Potenciál petržlenových polyfenolov a ich antioxidačná schopnosť pomôcť pri liečbe depresie a úzkosti: Subakútna štúdia in vivo

Pre viac info. kontakttina.xiang@wecistanche.com

Abstraktné: Depresia a úzkosť sú hlavnými problémami duševného zdravia vo všetkých častiach sveta. Tieto ochorenia sú spojené s množstvom rizikových faktorov vrátane oxidačného stresu. Psychofarmaká chemickej povahy preukázali niekoľko vedľajších účinkov, ktoré zvýšili vplyv týchto chorôb. Vzhľadom na túto situáciu sa prírodné produkty javia ako sľubná alternatíva. Cieľom tejto štúdie bolo zhodnotiť anxiolytické a antidepresívne účinky Petroselinum sativumpolyfenolyin vivo, ako aj jeho koreláciaantioxidant vlastnosti in vitro.Anxiolytikumaktivita extraktu (50 a 100 mg/kg) bola hodnotená pomocou testov v otvorenom poli a svetlo-tmavej komory, zatiaľ čo antidepresívna aktivita bola hodnotená pomocou testu núteného plávania. Antioxidačná aktivita extraktu bola hodnotená testom voľných radikálov 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl(DPPH) a testom FRAP (kapacita redukujúca železo). Fenolový extrakt vykazoval veľmi silné anxiolytické a antidepresívne účinky, najmä v dávke 100 mg/kg, čo znížilo depresívne správanie u myší (skrátenie času imobility) a tiež anxiolytické správanie (tendencia objavovania v strede a osvetlených oblastiach )ešte lepšie ako pri paroxetíne a bromazepame (klasické lieky), spolu s týmito výsledkami extrakt preukázal aj dôležitú antioxidačnú kapacitu. Tieto predbežné výsledky naznačujú, že Petroselinum satium vykazuje anxiolytický a antidepresívny potenciál na použitie ako doplnok alebo nezávislá fytomedicína na liečbu depresie a úzkosti.

Kľúčové slová: Petroselinum sativum; polyfenol; anxiolytikum; podobné antidepresívam; antioxidant; farmakológia; bylinková medicína; prírodné produkty

1. Úvod

Depresia a úzkostné poruchy sa už dlho považujú za problémy duševného zdravia a predstavujú veľkú záťaž pre každú spoločnosť, v ktorej je stres všadeprítomný. Svetová zdravotnícka organizácia (WHO) predpovedá, že do roku 2030 bude depresia ako potenciálne smrteľné ochorenie druhou najčastejšou príčinou invalidity na celom svete [1]. Podľa najnovších odhadov WHO trpí depresiou viac ako 300 miliónov ľudí na celom svete, z toho viac ako 260 miliónov má aj úzkostné poruchy [2].

Diagnostický a štatistický manuál duševných porúch (DSM-V) definoval veľkú depresívnu poruchu nielen ako príležitostný smútok alebo záchvat depresie, ale skôr ako depresívnu náladu alebo stratu záujmu alebo potešenia počas najmenej dvoch po sebe nasledujúcich týždňov, ktorých epizódy sú často recidivujúce [3]. WHO tiež definuje depresiu ako „rôzne psychologické a biologické symptómy, ako je celkový pocit smútku, strata potešenia a záujmu, pocit viny, narušený spánok (nespavosť alebo ospalosť) a chuť do jedla, pocity únavy (psychomotorická retardácia). ), a nedostatok koncentrácie“. V najvážnejších prípadoch môže depresia viesť až k samovražde [4].

Úzkosť, ako ju definuje WHO, je „pocit neurčitého bezprostredného nebezpečenstva sprevádzaný stavom malátnosti, nepokoja, bezmocnosti alebo dokonca zničenia“. Dá sa opísať aj ako stav anticipačného strachu spôsobený potenciálnym a neistým nebezpečenstvom, hoci jeho príčina nemusí byť nevyhnutne vedomá, na rozdiel od strachu, ktorý vzniká tvárou v tvár skutočnému nebezpečenstvu. Tieto dve emócie sú však charakterizované podobnými fyziologickými (zvýšený krvný tlak, potenie, tachykardia atď.) a behaviorálnymi (zvýšená bdelosť a vyhýbanie sa) odozvami [5].

Depresia a úzkosť sa vo všeobecnosti liečia psychotropnými liekmi vrátane antidepresív aanxiolytiká(trankvilizéry), často chemickej povahy, ako sú paroxetín a benzodiazepíny. Avšak užívanie týchto liekov má určité limity a môžu spôsobiť nežiaduce vedľajšie účinky. Bromazepam sa predpisuje na liečbu úzkosti. Jeho konzumácia však prináša množstvo negatívnych vedľajších účinkov vrátane ospalosti, útlmu a straty pamäti [6]. Ťažkosti so spánkom, strata chuti do jedla, ospalosť a sexuálna dysfunkcia sú tiež typickými vedľajšími účinkami paroxetínu, antidepresíva zo skupiny inhibítorov spätného vychytávania serotonínu (SSRI) používaného na zvládanie veľkých depresívnych porúch [7]. V dôsledku tejto obmedzenej účinnosti je vysoko cenené skúmanie nových, účinnejších a netoxických terapeutických prostriedkov.

