Epigallokatechín-3-Gallát podporuje dozrievanie in vitro a vývoj embryí po IVF prasacích oocytov

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPre viac informácií

Účel:Epigalokatechín-3-galát (EGCG) je hlavnou zložkou katechínových polyfenolov a má ochranné účinky vďaka svojim silným antioxidačným vlastnostiam. Pokiaľ vieme, stále je nedostatok systematického výskumu účinkov EGCG na in vitro maturáciu (IVM) a in vitro fertilizáciu (IVF) prasacích oocytov. Cieľom tejto štúdie bolo určiť účinky EGCG na IVM a IVF oocytov ošípaných.

Metódy: Prasacie oocyty boli ošetrené rôznymi koncentráciami EGCG (5, 10 a 20 uM) a expanziou buniek kumulu, rýchlosťou dozrievania oocytov, reaktívnymi formami kyslíka (ROS). hladina glutatiónu (GSH) a malondialdehydu (MDA) bola stanovená celková antioxidačná kapacita. Hladiny expresie mRNA génov spojených s oxidačným stresom a apoptózou boli stanovené kvantitatívnou PCR v reálnom čase. Hodnotila sa aj rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocyst oocytov po liečbe 10 μM EGCG počas IVM a IVF. Výsledky: EGCG v 5, 10 a 20 uM významne podporovalo expanziu buniek kumulu a EGCG v 10 uM zvýšilo rýchlosť dozrievania oocytov. Liečba EGCG (10 uM) znížila hladiny ROS a MDA a zároveň zvýšila antioxidačnú kapacitu a koncentrácie GSH v zrelých oocytoch. Výsledky qRT-PCR ukázali, že liečba EGCG up-regulovala expresiu mRNA katalázy, glutatiónperoxidázy a superoxiddismutázy v zrelých oocytoch. Okrem toho liečba EGCG tiež znížila hladiny expresie mRNA Bax a kaspázy-3 a zvýšila úroveň expresie mRNA Bcl{15}} v zrelých oocytoch. Okrem toho rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocyst oocytov ošetrených 10 μM EGCG počas IVM a IVF boli významne vyššie ako v kontrolnej skupine.

Ak chcete vedieť viac, kliknite sem

Záver:Naše výsledky naznačujú, že EGCG podporuje in vitro dozrievanie a vývoj embryí po IVF oocytov ošípaných. Ochranné účinky EGCG na oocyty môžu byť spojené s jeho antioxidačnými a antiapoptóznymi vlastnosťami. Kľúčové slová: EGCG, prasacie oocyty, IVM, antioxidant, antiapoptóza, IVF

Úvod

Dozrievanie oocytov in vitro (IVM) je kľúčovým krokom v produkcii embryí in vitro pre hospodárske zvieratá.2 Oocyty z IVM majú schopnosť oplodnenia a vyvinú sa na embryá, zatiaľ čo úspešnosť vývoja embryí z oocytov IVM je nižšia Zrenie oocytov si vyžaduje cytoplazmatické aj jadrové dozrievanie a nesprávne cytoplazmatické dozrievanie prispieva k slabému vývojovému potenciálu IVM oocytov. Na základe predchádzajúcich štúdií je správne zloženie média a kultivačné podmienky nevyhnutné pre úspešnú IVM oocytov.4 Epigalokatechín-3-galát (EGCG) je jednou z hlavných bioaktívnych zlúčenín v zelenom čaji a patrí medzi katechínové polyfenoly.5 EGCG má je dobre známy svojou úlohou pri chelátovaní prechodných kovov a tým znižovaní úrovne oxidačného stresu.5 Experimentálne štúdie in vitro a in vivo ukázali, že EGCG má rôzne biologické funkcie vrátane prevencie chromozomálneho poškodenia reaktívnymi formami kyslíka (ROS), antibakteriálnych aktivity, protinádorové aktivity a inhibícia lipogenézy. V IVM oocytoch Huang et al ukázali, že EGCG v IVM médiu môže znížiť hladinu ROS a apoptózu v oocytoch hovädzieho dobytka a zvýšiť expanziu buniek kumulu. Roth a kol. ukázali, že intraperitoneálna injekcia antioxidantu EGCG zlepšuje vývojovú kompetenciu a kvalitu embryí, ktoré sa vyvíjajú z oocytov ošetrených hypertermiou u myší. Gadani a kol. ukázali, že suplementácia EGCG do rozmrazených kančích spermií zlepšila oplodnenie in vitro (IVF).8. Nedávna štúdia Bucciho et al však preukázala, že suplementácia EGCG do rozmrazovacieho média nedokázala zlepšiť kvalitu psích spermií alebo kapacitu viazania zón.10 Pokiaľ vieme, stále je nedostatok systematického výskumu účinkov EGCG na IVM a IVF oocytov ošípaných. Je potrebné preskúmať, či sa EGCGcan používa ako účinný antioxidant pre prasacie oocyty kultivované in vitro. Systematicky sa skúmali účinky EGCGon na IVM a IVF oocytov ošípaných. Okrem toho sa pomocou in vitro testov stanovila hladina ROS, antioxidačná kapacita, hladiny expresie mRNA génu spojeného s antioxidantom a apoptózou v oocytoch.

Cistanche môže zlepšiť imunitu

Materiály a metódy Etické vyhlásenie

Túto prácu schválila Etická komisia pre experimentovanie na zvieratách Juhočínskej poľnohospodárskej univerzity.

