Má celkový glykozid cistanche účinky na čuch?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Účinok celkových glykozidov cistanche na bunky čuchového obalu potkanov a ich sekréciu neurotrofických faktorov

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Poranenie miechy (SCI) je vážne poranenie centrálynervový systém, čo predstavuje {{0}},2 percenta —0,5 percenta celkovej traumy. Pri zlomeninách chrbtice je 16 percent až 40 percent komplikovaných poranením miechy, ktoré často zanecháva ťažké postihnutie, čo vedie k ťažkostiam v každodennom živote ovplyvňujúcim kvalitu života pacientov a spôsobuje veľkú záťaž pre rodinu a spoločnosť.Čuchovéensheathing cells (OEC) sú špeciálnym typom nervového lepidla. Plazmatické bunky môžu migrovať do mozgu sčuchovénervových axónov a môže vylučovať mnoho rastových faktorov, ako sú NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptid-Y a S-100. Vďaka týmto vlastnostiamčuchovéOEC sa považujú za jednu zo sľubných semenných buniek na transplantáciu buniek na opravu SCI. V súčasnosti je liečba NKS v oblasti rehabilitačnej medicíny založená najmä na komplexnej rehabilitácii. S cieľom nájsť účinnejšiu metódu bol vykonaný nasledujúci výskum účinkucistancheCelkomglykozidyna OEC:

Celkový glykozid Cistanche pre bunky čuchového plášťa

1 Materiál a metódy

1.1 Experimentálne materiály

potkan Wistar (poskytnutý Animal Center of Inner Mongolia University);cistancheCelkomglykozidy, médium DMEM/F12, fetálne teľacie sérum (FCS), poly-D-lyzín, arabinozid (Ara-C), trypsín, D-Hanksov roztok, králičia anti-p75NGFR (Santa Cruz), súprava ELISA (Promega), bunkový inkubátor (Thermo-HEPA Class 100), mikroskop s inverzným fázovým kontrastom (Olympus CKX41, Japonsko), ultračistý pracovný stôl (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Spoločnosť, SW-CJ-2FD), enzým analyzátor štítkov (Wellscan MKH), prietokový cytometer atď.

1.2 Metódy výskumu

1.2.1 Kultivácia, purifikácia a identifikácia OEC: Potkany Wistar boli usmrtené dekapitáciou a namočené vo víne na 5 minút. Predná lebka bola otvorená, aby sa odhalilačuchovéžiarovka. Dvačuchovéžiarovky boli úplne odstránené pod pitevným mikroskopom. Umyte v D-Hanksovom roztoku; rezaťčuchovémikrochirurgickými nožnicami pridajte 2 ml 0.25 percentného pankreatínu a inkubujte pri 37 stupňoch 20 minút; pridajte kultivačné médium D MEM/F12 obsahujúce 10 percent teľacieho séra do 2 ml centrifugačnej skúmavky. Trávenie bolo ukončené uprostred; zbernicová pipeta nasala neúplne natrávené tkanivo pri 800 ot./min. a centrifugovala 5 minút, supernatant sa zlikvidoval; nakoniec sa použilo upravené médium (20 percent FCS plus 20 |i, mol/LForskolin plus 20 |ig/mlBPE plus DMEM /F12) Urobte z neho lx 107 ml jednobunkovej suspenzie, naočkujte ju do banky na kultiváciu buniek potiahnutej polylyzínom, vložte to v 37 stupňovom inkubátore s 5 percentami CO2 a potom pridajte Arac Purifikácia sa uskutočnila po 36 hodinách. Na imunohistochemickú identifikáciu buniek a pozorovanie fluorescenčným mikroskopom použite králičie anti-p75E a koziu anti-králičiu IgG sekundárnu protilátku značenú FITC.

1.2.2 Na stanovenie účinku použite MTT a prietokovú cytometriucistanche celkové glykozidynačuchovébunky plášťa: naočkujte kultivované a purifikovanéčuchovézabaliť bunky do 96-jamkovej platne pri 1X106 a pridaťcistanche celkové glykozidy(akčné koncentrácie sú Ijig/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), zmerajte hodnotu OD a zmerajte bunkovú prietokovú cytometriu po 24 hodinách pôsobenia. Nastavte kontrolnú skupinu aCelkové glykozidy Cistancheskupiny s rôznymi koncentráciami: Skupina A (kontrolná skupina): Ako negatívna kontrola sa používa kultivačné médium obsahujúce sérum; Skupina B (cistanche celkové glykozidyskupina s nízkou koncentráciou: l1ig/ml); Skupina C (stredná koncentrácia celkových glykozidov cistanche Skupina: L10jxg/MK); Skupina D (cistanche celkové glykozidyskupina s vysokou koncentráciou: 100|xg/ml): 15 potkanov v každej skupine.

