Koagulácia, receptory aktivované proteázou a diabetická obličková choroba: Lekcie od myší s deficitom ENOS

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Koagulácia, proteázou aktivované receptory a diabetická obličková choroba: Lekcie od myší s deficitom eNOS

Yuji Oe,1 Mariko Miyazaki1 a Nobuyuki Takahashi2

1Divízia nefrológie, endokrinológie a vaskulárnej medicíny, Tohoku University Graduate School of

Medicína, Sendai, Miyagi, Japonsko

2Divízia klinickej farmakológie a terapie, Vysoká škola farmaceutických vied Univerzity Tohoku & Fakulta farmaceutických vied, Sendai, Miyagi, Japonsko

Je známe, že dysfunkcia endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého (eNOS) zhoršuje progresiu a prognózu diabetického ochorenia obličiek (DKD). Jedným z mechanizmov, ktorými sa to dosahuje, je, že nízke hladiny eNOS sú spojené s hyperkoagulabilitou, ktorá podporuje poškodenie obličiek. Vo vonkajšej koagulačnej kaskáde tkanivový faktor (faktor III) a následné koagulačné faktory, ako je aktívny faktor X (FXa), zhoršujú zápal prostredníctvom aktivácie proteázou aktivovaných receptorov (PAR). Nedávno sa ukázalo, že nedostatok alebo znížená expresia eNOS u diabetických myší, ako model pokročilej DKD, zvyšuje hladiny renálneho tkanivového faktora a expresie PAR1 a 2 v ich obličkách. Okrem toho farmaceutická inhibícia alebo genetická delécia koagulačných faktorov alebo PAR zlepšila zápal v DKD u myší bez eNOS. V tomto prehľade sumarizujeme vzťah medzi eNOS, koaguláciou a PAR a navrhujeme novú terapeutickú možnosť na manažment pacientov s DKD.

Kľúčové slová: diabetická glomeruloskleróza; faktor Xa; zápal; tkanivového faktora

Tohoku J. Exp. Med., september 2021, 255 (1), 1-8.

Extrakt z cistanche môže veľmi dobre pomôcť pri ochorení obličiek

Počet pacientov s diabetickým ochorením obličiek (DKD) celosvetovo stúpa (de Boer et al. 2011; Kainz et al. 2015; Ogurtsova et al. 2017). DKD je jednou z hlavných príčin mortality u pacientov s diabetickými komplikáciami (Afkarian et al. 2013). Okrem toho je DKD proagresívny a je hlavnou príčinou konečného štádia ochorenia obličiek vyžadujúceho renálnu substitučnú terapiu (Gregg et al. 2014; Liyanage et al. 2015). V Japonsku predstavuje diabetická nefropatia viac ako 39 percent nových dialyzovaných pacientov (Nitta et al. 2020). Preto je potrebný vývoj nových terapeutických možností na zvládnutie pacientov s DKD.

Zvyšuje sa záujem o úlohu koagulačného systému v patogenéze DKD. Hyperkoagulabilita je spojená s DKD (Goldberg 2009; Domingueti et al. 2016). Ukázalo sa, že zvýšená hladina fibrinogénu v krvi súvisí s nízkou odhadovanou rýchlosťou glomerulárnej filtrácie, vysokou proteinúriou a ťažkým histologickým poškodením a bola prediktorom progresie do konečného štádia ochorenia obličiek (Dalla Vestra a kol. 2005; Pan a kol. al. 2018; Zhang et al. 2018). Niektoré štúdie preukázali koreláciu medzi hladinou D-diméru, produktu degradácie fibrínu, a renálnou dysfunkciou v DKD (Domingueti et al. 2018; Pan et al. 2018). Hyperkoagulabilita v DKD je pravdepodobne určená viacerými faktormi. Napríklad systém renín-angiotenzín-aldosterón aktivuje tkanivový faktor (TF, faktor III) a zvyšuje trombotické príhody (Dielis et al. 2005). V opačnom prípade sa hyperglykémia, dyslipidémia, zápal alebo endoteliálna dysfunkcia podieľajú na protrombotickom stave pod patogenézou DKD (Goldberg 2009).

Endoteliálna dysfunkcia je prítomná v DKD, ktorá vyvoláva mikrovaskulárne komplikácie (Goldberg 2009; Nakagawa et al. 2011). Zhoršená produkcia endotelovej syntázy oxidu dusnatého (eNOS) alebo znížená aktivita eNOS (napr. zhoršená fosforylácia eNOS) je charakteristickým znakom endotelovej dysfunkcie v DKD (Nakagawa et al. 2011; Cheng et al. 2012). Ukázali sme, že strata expresie eNOS bola spojená so zvýšením hladiny TF a aktivitou vonkajšieho koagulačného systému (Li et al. 2010; Wang et al. 2011a), ktorá je úzko spojená s trombotickými príhodami u pacientov s chronickými obličkami chorôb (Kolachalama et al. 2018).

koagulačné proteázy, ako je aktívny faktor FVII (FVIIa), aktívny faktor (FXa) a trombín, ktoré sú prítomné vo vonkajšej koagulačnej kaskáde, sprostredkovávajú poškodenie tkaniva prostredníctvom mechanizmu závislého od proteázou aktivovaného receptora (PAR) (Madhusudhan et al. 2016; Posma a kol. 2019). V tomto prehľade sumarizujeme zistenia získané od diabetických myší bez eNOS a diskutujeme o vzťahu medzi koagulačnou-PAR dráhou, hladinami eNOS a patogenézou DKD.

Dráha tkanivového faktora/proteázou aktivovaných receptorov

Tkanivový faktor (TF), známy ako faktor III, je 47 kDa transmembránový proteín, ktorý interaguje s faktorom VII (FVII) (Grover a Mackman 2018). Komplex TF/FVIIa je aktivátorom vonkajšej koagulačnej kaskády a katalyzuje aktiváciu FX a FIX. FXa a aktivovaný kofaktor V (FVa) tvoria protrombotický komplex, ktorý vytvára trombín. Nakoniec trombín premieňa fibrinogén na fibrín, čo vedie k tvorbe trombov (Grover a Mackman 2018). TF je exprimovaný v bunkách hladkého svalstva ciev a adventiciálnych fibroblastoch. Pri zápalových stavoch je jeho expresia indukovaná v endotelových bunkách alebo cirkulujúcich bunkách, ako sú monocyty (Østerud a Bjørklid 2006).

