Echinakozid pôsobí protinádorovo pri rakovine pečene
Mar 31, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Wen Li*, Jing Zhou, Yajie Zhang, Jing Zhang, Xue Li, Qiao Yan, Jiabing Han a Fangdi Hu*
Abstraktné
Pozadie:Echinakozid (ECH) je hlavnou aktívnou zložkou Cistanches Herba, o ktorej je známe, že má terapeutické účinky na metastatické nádory. Účinky ECH na rakovinu pečene sú však stále nejasné. Táto štúdia mala preskúmať účinky ECH na agresiu buniek rakoviny pečene.
Metódy:Dva typy buniek rakoviny pečene Huh7 a HepG2 boli liečené rôznymi dávkami ECH v rôznych časoch a gradientoch. Na stanovenie účinkov ECH na životaschopnosť buniek Huh7 a HepG2 sa použili testy MTT a tvorby kolónií. Na detekciu účinkov liečby ECH na inváziu, migráciu, apoptózu a bunkový cyklus buniek Huh7 a HepG2 sa použili testy Transwell a testy prietokovej cytometrie. Analýza Western blot sa použila na detekciu účinkov ECH na hladiny expresie TGF- 1, smad3, smad7, proteínov súvisiacich s apoptózou (kaspáza{10}}, kaspáza{11}}) a Cyto C v bunkách rakoviny pečene. Vzťah medzi miR-503-3p a TGF- 1 bol detekovaný pomocou bioinformatickej analýzy a luciferázového reportérového testu.
Výsledky:Výsledky ukázali, že ECH inhibovala proliferáciu, inváziu a migráciu buniek Huh7 a HepG2 spôsobom závislým od dávky a času. Okrem toho sme zistili, že ECH spôsobila apoptózu buniek Huh7 a HepG2 blokovaním buniek v S fáze. Okrem toho sa zistilo, že expresia miR-503-3p je znížená v tkanivách nádoru pečene, ale liečba ECH zvýšila expresiu miR-503-3p v bunkách Huh7 a HepG2. Okrem toho sme zistili, že TGF{10}} bol identifikovaný ako potenciálny cieľ miR{11}}p. ECH podporila aktiváciu signálnej dráhy TGF- 1/Smad a zvýšila hladiny expresie Bax/Bcl-2. Okrem toho by ECH mohla spustiť uvoľňovanie mitochondriálneho Cyto C a spôsobiť reakciu stupňa kaspáz.
Závery:Táto štúdia dokazuje, že ECH vykazuje protinádorovú aktivitu prostredníctvom osi miR{0}}p/TGF{1}}/Smad pri rakovine pečene a poskytuje bezpečné a účinné protinádorové činidlo pri rakovine pečene.
Kľúčové slová: Echinakozid, rakovina pečene, apoptóza, MiR-503-3p, TGF- 1/smad
Cistanche je bezpečný a účinný protinádorový prostriedok na rakovinu pečene.
Úvod
Rakovina pečene je jedným z najčastejších zhubných nádorov s vysokou incidenciou a incidencia rakoviny pečene rýchlo rastie [1]. Hepatektómia je najlepší spôsob liečby rakoviny pečene u pacientov v počiatočných štádiách [2]. Väčšina pacientov má však po operácii recidívu a metastázy. Miera 5-ročného prežitia je len asi 3–5 percent [2]. Preto sú naliehavo potrebné nové terapeutické prístupy a činidlá.
V posledných rokoch sa vo vývoji liekov na rakovinu a výskume fytochemikálií začala venovať pozornosť etnofarmakológii [3, 4]. Veľký počet klinických a experimentálnych štúdií ukázal, že monoméry liečiv môžu inhibovať proliferáciu, metastázy buniek hepatocelulárneho karcinómu, indukovať apoptózu a diferenciáciu rakovinových buniek [5]. Cistanches Herba je rastlina patriaca do čeľade rastlín, ktorá je v Číne tradičnou medicínou a je známa ako "púštny ženšen" [6]. Cistanches Herba je bohatá na druhy chemických zložiek a výskumníci doma i v zahraničí z nej izolovali viac ako sto zlúčenín vrátane fenyletanolových glykozidov, lignanov, cykloalifatických terpénov, cukrov, aminokyselín atď. [7]. Echinakozid (ECH) je hlavnou zložkou Cistanches Herba a je tiež všeobecne považovaný za jeho hlavnú účinnú látku [6]. V posledných rokoch štúdie ukázali, že ECH môže byť novou možnosťou liečby agresívnych alebo široko metastatických nádorov [8]. Štúdie zistili, že ECH môže inhibovať rakovinu pankreasu, leukémiu, rakovinu žalúdka, rakovinu endometria a mnoho ďalších nádorov [9]. Neexistuje však žiadna správa o účinku ECH na progresiu rakoviny pečene.
