SARS-CoV-2 profily pamäťových B a T buniek u pacientov s miernym COVID-19 v rekonvalescencii ✩

Abstraktné

Ciele:

Antivírusová adaptívna imunita zahŕňa pamäťové B bunky (MBC) a pamäťové T bunky (MTC). Dynamika MBC a MTC u rekonvalescentov s ťažkým akútnym respiračným syndrómom koronavírusom 2 (SARS-CoV-2) si vyžaduje ďalšie skúmanie.

Antivírusová adaptívna imunita je imunitná odpoveď organizmu na vírusovú infekciu, vrátane dvoch aspektov bunkovej imunity a humorálnej imunity. Bunková imunita využíva hlavne T bunky a prirodzené zabíjačské bunky na priame zabíjanie infikovaných vírusov alebo na podporu odstraňovania vírusov; humorálna imunita je sprostredkovaná hlavne protilátkami na neutralizáciu, vyčistenie a prevenciu reinfekcie. Imunita sa vzťahuje na schopnosť ľudského tela odolávať invázii vonkajších patogénnych mikroorganizmov a škodlivým faktorom a je dôležitou zárukou pre ľudské telo odolávať invázii chorôb. Antivírusová adaptívna imunita úzko súvisí s imunitou, pretože antivírusová adaptívna imunita je pre ľudské telo dôležitým prostriedkom na odolnosť proti vírusovej infekcii. Len v stave silnej imunity môže telo produkovať dostatočnú antivírusovú adaptívnu imunitnú odpoveď a čo najskôr odstrániť vírus. na dosiahnutie účelu prevencie a liečby vírusovej infekcie. Potom v každodennom živote musíme zlepšiť aj imunitu. Môžeme použiť Cistanche. Cistanche je bohatá na rôzne antioxidačné látky, ako je vitamín C, vitamín C, karotenoidy atď. Tieto zložky dokážu zachytávať voľné radikály a znižovať oxidačný stres, zlepšujú odolnosť imunitného systému.

Kliknite na výhody cistanche tubulosa

Metódy:

V tejto prierezovej a longitudinálnej štúdii boli reakcie MBC a MTC odvodené od krvi hodnotené u 68 rekonvalescentov s miernym koronavírusovým ochorením 2019 (COVID{6}}) pozitívnych na IgG pri návšteve 1, medzi 1. a 7. mesiacom (medián 4,1 mesiaca) po nástupe ochorenia. SARS-CoV-2 anti-spike IgG bol stanovený pomocou ELISA, MBC pomocou SARS-CoV-2-špecifickej receptorovej väzbovej domény (RBD) ELISpot a interferónu-gama (IFN-)-, interleukínu 2 (IL2 )- a IFN- plus IL2-vylučujúce MTC pomocou IFN- a IL2 SARS-CoV-2 FluoroSpot. U 24 pacientov odobratých pri prvej návšteve sa analýzy IgG, MBC a MTC vykonali aj o 3 mesiace neskôr pri druhej návšteve.

Výsledky:

Sedemdesiatdva percent rekonvalescentov bolo MBC- aj MTC-pozitívnych, 18 percent bolo MBC-pozitívnych a MTC-negatívnych a 10 percent bolo MTC-pozitívnych a MBC-negatívnych. Najvyššia úroveň odpovede MBC bola zistená 3 mesiace po nástupe COVID{10}} a pretrvávala až 7 mesiacov po infekcii. Významné hladiny MTC boli detegované 1 mesiac po nástupe ako odpoveď na peptidové pooly S1, S2_N a SNMO. Frekvencia a veľkosť odozvy MTC na SNMO boli vyššie ako na S1 a S2_N. Pozdĺžna analýza ukázala, že aj keď špecifická humorálna imunita poklesla, bunková imunita pretrvávala. Závery: Závery štúdie preukazujú trvácnosť adaptívnej bunkovej imunity aspoň 7 mesiacov po infekcii SARS-CoV{20}}, čo naznačuje dlhotrvajúcu ochranu.