Receptory aktivované proteázou (PAR) sú členmi superrodiny receptorov spojených s G-proteínom, ktorá obsahuje štyri proteíny PAR (PAR1-4). PAR podliehajú štiepeniu proteázami na N-terminálnom konci a sú aktivované po naviazaní na nový N-koniec obsahujúci viazaný ligand. Štyri členy PAR (PAR1-4) sú aktivované špecifickými koagulačnými proteázami: komplex TF a FVIIa aktivuje PAR2, faktor Xa aktivuje PAR1 aj PAR2 a trombín aktivuje PAR1, PAR3 a PAR4 (Camerer et al. 2000; Coughlin 2005; Rothmeier a Ruf 2012; Zhao a kol. 2014). Vzťah medzi TF, koagulačnými proteázami a PAR je znázornený na obr.

Je známe, že PAR sú široko exprimované v obličkových bunkách a podieľajú sa na patofyziológii poškodenia obličiek. PAR1 aj PAR2 sú exprimované v glomerulárnych endotelových bunkách, mezangiálnych bunkách a obličkových tubulárnych bunkách odvodených od človeka alebo myší; PAR2, PAR3 a PAR4 sú exprimované v ľudských podocytoch; PAR1, PAR3 a PAR4 sú exprimované v myších podocytoch (Tanaka a kol. 2005; Vesey a kol. 2005; Madhusudhan a kol. 2012; Dong a kol. 2015; Madhusudhan a kol. 2016).

Hoci boli preukázané škodlivé alebo ochranné účinky PAR pri poškodení obličiek, hromadiace sa údaje naznačujú, že PAR zhoršujú zápal stimuláciou produkcie cytokínov a chemokínov (Rothmeier a Ruf 2012; Isermann 2017; Posma et al. 2019). V súlade s týmto zistením, agonisty PAR1 a PAR2 podporujú expresiu zápalových mediátorov, ako je monocytový chemotaktický proteín 1 (MCP1) a inhibítor aktivátora plazminogénu-1 (PAI-1) a profibrotické molekuly v endotelových, mezangiálnych a obličkových tubulárnych bunkách (Vesey et al. 2005; Vesey et al. 2013; Ellinghaus et al. 2016; Waasdorp et al. 2016; Oe et al. 2019). V štúdiách in vivo nedostatok PAR1 alebo prítomnosť inhibítorov PAR1 znižovala zápal v modeloch crescentickej glomerulonefritídy alebo obštrukčného poškodenia obličiek (Cunningham a kol. 2000; Waasdorp a kol. 2019; Lok a kol. 2020). Podobne boli terapeutické účinky inhibície PAR2 pri poraneniach obličiek sprevádzané znížením zápalu v obličkách (Hayashi a kol. 2016; Du a kol. 2017; Han a kol. 2019; Watanabe a kol. 2019).

Polymorfizmy endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého v DKD

Endoteliálna syntáza oxidu dusnatého (eNOS) je jednou z troch izoforiem NOS a prispieva k tvorbe NO vo vaskulárnom endoteli (Walford a Loscalzo 2003). NO produkovaný eNOS vo vaskulárnom endoteli

Obr. 1. Vzťah medzi koagulačnými faktormi a proteázou aktivovanými receptormi (PAR).

Vo vonkajšej koagulačnej kaskáde komplex tkanivového faktora (TF) a aktívneho FVII (FVIIa) aktivuje proteázou aktivovaný receptor 2 (PAR2), aktívny FX (FXa) aktivuje PAR1 aj PAR2 a trombín sa zameriava na PAR1, PAR3 a PAR4. Štiepenie N-koncovej sekvencie PAR koagulačnými proteázami odhaľuje novú N-koncovú sekvenciu, ktorá pôsobí ako viazaný ligand a podporuje zápal.

hrá kľúčovú úlohu pri regulácii vaskulárnej relaxácie, protizápalu a prevencii tvorby trombu (Walford a Loscalzo 2003). Zhoršená expresia eNOS je spojená s vývojom DKD. Nedávno vykonané metaanalýzy na ľuďoch odhalili, že gény G894T (rs1799983), C-786T (rs2070744) a intrón 4b/4a ​​(rs{9}}) v eNOS (NOS3) sú úzko spojené s rozvoj DKD (Dellamea et al. 2014; Zhang et al. 2015; Dong et al. 2018). Z týchto variantov bola dobre charakterizovaná úloha polymorfizmu G894T (Glu298Asp) vo funkcii eNOS. Znížená produkcia NO alebo akumulácia dusitanov bola indikovaná v transfekovaných CHO bunkách s 298Asp v porovnaní s bunkami s 298Glu (Noiri et al. 2002). Súhrnne tieto výsledky naznačujú, že znížená produkcia NO dysfunkciou eNOS je dôležitá pre progresiu DKD u ľudí.

Diabetické myši bez eNOS ako model ľudskej diabetickej nefropatie

Vytvorenie spoľahlivých predklinických modelov podobných ľudskej DKD je nevyhnutné pre štúdium nových terapeutických možností. Na základe dôkazov preukazujúcich súvislosť medzi polymorfizmom eNOS a DKD niekoľko štúdií preukázalo, že modely knock-out eNOS typu I a typu II DM sú niektoré z úspešných modelov napodobňujúcich ľudskú DKD (Brosius et al. 2009; Azushima et al. 2018). Ukázalo sa, že u diabetických myší vyvolaných streptozotocínom, ktorým chýba eNOS, sa rozvinie ťažká albuminúria, mezangiálna expanzia, zhrubnutie glomerulárnej bazálnej membrány a arteriolárna hyalinóza, ktorá sa podobá ľudskej DKD (Nakagawa et al. 2007). Podobne diabetické myši typu II (DB/DB), ktorým chýba eNOS, vykazovali závažnú glomerulosklerózu a albuminúriu (Zhao et al. 2006).

Zvýšená TF u diabetických myší bez eNOS

NO inhibuje tvorbu trombu a agregáciu krvných doštičiek (Walford a Loscalzo 2003). Pretože tvorba glomerulárneho trombu bola pozorovaná u diabetických myší bez eNOS (Nakagawa et al. 2007), zhoršená expresia eNOS je pravdepodobne spojená so zvýšením koagulácie závislej od TF. Asociáciou medzi eNOS a TF v DKD sme sa zaoberali v našich predchádzajúcich správach (Li et al. 2010; Wang et al. 2011a; Oe et al. 2016) (obr. 2).