MiRNA hrajú kľúčovú úlohu v post-transkripčnej regulácii génovej expresie (10). Rozsiahle štúdie ukázali, že miRNA úzko súvisia s rakovinou pečene [11] a roztrúsenou sklerózou. MiR-503-3p je novoobjavená miRNA, ktorá sa podieľa na proliferácii, migrácii a invázii nádorových buniek [12]. Jeho funkcia pri rakovine pečene je však nejasná. V súčasnosti je výskum miRNA downstream cieľových génov v relatívne zrelom štádiu, ale mnoho cieľových génových lokusov zostáva neobjavených. Pre tumorigenézu a vývoj je obzvlášť dôležitá dráha prenosu signálu TGF- 1/Smad3 [13]. Zistilo sa, že dráha TGF- 1/Smad3 bola aktivovaná v modeli hepatómu, čo naznačuje, že dráha TGF{10}}/Smad3 hrala významnú úlohu pri vzniku rakoviny pečene [14]. Vysoká expresia dráhy TGF- 1/Smad3 sa považuje za jeden z kľúčových dôvodov výskytu rakoviny pečene [15]. Aby sa ďalej preskúmal základný mechanizmus, ktorý sprostredkovával účinky ECH na rakovinu pečene, skúmala sa dráha miRNA/TGF- 1/Smad3.
V tejto štúdii sme hodnotili účinky ECH na progresiu buniek rakoviny pečene a zistili sme, že ECH má protinádorovú aktivitu prostredníctvom osi miR-503-3p/TGF- 1/Smad pri rakovine pečene, a poskytuje bezpečné a účinné protinádorové činidlo na rakovinu pečene.
cistanche tcmje protirakovinový.
Metódy a materiály
Materiály
Echinacoside (ECH) (purity>98 percent, monohydrát) bol získaný od Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co., Ltd (Xinjiang, Čína). Štruktúrny vzorec je znázornený na obr.
Bunková kultúra a transfekcia
Bunkové línie ľudskej rakoviny pečene Huh7 a HepG2 boli zakúpené od FENGHUISHENGWU (Hunan, Čína). Bunky sa kultivovali v médiu DMEM doplnenom 10 percentným fetálnym hovädzím sérom (FBS, Gibco, USA) pri 37 stupňoch v 5 percentnom C02 bunkovom inkubátore. MiR-503-3p mimic a miR-NC boli získané od Shanghai Gene Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, Čína). Všetky transfekcie sa uskutočnili s použitím činidla Lipofectamine 2000 (Invitrogen) podľa pokynov výrobcu. Po ďalších 24 až 48 hodinách sa transfekované bunky zhromaždili a spracovali na ďalšie štúdie.
Luciferázový reportérový test
Celková RNA sa extrahovala z buniek a TGF- sa amplifikoval pomocou primérov WT a MUT. Fragment TGF- 1 bol vložený do pGL3-Bashc luciferázového reportérového vektora s názvom TGF- -WT-Luc. Väzbová oblasť 1 a miR-503-3p bola mutagenizovaná za vzniku mutantného plazmidu označeného ako TGF- 1-Mut-Luc. TGF 1-WT-Luc a TGF- 1-Mut-Luc boli kotransfekované do buniek s miR-503-3p mimikom a pRLTK. Bunky sa odobrali 6 hodín po transfekcii. Na stanovenie luciferázovej aktivity sa použila súprava Dual-Luciferase Reporter Assay Kit (Promega, Madison, WI, USA).
Test bunkového rastu
Bunky Huh7 a HepG2 (2 x 105) sa umiestnili do 96-jamkových platní. Bunky sa potom ošetrili ECH počas 24, 36 a 48 hodín. Potom sa do každej jamky pridalo 10 ml roztoku MTT a bunky sa inkubovali počas 4 hodín. Potom sa do jamiek pridalo 150 ul DMSO. A absorbancia pri 570 nm bola meraná čítačkou ELISA (Aoweiya, Peking, Čína).
Tvorba kolónií
Z transfekovaných buniek bola pripravená jednobunková suspenzia a kultivovaná v inkubátore počas 7 dní. Po odstránení média sa bunky farbili Wrightovým farbivom počas 5 minút a potom sa farbili roztokom Giemsa farbiva a roztokom Sorensenovho fosfomolybdátového pufra (1: 9) počas 10 minút. Po premytí sa kolónie spočítali pod mikroskopom.
