Štúdia o chemických zložkách Cistanche Deserticola, čínskeho bylinného lieku na výživu obličiek a posilnenie jangu

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964audrey.hu@wecistanche.com

Úvod

Cistanche deserticolaktorá patrí do čeľade Orobanchaceae je suchá dužinatá stonka Cistanche deserticola, ktorá je sladká, slaná a teplá. Má účinky na tonizáciu obličiek, posilnenie jangu, zvlhčenie čriev a uvoľnenie čriev. Používa sa najmä na liečbu impotencie, prechladnutia a bolesti v páse a kolenách, neplodnosti, suchosti čriev a zápchy. Boli hlásené aj farmakologické účinky Cistanche deserticola.

Cistanche deserticola

Ústav tradičnej čínskej medicíny Čínskej akadémie tradičnej čínskej medicíny vykonal chemické a farmakologické štúdie oCistanche deserticola. Je dokázané, že jeho etanolový extrakt ovplyvňuje imunitný systém. Deväť zlúčenín sa oddelilo a identifikovalo ako D-manitol - sitosterol, daukosterol, kyselina jantárová, triakontanol, 8-epibrucínový glukozid, betaín, glykolipid kyseliny kávovej a polysacharidové zlúčeniny. Okrem manitolu a 8-epibrucínového glukozidu boli po prvýkrát získané z Cistanche deserticola aj ďalšie zložky. Glykolipid kyseliny kávovej, betaín, manitol, kyselina jantárová a ďalšie zlúčeniny majú rôzne fyziologické aktivity. Majú účinky na imunitný systém, sexuálne funkcie, kardiovaskulárny systém, pečeň, proti starnutiu a pod.

Experimentálna časť

Teplota topenia bola meraná mikroskopom Boetius PHMK a teplomer nebol nastavený; Hmotnostná spektrometria (EI) bola stanovená prístrojom MMH 70-70 (UK) a FD bola stanovená pomocou M-80 plynovej chromatografie-hmotnostného spektrometra (Japonsko); Nukleárna magnetická rezonancia (vodíkové spektrum) bola stanovená prístrojom typu JEOL FX 90Q (Japonsko); ultrafialové spektrum bolo určené prístrojom typu UV-3000; infračervené spektrum bolo merané prístrojom Hitachi typ 260-50, tabletovanie KBr a silikagély boli vyrobené z námornej chemickej továrne Qingdao, gél LH-20 bol vyrobený vo Švédsku. Sušené mäsové stonky Cistanche deserticola boli zakúpené od Pekingskej spoločnosti na výrobu liečivých materiálov a identifikované Zhang Yanzhenom.

1. Extrakcia a separácia

Cistanche deserticola sa rozdrví, perkoluje sa 95 percentným etanolom, rozpúšťadlo sa získa, rozpustí sa v malom množstve vody, extrahuje sa éterom, stĺpcová chromatografia na silikagéli, eluuje sa petroléterom a éterom (6:4), čím sa získa biely kryštál ( ja). Vodná vrstva extrahovaná éterom sa odparí, zahreje a rozpustí v etanole, ochladí, aby sa získala vločkovitá zrazenina (II). Cistanche deserticola je perkolovaný 50 percentami etanolu. Extrahované etylacetátom, stĺpcová chromatografia na silikagéli, elúcia etylacetátom, každý po 20ml (rovnaké, ako je uvedené nižšie) Celkovo sa odobralo 37 vzoriek, ktoré sa skúmali chromatografiou na tenkej vrstve. Časť obsahujúca kryštál (III), ktorý pôvodne vytekal, sa spojil. 24 až 37 vzoriek sa odfiltrovalo z bielych vločiek (II) a odparilo sa do sucha. Zvyšok sa podrobil stĺpcovej chromatografii na silikagéli a eluoval zmesou butanón-etylacetát-benzén-voda (4:3:2:0,2). Odobralo sa 12 vzoriek, z ktorých 8 ~ 11 vzoriek bolo oddelených od oranžových kryštálov; vodná vrstva extrahovaná etylacetátom bola extrahovaná n-butanolom, stĺpcovou chromatografiou na silikagéli a eluovaná zmesou chloroform-metanol-voda (6:4:1). Piata vzorka rozpustila tenkú kryštalizáciu (IV), druhá časť chromatografie na tenkej vrstve sa spojila s modrou fluorescenčnou časťou, potom sa použila stĺpcová chromatografia na silikagéli, eluovaná zmesou chloroform-metanol-voda (7:3:2,5 ), použili rovnakú metódu kombinovanú s modrou fluorescenčnou časťou, prešli gélovou LH-20 kolónou, eluovali zmesou metanol-voda (1:1), Ôsma vzorka rozpustila trochu žltého prášku (V), pokračovala v eluovaní na 37 dielov, v kombinácii s požadovanou časťou vyššie, stĺpcovou chromatografiou na silikagéli, rozotretím zmesou butanón-etylacetát-benzén-voda (4:3:2:0,2), odrezať modrý fluorescenčný segment a eluovať metanolom, aby sa získalo svetlo hnedý prášok (VI).

