Anti-nociceptívna a protizápalová aktivita spôsobená Cistanche Deserticola u hlodavcov

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li-Wei Lin, et al

Abstraktný

V súčasnej štúdii sa odnožeCistanchedeserticola(Orobanchaceae, skrátene CD) boli extrahované s 50% etanolom a usporiadané izolované etylaceátom, n-butanolom a vodou. Analgetikum aAnti-zápalovýúčinky CD extraktu a troch vrstiev boli hodnotené v niekoľkých zvieracích modeloch. DISK CD(Cistanchedeserticola)extrakty účinne inhibovali zvíjajúcu sa reakciu vyvolanú 1% reakciou kyseliny octovej a bifázových lízaní spôsobených 1% formalínom a tiež znížili edém vyvolaný 1% karabelenanom, ale nie zymosanom. Okrem toho butanoické a vodné vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt nielenže znížil bolesť vyvolanú kyselinou octovou a formalínom, ale tiež znížil edém vyvolaný karagénanom. Účinky butanoickej vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt je lepší ako extrakt vodnej vrstvy. Okrem toho účinok butanoickej vrstvy CD(Cistanchedeserticola)Extrakt nebol zrušený naloxónom. Tieto výsledky ukázali, že má analgetické aAnti-zápalovýúčinky a butanoické a vodné vrstvy sú hlavne aktívnymi zložkami. Okrem toho analgetikum aAnti-zápalovýúčinky butanoickej vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt nesúvisel s opioidnými receptormi a imunitným systémom.

Kľúčové slová:Cistanche deserticola; Analgetická aktivita; Protizápalová aktivita

1. Úvod

CistanchedeserticolaMami. (Orobanchaceae, skrátene CD), pôvodná bylina v Číne je široko používaná v tradičnej medicíne pre rôzne terapeutické liečby vrátane sedatívnych, analgetických a imunitných indikácií (Lee, 1986). Moderné farmakologické štúdie poukázali na CD(Cistanchedeserticola)extrakt mal imunovýmoc (Chin and Su, 1993), účinok zachytávania voľných radikálov (Hsu et al., 1995) a zvýšenie aktivity SOD (Chang et al., 1995). V nedávnej štúdii hrala reakcia voľných radikálov významnú úlohu v zápalových procesoch (Arrigoni-Martelli, 1985). Preto sa táto štúdia pokúsila preskúmať domnelé analgetické účinky CD(Cistanchedeserticola)extrakt u myší s testom zvíjania vyvolaným kyselinou octovou (Taber et al., 1969) a testom lízania vyvolaným formalínom (Shibata et al., 1989). Po druhé, študovali sme aj možnéAnti-zápalovýČinnosť CD(Cistanchedeserticola)extrakt z klasického zápalového procesu s edémovým testom vyvolaným karagenánom (Winter et al., 1962) a alternatívnym zápalovým procesom s edémovým testom vyvolaným zymosanom (Tarayre et al., 1989). Nakoniec sme skúmali aktívne vrstvy CD extraktu oddelené rôznymi rozpúšťadlami. '

2. Materiály a metódy

2.1. Rastlinný materiál a výťažky

Odnože CD(Cistanchedeserticola)boli zakúpené na taiwanskom trhu a potvrdené profesorom M.T. Hsiehom. Vzorka poukážok (č. CMC-ICPS-000626) bol zachovaný v herbári Inštitútu čínskych farmaceutických vied, China Medical College pre budúce použitie. Extrakcia a izolácia CD(Cistanchedeserticola)Nasledovali predchádzajúce správy (Lu, 1998). DISK CD(Cistanchedeserticola)extrakt (výťažok v 34,2%) a tri vrstvy*/etylacetátová vrstva, butanolová vrstva a vodná vrstva (ich výnosy v 3,4, 10,2, 30,6%) (skrátene CDE, CDB a CDW) boli použité na prípravu extraktov.