Liečivé rastliny môžu byť adekvátnym zdrojom nových, bezpečných a účinných terapeutík, najmä preto, že je známe, že mnohé vykazujú menej vedľajších účinkov [8]. Pri vyššie uvedených poruchách bolo testovaných viacero liečivých rastlín a priniesli veľmi príjemné výsledky, ktoré povzbudili ďalšie štúdie na objavenie antidepresívnych a anxiolytických vlastností ďalších rastlín [9].

Petroselinum satioum Hoffm., bežne známy ako "petržlen" ("maadnous" v arabčine), je členom čeľade Apiaceae. Apium crispum Mill, Apium Petroselinum L., Petroselinum Hortense Hoffm a Petroselinum crispum (Mill) Fuss. sú synonymá aj pre Petroselinum sativum Hoffm.[10. Petržlen ako kulinárska bylina pochádzajúca z oblasti Stredozemného mora sa v modernej dobe stala celosvetovo bežnou bylinkou [11]. P. sativum má celý rad prospešných vlastností, vrátaneantioxidantanalgetické, spazmolytické, antidiabetické, imunomodulačné a gastrointestinálne účinky [12]. Tieto rôzne výhody možno pripísať základným zložkám rastliny, ako sú polyfenoly (apigenín, kvercetín, luteolín a kempferol), vitamíny, karotenoidy, kumarín a taníny [13]. Čeľaď Apiaceae zahŕňa viaceré rastliny známe svojimi antidepresívnymi a anxiolytickými účinkami ako Coriandrum satioum L.[14], Pimpinella anisum L.[15], Carum carvi L.[16] pre koncentráciu v rozmedzí od 50 do 200 mg/kg.

V tejto štúdii potenciálne antidepresívne a anxiolytické aktivity petržlenupolyfenolyboli po prvýkrát hodnotené spolu s jehoantioxidačná aktivitana určenie, či existovala korelácia.

2. Výsledky

2.1. Hodnotenie antioxidačnej aktivity

2.1.1. Test DPPH

Obrázok 1 ukazuje percento antioxidačnej aktivity ako funkciu rôznych hladín PSPE a BHT. Získané výsledky ukazujú, že náš extrakt a BHT vykazujú antiradikálovú aktivitu závislú od koncentrácie. To znamená, že percento inhibície DPPH radikálu sa zvyšuje s koncentráciou fenolového extraktu P. sativum a BHT. BHIT vykazoval najvyššiu aktivitu v porovnaní s naším extraktom. Pre 0,5 ug/ml dosiahol BHT maximálne percento inhibície 90 percent, ktoré zostalo konštantné pri koncentrácii 1 ug/ml. Pri rovnakej koncentrácii fenolový extrakt produkoval maximálnu inhibíciu 58 percent

Syntetický antioxidant BHT vykazoval veľmi silnú antiradikálovú aktivitu, s IC50 približne 0,024 ug/ml, vyššou ako hodnota zaznamenaná pre fenolový extrakt P sativum （asi 0,184 ug/ml） .

2.1.2. Test FRAP

Obrázok 2 ukazuje zmeny v optickej hustote (OD) ako funkciu rôznych koncentrácií PSPE a BHT (pozitívna kontrola). Je možné vidieť, že percentá zníženia sú úmerné koncentrácii extraktu aj BHT. Posledne menovaný vykazoval vyššie percento redukcie v porovnaní s extraktom.

Aby sme porovnali účinnosť polyfenolovej frakcie P. sativou (PSPE) s účinnosťou BHT, určili sme koncentráciu, ktorá znížila FRAP o 50 percent (IC50).

BHT (syntetický antioxidant BHT) vykazoval vysoko silnú antioxidačnú aktivitu s IC50 približne 0,09 ug/ml, čo je vyššie ako hodnota zaznamenaná pre fenolový extrakt z P. sativum （asi 0,38 ug/ml ).

2.2. Vyhodnotenie testu núteného plávania s antidepresívnou aktivitou

Zmeny v prestojoch v teste núteného plávania počas troch týždňov experimentu sú znázornené na obrázku 3. Čas nehybnosti počas testu bol významne kratší u myší liečených PSPE (PSPE 50 mg/kg (34 s±3,286), PSPE 100 mg/kg (33,8 s ± 2,653)) v porovnaní s kontrolami (paroxetín (100,8 s ± 6,837), vehikulum (176 s ± 6,550).

Tieto výsledky ukazujú, že antidepresívny účinok fenolového extraktu P. sativum je väčší ako účinok paroxetínu.