95 % etanolový extrakt, odstránenie petroléteru a dichlórmetánu, rozpustenie v metanole, nízkotlaková silikagélová stĺpcová chromatografia, elúcia zmesou metanol-chloroform (9:1), každý po 20 ml, 18. až 28. diel rozpustil niekoľko bezfarebných kryštálov (VII) ; extrahoval vodou zvyšok Cistanche deserticola po extrakcii etanolom, potom skoncentroval zvyšok, ochladil, rozpustil veľké množstvo bielych kryštálov (VIII), odstránil kryštalizovaný vodný roztok a potom spracoval so 4-násobným množstvom etanolu, aby sa vyrobil viac zrážok (IX).

2. Identifikácia

Zlúčenina I: biely ihličkovitý kryštál sa získal rekryštalizáciou s acetónom, teplota topenia 136 až 137 stupňov. Činidlo kyseliny sírovej koncentrované v anhydride kyseliny octovej vykazovalo pozitívnu reakciu (zelené). EIMS m/z: 414 (Mplus). Hodnota Rf chromatografie na tenkej vrstve a infračervené spektrum boli v súlade s - sitosterolovým štandardom, takže je potvrdený ako - sitosterol.

Zlúčenina II sa rekryštalizovala zahrievaním a refluxovaním s etanolom dvakrát, aby sa získala biela vločkovitá precipitácia, t.t. 290 ~ 291 stupňov. Činidlo kyseliny sírovej koncentrovanej anhydridom kyseliny octovej vykazovalo pozitívnu reakciu (zelené), - činidlo naftol vykazovalo pozitívnu reakciu. EIMS m/z: 396 (základný pík), 382, ​​255, 213, 81, 57, 43. Chromatografia na tenkej vrstve bola konzistentná so známym produktom daukosterolu a teplota topenia zmesi neklesla. Potvrdilo sa to ako daukosterol.

Zlúčenina III metanol rekryštalizoval do niekoľkých podlhovastých kryštálov, mpl87 ~ 189 stupňov, pH 2. EIMS m/z: 119 (M plus 1), 118 (M plus), 101, 100, 74, 73, 55 (základný pík), 45, 28, 27. IR (KBr) cm-1: 3100 ~ 2500 (šírka, OH), 1690 (C=0), 1420, 1310, 1200, 920, 800. Hodnota RF tenkovrstvovej chromatografie je rovnaký ako štandard kyseliny jantárovej. Okrem toho je v súlade so štandardným hmotnostným spektrom a štandardným infračerveným spektrom kyseliny jantárovej a teplota topenia zmesi sa neznižuje. Je potvrdená ako kyselina jantárová

Zlúčenina IV sa rekryštalizuje z etanolu ako biela lesklá tuhá látka, t.t. 83 ~ 84 stupňov. EIMS m/z: 420 (M plus -H20), 57 (základný pík). Hodnota Rf tenkovrstvovej chromatografie je rovnaká ako hodnota známeho triacontanolu a teplota topenia zmesi neklesá. Vyššie uvedené údaje sú v súlade s Triacontanolom uvedeným v literatúre.