2.2. Príprava extraktov a liečiv

DISK CD(Cistanchedeserticola)extrakt (0,1, 0,3, 1 g/kg) a tri vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakty (0, 03, 0, 1, 0, 3 g/kg) sa rozpustili v 0, 5% karboxymetylcelulóze a perorálne sa podávali 60 minút pred podaním induktora. Kyselina acetylsalicylová (ASA) (100, 300 mg/kg) a indomethacín (INDOL) (10 mg/kg) boli pripravené ako suspenzia s 0, 5% karboxymetylcelulózou a podávané intraperitoneálne pred podaním induktora. Naloxón (1 mg/kg) sa rozpustil normálnym fyziologickým roztokom.

2.3. Zvieratá

Samce potkanov Sprague-Dawley (200-250 g) boli použité na štúdiumAnti-zápalovýČinnosti. Samce ICR myší (20-25 g) boli použité na testovanie analgetických účinkov. Všetky zvieratá boli použité v experimentoch podľa hlavných zásad so starostlivosťou a používaním laboratórnych zvierat. Boli umiestnené najmenej 1 týždeň pred začatím experimentu v teplote 239/1 8C a 60% vlhkostne regulovanom prostredí s voľným prístupom k štandardným potravinám v peletách (dodávaných a navrhnutých spoločnosťou Fwusow Industry Co., LTD., Taiwan) a vode z vodovodu, v ktorej bol zachovaný cyklus svetla / tmy 12-12 hodín (svetelná fáza: 08:00-20:00 h). Potom sa podávali lieky a analgetikum aAnti-zápalovýTesty boli prevádzkované dvojito zaslepenou metódou. Po meraní správania boli všetky zvieratá usmrtené oxidom uhličitým.

2.4. Antinociceptívna štúdia

2.4.1. Reakcia na zvíjanie brucha vyvolanú kyselinou octovou u myší

Myši boli náhodne rozdelené do niekoľkých skupín. Každej myši bol podaný intraperitoneálne 1% roztok kyseliny octovej (10 ml/kg telesnej hmotnosti). Myši boli umiestnené v jednotlivých pozorovacích boxoch. Príznaky brušného zvíjania vyvolaného kyselinou octovou boli podobné tým, ktoré opísal Taber et al. (1969). Kontrolné zvieratá dostali riešenia vozidiel v tých istých experimentoch. Päť minút po injekcii kyseliny octovej sa počet zvíjajúcich sa reakcií na myš počítal 10 minút počas zvíjania brucha vyvolaného kyselinou octovou. Nakoniec, počet zvíjajúcich sa odpovedí nám umožnil vyjadriť percento ochrany pomocou nasledujúceho pomeru: (priemer ošetrený priemerom ošetreným priemerom kontroly)/100/ kontrolný priemer.

2.4.2. Formalínom vyvolaná lízavá reakcia u myší

Táto metóda predstavovala modifikáciu tej, ktorú opísal Shibata et al. (1989). Každá myš bola umiestnená v pozorovacej komore na akrylovej priehľadnej podlahe dosky po dobu 5 minút pred injekciou formalínu. Pod podlahou bolo veľké zrkadlo naklonené pod uhlom 458, aby bolo možné jasné pozorovanie labiek zvieraťa. Zvieratám sa podávalo 25 ml 1% formalínu do pravého subplantátu. Potom sa každé zviera vrátilo do komory a pozorovali sa dve odlišné obdobia intenzívnej reakcie na lízanie. Prvá perióda (počiatočná fáza) bola zaznamenaná 0/5 min po injekcii formalínu a druhá perióda (neskorá fáza) bola zaznamenaná 10/35 min po injekcii. Čas (časy) strávený lízaním reakcií injekčnej labky bol meraný ako indikátor reakcie na bolesť.