2.3. Hodnotenie anxiolytickej aktivity

2.3.1. Úzkostné správanie na otvorenom poli

Obrázok 4 ukazuje zmeny v čase strávenom v strede testu na otvorenom poli počas troch týždňov ošetrenia extraktom. Je možné vidieť, že myši liečené PSPE (50 a 100 mg/kg) strávili viac času v centrálnej oblasti v porovnaní s kontrolnými skupinami. Toto výrazné zvýšenie je úmerné nielen dĺžke liečby, ale aj koncentrácii extraktu. Optimálna hodnota sa získala pri koncentrácii 100 mg/kg (37,4 s± 1,778, v porovnaní s 33,4 s±1,208 sat pri dávke 50 mg/kg). To naznačuje ananxiolytikumúčinok tejto rastliny.

Zmeny v počte prekrížených dlaždíc počas trojtýždňového experimentu sú znázornené na obrázku 5. Analýza ukázala pozoruhodný nárast počtu dlaždíc, ktoré prešli myšiam liečeným PSPE (50 mg/kg (161,2 ± 5,490), 100 mg/ kg (173±10,104)) v porovnaní so skupinami liečenými bromazepamom 1 mg/kg (115,8±1,393) a vehikulom (147,4±1,568). Tieto výsledky naznačujú väčší anxiolytický účinok FPPS dokonca ako účinok bromazepamu v dávke 1 mg/kg.

2.3.2. Úzkostné správanie vo svetlej a tmavej miestnosti

Obrázok 6 predstavuje výsledky zmien v čase strávenom v osvetlenej komore počas obdobia štúdie. Výsledky ukazujú progresívny nárast času stráveného v osvetlenej komore v priebehu času u myší liečených PSPE. Toto zvýšenie je zvlášť viditeľné na 21. deň. V tomto teste myši liečené bromazepamom a PSPE strávili podstatne viac času v osvetlenom oddelení (bromazepam 1 mg/kg (146,8 s ± 1,068), PSPE 50 mg/kg (199,6 s ± 6,838), PSPE 100 mg/kg (213,6 s ± 9,331) v porovnaní s kontrolnými myšami (vehikulum (75,8 s ± 4,352)). Toto sa považovalo za dôkaz anxiolytického účinku polyfenolového extraktu P. sativum.

Obrázok 7 ukazuje zmeny v počte prechodov medzi svetlými a tmavými komorami počas tohto testu. Pozoruhodný rozdiel sa zistil počas 21 dní medzi myšami liečenými PSPE (50 mg/kg (16±{{10}}.548), 100 mg/ kg (12,4±0,510)) a kontrolné myši (nosič (10±0,837), bromazepam 1 mg/kg (12±0,949). Tieto výsledky sú v súlade s výsledkami času stráveného v osvetlenej komore, keďže tieto dva parametre sú nepriamo úmerné úrovni úzkosti, ktorú myši vykazovali.

3. Diskusia

V tejto štúdii sme preukázali, že fenolový extrakt P. satium vykazuje antioxidačnú aktivitu in vitro a anxiolytickú a antidepresívnu aktivitu in vivo.

V niektorých štúdiách sa zistilo, že kyselina ferulová a kyselina škoricová majú antidepresívne účinky [17,18], zatiaľ čo kvercetín a hydroxytyrozol preukázali schválený anxiolytický účinok [19,20]. Tieto zlúčeniny by mohli byť za pozorovaným účinkom.

Účinnosť antioxidantu sa môže prejaviť rôznymi formami, ako je vychytávanie voľných radikálov, rozklad voľných radikálov a tiež chelatácia kovových iónov [17]. Táto aktivita môže byť hodnotená pomocou testov FRAP a DPPH, z ktorých druhý sa vďaka svojej rýchlosti často používa na skríning molekúl prítomných v rastlinných extraktoch [18]. Naše výsledky ukázali antioxidačnú aktivitu vo fenolovom extrakte z petržlenu. Predchádzajúca práca Hinneburga et al.[21]ukázala, že vodný extrakt z petržlenu vykazoval slabú inhibičnú aktivitu radikálu DPPH s IC50 rádovo 12.0±{{8} },10 mg/ml (v porovnaní s polyfenolovým extraktom v našej štúdii, 0,184 ug/ml). Naopak, chelatačný účinok tohto extraktu bol účinnejší v porovnaní s inými extraktmi použitými v rovnakej štúdii.

Nedávne štúdie tiež zistili súvislosť medzi poruchami nálady a oxidačným stresom [22,23] a psychickým stresom [24,25], čím sa otvorili nové cesty prevencie a/alebo zvládania úzkosti a depresie, pokiaľ ide o potenciálne použitie antioxidantov. Desrumaux a kol. [26]všimol, že nedostatok vitamínu E v mozgu myší zvýšil hladiny kľúčových príznakov oxidačného stresu a správania vyvolávajúceho úzkosť. Podobne myši, ktorým bol podávaný vitamín C, nedávno odhalili, že táto zlúčenina má antidepresívnu úlohu na základe výsledkov testu zavesenia chvosta [27]. Polyfenoly, vrátane flavonoidov a fenolových kyselín, sú dobre známe pre svoje silné antioxidačné účinky [28,29]. Využitie týchto sekundárnych fytochemických metabolitov ako spôsobu predchádzania úzkosti a depresie a ich zvládania môže byť sľubnou stratégiou [9]. Štúdia vykonaná Akinci et al. [30] preukázali, že petržlenová vňať je úspešná pri minimalizácii stresom vyvolaného poškodenia žalúdka, keď sa užíva perorálne podporou antioxidačného obranného systému buniek, čo sa prejavuje zvýšením priemernej hladiny glutatiónu v tkanivách (53,31 ± 9,50) a aktivitou superoxiddismutázy ( 15,18 ± 1,05) a kataláza (16,68 ± 2,29).