Zlúčenina VI: po rozpustení v acetóne sa uskutočnila stĺpcová chromatografia na silikagéli a eluovala sa 60 percentným metanolom, aby sa získali svetložlté tenké amorfné kryštály, ktoré sú ľahko rozpustné vo vode a rozpustné v metanole, etanole a acetóne, činidlo -Naftol vykazovalo pozitívnu reakciu . IR (KBr) cm-1: 3700 ~ 3000 (OH), 2900 (CH2, CH3), 1690 (C=}O), 1600520 (C=C), 1440, 1350 1280, 1260 (COC), 1156, 1110, 1050 (CO), 807. UV A nm (loge): 218 (sh, 4,30), 249 (3,91), 291 (4,08), 330 (4,15). 1H-NMR (CD3COD3) 5 ppm: 1,18 (3H, D, J=6, CH3 na ramnóze), 2,75 (2h, t, J=7,2, 2H v polohe C), 4,75 ( 1H, D, J=8, C1-H na glukóze), 5,17 (1H, D, J=1,8, C1-H na ramnóze), 4,20 ~ 3,30 (12H, m, 2H v polohe C, 6H na glukóze, 4H na ramnóze), 6,27 (1H, D, J=16, 1H v polohe C), 7,52 (1H, a, J {{76} } Poloha C (1H), 6,60 (1H, a, J=8, C5"'-H), 6,90 (1H, DD, J=8/2, C6"' - H), 7,10 (1H, D, J=2, C2"'- H), 6,70 (1H, D, J 2-, C2-H), 6,65 (1H, D, J {{ 105}}, C5-H), 6,52 (1H, DD, J=8/2, C6-H), H-NMR (DMOS) 5 ppm: 7,43 (1H. s, OH), 8,07 (1H, s, OH), 850 (2H, s, 2 x OH), zmizli po zhoršení výmeny vody. [a] 22D: - 68,37 stupňa (C {{126} },67MeOH).FDMS m/z:647 (M plus plus Na), 625 (M plus plus 1), 624 (M plus), 479 (M plus 1-ramnosyl), 478 (M plus -ramnosyl ), ktorý zodpovedá molekulovému vzorcu C29H36O15. Po kyslej hydrolýze zlúčeniny VI sa na papierovom chromátovi zobrazia dve hnedé škvrny grafiky. Hodnota Rf je úplne v súlade s ramnózou a glukózou a teplota topenia neklesne, keď sa zmieša so známym akteozidom. Vyššie uvedené údaje sú v súlade s 3,{140}}dihydroxyskupinou opísanou v literatúre - fenyletoxy-o- - L-ramnosyl (1 → 3) - 4-o-skupina kyseliny kávovej - D- glukopyranozid je v podstate karcinogénny.

Zlúčenina VII je biely kryštál získaný rekryštalizáciou acetón-metanolu s teplotou topenia nad 299 stupňov (rozklad), extrémne rozpustný vo vode, ľahko rozplývavý a rozpustný v etanole a metanole. Alkaloidové činidlo vykazuje pozitívnu reakciu. Experimentálne hodnoty (v percentách) elementárnej analýzy: C47,29, H9,16, N10,54; teoretické hodnoty (v percentách): C47,54, H9,52, N11,11. Vyhovuje molekulovému vzorcu C5H11NO2.1/2H2O. IR (KBr) cm-1: 3360 (asociovaný NH, OH), 2940, 1620 (C=0), 1470, 1390, 1330, 1240, 1125, 980, 930, 890. H- NMR (D20) 5 ppm: 3,28 (9 H, s, 3 x CH3), 3,88 (2 H, s, CH2), 4,68 (D20). EIMS m/z: 117 (M plus), 100, 85, 73, 59, 58 (základný pík), 44, 42. Chromatografia na tenkej vrstve je úplne v súlade s Rf hodnotou betaínového štandardu a teplotou topenia zmes nekvapká. Spektrum nukleárnej magnetickej rezonancie, infračervené spektrum a hmotnostné spektrum sú v súlade so štandardným spektrom betaínu, takže betaín je rozpoznaný.

Zlúčenina IX: rozpustená vo vode, extrahovaná zmesou n-butanol-chloroform (1:4) a nečistoty boli odstránené. Vodná vrstva bola ošetrená 4-násobným množstvom etanolu, zrazenina bola rozpustená vo vode, odfarbená peroxidom vodíka a malomolekulárne zlúčeniny boli odstránené dialýzou. Na membránu sa pôsobilo 5-násobným množstvom etanolu, čím sa získala svetložltá zrazenina. Fehlingova reakcia bola pred hydrolýzou zrazeniny negatívna a po hydrolýze sa vytvorila hnedočervená zrazenina. Po kyslej hydrolýze sa hydrolyzát podrobil papierovej chromatografii. V porovnaní so štandardným cukrom bola detegovaná iba glukóza, takže sa potvrdilo, že boli detegované polysacharidy, ktoré pozostávajú najmä z glukózy.