápalom.11) Preto sme skúmali účinok pandurátu A na toxicitu cisplatiny u zvierat aj bunkových kultúr s použitím buniek RPTEC/TERT1. Tiež sme testovali, či spoločná liečba s pandurátom A ovplyvňuje protirakovinovú aktivitu cisplatiny v ľudských rakovinových bunkových líniách.
MATERIÁLY A METÓDY
Chemikálie Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), cisplatin, and compound C (AMP-activated protein kinase (AMPK) inhibitor) were purchased from Sigma-Aldrich (MO, U.S.A.). 3 H-1-Methyl-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) was purchased from PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Thailand). Annexin V- fluorescein isothiocyanate (FITC) apoptosis detection kit was purchased from BD Biosciences (CA, U.S.A.). Primary antibodies for p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No. 9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Cat. No. 2118S), p-AMPKα (Cat. No.2531S), AMPKα (Cat. No. 5832S), Bax (Cat. No. 5023) and β-actin (Cat. No. 4970T) antibodies were obtained from Cell Signaling (MA, U.S.A.) and anti-neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) antibody (Cat. No. STCSC-515876) was purchased from Santa Cruz Biotechnology (CA, U.S.A.). Pandurate A >98-percentná čistota stanovená pomocou HPLC bola izolovaná z Boesenbergia rotunda, ako už bolo opísané v našej skupine.24) Oddenky Boesenbergia rotunda boli zozbierané z Kanchanaburi, Thajsko. Rastlinu identifikoval Tuanta Sematong. Vzor poukážky (č. BKF 68909) bol uložený v Forest Herbarium, Royal Forestry Department, Bangkok.
CISTANCHE ZLEPŠÍ FUNKCIU OBLIČIEK/RENÁL
ZvieratáSamce myší C57BL/6 (vo veku 8- týždňov) boli zakúpené od Nomura Siam International Co., Ltd. (Bangkok, Thajsko). Protokol starostlivosti a používania zvierat č. MUSC61-063-464 bol schválený Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť a používanie zvierat, MUSC–IACUC. Myšiam bol umožnený voľný prístup k potrave a vode. Po jednom týždni aklimatizácie boli myši náhodne rozdelené a bola im podávaná liečba nasledovne: normálny fyziologický roztok jednou intraperitoneálnou (ip) injekciou v deň 4 (kontrolná skupina); pandurát A (50 mg/kg telesnej hmotnosti (BW)) orálnou sondou počas 7 dní (skupina pandurátu A); cisplatina (20 mg/kg telesnej hmotnosti) jednou ip injekciou v deň 4 (cisplatinová skupina); pandurát A (50 mg/kg telesnej hmotnosti/deň) orálnou sondou počas 7 dní a cisplatina (20 mg/kg telesnej hmotnosti) jednou ip injekciou na 4. deň (súčasne liečená skupina). V deň 7 boli myši hlboko anestetizované tiopentalom sodným. Krv sa odobrala a centrifugovala 10 minút pri 3000 pm. Zozbierané supernatanty sa udržiavali pri -80 stupňoch, kým safunkcie obličiekbola meraná.Obličkysa zhromaždili na meranie expresie proteínov a histopatologické štúdie.
Stanovenie funkcie obličiek a histologické vyšetrenieRenálna funkcia bola stanovená meraním sérového kreatinínu pomocou Stanbio Creatinine Liquicolor (NY, USA) a analyzátora chémie krvi, Licenza (Rím, Taliansko). Na vyšetrenie cisplatinou indukovaného renálneho tubulárneho poškodenia, myšobličkyboli fixované v 4 percentách paraformaldehydu. Theobličkyplátky boli zafarbené hematoxylínom a eozínom (H&E) fotografované svetelným mikroskopom. Percento tubulárneho poškodenia sa použilo na vyhodnotenie renálneho tubulárneho poškodenia: 0=žiadne tubulárne poškodenie 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;" 5="">75 percent. Sklíčka boli slepo hodnotené patológom. Priemerné skóre pre každú skupinu zvierat sa vypočítalo spočítaním 10 rôznych políčok sklíčka.