Experiment na otvorenom poli sa používa na vyhodnotenie emocionálneho stavu zvieraťa. Zvieratá, ktoré boli oddelené od svojej domácej klietky a umiestnené do iného prostredia, často prejavujú strach a úzkosť tým, že prejavujú zmeny vo všetkých alebo niektorých parametroch, ako je zníženie ambulantnej aktivity, skúmania a imobilizácie, ale zvýšenie starostlivosti o srsť. správanie [31]. Extrakt P. sativum v dávke 100 mg/kg vyvolal veľmi významný anxiolytický účinok, čo sa prejavilo výrazným zvýšením času stráveného v strede poľa a celkovej ambulantnej aktivity. Toto zvýšenie bolo väčšie ako zvýšenie pozorované u myší liečených bromazepamom v dávke 1 mg/kg.

Experiment svetlo-tmavá miestnosť je tiež užitočný pri predpovedaní anxiolytického účinku liekov. Na meranie stupňa úzkosti u myší počas tohto testu sa zaznamenávajú dva parametre: (1) Nižšie percento času, ktorý zviera strávilo v tmavej komore, súvisí s úrovňou jeho úzkosti. Inými slovami, keď je percento času stráveného v osvetlenom oddelení minimálne, úzkosť sa považuje za vysokú a(2) počet prechodov, tj počet prechodov medzi dvoma oddeleniami, nepriamo súvisí s úrovňou úzkosti. (nižší počet prechodov znamená vysokú úroveň úzkosti)[32]. Zistenia tejto štúdie ukázali, že polyfenolický extrakt P. sativum v dávke 100 mg/kg vykazoval optimálny anxiolytický účinok založený na predĺženom čase strávenom zvieraťom v osvetlenej komore a počte prechodov v porovnaní s kontrolami počas obdobia štúdie.

Experiment s núteným plávaním bol vyvinutý v 70. rokoch 20. storočia. Je tiež známy pod menom svojho vynálezcu ako Porsoltov test [33]. Naše zistenie naznačuje, že čas imobility liečených myší bol kratší ako čas kontrolných myší, čo naznačuje antidepresívny účinok fenolového extraktu P. sativum. Toto zníženie času nehybnosti však mohlo byť v prospech buď predĺženia času plávania alebo času lezenia. Tento rozdiel je veľmi dôležitý z neurofarmakologického hľadiska, pretože teoreticky, počas núteného plávania, antidepresíva spôsobujúce prevažne noradrenergné alebo dopaminergné zvýšenie znižujú nehybnosť zvýšením času eskalácie [34], zatiaľ čo tie, ktoré aktivujú 5HT, namiesto toho znižujú nehybnosť predĺžením času plávania. [35]. Pokiaľ ide o funkciu CNS, väčšina polyfenolov interaguje priamo s neurotransmiterovými systémami [36]. Štúdie uskutočnené na petržlenovej vňate ukazujú prevahu flavonoidov 37]. Uvádza sa, že široká škála flavonoidov nachádzajúcich sa v konvenčných tradičných liečivých extraktoch má sedatívne/anxiolytické účinky priamou väzbou na receptory GABAA [38].

Štúdia, ktorú uskutočnili Priprem a kol. [39]ukazuje, že polyfenol kvercetín vykazuje anxiolytickú aktivitu po týždni opakovaného podávania v dávke 300 mg/kg, čo nie je také účinné ako diazepam, ktorý prejavuje svoj účinok hodinu po podaní nižších dávok. Pereira a kol. [40] ukázali, že kyselina rozmarínová vykazuje anxiolytický účinok pri veľmi nízkych dávkach (2 až 4 mg/kg). Ďalším príkladom je apigenín, ktorý vykazuje selektívnu a nízku afinitu k benzodiazepínovým receptorom, pričom má anxiolytickú aktivitu takmer bez vedľajších účinkov[41]. Flavonoidy tiež hrajú úlohu pri depresii prostredníctvom inhibície monoaminooxidázy a následného zvýšenia hladín 5-HT, DA a norepinefrínu v určitých oblastiach mozgu [42].