1. Úvod

Postupný pokles hladín protilátok proti koronavírusu 2 proti závažnému akútnemu respiračnému syndrómu (SARS-CoV-2) u pacientov v rekonvalescencii po primárnej infekcii (Achiron a kol., 2021; Hartley a kol., 2020; Rodda a kol., 2021; Sakharkar a kol., 2021) zvyšuje možnosť reinfekcie SARS-CoV-2, keď sa humorálna imunita zníži. V dôsledku toho sa pozornosť upriamila na dlhodobú imunitu proti SARS-CoV-2 zahŕňajúcu pamäťové B a pamäťové T bunky (MBC a MTC). Prítomnosť špecifických anti-SARS-CoV-2 MBC a MTC bola preukázaná u pacientov v rekonvalescencii (Forthal, 2021; Hartley a kol., 2020; Peng a kol., 2006; Peng a kol., 2020; Rodda a kol., 2021; Schwarzkopf a kol., 2021; Sekine a kol., 2020; Sherina a kol., 2021; Thieme a kol., 2020).

Niekoľko nedávnych štúdií ukázalo, že SARS-CoV-2- špecifický IgG pretrváva a je sprevádzaný súčasne zvýšeným podielom MBC a MTC až 8–9 mesiacov po nástupe ochorenia (Dan et al., 2021; Sandberg et al. , 2021; Sherina et al., 2021), zatiaľ čo iní preukázali pokles hladín SARS-CoV-2 IgG sprevádzaný pretrvávaním a dokonca nárastom MBC najmenej 5 mesiacov po nástupe ochorenia (Hartley et al. , 2020; Rodda a kol., 2021; Sakharkar a kol., 2021).

Vzhľadom na hlásený pokles hladín IgG počas rekonvalescencie koronavírusového ochorenia 2019 (COVID-19), dlhotrvajúca adaptívna imunita je najrelevantnejšia pre re-call imunitnú odpoveď v prípade opätovnej infekcie. Nedávno hlásená nízka frekvencia reinfekcie SARSCoV{5}} u séronegatívnych jedincov (Leidi a kol., 2021; Murchu a kol., 2021) zvýšila možnosť obrany proti SARS-CoV2 opätovným vyvolaním adaptívnej imunity . Preto sa táto štúdia uskutočnila na profilovanie SARS-CoV-2 MBC a MTC odpovedí a repertoáru MTC u pacientov s miernym COVID{17}} v rekonvalescencii s anti-spike IgG pozitívnymi. Hodnotili sa najmä reakcie MBC a MTC u rekonvalescentov COVID{18}} so zníženou hladinou IgG.

2. Metódy

2.1. Účastníci

Rekonvalescenti SARS-CoV-2 boli zaradení do štúdie podľa nasledujúcich kritérií: (1) pozitívny RT-PCR SARS-CoV-2 RNA nazofaryngeálny výter; (2) pozitívny anti-SARS-CoV-2 IgG test. Žiadny z pacientov nevyžadoval hospitalizáciu a závažnosť ochorenia bola mierna, pričom pacienti vykazovali aspoň jeden z nasledujúcich príznakov: únava, slabosť, bolesť svalov, kašeľ a horúčka. Zdraví jedinci bez anamnézy symptómov SARS-CoV{11}}, bez kontaktu v domácnosti s infikovaným pacientom a ktorí boli séronegatívni na anti-spike SARS-CoV-2 boli zahrnutí ako negatívna kontrolná skupina. Vzorky krvi na posúdenie imunity sa získali od všetkých účastníkov (N=84), vrátane 68 rekonvalescentov a 16 zdravých jedincov. MBC odpoveď bola stanovená u všetkých 68 rekonvalescentov a 41 bolo hodnotených na MTC pri prvej návšteve. Pre longitudinálnu štúdiu bolo 24 pacientov charakterizovaných zníženým anti-spike IgG testom o 3 mesiace neskôr (druhá návšteva) opäť analyzovaných MBC a MTC testami.

