13-týždenná štúdia subchronickej toxicity 2-(l-mentoxy)etanolu v obličkách potkanov F344
Mar 03, 2022
Pre viac informácií:emily.li@wecistanche.com
Takeshi Toyoda, Kohei Matsushita, Hirotoshi Akane, Tomomi Morikawa a Kumiko Ogawa
1 Division of Pathology, National Institute of Health Sciences, 3-25-26 Tonomachi, Kawasaki-Ku, Kawasaki 210-9501, Japonsko
Abstrakt:
{{0}}(-Mentoxy)etanol sa často používa ako príchuť; avšak údaje týkajúce sa toxicity 2-(I-mentoxy)etanolu zostávajú obmedzené. Uskutočnili sme 13-týždňovú štúdiu subchronickej toxicity 2-(I-mentoxy)etanolu u samcov a samíc potkanov F344 s dávkami 0,15.d.alebo 250 mg/ke telesnej hmotnosti (BWday orálne podávané hw priemer s použitím kukuričného oleja ako vehikula V žiadnej skupine neboli pozorované žiadne významné toxikologické zmeny vo všeobecnom stave, telesnej hmotnosti alebo príjme potravy. Hematologické hodnotenie ukázalo znížený hemoglobín, hematokrit, stredný korpuskulárny objem a stredný korpuskulárny hemoglobín a zvýšený počet krvných doštičiek v skupina samcov 250 mg/kg. Biochémia séra odhalila zvýšený celkový cholesterol v skupine 250 mg/kg samcov a samíc potkanov, znížené triglyceridy v skupine samíc 250 mg/kg a zvýšený celkový proteín v skupine samcov 250 mg/kg, čo poukazuje na účinky na metabolizmus lipidov a syntézu bielkovín. Pre hmotnosti orgánov sa zvýšila absolútna a relatívna hmotnosť pečene a nadobličiek v skupine 250 mg/kg u oboch pohlaví a v skupine mužov 250 mg/kg, v tomto poradí. Histopatologická analýza vykazovali chronickú nefropatiu v skupinách samcov 15 mg/kg alebo vyšších, so zvýšeným absolútnym a relatívnymobličkyzávažiaako aj zvýšený kreatinín v sére u mužov v skupinách 60 a 250 mg/kg. V proximálnych tubuloch však boli identifikované eozinofilné granuly obsahujúce a,-globulín, čo naznačuje 2-globulínovú nefropatiu špecifickú pre samcov potkanov a bez toxikologického významu. Tieto výsledky ukázali, že hladina 2-(-mentoxy)etanolu bez pozorovaného nepriaznivého účinku bola 60 mg/kg telesnej hmotnosti/deň pre obe pohlavia, (DOI; 10,1293 tox2020-0091:J Toxicol Patho 1 2021;34:309-317)
Kľúčové slová:2-(-mentoxy )etanol, 2-1-mentoxyethandl,jedloaditívum, dochucovadlo, potkan Fischer, mentol
Úvod
{{0}}(-Mentoxy)etanol (číslo CAS.{2}}) je číra a bezfarebná kvapalina s charakteristickým zápachom a je široko používaná ako príchuť. Spoločný výbor expertov FAO/WHO pre potravinárske prídavné látky (JECFA) vyhodnotil 2-(1-metoxy)etanol ako dochucovadlo kategorizované ako látka štrukturálne príbuzná mentolu. Na základe štruktúrnej triedy aromatických látok bol 2-(-metoxy)etanol zaradený do triedy I. V Spojených štátoch a Európe boli úrovne príjmu2-(I-metoxy)etanolu ľuďmi odhaduje sa na 12 ug/osoba/deň a 0,01 ug/osoba/deň, v oboch prípadoch pod hranicou triedy I 1 800 ug/osoba/deň. Na základe týchto odhadov sa usudzuje, že 2-(1-metoxy)etanol nemusí predstavovať bezpečnostné riziko pri bežnom používaní ako dochucovadlo.