Bunkové línieBunky RPTEC/TERT1, bunky rakoviny hrubého čreva (HCT116) a bunky nemalobunkovej rakoviny pľúc (A549) boli zakúpené od American Type Culture Collection (VA, USA). Stručne povedané, bunky RPTEC/TERT1 sa kultivovali v kompletnom Dulbeccovom modifikovanom Eaglovom médiu/F-12 médiu (DMEM/F12), ako bolo opísané vyššie. s penicilín-streptomycínovými antibiotikami a 10 percentným fetálnym bovinným sérom (FBS). Bunky sa kultivovali pri 37 stupňoch vo vlhkej atmosfére s 5 percentami CO2 a 95 percentami O2.
Test bunkovej životaschopnosti a analýza bunkovej apoptózyŽivotaschopnosť buniek sa určila vystavením buniek RPTEC/TERT1 pôsobeniu činidla 0,5 mg/ml MTT počas 1 hodiny pri 37 °C. Činidlá sa odstránili, vytvorená formazánová soľ sa rozpustila v dimetylsulfoxide (DMSO) a detegovala sa Čítačka mikrodoštičiek EnVision pri absorbancii 570nm. Životaschopnosť buniek bola uvedená ako percento kontroly. Annexin V a propidium jodid (analýza farbenia PI sa použila na stanovenie apoptózy buniek. Stručne, bunky RPTEC/TERT1 sa oddelili 0,25 % kyselinou trypsín-etyléndiamíntetraoctovou (EDTA). Bunkové suspenzie sa inkubovali s Annexinom V-FITC a PI v tme pri 4 stupňoch počas 15 minút s následným dvojnásobným premytím väzbovým pufrom.Apoptotické bunky boli spočítané prietokovým cytometrom a vyjadrené ako percento z celkového počtu buniek.
Hodnotenie intracelulárnej akumulácie ROSHladiny ROS boli stanovené testom DCFH-DA. Bunky RPTEC/TERT1 sa inkubovali s 10 uM DCFH-DA a inkubovali sa 30 minút pri 37 stupňoch. Ďalej sa odstránilo farbivo DCFH-DA a bunky sa premyli fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom (PBS). Intracelulárna hladina ROS sa merala pri vlnových dĺžkach 485 a 530 nm pre excitáciu a emisiu. Intracelulárna akumulácia ROS sa uvádza ako percento intenzity fluorescencie vzhľadom na kontrolné bunky.
CISTANCHE ZLEPŠÍ OCHORENIE OBLIČIEK/OBLIVÍN
Analýza akumulácie platinyAkumulovaná platina sa merala v štiepených bunkách RPTEC/TERT1 a myšiachobličkypomocou UNICAM 989 QZ AA spektrometra (Geleen, Holandsko). Do každej 100 μl vzorky sa pridalo desať mikrolitrov 1% Tritonu X-100 a 400 ul 1% kyseliny dusičnej. Vzorky sa potom inkubovali aspoň 1 hodinu. Pred detekciou platiny sa každá vzorka zriedila 10:1 1% kyselinou dusičnou. Koncentrácia platiny sa vypočítala použitím lineárnej regresie platinovej štandardnej krivky pripravenej s použitím 2,5 mg/ml cisplatiny zriedenej v 1 % kyseline dusičnej. Platina sa vypočítala ako ng/počet buniek alebo ng/obličkyhmotnosť.
Test absorpcie 3H-MMP*Absorpcia 3H-MPP plus do buniek RPTEC/TERT1 bola stanovená pomocou našej predchádzajúcej metódy.25) Stručne, bunky sa premyli teplým transportným pufrom a ďalej sa inkubovali 20 minút. Bunkové monovrstvy sa inkubovali s H-MPP plus (10 nM), po čom nasledovalo premytie ľadovo studeným transportným pufrom. Vzorky sa odobrali a rádioaktívna aktivita H-MPP plus sa merala pomocou kvapalinového scintilačného počítača.