2.2. Etické vyhlásenie

Túto štúdiu schválila Sheba Institutional Review Board (SMC{0}}) a informovaný súhlas bol získaný od všetkých účastníkov.

2.3. Detekcia SARS-CoV-2 anti-spike S1 IgG protilátok

Imunoanalýza na detekciu SARS-CoV-2 IgG protilátok vo vzorkách krvi bola vykonaná pomocou Euroimmunu (EI, Lubeck, Nemecko) anti-SARS-CoV-2 IgG kvantitatívnej ELISA súpravy založenej na rekombinantnom S1 podjednotka vrcholového proteínu SARS-CoV-2. Testy sa uskutočňovali podľa pokynov výrobcu s použitím automatického analyzátora Agility ELISA (DYNEX Technologies Inc., Chantilly, VA, USA). Optická hustota (OD) sa detegovala pri 450 nm a pre každú vzorku sa vypočítal pomer odčítania každej vzorky k odčítaniu kalibrátora, ktorý je súčasťou súpravy (označené ako skóre IgG nižšie ). Hodnoty IgG skóre vyššie ako 1,0 boli považované za pozitívne.

2.4. COVID-19 odpovede pamäťových B buniek a pamäťových T buniek

Analýza SARS-CoV-2-špecifických MBC bola vykonaná pomocou testu FluoroSpot na detekciu receptor-binding domain (RBD) špecifických MBC odvodených IgG-sekretujúcich buniek po stimulácii polyklonálnych B buniek. Použila sa súprava ELISpot PLUS špecifická pre ľudský IgG SARS-CoV-2 receptor viažuca doménu (RBD) (ALP kit; Mabtech, Švédsko) podľa pokynov výrobcu. Stručne, mononukleárne bunky periférnej krvi (PBMC) sa inkubovali (250 000 buniek/jamka) na anti-IgG FluoroSpot doštičke po stimulácii zmesou R848 (1 ug/ml) a interleukínu 2 (IL2) (10 ng /ml) (B-Cell stim pack; Mabtech, Švédsko). Počet B buniek vylučujúcich IgG špecifických pre SARS-CoV{18}} sa meral v jednotkách tvoriacich škvrny (SFU) pomocou čítačky Mabtech IRIS. Výsledky boli vyjadrené ako počet SFU na 250 000 nasadené bunky po odčítaní pozadia nestimulovaných buniek. Pozitívna medzná hodnota bola nastavená nad 90-percentným intervalom spoľahlivosti u zdravých jedincov (HS).

Interferón-gama (IFN-)-, IL2- a IFN-plus IL2-vylučujúce MTC sa detegovali pomocou ľudských IFN- a IL2 SARS-CoV-2 súprav FluoroSpot PLUS podľa protokol výrobcu (Mabtech AB, Švédsko). Vopred potiahnuté platne s monoklonálnou anti-IFN-/IL2 sa inkubovali cez noc v RPMI-1640 médiu obsahujúcom 1{{20}}} percent fetálneho teľacieho séra (FCS) doplneného o SARSCoV{{16} } peptidové pooly alebo nešpecifické anti-CD3 stimuly (0,1 ug/ml) v prítomnosti anti-CD28 (0,1 ug/ml) a 300 000 buniek na jamku vo zvlhčenom inkubátore (5 percent CO2, 37 stupňov ).