Znížená alebo nedostatočná expresia eNOS zvyšuje aktivitu renálnej TF u diabetických myší Akita

Charakterizovali sme expresiu TF u diabetických myší Akita (Ins2Akita/plus), model DM typu I, s rôznymi hladinami expresie eNOS (eNOS plus/plus, eNOS plus/- a eNOS-/-) (Wang et al. 2011a ). Zistili sme, že závažnosť DKD bola spojená so zníženou expresiou eNOS. Vylučovanie albumínu močom, glomeruloskleróza a zníženie rýchlosti glomerulárnej filtrácie boli exacerbované v nasledujúcom poradí: eNOS plus/plus; Ins2Akita/ plus < enos="" plus="" ;="" ins2akita/="" plus="">< enos-/-;="" ins2akita/="" plus="" .="" je="" zaujímavé,="" že="" expresia="" a="" aktivita="" obličkovej="" tf="" sa="" zvýšila="" v="" enos="" plus="" ;="" ins2akita/plus="" a="" enos-/-;="" myši="" ins2akita/plus="" v="" porovnaní="" s="" myšami="" v="" enos="" plus/plus;="" ins2akita/="" plus="" myši.="" glomerulárna="" depozícia="" fibrínu="" bola="" tiež="" pozoruhodná="" v="" enos="" plus/-;="" ins2akita/="" plus="" a="" enos-/-="" ;="" ins2akita/="" plus="" myši.="" okrem="" toho="" expresia="" renálnej="" tf="" mrna="" korelovala="" so="" závažnosťou="" ochorenia,="" vylučovaním="" albumínu="" močom="" a="" expresiou="" obličkových="" zápalových="">

Neutralizujúce protilátky proti TF zmierňujú zápal u diabetických obličiek v

Myši eNOS-Knockout

Zvýšenie koagulácie závislej od TF je spojené so zvýšeným zápalom (Witkowski et al. 2016). Inhibícia TF-dependentného koagulačného systému zlepšila zápalové ochorenia, ako je sepsa vyvolaná LPS (Pawlinski et al. 2010). Aby sme objasnili príčinnú súvislosť medzi zápalom a TF v DKD, skúmali sme krátkodobý účinok neutralizujúcich protilátok proti TF na zápal diabetických obličiek u myší s deficitom eNOS (Li et al. 2010). Výsledky ukázali, že podávanie protilátok proti TF výrazne znížilo hladiny renálnej expresie génov súvisiacich so zápalom a fibrózou, ako sú mRNA Tnfa, Ccl2, Tgfb a Col4 v obličkách myší počas štyroch dní po neutralizácii TF.

Inhibítor koagulácie FXa zlepšuje poškodenie obličiek u diabetických myší s nedostatkom eNOS

Koagulačný FXa, ktorý sa nachádza po prúde od TF/VIIa, tiež prispieva k zápalu prostredníctvom dráh závislých od PAR. Jeho úloha v DKD bola preukázaná na niekoľkých zvieracích modeloch. Sumi a kol. (2011) preukázali, že fondaparinux, inhibítor FXa, znížil hladiny proteínov v moči, glomerulárnu hypertrofiu a ukladanie fibrínu u DB/ DB myší. Terapeutický účinok inhibície FXa u myší DKD bez eNOS preukázala naša skupina (Oe et al. 2016). Edoxaban (50 mg/kg/deň), perorálny inhibítor FXa, bol podávaný eNOS-/-; Ins2Akita/ plus myši tri mesiace a výsledky ukázali zlepšenie histologických poranení, ako je proliferácia mezangiálnej matrice. Úrovne expresie zápalových génov v obličkách boli znížené edoxabanom (tabuľka 1). FXa aktivuje PAR1 aj PAR2. Aby sme objasnili mechanizmus poškodenia obličiek sprostredkovaného FXa, preukázali sme, že protizápalové účinky inhibítorov FXa sú podobné tým, ktoré sa vyskytujú u myší PAR2-/- a PAR2-/- myší s inhibítormi FXa . Tieto zistenia naznačujú, že FXa pravdepodobne spôsobil zápal prostredníctvom mechanizmu závislého od PAR2- v DKD. Naopak, edoxaban nezlepšil glomerulárne poškodenie v eNOS plus/plus; Ins2Akita / plus myši, čo naznačuje, že terapeutický účinok inhibície FXa bol spojený s hyperkoagulabilitou závislou od eNOS u diabetických myší typu I.

Ďalšie koagulačné faktory v DKD

Pretože trombín sa zameriava na PAR1, ktorý progreduje vaskulárny zápal (Chen a Dorling 2009), trombín pravdepodobne zhoršuje DKD. Preukázala sa však ochranná alebo škodlivá úloha trombínu v patogenéze DKD; nízka dávka trombínu (50 pM) je zabránená, zatiaľ čo vysoká dávka trombínu (20 nM) zhoršuje glukózou indukovanú apoptózu v podocytoch (Wang et al. 201lb). V budúcnosti by sa mali objasniť účinky inhibítorov trombínu, ako je dabigatran, na diabetické myši bez eNOS.

Fibrinogén sa podieľa na rôznych zápalových stavoch. Je zaujímavé, že čiastočná redukcia alebo absencia fibrinogénu bola prospešná pre modely renálnej ischémie-reperfúzie alebo obštrukčnej fibrózy obličiek (Sorensen et al. 2011; Craciun et al, 2014). Pretože ukladanie glomerulárneho fibrínu je zvýšené u diabetických myší, ktorým chýba eNOS (Nakagawa a kol. 2007; Li a kol. 2010; Wang a kol. 201la), objasnenie jeho úlohy v patogenéze DKD si zaslúži ďalší výskum.

Tabuľka 1. Účinky tkanivového faktora (TF), koagulačného faktora Xa (FXa) a inhibície proteázou aktivovaného receptora (PAR) u myší s diabetickým ochorením obličiek (DKD) so zníženou alebo chýbajúcou expresiou eNOS.