1.2.3 Stanovenie obsahu neurotrofného faktora v supernatante pomocou ELISA: naočkujte kultivované a purifikovanéčuchovézapuzdrenie buniek do 6-jamkovej platne pri 1 x 106, pridajtecistanche celkové glykozidy(rovnaká koncentrácia ako vyššie) po 24 hodinách a pôsobiť 24 hodín a oddelene odobrať supernatant, uložený pri -80 dlho. Obsah nervových rastových faktorov v tekutine bol stanovený metódou ELISA.

1.3 Štatistická analýza

Údaje v tejto štúdii sa považujú za údaje z meraní a získané údaje sú vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka a SPSS 11.0 štatistický softvér sa používa na štatistickú analýzu. Získané údaje sa analyzujú analýzou rozptylu a P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Výsledky

2.1 Účinokcistanchecelkové glykozidy načuchovéobalové bunky

2.1.1 Výsledky stanovenia metódou metyloxazolyltetrazolu (MT): Skupina A: 0,617±0,149; Skupina B: 0.589±0.147; Skupina C: 0.761±0.138; Skupina D: 0.732±0.234. Porovnanie medziCelkové glykozidy Cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, rozdiel nebol významný;Celkové glykozidy Cistanche10 mg/ml, 100 mg/ml koncentračná skupina (C, D) v porovnaní s kontrolnou skupinou (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Výsledok stanovenia prietokovou cytometriou je znázornený na obrázku 1. V porovnaní s kontrolnou skupinoucistanche celkové glykozidyskupina bola vyššia ako kontrolná skupina a percento apoptotických buniek bolo nižšie ako kontrolná skupina.

2.2 Výsledky ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay).

Výsledky testu ukázali, že obsah neurotrofického faktora odvodeného z gliových buniek (GDNF): pred dávkovaním: 302,1 ± 16,6 pg/ml, skupina A: 340,5 ± 13,2 pg/ml; skupina B: 333,2 ± 23,6 pg/ml; Skupina C: 355,2 ± 17,6 pg/ml; skupina D; 379,2 ± 15,3 pg/ml. V porovnaní s predbežným podaním bol obsah GDNF významne zvýšený; v porovnaní s kontrolnou skupinou (A), obsah GDNF vCelkové glykozidy CistancheSkupina s koncentráciou 100 mg/ml (D) bola významne zvýšená.

3 Diskusia

Ťažkosti s regeneráciou axónov sú jedným z hlavných dôvodov, prečo je ťažké zotaviť sa po poranení miechy. OEC majú úlohu pri regenerácii axónov centrálnych neurónov, ktoré je ťažké nahradiť inými typmi buniek. V posledných rokoch sa výskum očuchovéobalové bunky sa stali horúcim miestom.Čuchovébunky plášťa sú špeciálnym typom gliových buniek, ktoré majú vlastnosti Schwannových buniek a astrocytov. Pochádzajú zčuchovébazálnej membrány a sú široko rozmiestnené na povrchučuchovésliznica,čuchovénerv ačuchovéžiarovka. Má schopnosť deliť sa a regenerovať po celý život a môže sprevádzaťčuchovénervových axónov migrovať do mozgu. Axóny zčuchovénerv môže každých 30-60 dní prejsť cez spojenie medzi periférnym nervovým systémom a centrálnym nervovým systémom, znovu prerásť dočuchovépuzdro a nadviazať synaptické spojenia4.Čuchovébunky plášťa môžu vylučovať mnohé rastové faktory, ako je NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptid-Y a S-100. Štúdie ukázali, že nervový rastový faktor (NGF) môže zabrániť atrofii neurónov miechového červeného jadra a posilniť kortikospinálny trakt Sprout a podporiť regeneráciu nervovej dráhy miechy s červeným jadrom; neurotrofický faktor odvodený od mozgu (BDNF) aj neurotrofín-3 (NT-3) môžu zabrániť apoptóze buniek miechy s červeným jadrom u dospelých potkanov s axotomizovaným poranením a zachrániť umierajúce neuróny a podporiť regeneráciu axónov P. Navyše,čuchovéensheathing bunky tiež exprimujú iné faktory na svojich bunkových membránach, ako je faktor adhézie nervových buniek (N-CAM), ktoré sa podieľajú na bunkovej adhézii a raste axónov. Vďaka týmto vlastnostiamčuchovéOEC sa považujú za jednu zo sľubných semenných buniek na transplantáciu buniek na opravu SCI.