Skenovacia skupina SARS-CoV-2 S1 obsahuje 166 peptidov z ľudského vírusu SARS-CoV-2 (#3629-1; Mabtech AB). Peptidy sú 15-méry prekrývajúce sa s 11 aminokyselinami, ktoré pokrývajú doménu S1 proteínu S (aminokyseliny 13–685). Súbor S1 sa dodáva ako peptidy S1_1 (1–83) a S{16}} (84–166). Skupina peptidov definovaná SNMO SARS-CoV{20}} obsahuje 47 syntetických peptidov viažucich sa na ľudský leukocytový antigén (HLA), odvodených z proteínov S, N, M, ORF3a a ORF7a (#3622-1; Mabtech AB) (Peng a kol., 2020). Skupina peptidov definovaná SARS-CoV-2 S2_N obsahuje 41 syntetických peptidov viažucich sa na HLA odvodených z proteínov S a N vírusu SARS-CoV-2 (#{{33} }, Mabtech AB) (Ahmed a kol., 2020).

Výsledky testov ELISpot a FluoroSpot boli vyhodnotené pomocou čítačky IRIS a analyzované pomocou softvéru IRIS verzie 1.1.9 (Mabtech AB). Reakcie špecifické pre skupinu peptidov boli kvantifikované meraním IFN- -, IL2- alebo IFN-plus IL2-produkujúcich MTC. Merania aspoň 5.0 SFU, ktoré boli aspoň 2-krát vyššie ako pozadie SFU v kultivačnom médiu, sa považovali za pozitívne. SFU pozadia sa odpočítala od meraní a vyjadrila sa ako SFU/250 000 bunky. Na určenie celkovej IFN- -, IL2- alebo IFN- plus IL{15}}produkujúcej MTC odozvu ako pozitívnu alebo negatívnu, subjekty s aspoň jednou pozitívnou odpoveďou na IFN-, IL2 alebo IFN-plus IL2 k aspoň jednému z poolov peptidov SARS-CoV{21}}. Na posúdenie pokračujúcej celkovej odpovede MTC na jeden z analyzovaných cytokínov sa zhrnula pozitívna SFU špecifického MTC vylučujúceho cytokíny v reakcii na peptidy S1, S2_N a SNMO, ako bolo opísané vyššie (Sherina et al. , 2021). Pozitívna medzná hodnota bola nastavená nad 90 percentným intervalom spoľahlivosti počtu špecifických MTC u zdravých kontrol.

2.5. Štatistická analýza

Všetky spojité charakteristiky sú opísané ako priemer ± štandardná odchýlka (SD); nespojité charakteristiky sú opísané ako medián s 25–75 percentným medzikvartilovým rozsahom (IQR). Rozdiely boli stanovené Mann-Whitney U-testom, Fisherovým presným testom a Chí-kvadrát testom; korelácia bola hodnotená Spearmanovým (hodnotovým) testom. P-hodnota<0.05 indicated significance.

3. Výsledky

Šesťdesiatosem anti-spike-IgG pozitívnych COVID-19 rekonvalescentov, 25 žien a 43 mužov, priemerný vek 39,3 ± 13,2 rokov, s mediánom času od začiatku ochorenia (TFO) pri prvej návšteve 4,1 mesiaca (IQR 2,6 – 6,1 mesiaca), boli zahrnuté do štúdie. Analýza MBC bola už na 1-mesačnom TFO a trvala až 7 mesiacov (P< 0.005; Figure 3B–D). Notably, while anti-spike IgG levels, MBC, and MTC were significantly higher than in the HS, no statistical differences were observed in convalescents at the different time points.

Boli pozorované signifikantné korelácie medzi počtom anti-RBD MBC a anti-spike IgG hladinou (r=0,39, P=0,0009) a IL2-vylučujúcim MTC (r { {7}}.45, P=0.004), ale menej s IFN- - vylučujúcim MTC (r=0.3, P=0.05) (obrázok 4A –C), zatiaľ čo IFN- - a IL2-vylučujúce MTC boli tiež v korelácii (r=0.48, P=0.001; obrázok 4D). Neboli pozorované žiadne významné korelácie medzi IgG a MTC a medzi MBC a MTC s TFO.