Expresia PAR1 a PAR2 u diabetických myší bez eNOS

Zvýšená expresia PAR je spojená s poškodením obličiek. My a iní sme demonštrovali, že hladiny expresie Par1 a/alebo Par2 mRNA boli zvýšené na zvieracích modeloch s diabetickou nefropatiou, poškodením obličiek vyvolaným ade-9nom, obštrukčnou renálnou fibrózou a poškodením obličiek vyvolaným cisplatinou (Chung et al. 2013; Hayashi a kol. 2016; Oe a kol. 2016; Watanabe a kol. 2019). Okrem toho sa hladiny glomerulárneho proteínu PAR2 zvýšili u myší DB/DB, čo je model DM typu II (Sumi et al. 2011). Preukázali sme súvislosť medzi expresiou PAR a deficitom eNOS u diabetických myší (Oe et al. 2016). Úroveň expresie Par1 mRNA bola významne vyššia v eNOS-/-; Ins2Akita/ plus myši ako v eNOS−/−; Ins2Akita/ plus a non-DM myši. Podobne bola expresia Par2 významne vyššia v eNOS-/-; Ins2Akita/ plus myši ako u non-DM myší. Na rozdiel od toho sa hladiny mRNA Par4 medzi genotypmi nelíšili. Nedostatok eNOS zhoršuje zápal v DKD (Wang et al. 2011a). Pretože prozápalové cytokíny údajne zvyšujú PAR (Nystedt et al. 1996), zvýšený zápal spôsobený nedostatkom eNOS pravdepodobne indukuje renálnu expresiu Pars v DKD. Súhrnne výsledky našich štúdií naznačujú, že hladiny expresie PAR1 a PAR2, podobne ako v prípade TF, boli zvýšené v diabetických obličkách, keď chýbal eNOS (obr. 2).

Delécia PAR2 zlepšila diabetické poškodenie obličiek u myší so zníženým eNOS

My a iní sme sa zaoberali úlohou PAR2 v DKD v predchádzajúcich štúdiách. Delécia Par2 neovplyvnila glomerulárne poškodenie u diabetických myší Akita divokého typu (Ins2Akita/plus) s eNOS (Oe et al. 2016). Okrem toho diabetické myši indukované STZ bez PAR2 vykazovali zníženú albuminúriu v porovnaní s diabetickými myšami divokého typu, ale zvýšili mezangiálnu expanziu (Waasdorp et al. 2017). Súhrnne tieto výsledky ukazujú, že neexistujú žiadne alebo len mierne terapeutické účinky inhibície PAR2 na poškodenie obličiek v skorých a miernych modeloch DKD. Na rozdiel od toho sme preukázali účinky deficitu PAR2 na DKD u diabetických myší Akita so zníženou expresiou eNOS (eNOS plus /-; Ins2Akita/ plus ) (Oe et al. 2016). Nedostatok PAR2 významne znížil hladiny vylučovania albumínu močom, mezangiálnu expanziu a hrúbku GBM. Hladiny expresie prozápalových génov a génov súvisiacich s fibrózou, vrátane Tnfa, Tgfb a Col4, boli tiež znížené v obličkách myší. Tieto zistenia naznačujú, že PAR2 nie je patogénny na začiatku, ale v relatívne pokročilom diabetickom glomerulárnom poškodení spôsobenom deficitom eNOS (tabuľka 1).

Dvojitá blokáda PAR1 a PAR2 u diabetických myší so zníženým eNOS

Preukázali sme, že PAR1 a PAR2 kooperatívne prispievajú k patogenéze DKD (Mitsui et al. 2020). V tejto štúdii sa ako model DKD použili samce diabetických myší Akita typu I heterozygotné pre eNOS (Ins2Akita/plus; eNOS plus/-). Tieto myši boli liečené vehikulom, antagonistom PAR1 (E5555, 60 mg/kg/deň), antagonistom PAR2 (FSLLRY, 3 mg/kg/deň) alebo E5555 plus FSLLRY počas 4 týždňov. Podávanie samotného antagonistu PAR1 alebo PAR2 zmiernilo glomerulárne poškodenie, ako je mezangiálna expanzia a ukladanie kolagénu IV, v porovnaní s podávaním vehikula. Boli pozorované synergické terapeutické účinky inhibície PAR1 aj PAR2 a pomer albumínu ku kreatinínu v moči sa významne znížil, keď boli PAR1 aj PAR2 blokované pomocou E5555 plus FSLLRY v porovnaní s podávaním vehikula. Okrem toho duálna blokáda PAR1 a PAR2 pomocou E5555 plus FSLLRY synergicky zlepšila histologické poškodenie, vrátane mezangiálnej expanzie, infiltrácie glomerulárnych makrofágov a ukladania kolagénu typu IV. Hladiny expresie génov súvisiacich so zápalom a fibrózou v obličkách boli tiež znížené (tabuľka 1).

Zamerali sme sa na prozápalové účinky agonistov PAR1 a PAR2 na ľudské endotelové bunky (Mitsui et al. 2020). Výsledky ukázali, že stimulácia agonistami PAR1 aj PAR2 synergicky zvýšila hladiny expresie mRNA MCP1 a PAI1. Účinok agonistu PAR1 bol blokovaný inhibítorom NF-KB, zatiaľ čo účinok agonistu PAR2 bol blokovaný inhibítormi NF-kB a MAPK. PAR1 a PAR2 spoločne prispievajú k vaskulárnemu zápalu a DKD prostredníctvom rôznych signálnych dráh (obr. 3).

Záver

V tomto prehľade sme sa zamerali na vzťah medzi dráhou koagulačnej proteázy-PAR a deficitom eNOS u diabetických myší. Nízka produkcia eNOS je spojená s hyperkoagulabilitou a zvýšenou signalizáciou PAR, ktoré sú pri DKD škodlivé. Tieto nálezy môžu naznačovať ich patologické úlohy v pokročilej alebo neskoršej fáze DKD (napr. pri zlyhaní obličiek a/alebo masívnej proteinúrii). Perorálne inhibítory FXa sa široko používajú na prevenciu trombózy (Patel et al. 2011; Robertson et al. 2015). Ich využitie pri liečbe DKD je perspektívnou možnosťou. Okrem toho sa niektoré antagonisty PAR1, vrátane atopaxaru a vorapaxaru, môžu použiť v protidoštičkovej terapii na prevenciu akútneho koronárneho syndrómu

Obr. 3. Rozdielne úlohy PAR1 a PAR2 pri vaskulárnom zápale a diabetickej chorobe obličiek (DKD).

V ľudských endotelových bunkách agonista PAR1 zvyšuje expresiu chemokínov a cytokínov prostredníctvom signálnej dráhy NF-KB, zatiaľ čo agonista PAR2 ich zvyšuje prostredníctvom signálnych dráh NF-KB a MAPK. PAR1 a PAR2 synergicky spôsobujú vaskulárny zápal prostredníctvom odlišných dráh v DKD.