As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(1-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD.:>2,000 mg/kg telesnej hmotnosti [BW)1. Napriek použitiu 2-(1-mentoxy)etanolu ako dochucovadla. k dispozícii sú obmedzené údaje týkajúce sa toxicity po opakovanom podávaní tejto zlúčeniny. Naše laboratórium skúmalo toxicitu niekoľkých potravinárskych prídavných látok vrátane reprezentatívnych aromatických látok z každej kategórie na modeloch hlodavcov2-7. Na objasnenie toxikologického profilu a stanovenie hladiny bez pozorovaného nepriaznivého účinku (NOAEL) sme vykonali 13-týždňovú štúdiu subchronickej toxicity 2-(1-etoxy)etanolu, ktorá bola orálne podávané potkanom F344 sondou.
Materiály a metódy
Testovaná chemikália
2-(I-Mentoxy)etanol (šarža č. 510002, čistota 99,9 percent) vyrábaný spoločnosťou Takasago Int. Corp. (Tokio, Japonsko) poskytla Divízia noriem a hodnotenia, Ministerstvo bezpečnosti potravín, Ministerstvo zdravotníctva, práce a sociálnych vecí, Japonsko, s podporou Japan Flavor & Fragrance Materials Association (Tokio, Japonsko). Hoci bola testovaná látka poskytnutá ako zmes optických izomérov (Č. CAS 38618-23-4), výrobca ju potvrdil ako 1-enantiomér (Č. CAS 75443-64-0). Orálna sonda s kukuričným olejom (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) ako vehikulum bola vybraná ako spôsob podania vzhľadom na nerozpustnosť vo vode a prchavosť 2-(1-mentoxy)etanolu. Roztoky 2-(1-mentoxy)etanolu sa pripravovali denne, bezprostredne pred podaním. Po skladovaní počas 2 hodín pri izbovej teplote sa zvyškové pomery 2-(-mentoxy)etanolu v 4, 40 a 400 mg/ml roztoku bolo potvrdených ako 96,8 percenta, 99,8 percenta a 96,5 percenta, v uvedenom poradí, plynovou chromatografiou (Japanská inšpekčná asociácia pre životné prostredie potravinárskeho a potravinárskeho priemyslu, Tokio, Japonsko).
Pokusné zvieratá
Celkovo bolo od Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Japonsko) zakúpených 40 samcov a 40 samičiek potkanov bez špecifických patogénov (F344/DuCrlCrlj,5-vo veku týždňa) a použité po aklimatizácii počas jedného týždňa. Počas štúdie boli zvieratá umiestnené v polykarbonátových klietkach s mäkkou podstielkou, udržiavané v miestnosti s bariérovým systémom na kontrolu cyklu svetlo/tma (12 h), ventiláciu (výmena vzduchu 18-krát/h), teplotu (24 ±1 stupeň) a relatívnu vlhkosť (55±5 percent). Klietky a podstielka na čipy sa vymieňali dvakrát týždenne. Každé zviera malo voľný prístup k vode z vodovodu a základnej strave (CRF-1; orientálne kvasnice, Tokio, Japonsko). Na začiatku experimentu boli zvieratá náhodne rozdelené do štyroch skupín po 10 samcoch a samiciach potkanov na základe telesnej hmotnosti meranej bezprostredne pred začatím liečby testovanou chemikáliou.
Študovať dizajn
V predbežnej {{0}}dňovej štúdii hodnotiacej2-(1-mentoxy)etanol podávaný v dávkach 0,200 400 a 800 mg/kg telesnej hmotnosti/deň, absolútne a relatívne hmotnosti pečene boli významne zvýšené vo všetkých liečených skupinách oboch pohlaví (údaje nie sú uvedené). Na základe týchto výsledkov sme vybrali 2-(-mentoxy)etanol v dávkach 0,15,60 a 250 mg/kg telesnej hmotnosti/deň na podanie samcom aj samiciam potkanov v súčasnosti 13- týždňová štúdia toxicity.