3.2. SARS-CoV-2-špecifický pamäťový repertoár T buniek

Na určenie, či sa MTC vytvoril a udržal u COVID{{0}} rekonvalescentov, počet IFN- -, IL2- a IFN plus IL2-vylučujúcich MTC v odpoveď na stimuláciu s SARS-CoV2 S1, S2_N a SNMO peptidové pooly sa merali súčasne. Výrazne najvyššie frekvencie jedincov s pozitívnymi IFN- -, IL2- a IFN-plus IL2- vylučujúcimi MTC boli pozorované v reakcii na súbor SNMO (82,9 percenta, 57,5 ​​percenta a 72,3 percenta v porovnaní s S1 (56,6 percenta, 34,1 percenta a 43.0 percent, v uvedenom poradí; P < 0,0001) a S2_N (31,7 percenta, 7,3 percenta a 17,5 percenta, P < 0,0001) (tabuľka doplnkového materiálu S1). Okrem toho hladiny SFU aspoň IFN- -produkujúceho MTC v reakcii na SNMO boli významne vyššie ako v reakcii na S1 alebo S2_N (tabuľka doplnkového materiálu S2).

Ako ukazuje číslo SFU, stimulácia pomocou SNMO poolu bola charakterizovaná skoršou okamžitou a trvalejšou odpoveďou IFN{{0}}, IL2- a IFN-plus IL{{3} }vylučovanie MTC než stimulácia peptidmi S1 a S2_N. Po stimulácii SNMO, IFN- -, IL2- a IFN-plus IL2-secernujúce MTC sa výrazne zvýšili už po 1 mesiaci TFO a boli stále zvýšené až 7 mesiacov následného sledovania (P < 0,05) (obrázok 5). Reakcia na peptidy S1 bola oneskorená a významne sa líšila od reakcií HS po 5 a 7 mesiacoch v oboch MTC produkujúcich cytokíny (obrázok doplnkového materiálu S2). Reakcia na skupinu peptidov S2_N bola malá a pozorovaná pri MTC vylučujúcom IFN- - po 5 mesiacoch TFO (obrázok S3 doplnkového materiálu). Neboli pozorované žiadne štatistické rozdiely v hladinách IFN- -, IL2- a IFN-plus IL2- vylučujúcich MTC u rekonvalescentov v rôznych časových bodoch.

3.3. Pozdĺžna analýza

Ako už bolo preukázané, hladina SARS-CoV-2 anti-spike IgG sa znížila o 50 percent, ale stále prevládala počas 9 mesiacov (Achiron et al., 2021). Na lepšie pochopenie reakcií pozdĺžnych pamäťových buniek sa analyzovala dynamika IgG, MBC a MTC od toho istého pacienta pri dvoch opakovaných návštevách. Konkrétne bola bunková pamäť charakterizovaná u 24 rekonvalescentov, ktorí boli pri prvej návšteve pozitívni na IgG proti špičkám a pri druhej návšteve mali zníženú hladinu IgG. Šesť z 24 pacientov v rekonvalescencii s pozitívnym IgG v prvom časovom bode (medián 1,22, IQR 1,14–1,58) prešlo na IgG-negatívny v druhom časovom bode (medián 0,66, IQR 0). 40–0,96; P=0.008) (Obrázok 6A). Všetci pacienti v tejto podskupine boli charakterizovaní zvýšením alebo žiadnou zmenou v počte MBC: medián 23,5 (IQR 0–28,9) a medián 28,1 (IQR 19.0–56,3), v tomto poradí (P=0.002) (obrázok 6B). Celková sekrécia IFN, sekrécia IL2-a IFN-plus IL2-secernujúca MTC však zostala pretrvávajúca v oboch časových bodoch: medián 17,7 (IQR 3,22–45,2) a 5,85 (IQR 0–41,9 ), medián 9,5 (IQR 0 – 24,4) a 7,7 (IQR 0 – 34,0) a medián 20,9 (IQR 1,65 – 34,6) a 8,95 (IQR 4,75 – 18,5), v tomto poradí (P > 0,05) (obrázok 4 – Doplnkový materiál ).