Analýza Western blottingProteínové expresie boli spracované podľa našej predchádzajúcej štúdie.26) Extrahované proteíny z myšíobličkya bunky RPTEC/TERT1 sa centrifugovali pri 12 000 ot./min. počas 20 minút pri 4 stupňoch. Rovnaké množstvá proteínov izolovaných z buniek a tkaniva boli denaturované a oddelené 10-12 percentami dodecylsulfát-polyakrylamidovej gélovej elektroforézy (SDS-PAGE). Vzorky sa preniesli na nitrocelulózové membrány, po čom nasledovala 1 hodina nešpecifického proteínového blokovania s použitím odtučneného sušeného mlieka (5 percent). Membrány sa inkubovali s primárnou protilátkou počas 24 hodín a potom sa inkubovali so sekundárnou protilátkou počas 1 hodiny. Intenzita expresie proteínu sa detegovala pomocou chemiluminiscenčného substrátu HRP a kvantifikovala sa softvérom ImageJ.
Štatistická analýzaÚdaje sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Dáta boli analyzované jednosmernou ANOVA s použitím Tukeyho posthoc testov (GraphPad Prism 8.0). Za významnosť sa považuje, keď je p-hodnota menšia ako 0,05.
VÝSLEDKY Panduratín A zlepšuje akútne obličky vyvolané cisplatinouPoranenie Skúmali sme vplyv pandurátu A napoškodenie obličiekspôsobené cisplatinou u myší. Najprv sme pozorovali všeobecnú toxicitu meraním zmeny telesnej hmotnosti u myší po liečbe normálnym fyziologickým roztokom, pandurátom A (50 mg/kg telesnej hmotnosti), cisplatinou (20 mg/kg telesnej hmotnosti) a cisplatinou (20 mg/kg telesnej hmotnosti) a pandurátom A (50 mg/kg telesnej hmotnosti). Zistilo sa významné zníženie telesnej hmotnosti u myší liečených cisplatinou. Strata telesnej hmotnosti bola zmiernená spoločnou liečbou pandurátom A (obr. 1A). V porovnaní s ovládaním,funkcie obličiekktorý bol meraný hladinou kreatinínu v sére ukázal, že u myší liečených samotným pandurátom A nedošlo k zmene hladiny kreatinínu v sére; zatiaľ čo myši liečené cisplatinou mali významne zvýšené hladiny kreatinínu v sére, čo naznačuje zhoršenú funkciu obličiek. Hladina sérového kreatinínu pri súbežnom podávaní pandurátu A bola významne znížená v porovnaní s myšami liečenými cisplatinou (obr. 1B). Okrem toho akumulácia platiny vobličkytkanivo nebolo významne odlišné u myší liečených samotnou cisplatinou v porovnaní s myšami súčasne liečenými cisplatinou a pandurátom A (obr. 1C). Tieto údaje naznačujú, že pandurát A neovplyvnil obsah cisplatiny v obličkovom tkanive. Theobličkyzískané od myší liečených vehikulom alebo samotným pandurátom A nevykazovali žiadne výrazné patologické zmeny. Avšak myši liečené cisplatinou vykazovali viac tubulárneho poškodenia v porovnaní s myšami liečenými vehikulom, čo dokazuje nárast degenerácie a deskvamácie, tvorba luminálnych odliatkov, infiltrácia mononukleárnych buniek, karyomegália, intertubulárna hemorágia a dilatácia. Tieto patologické zmeny boli významne zoslabené spoločným podávaním pandurátu A (obr. 2A, tabuľka 1). Stanovili sa hladiny expresie NGAL (biomarker nefrotoxicity) a ERK1/2 a štiepená kaspáza 3 (proapoptotické proteíny). Naša štúdia ukázala, že myši liečené cisplatinou významne zvýšili expresiu NGAL, p-ERK1/2 a štiepenej kaspázy 3 v porovnaní s myšami liečenými vehikulom. Súbežná liečba s pandurátom A významne znížila tieto proteíny indukované liečbou cisplatinou (obr. 2B).