Excitačné aminokyseliny, ako je aspartát, glutamát, homocysteín a cysteín, stimulujú postsynaptické bunky, zatiaľ čo inhibičné aminokyseliny, ako je alanín, glycín, GABA a taurín, potláčajú vývoj postsynaptických buniek 43]. Enzým nazývaný dekarboxyláza aromatickej L-aminokyseliny, tiež nazývaný DOPA dekarboxyláza, tryptofándekarboxyláza, 5-hydroxytryptofándekarboxyláza alebo AAAD, ktorý katalyzuje príslušnú dekarboxyláciu L-dopa a 5-hydroxytryptofánu na dopamín a {{ 7}}hydroxytryptamín môže tiež hrať úlohu. Petržlen môže spôsobiť nadmernú expresiu tohto enzýmu, čo prispieva k jeho antidepresívnemu účinku. Štúdia vykonaná na Centella Asiatica, rastline patriacej do rovnakej čeľade Apiaceae, ukázala, že antidepresívny účinok celkových triterpénov bol spôsobený zlepšením funkcie hypotalamo-hypofýzy-adrenokortikálnej osi a zvýšením obsahu monoamínových neurotransmiterov [44]. Tieto štúdie naznačujú prítomnosť anxiolytickej a antidepresívnej aktivity fenolového extraktu P. sativum.

4. Materiály a metódy

4.1. Rastlinný materiál

Petroselinum sativum Hoffm. vzdušné časti boli zozbierané počas fázy pred kvitnutím (jar 2018) z oblasti Tanounate v severnom Maroku (34 stupeň 32'9"N 4 stupeň 38'24"W). Klasifikácia, identifikácia a botanický názov tejto rastliny boli overené kvalifikovaným botanikom Pr. Bari Amina. Vzorka rastliny je uložená v herbári Dhar El Mahrez Fez na Prírodovedeckej fakulte (ukážkový exemplár: 18TA5001).

4.2. Extrakcia

Extrakcia sa uskutočnila tak, ako je opísané v Slighoua et al. [11]. Stručne, 10 g sušených nadzemných častí jemného prášku P. sativum sa zmiešalo s metanolom (100 ml) a macerovalo sa 3 hodiny pri teplote 50 stupňov. Potom sa filtrát skoncentroval na rotačnej odparke do sucha, aby sa zaistilo úplné odparenie rozpúšťadla. Výsledný extrakt sa znovu rozpustil v destilovanej vode (200 ml) a premyl trikrát hexánom a chloroformom (200 ml trikrát), aby sa zbavili pigmentov a iných nečistôt. Konečná vodná fáza sa extrahovala etylacetátom (200 ml trikrát). Organická fáza (etylacetát) sa skoncentrovala, čím sa získal polyfenolový extrakt. Výťažok extrakcie je 10,52 percenta.

Predtým sme publikovali prácu o rovnakom extrakte, ktorý pomocou analýzy HPLC-DAD preukázal, že sa skladá z nasledujúcich polyfenolov: (1) kyselina ferulová, (2) kyselina škoricová, (3) kyselina galová, (4) kvercetín, (5) myricetín, (6) naringenín, (7) hydrox-tyrozol [11].

4.3. Štúdium zvierat

V tejto štúdii boli myši (švajčiarsky albíni) poskytnuté Animal House na Prírodovedeckej fakulte Dhar el Mahraz Fez. Pred zaradením do experimentov boli umiestnené v skupinách po šiestich do konvenčných klietok a bolo im umožnené dvojtýždňové adaptačné obdobie s voľným prístupom k potrave a vode a kontrolovanou teplotou 22 ± 2 stupňov a pod cyklom svetlo/tma. 12 h/12 ​​h.

Experimenty sa uskutočňovali v súlade s medzinárodnými štandardmi pre liečbu a používanie experimentálnych zvierat [16] a Interným výborom pre etiku zvierat (#09-12/2019/LBEAS).

4.4. Hodnotenie antioxidačnej aktivity

4.4.1.2, 2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH) test

DPPH je jednou z najbežnejších chemických zlúčenín používaných na hodnotenie antioxidačnej aktivity fenolových zlúčenín |45. DPPH má nespárovaný elektrón na premosťujúcom atóme dusíka. Princíp tohto testu je zhrnutý v schopnosti extraktu redukovať tmavofialový voľný radikál DPPH na žltkastú redukciu merateľnú spektrofotometriou [28]. Séria koncentrácií extraktu bola pripravená v metanole, 10}0 μl každého z nich bolo pridaných do 750 μl metanolového roztoku DPPH (0,004 percenta). Po inkubačnej dobe 30 minút pri 25 stupňoch sa merala absorbancia pri 517 nm. Pre negatívnu kontrolu bola vzorka nahradená metanolom. Percento DPPH sa určilo podľa nasledujúcej rovnice:

(1)I=[(prázdna vzorka)/prázdna]×100

V percentách antiradikálovej aktivity je vzorka absorbancia vzorky a blank je absorbancia negatívnej kontroly.