(Goto et al. 2010; Tricoci et al. 2012). Okrem toho existuje pozoruhodný pokrok vo vývoji antagonistov PAR2 (Lim a kol. 2013; Cheng a kol. 2017; Jiang a kol. 2018) a môžu predstavovať nové terapeutické možnosti liečby pacientov s DKD.

Poďakovanie

Túto štúdiu podporila Gonryo Medical Foundation. Radi by sme poďakovali spoločnosti Editage (https://www.edage.com) za úpravu v anglickom jazyku.

Konflikt záujmov

Autori nedeklarujú žiadny konflikt záujmov.

Referencie

Afkarian, M., Sachs, MC, Kestenbaum, B., Hirsch, IB, Tuttle, KR, Himmelfarb, J. & de Boer, IH (2013) Ochorenie obličiek a zvýšené riziko úmrtnosti pri cukrovke 2. typu. J. Am. Soc. Nephrol., 24, 302-308.

Azushima, K., Gurley, SB & Coffman, TM (2018) Modelovanie diabetickej nefropatie u myší. Nat. Rev. Nephrol., 14, 48-56.

Brosius, FC, Alpers, CE, Bottinger, EP, Breyer, MD, Coffman, TM, Gurley, SB, Harris, RC, Kakoki, M., Kretzler, M., Leiter, EH, Levi, M., McIndoe, RA Sharma, K., Smithies, O., Susztak, K., et al. (2009) Myšie modely diabetickej nefropatie. J. Am. Soc. Nephrol., 20, 2503-2512.

Camerer, E., Huang, W. & Coughlin, SR (2000) Aktivácia proteázou aktivovaného receptora 2 faktorom VIIa závislá od tkanivového faktora a faktora X. Proc. Natl. Akad. Sci. USA, 97, 5255-5260.

Chen, D. & Dorling, A. (2009) Kritické úlohy trombínu pri akútnom a chronickom zápale. J. Thromb. Haemost., 7 Suppl 1, 122-126.

Cheng, H., Wang, H., Fan, X., Paueksakon, P. & Harris, RC (2012) Zlepšenie aktivity endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého spomaľuje progresiu diabetickej nefropatie u DB/ DB myší. Kidney Int., 82, 1176-1183.

Cheng, RKY, Fiez-Vandal, C., Schlenker, O., Edman, K., Aggeler, B., Brown, DG, Brown, GA, Cooke, RM, Dumelin, CE, Doré, AS, Geschwindner, S. Grebner, C., Hermansson, NO, Jazayeri, A., Johansson, P., a kol. (2017) Štrukturálny pohľad na alosterickú moduláciu proteázou aktivovaného receptora 2. Nature, 545, 112-115.

Chung, H., Ramachandran, R., Hollenberg, MD & Muruve, DA (2013) Transaktivácia receptora aktivovaného proteínom -2 receptora epidermálneho rastového faktora a signálnych dráh transformujúcich receptorov rastového faktora prispieva k renálnej fibróze. J. Biol. Chem., 288, 37319-37331.

Coughlin, SR (2005) Receptory aktivované proteázou v hemostáze, trombóze a vaskulárnej biológii. J. Thromb. Haemost., 3, 1800-1814.

Craciun, FL, Ajay, AK, Hoffmann, D., Saikumar, J., Fabian, SL, Bijol, V., Humphreys, BD & Vaidya, VS (2014) Farmakologická a genetická deplécia fibrinogénu chráni pred fibrózou obličiek. Am. J. Physiol. Renal Physiol., 307, F471-484.

Cunningham, MA, Rondeau, E., Chen, X., Coughlin, SR, Holdworth, SR & Tipping, PG (2000) Receptor 1 aktivovaný proteázou sprostredkúva trombín-dependentný, bunkami sprostredkovaný obličkový zápal pri crescentickej glomerulonefritíde. J. Exp. Med., 191, 455-462.

Dalla Vestra, M., Mussap, M., Gallina, P., Bruseghin, M., Cernigoi, AM, Saller, A., Plebani, M. & Fioretto, P. (2005) Markery akútnej fázy zápalu a glomerulárnej štruktúre u pacientov s diabetom 2. typu. J. Am. Soc. Nephrol., 16 Suppl 1, S78-82.

de Boer, IH, Rue, TC, Hall, YN, Heagerty, PJ, Weiss, NS & Himmelfarb, J. (2011) Časové trendy v prevalencii diabetického ochorenia obličiek v Spojených štátoch. JAMA, 305, 2532-2539.

Dellamea, BS, Pinto, LC, Leitão, CB, Santos, KG & Canani, LH (2014) Polymorfizmy génu endotelovej syntázy oxidu dusnatého a riziko diabetickej nefropatie: systematický prehľad a metaanalýza. BMC Med. Genet., 15, 9.

Dielis, AW, Smid, M., Spronk, HM, Hamulyak, K., Kroon, AA, ten Cate, H. & de Leeuw, PW (2005) Protrombotický paradox hypertenzie: úloha renín-angiotenzínu a kalikreínu kinínové systémy. Hypertenzia, 46, 1236-1242.

Domingue, CP, Dusse, LM, Carvalho, M., de Sousa, LP, Gomes, KB & Fernandes, AP (2016) Diabetes mellitus: prepojenie medzi oxidačným stresom, zápalom, hyperkoagulabilitou a vaskulárnymi komplikáciami. J. Komplikácie diabetu, koagulácia, eNOS a DKD 7

30, 738-745.

Domingue, CP, Fóscolo, RB, Dusse, LMS, Reis, JS, Carv- tiež, MDG, Gomes, KB & Fernandes, AP (2018) Asociácia rôznych biomarkerov funkcie obličiek s hladinami D-dimérov u pacientov s diabetom 1. mellitus (obličkové biomarkery a D-dimér pri cukrovke). Arch. Endocrinol. Metab., 62, 27-33.

Dong, J., Peng, Y., Wang, Y. & Zhang, Y. (2018) Úlohy polymorfizmov génu endoteliálnej syntázy oxidu dusnatého pri diabetes mellitus a s ním spojených vaskulárnych komplikáciách: systematický prehľad a metaanalýza. Endokrinný, 62, 412-422.

Dong, W., Wang, H., Shahzad, K., Bock, F., Al-Dabet, MM, Ranjan, S., Wolter, J., Kohli, S., Hoffmann, J., Dhople, VM, Zhu, C., Lindquist, JA, Esmon, CT, Gröne, E., Gröne, HJ, et al. (2015) Activated protein C zlepšuje renálne ischemicko-reperfúzne poškodenie tým, že obmedzuje Y-box viažuci proteín-1 public- močenie. J. Am. Soc. Nephrol., 26, 2789-2799.