Pandurát A zabraňuje cytotoxicite indukovanej cisplatinou v ľudských renálnych proximálnych tubulárnych bunkách inhibíciou apoptotických signálnych dráhCisplatina (50 uM) znamená výrazne zníženú životaschopnosť buniek RPTEC/TERT1 po 72 hodinách inkubácie. Je zaujímavé, že spoločná liečba pandurátom A (1 a 5 uM) významne zvýšila životaschopnosť buniek (obr.
3A). Ochranný účinok panduratínu A proti cytotoxicite cisplatiny bol potvrdený meraním bunkovej apoptózy. Ako sa očakávalo, vystavenie buniek 50 uM cisplatine počas 48 hodín významne zvýšilo apoptózu buniek RPTEC/TERT1. Tento účinok bol oslabený pandurátom A (obr. 3B). Skúmali sme, či účinok pandurátu A na toxicitu cisplatiny vyžaduje aktiváciu AMPK. Ako je znázornené na obr. 3C, proteínová expresia p-AMPK, aktívnej formy AMPK, bola zvýšená pandurátom A, zatiaľ čo bola znížená cisplatinou. Okrem toho sa stanovil ochranný účinok pandurátu A pri inhibícii AMPK. Je zaujímavé, že inkubácia buniek s 10 uM zlúčeniny C, inhibítora AMPK, neznížila ochranný účinok pandurátu A na životaschopnosť buniek (obr. 3D). Tieto výsledky naznačujú, že ochranný účinok pandurátu A môže byť sprostredkovaný mechanizmami nezávislými od AMPK. Ďalej sme skúmali účinok pandurátu A na určité proteíny zapojené do bunkovej apoptózy indukovanej cisplatinou. Ako je znázornené na obr. 4, cisplatina významne zvýšila proapoptotické proteíny p-ERK1/2 a štiepila kaspázu 3. Cisplatina znížila expresiu antiapoptotického proteínu Bcl-2. Súbežná liečba s pandurátom A zvrátila expresiu týchto proteínov. Keďže ROS je hlavným faktorom zapojeným do apoptózy obličkových buniek indukovanej cisplatinou,11,27) stanovili sme účinok panduratínu A na akumuláciu ROS v dôsledku cisplatiny. Cisplatina významne zvýšila intracelulárne hladiny ROS. Je zaujímavé, že panduratín A významne znížil akumuláciu ROS vyvolanú cisplatinou.
Panduratín A neovplyvňuje bunkovú akumuláciu cisplatiny OCT2sprostredkúva transport cisplatiny do ľudských renálnych proximálnych tubulárnych buniek.289 Aby sme preskúmali možnosť, že panduratín A znižuje akumuláciu cisplatiny, merali sme transportnú funkciu OCT2. Výsledky ukázali, že inkubácia buniek s 5 uM panduratínom A počas 10 minút a 24 hodín nemala žiadny vplyv na bunkovú akumuláciu H-1-metyl-4-fenylpyridínia (H-MPP plus), substrátu OCT2. Ďalej bol potvrdený účinok panduratínu A na bunkovú akumuláciu cisplatiny. Panduratín A nemal žiadny významný vplyv na akumuláciu platiny v ľudských obličkových bunkách (obr. 5).