Všeobecný stav a mortalita boli hodnotené denne. Telesná hmotnosť, ako aj množstvo dodanej a zvyškovej stravy sa merali raz týždenne počas experimentálneho obdobia. Všetky krysy boli po dokončení liečby cez noc hladované a vzorky krvi na hematológiu a biochémiu séra sa odoberali z brušnej aorty v hlbokej inhalačnej anestézii s použitím izofluránu. Návrh štúdie bol v súlade so Smernicami pre označovanie potravinárskych prídavných látok a revíziou noriem pre používanie potravinárskych prídavných látok z Japonska (1996) a schválený Výborom pre starostlivosť o zvieratá a ich využitie Národného inštitútu zdravotníckych vied v Japonsku.
Hematológia a biochémia séra
Nasledujúce hematologické parametre boli analyzované pomocou automatických hematologických analyzátorov ProCyte Dx (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA): počet bielych krviniek (WBC), počet červených krviniek (RBC), koncentrácia hemoglobínu (HGB), hematokrit (HCT ), stredný korpuskulárny objem (MCV), stredný korpuskulárny hemoglobín (MCH),
priemerná koncentrácia korpuskulárneho hemoglobínu (MCHC), počet krvných doštičiek (PLT) a diferenciálne leukocyty, vrátane neutrofilov (Neut), lymfocytov (Lymph), monocytov (Mono), eozinofilov (Eosino) a bazofilov (Baso). Biochemická analýza séra sa uskutočnila pomocou Oriental Yeast pre nasledujúce parametre: celkový proteín (TP), albumín (Alb), pomer albumín/globulín (A/G), celkový bilirubín (Bil). glukóza, celkový cholesterol (T-Chol), triglyceridy (TG), močovinový dusík (BUN), kreatinín (Cre), vápnik (Ca), anorganický fosfor (IP), sodík (Na), draslík (K), chlór (Cl), as-partátaminotransferáza (AST), alanínaminotransferáza (ALT), alkalická fosfatáza (ALP) a y-glutamyltrans-peptidáza (y-GTP).
Hmotnosti orgánov a histopatologické hodnotenie
U všetkých zvierat bola vykonaná kompletná pitva. a mozog, týmus, pľúca, srdce, slezina,pečeň, nadobličiekžľazy,obličkyboli odvážené semenníky a vaječníky. Tieto orgány, ako aj tkanivá z miechy, trojklanného nervu, hypofýzy, nosovej dutiny, slinných žliaz, jazyka, pažeráka, priedušnice, aorty, štítnej žľazy, prištítnej žľazy, pankreasu, žalúdka, tenkého a hrubého čreva, podčeľustné a mezenterické lymfatické uzliny, vagína, maternica, močový mechúr, prostata, semenné vačky, nadsemenníky, stehenná kosť a hrudná kosť s kostnou dreňou, stavcami, kostrovými svalmi, sedacím nervom, kožou a mliečnou žľazou boli fixované v 10 percentnom neutrálnom pufrovanom formalíne; potom sa pripravili rezy zaliate do parafínu a zafarbili sa hematoxylínom a eozínom na histopatologické vyšetrenie. Semenníky a oči s Harderovými žľazami boli fixované v Bouinovom fixatíve a Davidsonovom roztoku. Kostné tkanivá, vrátane nosnej dutiny, stavcov, hrudnej kosti a stehennej kosti, sa odvápnili pomocou zmesi 10 percent kyseliny mravčej a 10 percent pufrovaného formalínu po dobu až 2 týždňov. Histopatologické hodnotenie sa uskutočnilo pre všetky tkanivá získané zo zvierat v kontrolnej skupine a skupine sa podávala najvyššia dávka, pokiaľ neboli pozorované žiadne lézie súvisiace s liečbou.
Imunohistochémia pre ,-globulín
U samcov potkanov sa akumulácia aglobulínu v obličkách skúmala imunohistochemickou analýzou rezov zaliatych do parafínu. Na získanie antigénu boli rezy získané od 5 potkanov v každej skupine inkubované s proteinázou K (DAKO, Glostrup, Dánsko) počas 1 minúty pri teplote miestnosti. Všetky rezy boli ponorené do 3% roztoku H20/metanol na 10 minút pri teplote miestnosti, aby sa inaktivovala aktivita endogénnej peroxidázy. Po blokovaní nešpecifických reakcií 10 percentným normálnym králičím sérom boli rezy inkubované s primárnou protilátkou pre -globulín (zriedená 1:400; anti-krysa, globulínová protilátka; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) cez noc pri 4 stupňoch s Vizualizácia väzby protilátky sa uskutočnila pomocou súpravy Vecta-Stain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) a 3,3'-diaminobenzidínu. Všetky rezy boli kontrastne zafarbené hematoxylínom.