In contrast, the 18 patients with decreased IgG yet remaining IgG-positive (median 3.91 (IQR 2.81–7.73) and 2.53 (IQR 1.89–3.88); P = 0.01) (Figure 6C) displayed no significant changes in MBC (median 30.5 (IQR 1.73–56.3) and 12.1 (IQR 0–60.8); P = 0.2) (Figure 6D) and in the overall IFN-γ -secreting, IL2-secreting, and IFN-γ +IL2-secreting MTC (median 15.0 (IQR 0.68–38.6) and 25.7 (IQR 0.9–38.5), median 4.8 (IQR 0–22.4) and 8.45 (IQR 0–30.5), and median 5.4 (IQR 0–23.9) and 19.9 (IQR 0–42.5), respectively) (P >0.05) (Obrázok doplnkového materiálu S4E–H).

4. Diskusia

Prevencia reinfekcie zahŕňa zložky bunkovej pamäte naprogramované tak, aby rýchlo reagovali na antigény, ktoré generujú pamäťové B a T bunky (Cromer a kol., 2021; Forthal, 2021; Mazzoni a kol., 2021; Turner a kol., 2021; Ueffing a kol., 2020). Táto štúdia preukázala súčasnú prítomnosť silných SARSCoV-2 anti-spike protilátok a trvalých odpovedí pamäťových B a T buniek špecifických pre SARS-CoV-2 peptidy u pacientov zotavených z COVID-19 do 7. mesiacov po infekcii. Ukázalo sa, že hladiny MBC a MTC sa zvýšili krátko po nástupe. Je pozoruhodné, že odpoveď MTC predchádzala RBD-špecifickej MBC, ako už bolo uvedené (Dan et al., 2021). Odpoveď MTC bola charakterizovaná IFN- -, IL2- a IFN-plus IL2-vylučujúcimi MTC v reakcii na peptidové pooly S1, S2_}N a SNMO.

Pozorovaná dynamika humorálnej a adaptívnej imunitnej odpovede potvrdila predchádzajúce publikácie uvádzajúce, že anti-spike IgG zostal stabilný až 6 mesiacov po diagnóze (Dan a kol., 2021; Gaebler a kol., 2021; Hartley a kol., 2020; Sherina a kol., 2021). Pozorovaná humorálna odpoveď zistená proti hrotu a odpoveď pamäťových B buniek na RBD podporujú dlhotrvajúcu ochranu pred infekciou SARS-CoV-2. Okrem toho výsledky štúdie naznačujú, že aj keď sa hladina protilátok proti SARS-CoV{10}} zmení na séronegatívnu, prítomnosť MBC a MTC potenciálne poskytuje obranu v prípade opätovnej infekcie. Početné štúdie opísali približne 1 percento reinfekcií (Leidi a kol., 2021; Murchu a kol., 2021). Túto nízku frekvenciu prípadov reinfekcie možno pravdepodobne vysvetliť prítomnosťou a zapojením komponentov adaptívnej imunity, tj pamäťových B a T buniek. Táto predstava je ďalej posilnená nedávnou štúdiou (McMahan et al., 2021), ktorá ukázala, že relatívne nízke titre protilátok sú dostatočné na ochranu proti SARS-CoV-2 u makakov rhesus a že bunkové imunitné reakcie môžu prispieť k ochrane ak sú protilátkové odpovede suboptimálne.

Zistenia efektorového MTC vylučujúceho IFN{0}} naznačujú okamžitú, ale nie trvalú ochranu na miestach vstupu patogénu, zatiaľ čo centrálny MTC charakterizovaný sekréciou IL2 alebo IFN-plus IL2 naznačuje trvalú dlhotrvajúcu reakciu proliferáciou v sekundárnom lymfoidných orgánov a produkujú zásobu nových efektorov (Forthal, 2021).