Ochranný účinok panduratínu A neovplyvňuje protirakovinovú aktivitu cisplatinyBol stanovený účinok panduratínu A na toxicitu cisplatiny v rakovinových bunkových líniách. Vi-schopnosť buniek HCT116 a A549, ktoré sú bunkovými líniami rakoviny hrubého čreva a pľúc, bola významne znížená 72 hodín po liečbe cisplatinou (50 μuM). Súbežná liečba panduratinom A (5 μM) neznížila cytotoxicitu cisplatiny. Je zaujímavé, že samotný panduratín A tiež znižuje
DISKUSIA
Táto štúdia odhaľuje, že panduratín A znižuje nefrotoxicitu cis-platiny bez narušenia protirakovinovej aktivity cisplatiny v bunkových líniách rakoviny hrubého čreva a nemalobunkového karcinómu pľúc. Ukázali sme, že spoločná liečba panduratinom A zmierňuje akútpoškodenie obličieku myší spôsobená cisplatinou. Aj keď táto štúdia ukazuje ochranný účinok na indukciu cisplatinypoškodenie obličiek,primárny cieľ panduratínu A nie je identifikovaný. Panduratín A by mohol aktivovať AMPK v obličkových proximálnych tubulárnych bunkách (obr. 3) a iných typoch buniek.30-2) Zdá sa nepravdepodobné, že by ochranný účinok panduratínu A vyžadoval aktiváciu AMPK, keďže dôkazy ukázali, že inhibícia AMPK pomocou chemických inhibítorov nezmenil ochranný účinok Pandu-rating A. Panduratin A zlepšil renálnu funkciu, čo dokazuje znížený sérový kreatinín. Poškodenie funkcie obličiek cisplatinou koreluje s poranením renálnych tubulov, ako je degenerácia, tvorba luminálneho odliatku, hemorágia a dilatácia. Výsledky poškodenia renálnych tubulov dobre korelovali s našimi údajmi, ktoré ukazujú indukciu expresie NGAL vobličkytkaniva myší liečených cisplatinou. Okrem toho tento dôkaz podporuje predchádzajúca štúdia, ktorá ukazuje, že NGAL je výrazne exprimovaný v renálnych tubuloch po akútnompoškodenie obličiekindukované cisplatinou.3) Zaujímavé je, že spoločná liečba myší s panduratinom A zmiernila poškodenie renálnych tubulov vyvolané cisplatinou. Histologická analýza ukázala, že cisplatina zvýšila infiltráciu mononukleárnych buniek a tento účinok bol zrušený panduratínom A. Tieto výsledky naznačujú, že panduratín A, ktorý bol predtým preukázaný ako protizápalový,24.3435) môže zmierniť zápalový účinok cisplatiny v obličkovom tkanive. Aktivácia MAPK by mohla vyvolať bunkovú smrť.2415)Naše výsledky ukázali, že cisplatina stimulovala aktiváciu ERK1/2 a kaspázy 3. Expresie týchto proteínov boli zoslabené panduratinom A.
Bolo hlásených viacero ciest, ktoré prispievajú k nefrotoxicite vyvolanej cisplatinou (vrátane apoptózy, oxidačného stresu a zápalu).4 Použili sme bunkovú líniu RPTEC/TERT1 na identifikáciu mechanizmov toxicity panduratínu A, ktorá je spôsobená cisplatinou v ľudských obličkových proximálnych tubulárnych bunkách. Bunky RPTEC/TERT1 boli navrhnuté ako model obličkových buniek pre toxicitu vyvolanú xenobiotikami.36 Panduratín A vykazuje ochranný účinok vzhľadom na cytotoxicitu cisplatiny, ako ukazuje zníženie apoptózy buniek RPTEC/TERT1. Mechanizmy toxicity cisplatiny v renálnych proximálnych tubulárnych bunkách sú zložité. Aktivácia ERK1/2 a kaspázy 3 a deplécia Bcl{10}} sa podieľajú na apoptóze obličkových buniek v dôsledku cisplatiny.373) V súlade s predchádzajúcimi štúdiami táto štúdia ukázala, že cisplatina zvyšuje expresiu p-ERK1/2 a štiepenej kaspázy 3 a zníži výraz