Štatistická analýza
Odchýlky v hodnotách údajov pre telesnú hmotnosť počas experimentálneho obdobia, ako aj pre hematológiu, biochémiu séra a hmotnosti orgánov sa hodnotili na homogenitu pomocou Bartlettovho testu. Pre homogénne a heterogénne údaje sa použila jednosmerná analýza rozptylu a Kruskal-Wallisov test. Pri stanovení štatisticky významných rozdielov sa na porovnanie kontrolnej a liečenej skupiny použil Dunnettov viacnásobný porovnávací test. Porovnania histopatologických výskytov a stupňov boli analyzované s použitím Fisherovho presného pravdepodobnostného testu a Mann-W Whitneyho U/ testu. P hodnoty<0.05 were="" considered="" statistically="">
Výsledky
Parametre počas života, hematológia a biochémia séra Počas experimentálneho obdobia neboli zaznamenané žiadne významné klinické príznaky a všetky zvieratá prežili až do plánovanej nekropsie. Okrem toho neboli pozorované žiadne významné rozdiely v telesnej hmotnosti a dennom príjme potravy u samcov a samíc potkanov (obr. 1A a B).
Hematologické a biochemické údaje séra sú uvedené v tabuľkách I a 2, v tomto poradí. Hematologické analýzy odhalili významne znížené HGB, HCT, MCV a MCH a zvýšené PLT u samcov potkanov, ktorým sa podávalo 250 mg/kg telesnej hmotnosti/ay 2-(1-mentoxy)etanol (tabuľka 1). V biochémii séra boli zaznamenané významné zvýšenia TP, T-Chol a Ca a zníženie Bil a ALP u mužov zo skupiny 250 mg/kg (tabuľka 2). Významné zvýšenie Cre a zníženie A/G bolo zaznamenané u mužov zo skupín 60 a 250 mg/kg. U žien bolo zaznamenané významné zvýšenie Ca a zníženie ALP v skupinách 60 a 250 mg/kg, zatiaľ čo zvýšené T-chol a znížené A/G, Bil, TG.AST a ALT boli zistené v 250 mg/kg. kg skupina.
Hoci sa u samcov, ktorým sa podávalo 60 mg/kg, pozorovalo významné zvýšenie TG a zníženie Cl, absencia akéhokoľvek vzťahu medzi dávkou naznačovala, že tieto rozdiely nesúviseli s expozíciou testovanej látke.
Váhy orgánov
Údaje o hmotnosti orgánov sú zhrnuté v tabuľke 3. Absolútna a relatívna hmotnosť pečene sa významne zvýšila u oboch pohlaví v skupine s 250 mg/kg (tabuľka 3). Významné zvýšenie relatívnej hmotnosti pečene bolo pozorované u mužov v skupine s dávkou 60 mg/kg, u mužov absolútne a relatívneobličkyhmotnosti sa významne zvýšili v skupinách 60 a 250 mg/kg. V skupine mužov s dávkou 250 mg/kg boli zaznamenané významné zvýšenia absolútnej a relatívnej hmotnosti nadobličiek a relatívnej hmotnosti sleziny a semenníkov.
Histopatológia a imunohistochémia
Údaje pre histopatologické a imunohistochemické nálezy sú zhrnuté v tabuľkách 4 a 5, v tomto poradí. Histopatologické nálezy odhalili, že frekvencia akumulácie eozinofilných granúl (obr. 2A-D), bazofilných tubulov a hyalínového odliatku, ako aj fokálny intersticiálny zápal vobličky, boli významne zvýšené v výlučne mužských liečebných skupinách v porovnaní s kontrolnou skupinou (tabuľka 4). Na základe imunohistochemických analýz samce potkanov liečených testovanou látkou vykazovali zvýšenie imunoreaktivity globulínu v epitelových bunkách proximálnych tubulov, čo demonštruje jasnú závislosť od dávky (obr. 2E-H) (tabuľka 5).