Du, C., Zhang, T., Xiao, X., Shi, Y., Duan, H. & Ren, Y. (2017) Receptor aktivovaný proteázou-2 podporuje zápal tubulárneho epitelu obličiek inhibíciou autofágie prostredníctvom signálna dráha PI3K/Akt/mTOR. Biochem. J., 474, 2733-2747.

Ellinghaus, P., Perzborn, E., Hauenschild, P., Gerdes, C., Heitmeier, S., Visser, M., Summer, H. & Laux, V. (2016) Vyjadrenie pro- zápalové gény v ľudských endotelových bunkách: porovnanie rivaroxabanu a dabigatranu. Thromb. Res.,

142, 44-51.

Goldberg, RB (2009) Cytokínové a cytokínom podobné zápalové markery, endoteliálna dysfunkcia a nevyvážená koagulácia pri rozvoji diabetu a jeho komplikácií. J. Clin. Endocrinol. Metab., 94, 3171-3182.

Goto, S., Ogawa, H., Takeuchi, M., Flather, MD & Bhatt, DL; the J-LANCELOT (Japanese-Lesson from Antagonizing the Cellular Effect of Thrombin) Investigators (2010) Dvojito zaslepené, placebom kontrolované štúdie II. fázy antagonistu proteázou aktivovaného receptora 1 E5555 (atopaxar) u japonských pacientov s akútnym koronárnym syndrómom alebo vysoko rizikové ochorenie koronárnych artérií. Eur. Heart J., 31, 2601-2613.

Gregg, EW, Williams, DE & Geiss, L. (2014) Zmeny v komplikáciách súvisiacich s cukrovkou v Spojených štátoch. N. Engl. J. Med., 371, 286-287.

Grover, SP & Mackman, N. (2018) Tkanivový faktor: základný mediátor hemostázy a spúšťač trombózy. Arterioskler. Thromb. Vasc. Biol., 38, 709-725.

Han, Y., Tian, ​​L., Ma, F., Tesch, G., Vesey, DA, Globe, GC, Lohman, RJ, Morais, C., Suen, JY, Fairlie, DP & Nikolic-Paterson, DJ (2019) Farmakologická inhibícia proteázou aktivovaného receptora-2 znižuje tvorbu polmesiaca pri nefrotoxickej sérovej nefritíde u potkanov. Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 46,

456-464.

Hayashi, S., Oe, Y., Fushimi, T., Sato, E., Sato, H., Ito, S. & Takahashi, N. (2016) Proteázou aktivovaný receptor 2 exacerbuje adenínom indukované renálne tubulointersticiálne poškodenie v myši. Biochem. Biophys. Res. Commun., 483, 547-552.

Isermann, B. (2017) Homeostatické účinky koagulačnej proteázy-dependentnej signalizácie a proteázou aktivovaných receptorov. J. Thromb. Haemost., 15, 1273-1284.

Jiang, Y., Yau, MK, Lim, J., Wu, KC, Xu, W., Suen, JY & Fairlie, DP (2018) Silný antagonista proteázou aktivovaného receptora 2, ktorý inhibuje viaceré signalizačné funkcie pri ľudskej rakovine bunky. J. Pharmacol. Exp. Ther., 364, 246-257.

Kainz, A., Hronsky, M., Stel, VS, Jager, KJ, Geroldinger, A., Dunkler, D., Heinze, G., Tripepi, G. & Oberbauer, R. (2015) Predikcia prevalencie chronické ochorenie obličiek u diabetických pacientov v krajinách Európskej únie do roku 2025. Nefrol. Vytočiť. Transplant., 30 Suppl 4, iv113-118.

Kolachalama, VB, Shashar, M., Alousi, F., Shivanna, S., Rijal, K., Belghasem, ME, Walker, J., Matsuura, S., Chang, GH, Gibson, CM, Dember, LM, Francis, JM, Ravid, K. & Chitalia, VC (2018) Os uremického solute-arylového uhľovodíkového receptora a tkanivového faktora sa spája s trombózou po vaskulárnom poranení u ľudí. J. Am. Soc. Nephrol., 29, 1063- 1072.

Li, F., Wang, CH, Wang, JG, Thai, T., Boysen, G., Xu, L., Turner, AL, Wolberg, AS, Mackman, N., Maeda, N. & Takahashi, N. (2010) Zvýšená expresia tkanivového faktora prispieva k exacerbovanej diabetickej nefropatii u myší bez eNOS kŕmených diétou s vysokým obsahom tukov. J. Thromb. Haemost., 8, 2122-2132.

Lim, J., Iyer, A., Liu, L., Suen, JY, Lohman, RJ, Seow, V., Yau, MK, Brown, L. & Fairlie, DP (2013) Obezita vyvolaná diétou, adipózny zápal a metabolická dysfunkcia korelujúca s expresiou PAR2 sú oslabené antagonizmom PAR2. FASEB J., 27, 4757-4767.

Liyanage, T., Ninomiya, T., Jha, V., Neal, B., Patrice, HM, Okpechi, I., Zhao, MH, Lv, J., Garg, AX, Knight, J., Rodgers, A ., Gallagher, M., Kotwal, S., Cass, A. & Perkovic, V. (2015) Celosvetový prístup k liečbe ochorenia obličiek v konečnom štádiu: systematický prehľad. Lancet, 385, 1975-1982.

Lok, SWY, Yiu, WH, Li, H., Xue, R., Zou, Y., Li, B., Chan, KW, Chan, LYY, Leung, JCK, Lai, KN & Tang, SCW

(2020) Antagonista PAR-1 vorapaxar zlepšuje poškodenie obličiek a tubulointersticiálnu fibrózu. Clin. Sci. (Londýn.), 134, 2873-2891.

Lv, B., Wang, H., Tang, Y., Fan, Z., Xiao, X. & Chen, F. (2009) Proteín skupiny box 1 s vysokou mobilitou indukuje expresiu tkanivového faktora vo vaskulárnych endotelových bunkách prostredníctvom aktivácie NF-kappaB a Egr-1. Thromb. Haemost., 102, 352-359.

Madhusudhan, T., Kerlin, BA & Isermann, B. (2016) Vznikajúca úloha koagulačných proteáz pri ochorení obličiek. Nat. Rev. Nephrol., 12, 94-109.