Transwell test
Testy migrácie a invázie sa uskutočňovali v komorách Transwell (Costar, Badhoevedorp, Te Nether lands) potiahnutých alebo bez Maribel (BD Biosciences) na hornom povrchu membrány {{0}} μm (veľkosť pórov). Na migračný test sa transfekované bunky Huh7 a HepG2 resuspendovali v 200 ul média DMEM bez séra a naočkovali sa do horných komôr. Na test invázie sa na membrány horných komôr vopred naniesol Matrigel (30 ug/jamka) a ďalšie kroky boli rovnaké ako pri migračnom teste. Po inkubácii 24 hodín boli bunky, ktoré migrovali alebo prenikli cez membránu na spodný povrch, fixované etanolom a zafarbené 0,2 percentnou kryštálovou violeťou. Nakoniec boli bunky pozorované a spočítané v piatich náhodných poliach pomocou mikroskopu.
Analýza bunkového cyklu
Bunky Huh7 a HepG2 sa naočkovali na 6-jamkové platne v hustote 1 x 10 5 buniek/ml. Bunky sa odobrali po ošetrení ECH počas 0, 24, 48 hodín. K bunkám sa potom pridal 1 ml ľadu vopred ochladeného 75 percentným etanolom, fixovaného na 20 stupňov počas 2 hodín. Potom sa k bunkám pridal roztok na farbenie PI a inkubovali sa v tme počas 15 minút. Bunkový cyklus sa potom analyzoval prietokovou cytometriou.
Apoptotická bunková analýza
Bunky boli nanesené na 6-jamkové platne v hustote 5 x 105 buniek/jamku. Po odbere sa bunky odstredili a pridalo sa 195 ul väzbového roztoku Annexin V-FITC, aby sa bunky resuspendovali. Ďalej sa pridalo 5 ul farbiaceho roztoku Annexin V-FITC a 10 ul propidium jodidu. Bunky sa inkubovali v tme a potom sa umiestnili do ľadového kúpeľa.
Cistanche chráni pečeň.
Kvantitatívna reverzná transkripčná PCR (qRT-PCR)
Celkové RNA boli extrahované činidlom TRIzol (Haigene, Haerbin, Čína). Na qRT-PCR sa použil systém PCR v reálnom čase Te viiA™ 7. RNA bola reverzne transkribovaná do cDNA pomocou súpravy BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit (Beyotime Institute of Biotechnology). U6 bol použitý ako endogénna kontrola [16]. Sekvencie primérov boli nasledovné:
miR-503-3p: dopredu: 5′-CTGATGGTTAAGAGAATGT-3′,
miR-503-3p: spätný chod: 5′-GTCCTTGGACATCCGGGCCG-3′,
U6: dopredu: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′,
U6: zadná strana: 5′-GATTACCCGTCGGCCATCGATC-3′.
Western blot analýza
Transfekované bunky sa zhromaždili a extrahovali sa celkové proteíny. Koncentrácie proteínov boli stanovené pomocou súpravy BCA Protein Assay Kit. Vzorky proteínov sa oddelili pomocou 10 percent SDS-PAGE a preniesli sa na polyvinylidénfluoridovú membránu. Membrána sa potom inkubovala s anti-TGF- 1 (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína), SMAD3 (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína), SMAD 7 (1:1000, Shifeng, Shanghai, Čína), Bcl{12}} (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína), Bax (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína), Cyto C (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína), kaspáza{ {19}} (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína), kaspáza{22}} (1:1000, Shifeng, Šanghaj, Čína) a anti{25}}aktínová protilátka (1:1000, Shifeng, Šanghaj) , Čína) cez noc. Membrána bola inkubovaná s anti-králičou sekundárnou protilátkou (1:1000, Shifeng, Shanghai, Čína) [17].