Pri pitve jeden potkaní samec v skupine s dávkou 250 mg/kg vykazoval závažné zväčšenie pravej stranyobličkyv dôsledku histologicky charakteristického nefroblastómu. Hoci nefroblastóm je u väčšiny kmeňov potkanov menej častý9, tento prípad sa považoval za náhodný, pretože žiadne iné zvieratá nevykazovali podobné lézie. Okrem toho v štúdiách orálnej karcinogenity sa výskyt spontánneho nefroblastómu u samcov potkanov F344/DuCrlCrlj údajne pohyboval medzi 0-2.0 percent 10. Aj keď sa sporadicky zistilo niekoľko lézií v iných orgánoch, žiadna významná liečba nebola zaznamenaná. boli zjavné závislé zmeny vo výskyte týchto lézií.
Diskusia
K dnešnému dňu JECFA vyhodnotilo 24 uprednostňujúcich látok, vrátane 2-(-mentoxy)etanolu, ako látky štrukturálne príbuzné mentolu a všetky sú uvedené ako „žiadne bezpečnostné riziko“ pri súčasných odhadovaných úrovniach príjmu. 2-(1-Mentoxy)etanol je klasifikovaný v podskupine alicyklických alkoholov alebo éterov a považuje sa za primárne konjugovaný s kyselinou glukurónovou, po ktorej nasleduje vylučovanie močom!. Hoci orálne hodnoty LD. týchto látok u hlodavcov sú relatívne vysoké, údaje zo štúdií toxicity po opakovanom podávaní zostávajú obmedzené. 13-týždňová štúdia toxicity po opakovanom podávaní odhalila, že mentylpyrolidónkarboxylát (CAS č. 68127-22-0), zlúčenina štrukturálne príbuzná mentolu, môže súvisieť so zvýšeným pomerom pečene aobličkyhmotnosti samcov a samíc potkanov Wistar. Akumulácia .-globulínu v proximálnych tubuloch samcov potkanov bola tiež pozorovaná pri dávke 1,1 ul mg/kg telesnej hmotnosti/deň a NOAEL bola stanovená ako 109 mg/kg telesnej hmotnosti/deň.
V súčasnej 13-týždňovej štúdii subchronickej toxicity 2-(1-mentoxy)etanolu neboli pozorované žiadne toxikologické zmeny celkového stavu, telesnej hmotnosti a príjmu potravy. Po hematologickom vyšetrení sme pozorovali pokles HGB (96,6 percent oproti kontrolným priemerným hodnotám), HCT (96,3 percenta), MCV (98,4 percenta) a MCH (98,2 percenta) a zvýšenie PLT (111 percenta) u mužov. 250 mg/kg, čo sa považovalo za toxikologické vplyvy liečby 2-(1-mentoxy)etanolom Absolútne (115 percent u oboch pohlaví) aj relatívne (119 percent u mužov a 111 percent u žien )hmotnosti pečene sa významne zvýšili u oboch pohlaví v skupinách s dávkou 250 mg/kg. Hoci v pečeni neboli žiadne histopatologické zmeny, zvýšené hladiny T-chol v sére (110 percent u mužov a 121 percent u žien) a TP (105 percent u mužov) a zníženie TG (60,1 percent u žien) u 250 mg/kg skupiny naznačujú toxické zmeny spojené s metabolizmom lipidov a syntézou proteínov v pečeni. Znížené HGB a MCH a zvýšené PLT, T-Chol a TP u mužov a znížené TG a zvýšená absolútna a relatívna hmotnosť pečene u oboch pohlaví boli tiež zistené, so štatistickou významnosťou v 28-dňovej predbežnej štúdii (údaje nie sú uvedené ), čo potvrdzuje, že tieto zmenené hematologické a biochemické parametre v sére, ako aj hmotnosti pečene, neboli náhodné, ale účinky súvisiace s testovanou látkou. Na rozdiel od toho významné zvýšenie relatívnej hmotnosti pečene zistené v skupine mužov 60 mg / kg v tejto štúdii nebolo sprevádzané zvýšením absolútnej hmotnosti alebo zmenami v súvisiacich biochemických parametroch, čo naznačuje, že toto zvýšenie bolo adaptívnou zmenou.