2.5. Protizápalová štúdia na potkanoch

TáAnti-zápalovýaktivita sa u potkanov stanovila meraním priemerného zvýšenia objemu zadnej labky po sub plantárnej injekcii zápalových látok, ako je karagénan (Winter et al., 1962) alebo zymosan (Tarayre et al., 1989). Zvieratám sa vstreklo 0,1 ml 1% karagénanu alebo 2% zymosanu v pravej zadnej nohe pod plantárnou aponeurózou. Zápal bol kvantitovaný z hľadiska mililitrov pomocou pletyzmometra (7150 Ugo Basile), ktorý zaznamenal malé rozdiely v hladine vody spôsobené posunom objemu. Pred akýmkoľvek ošetrením bol stanovený priemerný objem zadných vrátok každého zvieraťa (Vo) s tromi meraniami, ktoré sa nelíšili od viac ako 4% (presnosť prístroja). Potom 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 min po injekcii zápalových látok bol stanovený priemerný objem zadných labiek každého zvieraťa (Vt) s tromi meraniami, ktoré sa nelíšili od viac ako 4%.

Percentá edému pri každom zázname sa vypočítali porovnaním priemerného objemu zadných labiek každého zvieraťa (Vt) po injekcii zápalových látok s priemerným objemom zadných labiek každého zvieraťa (Vo) pred akoukoľvek liečbou (Palanichamy a Nagarajan, 1990). Percentuálne inhibície sa získali pre každú skupinu použitím tohto pomeru: [(Vt-Vo)control/(Vt-Vo)liečená]-100/ (Vt-Vo)kontrola.

2.6. Štatistická analýza

Všetky údaje získané počas analgetika aAnti-zápalovýaktivita bola vyjadrená v zmysle priemerných a štandardných chýb a ďalej analyzovaná pomocou jednosmernej analýzy rozptylu ANOVA, po ktorej nasledoval Scheffov test. Keď bola pravdepodobnosť (P) menšia ako 0,05, rozdiel sa považoval za významný.

3. Výsledky a diskusia

Zvieratá pred liečbou perorálnymi dávkami CD(Cistanchedeserticola)extrakt (0,1 - 1 g/kg) viedol k závislosti od dávky a významnej inhibícii reakcie zvíjania vyvolanej kyselinou octovou (tabuľka 1) a bifázických fáz formalínom indukovaných lízacích reakcií u myší (obr. 1(A)). Inhibícia spôsobená CD(Cistanchedeserticola)extrakt pri 1 g/kg na odpoveď zvíjania vyvolanú kyselinou octovou a odpovede na lízanie vyvolané formalínom boli asi 54 a 45%. Pozitívna kontrolná kyselina acetylsalicylová pri 0,1- 0,3 g/kg tiež znížila zvíjaciu reakciu vyvolanú kyselinou octovou s inhibíciou 45-64% (tabuľka 1). Avšak druhá pozitívna kontrolná indomethacín pri dávke 10 mg/kg inhibovala iba neskorú, ale nie skorú fázu formalínom vyvolanej lízavej reakcie u myší s maximálnou inhibíciou 32% (obr. 1(A)). Okrem toho iba butanoické a vodné vrstvy medzi tromi vrstvami CD(Cistanchedeserticola)extrakt pri 0,1 - 0,3 g/kg tiež produkoval významnú antinocicepciu a tieto analgetické účinky butanolovej vrstvy boli lepšie ako účinky vodnej vrstvy (tabuľka 1 a obr. 1 (B)). Po druhé, hodnotili smeAnti-zápalovýČinnosť CD(Cistanchedeserticola)extrakt a tri vrstvy proti klasickej (vyvolanej karagenenanom) a alternatívnej (zymosanom vyvolanej) tvorbe edému. Našli sme, že CD(Cistanchedeserticola)extrakt pri 0,1-1g/kg tiež významne inhiboval tvorbu edému vyvolaného karagénanom spôsobom súvisiacim s dávkou a indomethacín pri dávke pri dávke a indomethacín pri dávke pri dávke tiež účinne inhiboval tvorbu edému vyvolaného karagenánom u potkanov (obr. 2). Tvorba edému vyvolaného zymosanom však nebola potlačená CD(Cistanchedeserticola)extrakt pri 0,1 - 1 g/kg u potkanov (údaje nie sú uvedené). Okrem toho iba butanoická vrstva medzi tromi vrstvami CD(Cistanchedeserticola)extrakt pri 0,1 - 0,3 g/kg tiež významne inhiboval tvorbu edému indukovaného karagénanom u potkanov (obr. 2). Podľa fytochemických správ, acteozid a kyselina jantárová, patriaca k zložkám butanolovej vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt (Hsu et al., 1994, 1995), vlastnilAnti-zápalovýčinnosť pri tvorbe edému vyvolaného chemikáliami (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). Z našich aktuálnych údajov a ďalších predchádzajúcich správ sme navrhli odnože CD(Cistanchedeserticola)má analgetikum aAnti-zápalovýaktivita u hlodavcov a aktívne zložky odchádzajú hlavne v butanolovej vrstve CD(Cistanchedeserticola)extrahovať. Či sú acteozid a kyselina jantárová aktívnymi zložkami CD(Cistanchedeserticola), izolujeme a vyhodnotíme ich analgetikum aAnti-zápalovýaktivity v budúcnosti.