Štatistické metódy
Údaje boli prezentované ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou softvéru SPSS 13.0. Na porovnanie bol použitý študentský t-test. p-hodnota < 0.05="" sa="" považovala="" za="">
Výsledky
Účinok ECH na aktivitu a proliferáciu ľudských buniek rakoviny pečene
Aby sa preskúmal účinok ECH na funkciu ľudských buniek rakoviny pečene, vykonal sa test MTT a výsledky ukázali, že životaschopnosť buniek HepG2 (obr. 2a) a Huh7 (obr. 2b) sa postupne znižovala so zvyšujúcou sa dávkou a časom Liečba ECH v porovnaní s kontrolnou skupinou (p < 0.01).="" po="" 48-hodinovej="" expozícii="" ech="" bola="" životaschopnosť="" buniek="" najnižšia,="" preto="" sa="" na="" ďalší="" experiment="" vybrala="" 48-hodinová="" expozícia="" ech.="" výsledky="" testu="" tvorby="" kolónií="" ukázali,="" že="" počet="" kolónií="" buniek="" hepg2="" (obr.="" 2c)="" a="" huh7="" (obr.="" 2d)="" postupne="" klesal="" liečbou="" ech="" v="" závislosti="" od="" dávky="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" (p="">< 0).="" 0,01,="" p="">< 0,001).="" tieto="" výsledky="" naznačujú,="" že="" ech="" hrá="" dôležitú="" úlohu="" v="" bunkovej="" aktivite="" a="" proliferácii="">
Účinky ECH na migráciu a inváziu ľudských buniek rakoviny pečene
Na ďalšie skúmanie účinku ECH na funkciu ľudských buniek rakoviny pečene sa zistila migrácia a invázia buniek. Ako je znázornené na obr. 3a, b, v porovnaní so skupinou bez liečby ECH, migrácia a invázia buniek Huh7 a HepG2 boli po liečbe ECH významne znížené v závislosti od dávky (p<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
ECH regulovala distribúciu a apoptózu ľudských buniek rakoviny pečene
Aby sa preskúmal účinok ECH na apoptózu buniek rakoviny pečene, uskutočnila sa prietoková cytometria. Ako je znázornené na obr. 4a, v porovnaní s kontrolnou skupinou bolo percento buniek Huh7 a HepG2 vo fáze G0/G1 významne znížené po liečbe ECH v závislosti od dávky (p<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05), čo naznačuje, že ECH spôsobila zastavenie S fázy buniek Huh7 a HepG2. Navyše, so zvyšovaním dávky ECH sa rýchlosť apoptózy buniek Huh7 a HepG2 postupne zvyšovala v porovnaní s kontrolnou skupinou (obr. 4b, s.<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
Účinky ECH na dráhu TGF‑ 1/Smad
Je známe, že signálna dráha TGF{0}}/Smad sa dobre podieľa na apoptóze buniek. Aby sa preskúmal mechanizmus ECH-indukovanej apoptózy v bunkách HepG2. Zistila sa expresia signálnej dráhy TGF- 1/Smad. V porovnaní s kontrolnou skupinou sme zistili, že liečba ECH významne znížila hladiny expresie TGF- 1 a Smad3 na úrovni mRNA (obr. 5a) aj proteínu (obr. 5b) a významne zvýšila expresiu Smad7 spôsobom závislým od dávky na úrovni mRNA aj proteínu (str<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">
TGF‑1 bol priamym cieľom miR‑503‑3p
Okrem toho online predikčný nástroj Starbase v2. ukázali, že TGF- 1 bol potenciálnym cieľom miR-503-3p (obr. 6a). Výsledky testu luciferázového reportérového génu ukázali, že luciferázová aktivita buniek HepG2 a Huh7 kotransfekovaných miR-503-3p mimikom a TGF- 1-WT bola významne znížená, ale nie buniek kotransfekovaných miR{ {10}}p mimic a TGF- 1-MUT (obr. 6b, s<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">
Účinok ECH na aktivity cytochrómu C a kaspáz
Ako je znázornené na obr. 7a, v porovnaní s kontrolnou skupinou sme zistili, že liečba ECH vyvolala významný pokles hladín expresie Bcl-2 v závislosti od dávky (p<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">
Diskusia
Chirurgická resekcia je hlavnou liečebnou metódou u pacientov s rakovinou pečene a miera recidív a metastáz po resekcii pečene je vysoká [18, 19]. V tejto štúdii sme zistili, že ECH má určitý inhibičný účinok na nádory pečene a poskytuje bezpečný a účinný protinádorový prostriedok na rakovinu pečene. Klinická prax ukázala, že tradičná čínska medicína dokáže účinne zmierniť klinické symptómy pacientov s rakovinou pečene [20]. V prípade ECH štúdie ukázali, že ECH má antioxidačné, antidepresívne, protizápalové, antivírusové, protinádorové a antibakteriálne účinky [21, 22]. Pri kolorektálnom karcinóme môže ECH indukovať apoptózu nádorových buniek upreguláciou kaspázy-3 a štiepením enzýmov na opravu DNA, aby sa indukovala oxidácia DNA [23]. V tejto štúdii sme prvýkrát zistili, že ECH vykazuje protinádorovú aktivitu prostredníctvom osi miR 503-3p/TGF- 1/Smad pri rakovine pečene.