IL2 je rastový faktor pre bunkovú expanziu špecifických T buniek a tvorbu efektorových a pamäťových T buniek (Abbas et al., 2018), ako už bolo predtým zistené pri in vitro stimulácii PBMC z akútneho aj rekonvalescentného COVID{{ 2}} pacientov (Braun a kol., 2020; Grifoni a kol., 2020; Peng a kol., 2020; Sekine a kol., 2020; Thieme a kol., 2020; Weiskopf a kol., 2020). Intracelulárne farbenie odhalilo, že CD8 plus T bunky aj CD4 plus T bunky sú zdrojmi tohto cytokínu, ale zdá sa, že hlavnými producentmi sú CD4 plus T bunky (Braun a kol., 2020; Grifoni a kol., 2020; Peng a kol. 2020; Sekine a kol., 2020). Na základe produkcie IFN- a IL2 možno SARS-CoV-2-špecifické CD4 plus T bunky rozdeliť do troch odlišných populácií: jednoduché IFN- -bunky vylučujúce IFN, dvojité IFN- plus IL{{23} }vylučujúce bunky a jednotlivé bunky vylučujúce IL{24} (Yang et al., 2006). Táto klasifikácia ďalej demonštruje heterogenitu MTC a tiež naznačuje, že odlišné subpopulácie pamäťových CD4 plus T buniek majú rôznu schopnosť vyvinúť sa na krátke/efektorové sekrécie IFN{27}}a dlhotrvajúce/centrálne sekrécie IL{29}}a IFN-plus IL2-vylučujúci MTC (Yang et al., 2006).

Ako sa očakávalo, výsledky štúdie preukázali odpoveď T-buniek pre všetky skupiny peptidov SARS-CoV-2. Najmä u rekonvalescentov vyvolala skupina peptidov SNMO najsilnejšie odpovede pamäťových T buniek, ktoré pravdepodobne odrážajú expozíciu zložkám celých vírusových častíc vrátane hrotu (S), nukleoproteínu (N), membránového proteínu (M) a ORF (ORF){{ 3}}a a ORF-7a (Peng a kol., 2020). Aj keď sa zdá zrejmé, že skupina SNMO vytvorí vyššie reakcie v porovnaní s S1 alebo S2, predchádzajúce štúdie ukázali, že skupina S1 má výrazne vyššiu reaktivitu u jedincov po vyliečení COVID-19- ako u zdravých kontrol a že SFU sa násobne menia S1 pool sú vyššie ako tie pre SNMO (Long a kol., 2021). Okrem toho významne viac polyfunkčných T buniek reaguje na peptidový pool S1 v porovnaní s poolom N peptidov u rekonvalescentov (Sandberg et al., 2021). Zistenie vyššej odozvy SNMO SFU v porovnaní s odozvou zo skupiny S1 preto nie je jednoduché.

Napriek tomu očakávame, že odpoveď očkovaných subjektov (s vakcínou na báze mRNA; Pfizer BNT162b2) bude vyvolaná dominantne na spike proteínový peptidový pool.

Vzhľadom na nedávno vyvinuté anti-SARS-CoV-2 vakcíny a hlásený pokles titrov protilátok u očkovaných jedincov (Bates a kol., 2021; Sariol a kol., 2021) a pacientov v rekonvalescencii (Gaebler a kol., 2021) bolo zaujímavé sledovať hladiny MBC a MTC u pacientov prechádzajúcich do séronegatívneho stavu. Zásadnou otázkou u pacientov s poklesom cirkulujúcich protilátok je, či ešte stále existujú ďalšie prvky imunologickej rezistencie proti infekcii SARS-CoV-2.