Bcl{16}}. Naše výsledky naznačujú, že panduratín A potláča apoptotické signálne proteíny indukované cisplatinou, p-ERK1/2 a štiepenú kaspázu 3, a zachováva antiapoptotický proteín. Bcl-2. Okrem aktivácie ERK1/2 a kaspázy 3 je kľúčovým faktorom pri apoptóze obličkových buniek v dôsledku cisplatiny zvýšená intracelulárna akumulácia ROS.139 Predchádzajúca štúdia uvádza, že panduratín A chráni pred oxidačným poškodením v hepatocytoch znížením intracelulárnej tvorby ROS spôsobenej reaktívnym Medziprodukty.4 Zníženie akumulácie ROS po liečbe panduratinom A môže byť sprostredkované buď inhibíciou produkcie ROS, alebo zvýšením reakcie zachytávania ROS. Uviedli sme, že panduratín A zvýšil hladinu glutatiónu, molekuly zachytávajúcej ROS, ktorá by mohla znížiť akumuláciu ROS v obličkovom tkanive (pozri doplnkové materiály). Nevylučujeme však, že na redukcii ROS sa podieľajú aj iné mechanizmy. Naše výsledky ukázali, že panduratín A znižuje intracelulárnu akumuláciu ROS, čo prispieva k ochrannému účinku panduratínu A. Vnútrobunková hladina cisplatiny je primárnym faktorom ovplyvňujúcim závažnosť toxicity vyvolanej cisplatinou. Uvádza sa, že k transportu cisplatiny prispievajú renálne transportéry, ako sú OCT2, transportéry medi a transportér na vytláčanie viacerých liečiv a toxínov-1 (MATE1).4) Transport cisplatiny do proximálnych tubulárnych buniek obličiek je však primárne sprostredkovaný OCT2. Ukázalo sa, že inhibícia OCT znižuje renálnu toxicitu vyvolanú cisplatinou v kultivovaných obličkových bunkách aj u zvierat. 发9,42）Zdá sa však pravdepodobné, že panduratín A neovplyvňuje transportnú funkciu OCT2 alebo akumuláciu cisplatiny, čo naznačuje ochranný účinok panduratínu A proti toxicita cisplatiny nie je sprostredkovaná znížením transportu alebo akumulácie cisplatiny.
CISTANCHE ZLEPŠÍ BOLESŤ OBLIČIEK/OBLIVÍN
Panduratín A vykazuje renoprotektívne účinky prostredníctvom inhibície apoptózy obličkových buniek. Ak by panduratín A tiež inhiboval apoptózu rakovinových buniek, znížilo by to účinnosť chemoterapie. Preto sme testovali, či panduratín A znižuje protirakovinovú aktivitu cisplatiny. Je významné, že spoločná liečba s Pandu-rating A nemení protirakovinovú aktivitu cisplatiny ani v bunkách rakoviny hrubého čreva, ani v bunkách nemalobunkového karcinómu pľúc. Navyše samotný panduratín A je toxický pre obe rakovinové bunkové línie. Výsledky naznačujú, že účinok panduratínu A je selektívny a ovplyvňuje normálne obličkové bunky a rakovinové bunky odlišne. Hoci pandurácia A môže byť dobrým prostriedkom na prevenciu nefrotoxicity vyvolanej cisplatinou, v budúcnosti by sa mali preskúmať informácie týkajúce sa farmakologických účinkov panduratínu A v rámci klinicky relevantného modelu xenoštepu.
ZÁVER
Naša súčasná štúdia preukázala, že panduratín A poskytuje výrazný ochranný účinok na nefrotoxicitu cisplatiny znížením oxidačného stresu a inhibíciou aktivácií ERK1/2 a kaspázy 3. Ochranný účinok panduratínu A nezmenil protirakovinovú aktivitu cisplatiny v rakovinových bunkách. Aj keď blokovanie niektorých škodlivých účinkov môže mať len čiastočné renoprotektívne účinky, panduratín A môže byť dobrým kandidátom na zmiernenie nefrotoxicity cisplatiny, pretože znižuje toxicitu cisplatiny prostredníctvom viacerých mechanizmov.