Chemické zložkyCistanchezahŕňajú najmä fenyletanoidové glykozidy, iridoidy, prchavé zložky, lignany, polysacharidy a alkaloidy. Štúdia to zistilaCistanchea jeho chemické zložky majú neuroprotektívne účinky. Deng a kol. študovali účinok tubulózy B na apoptózu neurónov SH-SY5Y indukovanú faktorom nekrózy nádorov (TNF). Výsledky ukázali, že po 100 ug/ Neuróny SH-SY5Y po ​​36 hodinách liečby TNF pomocou L vykazovali typické charakteristiky apoptózy, zatiaľ čo liečba tubulínom B počas 2 hodín mohla významne znížiť apoptózu indukovanú TNF. Okrem toho štúdie tiež ukázali, že fenyletanoidové glykozidy môžu inhibovať apoptózu potkaních cerebelárnych granulárnych buniek inhibíciou kaspázy-3 a kaspázy-8 a proti myšiam C57 spôsobeným metylfenyltetrahydropyridínom (MPTP). Poškodenie kvalitných dopamínergných neurónov má ochranný účinok. Nielen to, aleCistanchemôže tiež zmierniť rôzne poškodenia, ako je ischémia-reperfúzia nervového systému. Experiment ischemického poškodenia mozgu u myší ukazuje, že rozsah infarktu 24 hodín a 48 hodín po ischémii v skupine s cerebrálnou ischémiou a reperfúziou je v priemere 72,98 percent a 60,45 percent. Na rozdiel od toho,cistancheveľké, stredné a nízke skupiny glykozidov (250.0mg·kg/d; 125,0 mg·kg/d; 62,5 mg·kg/d) môžu vytvoriť mozog myší po cerebrálnej ischémii-reperfúzii 24h Veľkosť infarktu sa po 48 hodinách znížila na 25,94 percent, 25,81 percent a 31,13 percent a veľkosť mozgového infarktu sa znížila na 22,14 percent, 20,06 percent a 22,27 percent. Medzi nimi bol významný rozdiel, ktorý ukazuje významný inhibičný účinok na apoptózu neurónov.

V tejto štúdii sú rôzne koncentráciecistanche celkové glykozidyboli aplikované na OEC. Metóda MTT a meranie prietokovou cytometriou potvrdili, že 10 mg/ml100 mg/mlcistanche celkové glykozidymôže podporovať šíreniečuchovéobalové bunky. Ukázali to výsledky prietokovej cytometriecistanche celkové glykozidymôže podporovať šíreniečuchovéobalových buniek Podporuje najmä proliferáciu G1 cyklučuchovéspermií a výrazne znižuje apoptotické bunky. pretoCelkové glykozidy Cistanchemôže nielen podporovať šíreniečuchovéobalujú bunky, ale tiež zvyšujú aktivitu buniek a inhibujú ich apoptózu. Dokazuje to enzýmová imunoanalýzaCelkové glykozidy Cistanchemôže významne podporiť sekréciu GDNF týmčuchovéobalové bunky. Vyššie uvedené výsledky poskytujú experimentálny základ pre klinickú aplikáciuCelkové glykozidy Cistanche.

Referencie

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang a kol. Faktory ovplyvňujúce kvalitu života pacientov s poranením miechy počas rehabilitácie [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J a kol. Lamina propria ačuchovébunky býčieho plášťa vykazujú rozdielnu integráciu a migráciu a podporujú deferenčné klíčenie axónov v poškodenej mieche[J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. bunky čuchového plášťa: ich úloha pri oprave centrálneho nervového systému [J.Int. J. Biochem Cell Biol. 2005, 37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotencia čistených. transplantované bazálne bunky glukózy včuchovéepitel[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914):457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. marostromálna bunka exprimujúca BDNF; podporujú rozsiahly rast axónov v miestach d poranenia miechy[J]. Exp Neurol, 2005, 191 (2): 344-360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD a kol. Ochranný účinok tubulózy B na apoptózu indukovanú TNF v neurónových bunkách[J]. Acta Pharmacol Sin, 2004,25 (102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.fenyletanoidglykozidyodCistanchessalsa inhibuje apoptózu indukovanú 1-metyl-4-fenylpyridíniovým iónom v neurónoch[J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L. Pu X, a kol. Neuroprotektívny účinok