4.4.2. Test FRAP (Ferous Reduction Power).

Redukčná sila železa (Fe3 plus) v študovanom extrakte bola stanovená podľa metódy opísanej v Mechchate et al. 【28】. Stručne, 100 μl extraktu v rôznych koncentráciách sa zmiešal s 500 μl fosfátom pufrovaného roztoku （PBS, 0,2 M, pH 6,6 ）a 500 μl 1-percentného roztoku ferrikyanidu draselného K, Fe（CN）. Tieto boli inkubované vo vodnom kúpeli pri 50 stupňoch počas 20 minút. Potom sa do reakčnej zmesi pridalo 500 ul 10 % vodného roztoku kyseliny trichlóroctovej (TCA), 100 ul 0,1 % roztoku chloridu železitého FeCl3 a 0,5 ml destilovanej vody. Odčítanie absorbancie tejto zmesi sa uskutočnilo pri 700 nm oproti slepému pokusu obsahujúcemu všetky činidlá média okrem rastlinného extraktu. Výsledky sú vyjadrené ako 50-percentná účinná koncentrácia (EC50), ktorá predstavuje koncentráciu antioxidantov potrebnú na získanie absorbancie 0,5. Zvýšenie absorbancie zodpovedá zvýšeniu redukčnej sily testovaného extraktu.

4.5. Test núteného plávania antidepresívnou aktivitou (FST)

Porsoltov model alebo test núteného plávania je prediktívny test aktivity antidepresívneho typu. Myši sú jednotlivo nútené plávať vo valcovej nádobe naplnenej do výšky 12 cm vodou. Test trvá 6 minút, ale analyzujú sa len posledné 4 minúty testu. Zviera sa považuje za nehybné, keď pláva vo vzpriamenej polohe a robí len niekoľko pohybov, aby si udržalo rovnováhu vo vode (čas nehybnosti).

Na tento test sa použili celkom štyri skupiny po piatich myšiach. Všetky rastlinné extrakty sa podávali sondou počas 21 dní a test sa uskutočnil 1 hodinu po podaní extraktov 21 dní. Skupina A, negatívna kontrola, dostala fyziologický roztok ako vehikulum. Skupina B, pozitívna kontrolná skupina, dostávala paroxetín v dávke 11 mg/kg. Skupiny C a D dostávali PSPE v dávke 50 a 100 mg/kg.

Jednu hodinu po podaní rastlinného extraktu sa meral čas imobility počas 6 minút. Prvé dve minúty umožnili myši prispôsobiť sa stresu a potom sa myš časom unavila a znehybnila. Čas imobility sa počítal v sekundách a potom sa porovnával s časom imobility myší v pozitívnej kontrolnej skupine (paroxetín) pre referenciu [33].

4.6. Anxiolytická aktivita

4.6.1.Otvorené pole

Test otvoreného poľa (OF) sa používa na predpovedanie anxiolytickej aktivity, pretože zvieratá vykazujú vysoký stupeň vyhýbania sa centrálnej oblasti vzhľadom na perifériu. Používa sa tiež ako prieskumný a lokomočný test. Plochu tvorili štyri drevené steny vysoké 40 cm usporiadané na plochu 50×50 cm, rozdelené na 25 dlaždíc rovnakej veľkosti označených čiernymi čiarami.

Na tento test sa použili celkom štyri skupiny po piatich myšiach. Všetky rastlinné extrakty sa podávali sondou počas 21 dní. Ďalej sa test uskutočnil 1 hodinu po podaní rastlinného extraktu v dňoch 1, 7, 14 a skupina A, negatívna kontrola, dostala fyziologický roztok ako vehikulum Skupina B, pozitívna kontrola, dostala bromazepam v dávke 1 mg/kg . Skupiny C a D dostávali PSPE v dávke 50 a 100 mg/kg.

Po 60 minútach sa test uskutočnil umiestnením každej myši do centrálneho štvorca, aby sa preskúmala aréna, aby sa zmerala celková ambulantná aktivita myší (počet celkových dlaždíc, ktoré myši prešli, tj počet okrajových dlaždíc a počet centrálnych dlaždíc prekrížených myšami všetkými štyrmi nohami) a čas strávený v strede otvoreného poľa [3146].

4.6.2. Test svetlej a tmavej miestnosti

Test svetlo-tmavá miestnosť sa tiež používa na predpovedanie anxiolytickej aktivity, pretože umožňuje jednoduché vyhodnotenie správania zvierat súvisiaceho s úzkosťou pomocou analýzy pohybov zvieraťa medzi dvoma oddeleniami rôznych farieb a osvetlenia. Úzkostlivejšie zvieratá majú tendenciu tráviť menej času v osvetlenej miestnosti. Drevená svetlo-tmavá škatuľka s rozmermi 44 × 21 × 21 cm pozostávala z dvoch čiernobielych priehradiek spojených priechodom (v strede otvor 7×7 cm, ktorý oddeľuje dve priehradky a umožňuje prístup do jednej alebo druhej priehradky oddelení). Osvetlené oddelenie bolo osvetlené lampou.

Na tento test sa použili celkom štyri skupiny po piatich myšiach. Všetky rastlinné extrakty sa podávali sondou počas 21 dní. Test sa uskutočnil 1 hodinu po podaní rastlinného extraktu v dňoch 1, 7, 14 a 21. Skupina A, negatívna kontrola, dostala fyziologický roztok ako vehikulum. Skupina B, pozitívna kontrola, dostala bromazepam v dávke 1 mg/kg. Skupiny C a D dostávali PSPE v dávke 50 a 100 mg/kg.