Významne zvýšené absolútne (120 percent) a relatívne (118 percent) hmotnosti nadobličiek v skupine mužov s dávkou 250 mg/kg sa považovali za spojené s testovanou chemikáliou. Okrem toho zvýšená absolútna a relatívna hmotnosť nadobličiek u oboch pohlaví ukázala jasnú závislosť od dávky v 28-dňovej predbežnej štúdii (údaje nie sú uvedené), čo naznačuje súvislosť s liečbou testovanou chemikáliou. Hoci hypertrofia nadobličiek môže byť výsledkom stresu, v súčasných ani predbežných štúdiách sa nezistili žiadne nálezy naznačujúce stres, ako je znížený prírastok telesnej hmotnosti alebo atrofia týmusu a iných lymfatických orgánov. Keďže v prípadoch inhibície enzýmov súvisiacich so steroidogenézou12 nemusí dôjsť k histopatologickým zmenám v nadobličkách ani pri poruche produkcie glukokortikoidov, nemožno vylúčiť možnosť, že zvýšená hmotnosť nadobličiek je toxickým nálezom. Naopak, zvýšené relatívne hmotnosti sleziny a semenníkov v skupine mužov s 250 mg/kg, ktoré neboli pozorované v predbežnej štúdii, sa považovali za toxikologicky nevýznamné v dôsledku absencie histopatologických lézií alebo významne zvýšených absolútnych hmotností. Podobne biochémia v sére odhalila pokles A/G a zvýšenie Ca u oboch pohlaví, čo sa považovalo za toxikologicky bezvýznamné, keďže sa nezistili žiadne abnormality v súvisiacich parametroch. Okrem toho znížené hladiny Bil a ALP u oboch pohlaví a znížené hladiny AST a ALT u žien boli v rozpore s očakávanými toxickými účinkami a nepovažovali sa za významné.
Chronická nefropatia charakterizovaná bazofilnými tubulmi, hyalínovým odliatom a fokálnym intersticiálnym zápalom bola pozorovaná so štatistickou významnosťou u mužov zo všetkých liečených skupín. Okrem toho zvýšené sérové Cre a absolútne a relatívneobličkyhmotnosti sa zistili v skupinách samcov 60 a 250 mg/kg; tieto zmeny neboli pozorované v skupinách liečených žien. V týchto prípadoch sa stupeň akumulácie eozinofilných granúl v proximálnych tubulárnych epiteliálnych bunkách zvýšil zjavne závislým spôsobom. Tieto granuly sa imunohistochémiou potvrdili ako 2uglobulín, čo naznačuje výskyt x-globulínovej nefropatie. -Globulíny viazané na určité chemikálie, ako je d-limonén, sa akumulujú v lyzozómoch a sú pozorované v proximálnych tubuloch ako eozinofilné alebo hyalínové granuly9. Táto akumulácia môže poškodiť epitelové bunky, čo vedie k chronickej progresívnej nefropatii a následnej tvorbe nádorov. Hoci teda NOAEL pre 2-(1-men-thoxy)etanol spojený s ., globulínovou nefropatiou u samcov potkanovobličkynebol identifikovaný, tento typ nefropatie je údajne špecifický pre samcov potkanov, a preto nie je relevantný pre hodnotenie rizika pre ľudí. Zvýšené riziko zlyhania obličiek sprostredkované mechanizmami súvisiacimi s akumuláciou ,-globulínu je vysoko nepravdepodobné, pretože tento proteín v hu-mansl4 chýba. Preto sa považovalo za rozumné vylúčiť zo stanovenia NOAEL zmeny spojené s chronickou nefropatiou pozorovanou u mužov.