Obr. 1. Účinok CD(Cistanchedeserticola)extrakt (0,1, 0,3 a 1 g/kg), etylacetát, butanolové a vodné vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt (CDE, CDB a CDW) (0,03, 0,1 a 0,3 g/kg) a indomethacín (INDOL, 10 mg/kg) na začiatku (0/5 min) a v neskorej fáze (10/35 min) odpovede na lízanie vyvolanej formalínom u myší. Každá hodnota je reprezentovaná ako stredná hodnota9/S.E. (N/7). *P B/0,05, *** P B/0,001 v porovnaní so skupinou VEH.

Obr. 2. Účinok CD(Cistanchedeserticola)extrakt (0,1, 0,3 a 1 g/kg), etylacetát, butanolové a vodné vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt (CDE, CDB a CDW) (0,03, 0,1 a 0,3 g/kg) a indomethacín (INDOL, 10 mg/kg) na edém labky vyvolaný karagenánom u potkanov. Každá hodnota je reprezentovaná ako stredná hodnota9/S.E. (N/6). *P B/0,05, ** P B/0,01 v porovnaní so skupinou VEH

Okrem toho Shibata et al. (1989) naznačujú, že skorá fáza formalínom vyvolanej lízavej reakcie súvisela s bradykinínom a látkou P a neskorá fáza súvisela s bradykinínom, autokrinom a prostaglandínom. Naše súčasné údaje poukázali na to, že naloxón nezrušilAnti-zápalovýaktivita butanolu vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt na obe fázy odpovede na lízanie vyvolanú formalínom (obr. 3) a analgetický účinok na reakciu zvíjania vyvolanú kyselinou octovou (tabuľka 1). Analgetikum aAnti-zápalovýúčinky butanolu vrstvy CD extraktu nemusia súvisieť s opioidnými receptormi. Napríklad CD(Cistanchedeserticola)extrakt a jeho butanolová vrstva inhibovali tvorbu edému vyvolaného karaageenanom iba u potkanov. Edém indukovaný karagenanom prostredníctvom polymorfonukleárnej infiltrácie leukocytov a aktivovaného kinínového systému, najmä bradykinínu, sa líši od edému vyvolaného zymosanom prostredníctvom prílivu monocytov a aktivovaného imunitného systému (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). Kyselina jantárová, zložka butanolovej vrstvy CD extraktu, inhibovala polymorfonukleárnu leukocytovú funkciu (Rotstein et al., 1985). Tieto výsledky ukázali, že analgetikum aAnti-zápalovýÚčinky butanolu vrstvy CD(Cistanchedeserticola)extrakt môže súvisieť s kinínovým systémom, ale nie s opioidnými receptormi a imunitným systémom, hoci CD(Cistanchedeserticola)mal imunoenhancingový účinok (Chin and Su, 1993). Pre podrobné informácie o mechanizme analgetika aAnti-zápalovýčinnosť, budeme ďalej skúmať s aktívnymi vrstvami alebo zložkami CD extraktu.