Madhusudhan, T., Wang, H., Straub, BK, Gröne, E., Zhou, Q., Shahzad, K., Müller-Krebs, S., Schwenger, V., Gerlitz, B., Grinnell, BW, Griffin, JH, Reiser, J., Gröne, HJ, Esmon, CT, Nawroth, PP, a kol. (2012) Cytoprotektívna signalizácia aktivovaným proteínom C vyžaduje receptor aktivovaný proteázou-3 v podocytoch. Blood, 119, 874-883.

Mitsui, S., Oe, Y., Sekimoto, A., Sato, E., Hashizume, Y., Yamakage, S., Kumakura, S., Sato, H., Ito, S. & Takahashi, N. ( 2020) Dvojitá blokáda proteázou aktivovaného receptora 1 a 2 aditívne zlepšuje diabetické ochorenie obličiek. Am. J. Physiol. Renal Physiol., 318, F1067-F1073.

Nakagawa, T., Sato, W., Glushakova, O., Heinig, M., Clarke, T., Campbell-Thompson, M., Yuzawa, Y., Atkinson, MA, Johnson, RJ & Croker, B. ( 2007) U diabetickej endotelovej syntázy oxidu dusnatého knockout myší sa vyvinula pokročilá diabetická nefropatia. J. Am. Soc. Nephrol., 18, 539-550.

Nakagawa, T., Tanabe, K., Croker, BP, Johnson, RJ, Grant, MB, Kosugi, T. & Li, Q. (2011) Endoteliálna dysfunkcia ako potenciálny prispievateľ k diabetickej nefropatii. Nat. Rev. Nephrol., 7, 36-44.

Nitta, K., Goto, S., Masakane, I., Hanafusa, N., Taniguchi, M., Hasegawa, T., Nakai, S., Wada, A., Hamano, T., Hoshino, J., Joki, N., Abe, M., Yamamoto, K. & Nakamoto, H.; výbor Japonskej spoločnosti pre dialyzačný register údajov o obličkách (2020) Výročná správa údajov o dialýze za rok 2018, register údajov o obličkách JSDT: metódy prieskumu, údaje zo zariadení, výskyt, prevalencia a úmrtnosť. Ren. Nahradiť. Ther., 6, 41.

Noiri, E., Satoh, H., Taguchi, J., Brodsky, SV, Nakao, A., Ogawa, Y., Nishijima, S., Yokomizo, T., Tokunaga, K. & Fujita, T. (2002 ) Asociácia polymorfizmu eNOS Glu298Asp s terminálnym štádiom ochorenia obličiek. Hypertenzia, 40, 535-540.

Nystedt, S., Ramakrishnan, V. & Sundelin, J. (1996) Proteázou aktivovaný receptor 2 je indukovaný zápalovými mediátormi v ľudských endotelových bunkách. Porovnanie s trombínovým receptorom. J. Biol. Chem., 271, 14910-14915.

Oe, Y., Fushima, T., Sato, E., Sekimoto, A., Kisu, K., Sato, H., Sugawara, J., Ito, S. & Takahashi, N. (2019) Aktivované proteázou receptor 2 chráni pred inhibítorom VEGF vyvolaným 8Y. Oe a kol. poškodenie glomerulárneho endotelu a podocytov. Sci. Rep., 9, 2986.

Oe, Y., Hayashi, S., Fushima, T., Sato, E., Kisu, K., Sato, H., Ito, S. & Takahashi, N. (2016) Koagulačný faktor Xa a receptor aktivovaný proteázou 2 ako nové terapeutické ciele pre diabetickú nefropatiu. Arterioskler. Thromb. Vasc. Biol., 36, 1525- 1533.

Ogurtsova, K., da Rocha Fernandes, JD, Huang, Y., Linnenkamp, ​​U., Guariguata, L., Cho, NH, Cavan, D., Shaw, JE & Makaroff, LE (2017) IDF Diabetes Atlas: Global odhady prevalencie cukrovky na roky 2015 a 2040. Diabetes Res. Clin. Pract., 128, 40-50.

Østerud, B. & Bjørklid, E. (2006) Zdroje tkanivového faktora. Semin. Thromb. Hemost., 32, 11-23.

Owens, AP, Passam, FH, Antoniak, S., Marshall, SM, McDaniel, AL, Rudel, L., Williams, JC, Hubbard, BK, Dutton, JA, Wang, J., Tobias, PS, Curtiss, LK , Daugherty, A., Kirchhofer, D., Luyendyk, JP, a kol. (2012) Aktivácia koagulácie závislá od monocytového tkanivového faktora u hypercholesterolemických myší a opíc je inhibovaná simvastatínom. J. Clin. Invest., 122, 558-568.

Pan, L., Ye, Y., Wo, M., Bao, D., Zhu, F., Cheng, M., Ni, X. & Fei, X. (2018) Klinický význam hemostatických parametrov v predikcii na diabetes mellitus 2. typu a diabetickú nefropatiu. Dis. Značky, 2018, 5214376.

Patel, MR, Mahaffey, KW, Garg, J., Pan, G., Singer, DE, Hacke, W., Breithardt, G., Halperin, JL, Hankey, GJ, Piccini, JP, Becker, RC, Nessel, CC, Paolini, JF, Berkowitz, SD, Fox, KA, a kol. (2011) Rivaroxaban versus warfarín pri nevalvulárnej fibrilácii predsiení. N. Engl. J. Med.,

365, 883-891. Pawlinski, R., Wang, JG, Owens, AP, Williams, J., Antoniak, S., Tencati, M., Luther, T., Rowley, JW, Low, EN, Weyrich, AS & Mackman, N. ( 2010) Hematopoetický a nehematopoetický bunkový tkanivový faktor aktivuje koagulačnú kaskádu u endotoxemických myší. Blood, 116, 806-814. Posma, JJ, Grover, SP, Hisada, Y., Owens, AP, Antoniak, S., Spronk, HM & Mackman, N. (2019) Roles of koagulation proteases and PARs (Protease-Activated Receptors) v myších modeloch zápalových choroby. Arterioskler. Thromb. Vasc. Biol., 39, 13-24.

Robertson, L., Kesteven, P. & McCaslin, JE (2015) Orálne priame inhibítory trombínu alebo perorálne inhibítory faktora Xa na liečbu hlbokej žilovej trombózy. Cochrane Database Syst. Rev.,

CD010956.

Rogero, MM & Calder, PC (2018) Obezita, zápal, toll-like receptor 4 a mastné kyseliny. Živiny, 10, 432.