Na záver, súčasná 13-týždňová štúdia subchronickej toxicity preukázala, že liečba 250 mg/kg telesnej hmotnosti/deň 2-(/-mentoxy)etanolom spôsobila toxické zmeny v hematológii, biochémii séra a hmotnosti orgánov u mužov a samice potkanov F344. Na základe pozorovaných výsledkov bola NOAEL 2-(1-mentoxyetanolu vyhodnotená ako 60 mg/kg telesnej hmotnosti/deň pre obe pohlavia.
Referencie
1 JEFF. Séria WHO Food Additives: 60. Hodnotenie bezpečnosti určitých potravinárskych prídavných látok. 579–593. 2009.
2. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Toyoda T a Ogawa K. Hodnotenie subchronickej toxicity 5-hexenyl izotiokyanátu, prírodne identickej aromatickej látky z Wasabia japonica, u potkanov F344/DuCrj. Food Chem Toxicol. 122: 80 – 86. 2018. [Medline] [CrossRef]
3. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T a Ogawa K. 13--týždňová štúdia subchronickej toxicity acetalu vanilín propylénglykolu u potkanov F344. Food Chem Toxicol. 132: 110643. 2019. [Medline] [CrossRef]
4. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T, Takahashi M, Inoue K a Ogawa K. 13-týždňová štúdia subchronickej toxicity 2-etylbutanalu u potkanov F344. Regul Toxicol Pharmacol. 100: 118-126. 2018. [Medline] [CrossRef]
5. Toyoda T, Cho YM, Matsushita K, Tachibana S, Senuma M, Akagi J a Ogawa K. 13-týždňová štúdia subchronickej toxicity hexylacetátu u SD potkanov. J Toxicol Pathol. 32: 205-212. 2019. [Medline] [CrossRef]
6. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Tatebe C, Sato K a Ogawa K. Hodnotenie subchronickej toxicity metyléteru izoeugenolu u potkanov F344/DuCrj pri 13-týždňovom perorálnom podávaní. Regul Toxicol Pharmacol. 102: 34–39. 2019. [Medline] [CrossRef]
7. Ide T, Mizuta Y, Akagi J, Masumoto N, Sugimoto N, Sato K, Ogawa K a Cho YM. 90-dňová štúdia toxicity po opakovanom perorálnom podaní štyroch stereoizomérov 2,4-dimetyl- 4-fenyltetrahydrofuránu, syntetickej aromatickej látky, na potkanoch F344. Regul Toxicol Pharmacol. 114: 104664. 2020. [Medline] [CrossRef]
8. Furukawa S, Nagaike M a Ozaki K. Databázy pre technické aspekty imunohistochémie. J Toxicol Pathol. 30: 79-107. 2017. [Medline] [CrossRef]
9. Seely JC, Hard GC a Blankenship B. Kidney. In: Boor man's Pathology of the Rat, 2nd ed. AW Suttie (ed.). Aca demic Press, Londýn. 125–166. 2018.
10. Takanobu K, Aiso S, Umeda Y, Senoh H, Saito M, Katagiri T, Ikawa N, Ishikawa H, Mine T, Take M, Haresaku M, Matsumoto M a Fukushima S. [Základné údaje o spontánnych nádoroch v F344 /DuCrlCrlj potkany]. Sangyo Eiseigaku Zasshi. 57: 85-96. 2015 (v japončine). [Medline] [CrossRef]
11. JEFF. Séria technických správ WHO: 891. Hodnotenie určitých potravinárskych prídavných látok (Päťdesiata prvá správa Spoločného výboru expertov FAO/WHO pre potravinárske prídavné látky). 111–118. 2000.
12. Wallig MA. Endokrinný systém. In: Základy toxikologickej patológie, 3. vyd. MA Wallig, WM Haschek, CG Rousseaux, B Bolon a BW Mahler (editori). Academic Press, Londýn. 565–624. 2018.
13. Swenberg JA. 2u-globulínová nefropatia: prehľad zahrnutých bunkových a molekulárnych mechanizmov a ich dôsledkov pre hodnotenie rizika pre ľudí. Environmentálny zdravotný výhľad. 101 (Suppl 6): 39-44. 1993. [Medline] [CrossRef]
14. Škvarky P. Močové cesty. In: Histopathology of Preclinical Toxicity Studies, 4. vyd. Academic Press, Londýn. 537–614. 2012.