Výsledky štúdie ukázali, že robustné reakcie T a B buniek u takýchto pacientov nielen pretrvávali, ale dokonca sa zvýšili, podobne ako výsledky predchádzajúcej štúdie, v ktorej bol miznúci SARS-CoV-2- špecifický IgG spojený s trvalou pamäťovou T bunkou odpoveď v porovnaní s rekonvalescentmi, ktorí zostali IgG-pozitívni (Schwarzkopf et al., 2021). Výsledky súčasnej štúdie sú v súlade s predchádzajúcimi publikáciami súvisiacimi s koronavírusom respiračného syndrómu na Blízkom východe (MERS-CoV) a ťažkým akútnym respiračným syndrómom koronavírusom 1 (SARS-CoV-1), pri ktorých bola pozorovaná odpoveď pamäťových T buniek, keď protilátková odpoveď slabla (Abayasingam a kol., 2021; Alshukairi a kol., 2016; Channappanavar a kol., 2014; Zhao a kol., 2017).

Podobne Sandberg a kol. (2021) a Sherina a kol. (2020) (Sandberg a kol., 2021; Sherina a kol., 2021) preukázali silné MBC a MTC reakcie u pacientov s postupne znižovanými hladinami protilátok 8–9 mesiacov po nástupe SARS-CoV-2 (Dan a kol. ., 2021). To naznačuje, že hoci titre protilátok klesajú, účinnú imunitnú odpoveď na budúce infekcie by mohli vyvinúť zložky bunkovej pamäte. Vzhľadom na vysokú mieru mutácií SARS-CoV-2 a potenciálny únik imunity a na to, že rôzne bodové mutácie zhoršujú antigenicitu SARS-CoV-2 (Harvey et al., 2021), zostáva otvorenou otázkou, či pôvodné pamäťové bunky budú skrížene reagovať s variantmi SARS-CoV-2.

Hoci existujú dôkazy o tom, že skokové zmeny aminokyselín ovplyvňujú neutralizáciu protilátok (Harvey et al., 2021) a niektoré varianty môžu čiastočne uniknúť humorálnej imunite vyvolanej infekciou SARS-CoV{2}} alebo očkovaním BNT162b2, aktivácia špecifických CD4 plus T buniek nie je ovplyvnená mutáciami aspoň vo variantoch B.1.1.7 a B.1.351 (Geers et al., 2021). Varianty SARSCoV{12}} analyzované Tarke et al. v roku 2021 významne nenarušil celkovú reaktivitu T-buniek SARS-CoV{15}}; poklesy pozorované v odpovediach však zdôrazňujú dôležitosť aktívneho monitorovania reaktivity T buniek v kontexte vývoja SARS-CoV-2 (Tarke et al., 2021).

Záverom možno povedať, že (1) trvalé imunitné humorálne a adaptívne reakcie boli pozorované u pacientov so SARS-CoV-2 v rekonvalescencii s miernymi symptómami až 7 mesiacov, čo naznačuje dlhovekosť humorálnej a adaptívnej imunity u pacientov v rekonvalescencii. (2) U pacientov v rekonvalescencii boli reakcie T buniek na peptidové pooly S1, S2_N a SNMO charakterizované prezentáciou T buniek vylučujúcich IFN- - a IL{8}} a polyfunkčných T bunky vylučujúce IFN-plus IL{11}}. (3) U pacientov v rekonvalescencii môže byť klesajúci anti-spike titer IgG sprevádzaný silným MBC a IFN- -produkujúcim MTC, čo naznačuje potenciálnu dlhotrvajúcu pamäťovú odpoveď a obranu proti opätovnej infekcii.

vyhlásenia

Financovanie

Autori nezískali žiadny konkrétny grant od žiadnej financujúcej agentúry vo verejnom, komerčnom alebo neziskovom sektore.

Etické schválenie

Autori vyhlasujú, že získali informovaný súhlas od pacientov zahrnutých v článku a že táto správa neobsahuje žiadne osobné údaje, ktoré by mohli viesť k ich identifikácii.

Konflikt záujmov

Autori nemajú žiadne konflikty záujmov, ktoré by mohli nahlásiť.

Doplnkové materiály

Doplnkový materiál súvisiaci s týmto článkom možno nájsť v online verzii na adrese doi:10.1016/j.ijid.2021.12.309.

For more information:1950477648nn@gmail.com