Cistanchetubulosamá veľa efektov, kliknite sem a dozviete sa viac

Referencie

Arrigoni-Martelli, E., 1985. Farmakológia voľných radikálov zachytávajúcich zápal. Medzinárodný časopis tkanivových reakcií 7, 513/ 519.
Chang, Y., Wu, H., Wang, S.N., Cheng, H.C., 1995. Štúdia o silných účinkochCistanchedeserticolaMa., Cistanche salsa (C.A. Mey) G. Beck a Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. China Journal of Chinese Materials and Medicine 26, 143/146.
Chin, H.L., Su, Y.C., 1993. Štúdia o farmakologických účinkochCistanchedeserticolaMami. Čínsky časopis čínskych materiálov a medicíny 19, 143/146.
Damas, J., Bourdon, V., Remacle-Volon, G., Adam, A., 1990. Kiníny a peritoneálne exsudáty vyvolané karagenínom a zymosánom u potkanov. British Journal of Pharmacology 101, 418/422.

Dawson, J., Sedgwick, A.D., Edwards, J.C., Lees, P., 1991. Porovnávacia štúdia bunkových, exsudatívnych a histologických reakcií na karagénan, dextrán a zymosán u myši. Medzinárodný časopis tkanivových reakcií 13, 171/185.

Hsu, W.H., Chu, S.H., Chao, C.H., Hsu, Y., Yuan, K.W., Yen, C.H., Chi, C.Y., Chan, C., 1994. Štúdia o chemických zložkáchCistanchedeserticolaMami. Čínsky časopis čínskych materiálov a medicíny 25, 509/513.
Hsu, W.H., Chu, S.H., Sheng, L.C., Yuan, K.W., Mao, C.N., 1995. Štúdia o chemických zložkách a farmakologických účinkochCistanchedeserticolaMami. a cistanche salsa (C.A. Mey) G. Beck. Čínske tradičné bylinné lieky 26, 143/146.
Kabachnyi, V.I., Černák, V.P., Drogovoz, S.M., Golubenko, Iu.A., Bogutskaia, E.E., 1987. HľadaťAnti-zápalovýprípravky medzi derivátmi heteryl amidov kyseliny jantárovej. Farmakologiia i Toksikologiia 50, 94/97.
Lee, S.L., 1986. Pero-Tsao-Kun-Mu. Národný výskumný ústav publikácií čínskej medicíny, Taipei, s. 20.
Lu, M.C., 1998. Štúdie o sedatívnom účinkuCistanchedeserticola. Časopis etnofarmakológie 59, 161/165.
Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995. Fenyletanoidy v byline Plantago lanceolata a inhibičný účinok na edém myšieho ucha vyvolaný kyselinou arachidónovou. Planta Medica 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. Analgetická aktivita extraktu Cassia alata leat a kemp Eerol 3-0-Soforoside. Časopis etnofarmakológie 29, 73/78.
Rotstein, O.D., Pruett, T.L., Figeľ, V.D., Nelson, R.D., Simmons, R.L., 1985. Kyselina jantárová, metabolický vedľajší produkt druhov Bacteroides, inhibuje polymorfonukleárnu leukocytovú funkciu. Infekcia a imunita 48, 402/408.
Shibata, M., Ohkubo, T., Takahashi, H., Inoki, R., 1989. Modifikovaný formalínový test: charakteristická bifázická odpoveď na bolesť. Bolesť 38, 347/ 352.
Taber, R.I., Greenhouse, D.D., Rendell, J.K., Irwin, S., 1969. Agonistické a antagonistické interakcie opioidov na brušnom strečingu vyvolanom kyselinou octovou u myší. Časopis farmakológie a experimentálnej terapie 169, 29/38.
Tarayre, J.P., Delhon, A., Aliaga, M., Barbara, M., Bruniquel, F., Caillol, V., Puech, L., Konzul, N., Tisne-Versailles, J., 1989.
Farmakologické štúdie o zápale zymosanu u potkanov a myší. 1: Edém labky vyvolaný Zymosanom u potkanov a myší. Farmakologický výskum 21, 375/384.
Winter, C.A., Risley, E.A., Nuss, G.W., 1962. Carrageenan-indukovaný edém v zadnej labke potkana ako skúška preAnti-zápalovýlieky. Zborník Spoločnosť experimentálnej biológie a medicíny 111, 544/547.