Rothmeier, AS & Ruf, W. (2012) Signalizácia receptora 2 aktivovaného proteázou pri zápale. Semin. Imunopathol. , 34, 133-149.

Samad, F. & Ruf, W. (2013) Zápal, obezita a trombóza. Blood, 122, 3415-3422.

Shrestha, C., Ito, T., Kawahara, K., Shrestha, B., Yamakuchi, M., Hashiguchi, T. & Maruyama, I. (2013) Palmitát nasýtených mastných kyselín vyvoláva extracelulárne uvoľňovanie histónu H3: a možný mechanický základ zápalu a trombózy vyvolaného stravou s vysokým obsahom tukov. Biochem. Biophys. Res. Commun., 437, 573-578. Sörensen, I., Susnik, N., Inhester, T., Degen, JL, Melk, A., Haller,

H. & Schmitt, R. (2011) Fibrinogén, pôsobiaci ako mitogén pre tubulointersticiálne fibroblasty, podporuje renálnu fibrózu. Kidney Int., 80, 1035-1044.

Sumi, A., Yamanaka-Hanada, N., Bai, F., Makino, T., Mizukami, H. & Ono, T. (2011) Úlohy koagulačnej dráhy a faktora Xa v progresii diabetickej nefropatie u DB/ DB myši. Biol. Pharm. Bull., 34, 824-830.

Tanaka, M., Arai, H., Liu, N., Nogaki, F., Nomura, K., Kasuno, K., Oida, E., Kita, T. & Ono, T. (2005) Role of koagulation faktor Xa a proteázou aktivovaný receptor 2 v proliferácii ľudských mezangiálnych buniek. Kidney Int., 67, 2123-2133.

Tricoci, P., Huang, Z., Held, C., Moliterno, DJ, Armstrong, PW, Van de Werf, F., Biela, HD, Aylward, PE, Wallentin, L., Chen, E., Lokhnygina, Y., Pei, J., Leonardi, S., Rorick, TL, Kilian, AM, a kol. (2012) Antagonista trombínového receptora vorapaxar pri akútnych koronárnych syndrómoch. N. Engl. J. Med., 366, 20-33.

Vesey, DA, Cheung, CW, Kruger, WA, Poronnik, P., Gobe, G. & Johnson, DW (2005) Trombín stimuluje prozápalové a proliferatívne reakcie v primárnych kultúrach buniek ľudských proximálnych tubulov. Kidney Int., 67, 1315-1329.

Vesey, DA, Suen, JY, Seow, V., Lohman, RJ, Liu, L., Gobe, GC, Johnson, DW & Fairlie, DP (2013) PAR2-indukované zápalové reakcie v tubulárnom epiteli ľudských obličiek bunky. Am. J. Physiol. Renal Physiol., 304, F737-750.

Waasdorp, M., de Rooij, DM, Florquin, S., Duitman, J. & Spek, CA (2019) Receptor aktivovaný proteázou-1 prispieva k poškodeniu obličiek a intersticiálnej fibróze počas chronickej obštrukčnej nefropatie. J. Cell. Mol. Med., 23, 1268-1279.

Waasdorp, M., Duitman, J., Florquin, S. & Spek, CA (2016) Nedostatok receptora aktivovaného proteázou -1 chráni pred diabetickou nefropatiou vyvolanou streptozotocínom u myší. Sci. Rep., 6, 33030.

Waasdorp, M., Duitman, J., Florquin, S., Spek, CA & Spek, AC (2017) Proteázou aktivovaný receptor 2 pri diabetickej nefropatii: dvojsečný meč. Am. J. Transl. Res., 9, 4512-4520.

Walford, G. & Loscalzo, J. (2003) Oxid dusnatý vo vaskulárnej biológii.

J. Thromb. Haemost., 1, 2112-2118.

Wang, CH, Li, F., Hiller, S., Kim, HS, Maeda, N., Smithies, O. & Takahashi, N. (2011a) Mierny pokles endotelového NOS u myší porovnateľný s poklesom spojeným s ľudským NOS3 variant zhoršuje diabetickú nefropatiu. Proc. Natl. Akad.

Sci. USA, 108, 2070-2075.

Wang, H., Madhusudhan, T., He, T., Hummel, B., Schmidt, S., Vinnikov, IA, Shahzad, K., Kashif, M., Muller-Krebs, S., Schwenger, V. , Bierhaus, A., Rudofsky, G., Nawroth, PP & Isermann, B. (2011b) Nízka, ale trvalá aktivácia koagulácie zlepšuje glukózou indukovanú apoptózu podocytov: ochranný účinok faktora V Leiden pri diabetickej nefropatii. Blood, 117, 5231-5242.

Watanabe, M., Oe, Y., Sato, E., Sekimoto, A., Sato, H., Ito, S. & Takahashi, N. (2019) Proteázou aktivovaný receptor 2 exacerbuje nefrotoxicitu vyvolanú cisplatinou. Am. J. Physiol. Renal Physiol., 316, F654-F659.

Witkowski, M., Landmesser, U. & Rauch, U. (2016) Tkanivový faktor ako prepojenie medzi zápalom a koaguláciou. Trendy Cardiovasc. Med., 26, 297-303.

Zhang, J., Wang, Y., Zhang, R., Li, H., Han, Q., Wu, Y., Wang, S., Guo, R., Wang, T., Li, L. & Liu, F. (2018) Sérový fibrinogén predpovedá diabetickú ESRD u pacientov s diabetes mellitus 2. typu. Diabetes Res. Clin. Pract., 141, 1-9.

Zhang, Y., Xiao, HQ, Zeng, XT, Zuo, HX & Xu, YC (2015) Asociácie medzi polymorfizmami endotelovej syntázy oxidu dusnatého a rizikom diabetickej nefropatie: aktualizovaná metaanalýza. Ren. Zlyhanie, 37, 312-326.

Zhao, HJ, Wang, S., Cheng, H., Zhang, MZ, Takahashi, T., Fogo, AB, Breyer, MD & Harris, RC (2006) Nedostatok endotelovej syntázy oxidu dusnatého spôsobuje zrýchlenú nefropatiu u diabetických myší. J. Am. Soc. Nephrol., 17, 2664-2669.

Zhao, P., Metcalf, M. & Bunnett, NW (2014) Zaujatá signalizácia receptorov aktivovaných proteázou. Predné. Endocrinol. (Lausanne), 5, 67.