Po 60 minútach sa vykonal päťminútový test umiestnením každej myši smerom k otvoru spájajúcemu tmavé oddelenie [47]. Po každom teste bola krabica vyčistená alkoholom. Merané parametre boli čas strávený v osvetlenej komore a počet prechodov komory [48].

5. Závery

Petržlen, denne používaná kulinárska bylina na celom svete, predstavuje obrovské zdravotné výhody a prostredníctvom tejto štúdie sa preukázalo, že má pozoruhodnú antidepresívnu a anxiolytickú aktivitu, dokonca lepšiu ako klasické lieky, najmä pri dávke 100 mg/kg. Pri hľadaní účinného lieku s menšími alebo takmer žiadnymi vedľajšími účinkami by táto rastlina mohla byť vhodnou alternatívou. Táto práca podporuje jeho každodennú konzumáciu, ako aj jeho vývoj na osvedčenú fytomedicínu.

Na dokončenie tejto práce je potrebný ďalší výskum, vrátane vykonania iných behaviorálnych testov s rovnakým extraktom, aby sa potvrdila jeho účinnosť. Preto sa plánuje biologicky riadená frakcionácia fenolového extraktu P. satium s cieľom identifikovať kľúčovú zložku zodpovednú za pozorované anxiolytické a antidepresívne aktivity a určiť ich presný mechanizmus účinku.

Referencie
1. Friedrich, MJ Depresia je hlavnou príčinou invalidity na celom svete. JAMA 2017, 317, 1517. [CrossRef] [PubMed]
2. Lim, GY; Tam, WW; Lu, Y.; Ho, CS; Zhang, MW; Ho, RC Prevalencia depresie v komunite z 30 krajín v rokoch 1994 až 2014. Sci. Rep. 2018, 8, 2861. [CrossRef]
3. Americká psychiatrická asociácia. Diagnostický a štatistický manuál duševných porúch (DSM-5®); Americká psychiatrická asociácia: Washington, DC, USA, 2013; ISBN 0-89042-557-4.