Medzibunkovú fázu bunkového cyklu eukaryotických buniek možno rozdeliť na G1, S a G2. Regulačné body bunkového cyklu v rôznych obdobiach sú regulované rôznymi regulačnými faktormi [24]. Táto štúdia zistila, že percento buniek Huh7 a HepG2 vo fáze G0/G1 a G2/M sa znížilo a percento buniek vo fáze S sa zvýšilo po ECH, čo naznačuje, že ECH spôsobila zastavenie fázy S Huh7 a HepG2 buniek. Nerovnováha apoptózy je jedným z hlavných mechanizmov ľudských nádorov. Uvádza sa, že protinádorové chemoterapeutické liečivá vo všeobecnosti indukujú apoptózu rakovinových buniek a kontrolujú progresiu rakoviny. V našej štúdii sme tiež zistili, že ECH môže indukovať apoptózu rakovinových buniek pečene spôsobom závislým od dávky, čo naznačuje, že indukcia apoptózy rakovinových buniek môže byť jedným zo základných mechanizmov ECH pri rakovine pečene.
MiRNA hrajú kľúčovú úlohu v regulácii proliferácie, cyklu, apoptózy, migrácie HCC buniek prostredníctvom interakcií s rôznymi signálnymi dráhami a molekulami [25, 26]. Napríklad sa zistilo, že miR-26a je vysoko exprimovaný v normálnych pečeňových bunkách, ale v bunkách rakoviny pečene je výrazne znížená a inhibuje proliferáciu [27]. Nadmerná expresia miR-503-3p indukuje apoptózu buniek rakoviny pľúc a inhibuje bunkovú inváziu a migráciu [28]. Okrem toho veľký počet štúdií ukázal, že signálna dráha TGF- 1/Smad hrá kľúčovú úlohu pri vzniku rakoviny pečene [7]. Okrem toho, keď rakovina pečene pokračuje v progresii, uvádza sa, že expresia TGF- 1 sa postupne zvyšuje [29]. V tejto štúdii sme zistili, že ECH down-reguloval TGF- 1 a Smad3 a up-reguloval Smad7, čo dokazuje, že ECH inhibuje aktiváciu TGF- 1/Smad signálnej dráhy. V tejto štúdii sme zistili, že sa zistilo, že expresia miR-503-3p je znížená v tkanivách nádoru pečene, ale liečba ECH zvýšila expresiu miR-503-3p v bunkách Huh7 a HepG2. Okrem toho sme zistili, že TGF- 1 bol identifikovaný ako potenciálny cieľ miR-503-3p. ECH podporila aktiváciu signálnej dráhy TGF- 1/Smad a zvýšila hladiny expresie Bax/Bcl-2. Tieto výsledky naznačujú, že signálna dráha miR-503-3p/ TGF- 1/Smad môže sprostredkovať účinky ECH na rakovinu pečene. Je známe, že zvýšený pomer Bax/Bcl-2 môže spôsobiť uvoľnenie Cyto C v mitochondriách do cytoplazmy. Cyto C interaguje s kaspázou{27}} a vytvára apoptotické telo, ktoré potom získava a aktivuje kaspázu{28}}, čo spôsobuje kaskádu kaspáz a podporuje bunkovú smrť [30]. V tejto štúdii sme zistili, že ECH znížila expresiu Bcl-2 a zvýšila expresiu Bax, Cyto C, kaspázy-8 a kaspázy-3. Tieto výsledky naznačujú, že ECH môže do určitej miery opraviť mitochondriálne poškodenie.
Záver V tejto štúdii sme zistili, že liečba ECH inhibovala proliferáciu, inváziu a migráciu a vyvolala apoptózu buniek rakoviny pečene. Zistilo sa, že základný mechanizmus liečby ECH na bunkách rakoviny pečene súvisí so signálnou dráhou miR-503-3p/TGF- 1/Smad. Táto štúdia poskytne určitý experimentálny základ pre výskum ECH na protinádorové účely. Stojí za zmienku, že táto štúdia je obmedzená nedostatkom pokusov na zvieratách. Naša budúca štúdia preto vykoná experimenty na zvieratách, aby sme ďalej potvrdili naše zistenia.