4. Dinga, R.; Marquand, AF; Veltman, DJ; Beekman, AT; Schoevers, RA; van Hemert, AM; Penninx, BW; Schmaal, L. Predpovedanie prirodzeného priebehu depresie zo širokého spektra klinických, psychologických a biologických údajov: Prístup strojového učenia. Prekl. Psychiatria 2018, 8, 1–11. [CrossRef]
5. Daviu, N.; Bruchas, MR; Moghaddam, B.; Sandi, C.; Beyeler, A. Neurobiologické väzby medzi stresom a úzkosťou. Neurobiol. Stres 2019, 11, 100191. [CrossRef]
6. Sanabria, E.; Cuenca, RE; Esteso, M.Á.; Maldonado, M. Benzodiazepíny: Ich použitie buď ako esenciálnych liekov alebo ako toxických látok. Toxics 2021, 9, 25. [CrossRef] [PubMed]
7. Kanekar, S.; Sheth, CS; Ombach, HJ; Olson, PR; Bogdanová, OV; Petersen, M.; Renshaw, CE; Sung, Y.-H.; D'Anci, KE; Renshaw, PF vystavenie hypobarickej hypoxii u potkanov rozdielne mení antidepresívnu účinnosť selektívnych inhibítorov spätného vychytávania serotonínu fluoxetín, paroxetín, escitalopram a sertralín. Pharmacol. Biochem. Správaj sa. 2018, 170, 25–35. [CrossRef]
8. Es-Safifi, I.; Mechchate, H.; Amagnouje, A.; Jawhari, FZ; Bari, A.; Cerruti, P.; Avella, M.; Andriy, A.; Andriy, D. Liečivé rastliny používané na liečbu akútnych problémov tráviaceho systému v regióne Fez-Meknes v Maroku: Etnofarmakologický prieskum. Etnobotanika. Res. Appl. 2020, 20. [CrossRef]
9. Amaghnouje, A.; Mechchate, H.; Es-Safifi, I.; Boukhira, S.; Aliqahtani, AS; Noman, OM; Nasr, FA; Conte, R.; Calarco, A.; Bousta, D. Subakútne hodnotenie toxicity a antidepresívnych účinkov Origanum Majorana L. Polyfenoly u myší Swiss Albino. Molekuly 2020, 25, 5653. [CrossRef]
10. Agyare, C.; Appiah, T.; Boakye, YD; Apenteng, JA Petroselinum crispum: Prehľad. Med. Korenie Veg. Afr. 2017, 527–547. [CrossRef]
11. Slighoua, M.; Mahdi, I.; Di Cristo, F.; Amagnouje, A.; Grafov, A.; Boucetta, N.; Bari, A.; Bousta, D. Hodnotenie in vivo estrogénnych a protizápalových aktivít hydroetanolického extraktu a polyfenolovej frakcie petržlenu (Petroselinum sativum Hoffm.). J. Ethnopharmacol. 2020, 265, 113290. [CrossRef] [PubMed] 12. Farzaei, MH; Abbasabadi, Z.; Ardekani, PANI; Rahimi, R.; Farzaei, F. Petržlen: Prehľad etnofarmakológie, fytochémie a biologických aktivít. J. Tradit. Brada. Med. 2013, 33, 815–826. [CrossRef]
13. Chaves, DS; Frattini, FS; Assafifim, M.; de Almeida, AP; Zingali, RB; Costa, SS Fenolické chemické zloženie extraktu Petroselinum Crispum a jeho účinok na hemostázu. Nat. Prod. komun. 2011, 6, 1934578X1100600709. [CrossRef]
14. Mahendra, P.; Bisht, S. Anti-úzkostná aktivita Coriandru m Sativum hodnotená pomocou rôznych experimentálnych modelov úzkosti. Indian J. Pharmacol. 2011, 43, 574. [CrossRef]
15. Shahamat, Z.; Abbasi-Maleki, S.; Mohammadi Motamed, S. Hodnotenie antidepresívnych účinkov vodných a etanolických extraktov z ovocia Pimpinella Anisum u myší. Avicenna J. Phytomed. 2016, 6, 322–328. [PubMed]
16. Es-Safi, I.; Mechchate, H.; Amagnouje, A.; Jawhari, FZ; Al Kamaly, OM; Imtara, H.; Grafov, A.; Bari, A.; Bousta, D. Pohľad do anxiolytických a antidepresívnych vlastností Carum carvi L. a ich asociácie s jeho antioxidačnou aktivitou. Life 2021, 11, 207. [CrossRef]
17. Zheng, X.; Cheng, Y.; Chen, Y.; Yue, Y.; Li, Y.; Xia, S.; Li, Y.; Deng, H.; Zhang, J.; Cao, Y. Kyselina ferulová zlepšuje depresívne správanie u prenatálne stresovaných potomkov potkanov prostredníctvom protizápalovej aktivity a osi HPA. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 493. [CrossRef]
18. Diniz, LRL; de Souza, MTS; Barboza, JN; de Almeida, RN; de Sousa, DP Antidepresívny potenciál škoricových kyselín: Mechanizmy účinku a perspektívy vo vývoji liekov. Molekuly 2019, 24, 4469. [CrossRef]
19. Lee, B.; Yeom, M.; Shim, I.; Lee, H.; Hahm, D.-H. Ochranné účinky kvercetínu na symptómy podobné úzkosti a neurozápal indukovaný lipopolysacharidom u potkanov. Evid. Založený doplnok. Altern. Med. 2020, 2020, 4892415. [CrossRef]
20. Karkovič Markovič, A.; Tori's, J.; Barbaric, M.; Jakobuši´c Brala, C. Hydroxytyrozol, tyrozol a deriváty a ich potenciálne účinky na ľudské zdravie. Molekuly 2019, 24, 2001. [CrossRef]
21. Hinneburg, I.; Dorman, HD; Hiltunen, R. Antioxidačné aktivity extraktov z vybraných kulinárskych bylín a korenín. Food Chem. 2006, 97, 122–129. [CrossRef]
22. Nunes, CS; Maes, M.; Roomruangwong, C.; Moraes, JB; Bonifacio, KL; Vargas, HO; Barbosa, DS; Anderson, G.; de Melo, LGP; Drozdstoj, S. Znížená kvalita života pri poruchách nálady je spojená so zvýšeným neurooxidačným stresom a hladinami bazálneho hormónu stimulujúceho štítnu žľazu a používaním antikonvulzívnych stabilizátorov nálady. J. Eval. Clin. Prax. 2018, 24, 869–878. [CrossRef] [PubMed]
23. Bonifácio, KL; Barbosa, DS; Moreira, EG; Coneglian, CF; Vargas, HO; Nunes, SOV; Moraes, JB; Maes, M. Zvýšená toxicita nitro-oxidačného stresu ako hlavný determinant zvýšeného krvného tlaku pri poruchách nálady. J. Affect. Porucha. 2021, 278, 226–238. [CrossRef] [PubMed]
24. Eick, SM; Barrett, ES; van 't Erve, TJ; Nguyen, RH; Bush, NR; Milne, G.; Swan, SH; Ferguson, KK Asociácia medzi prenatálnym psychologickým stresom a oxidačným stresom počas tehotenstva. Pediatr. Perinat. Epidemiol. 2018, 32, 318–326. [CrossRef]
25. McAllister, MJ; Basham, SA; Waldman, HS; Smith, JW; Mettler, JA; Butawan, MB; Bloomer, RJ Účinky psychického stresu počas cvičenia na markery oxidačného stresu u mladých zdravých, trénovaných mužov. Physiol. Správaj sa. 2019, 198, 90–95. [CrossRef] [PubMed]
26. Desrumaux, C.; Risold, P.-Y.; Schroeder, H.; Deckert, V.; Masson, D.; Athias, A.; Laplanche, H.; Le Guern, N.; Blache, D.; Jiang, X.-C. Nedostatok fosfolipidového transferového proteínu (PLTP) znižuje obsah vitamínu E v mozgu a zvyšuje úzkosť u myší. FASEB J. 2005, 19, 1–16. [CrossRef]