Liečba EGCG

EGCG zlúčenina bola zakúpená od Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) a bola pripravená ako 1 mM zásobná koncentrácia s použitím M-199 média (Sigma-Aldrich). Na určenie vplyvu EGCG na index expanzie kumulu a rýchlosť dozrievania oocytov in vitro a produkciu ROS oocytov, rôzne koncentrácie EGCG (0,5, 1{{10}) } a 2 0 uM) boli doplnené do IVM média (M-199 médium doplnené 10 percentami fetálneho hovädzieho séra, 10 percent prasacej folikulárnej tekutiny, 0,57 mM cysteínu, 10 ng/ml epidermálneho rastového faktora, 10 IU/ml sérového gonadotropínu gravidných kobýl a 10 IU/ml ľudského choriogonadotropínu). Na stanovenie účinkov EGCG na celkovú antioxidačnú kapacitu, obsah glutatiónu (GSH), hladinu malondialdehydu (MDA) a hladiny expresie mRNA sa do IVM média pridalo EGCG (0 a 10 uM). Na stanovenie účinkov EGCG na vývojový potenciál oocytov sa EGCG (0 a 10 μM) doplnilo počas IVM a/alebo IVF alebo počas IVM a/alebo IVC.

Odber oocytov a dozrievanie in vitro

Vaječníky boli získané z mladých ošípaných zabitých na miestnom bitúnku (Guangzhou Kongwangji Slaughterhouse, Guangzhou, Čína) a prenesené do laboratória v 0,9 percentnom fyziologickom roztoku pri teplote 37 stupňov do 2 hodín. Folikulárna tekutina z 3-8 mm antrálnych folikulov sa odsala injekčnou striekačkou s pripojenou 18- ihlou. Ako už bolo opísané, približne 50 komplexov cumulus-oocyte (COC) sa kultivovalo v 500 ul (IVM) média, prekrylo sa minerálnym olejom a kultivovalo sa 44 hodín pri 38,5 stupňoch v inkubátore s 5 % CO2 so zvlhčeným vzduchom.

Hodnotenie expanzie cumulus a IVM oocytov

Expanzia kumulu bola zaznamenaná po 44 hodinách IVM. Hodnotenie bolo zaslepené, aby sa eliminovala zaujatosť. Stupeň expanzie kumulu pre každú COC bol hodnotený podľa subjektívneho bodovacieho systému na stupnici O-4, kde 0 označuje žiadnu expanziu, 1 označuje minimálnu pozorovateľnú expanziu, 2 označuje expanziu vonkajšie vrstvy buniek cumulus, 3 znamená rozšírenie všetkých vrstiev buniek cumulus okrem corona radiata a číslo 4 znamená úplné rozšírenie všetkých vrstiev buniek cumulus.12 Priemerné skóre (0.0-4.{{10 }}) pre každú skupinu, v každom replikáte (4-6 replikátov), ​​sa potom vypočítala, aby sa získala hodnota označovaná ako index expanzie kumulu. Extrúzia prvého polárneho telieska v oocytoch bola stanovená pod svetelným mikroskopom. Oocyty boli klasifikované nasledovne: nezrelé (nedosiahli metafázu), zrelé (prezentovaná metafáza I platničky a polárne telo) a abnormálne (akékoľvek chromozomálne aberácie, ako je diploidná, abnormálna metafáza I, viacsmerné vreteno a chromozomálna disperzia). Rýchlosť dozrievania oocytov sa vypočítala nasledovne: počet zrelých oocytov/celkový počet vyšetrených oocytov x 100 percent.

Stanovenie hladín ROS

Na stanovenie intracelulárneho obsahu ROS sa 30 zrelých oocytov inkubovalo 20 minút pri 38,5 stupňoch C vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS) s obsahom 10 uM fluorescenčnej sondy 2',7'-dichlórfluoresceín diacetátu (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Čína) v tme . Oocyty sa potom premyli PBS doplneným 1 percentom hovädzieho sérového albumínu. Obrázky boli zachytené systémom konfokálnej mikroskopie (X71, Olympus, Japonsko) s rovnakými nastaveniami skenovania medzi skupinami. Intenzita fluorescencie sa vypočítala pomocou softvéru Image.J.

Test celkovej antioxidačnej kapacity

Celková antioxidačná kapacita v oocytoch sa analyzovala pomocou súpravy Total Antioxidant Capacity Assay Kit metódou ABTS (Beyotime, Peking, Čína) podľa protokolu výrobcu. Test ABTS meria celkovú antioxidačnú kapacitu vzorky a je založený na radikálovom zafarbení ABTS· plus. Katiónový radikál ABTS· plus je chromofor, ktorý absorbuje pri vlnovej dĺžke 734 nm a vzniká oxidačnou reakciou ABTS(2,2'-a-bis-(3-etylbenztiazolínu-6-) sulfonát amónny) s persíranom draselným.13

Kvantifikácia obsahu GSH

Obsah GSH bol meraný pomocou súpravy Total Glutathion Assay Kit (S0053, Beyotime, Peking, Čína) podľa pokynov výrobcu. Táto súprava využíva kinetickú enzymatickú recykláciu založenú na oxidácii GSH 5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzoovou kyselinou),[DTNB] na meranie celkového obsahu glutatiónu (tGSH) v biologických vzorkách. Do jamiek mikrotitračnej platne sa pridajú glutatiónové štandardy alebo upravené vzorky, po ktorých nasleduje DTNB a glutatiónreduktáza. Pridanie NADPH2 do jamiek iniciuje progresívnu redukciu DTNB pomocou GSH, čo spôsobuje zvýšenie farby, ktoré sa monitoruje pri 405 nm. Stručne, vzorky sa naočkovali do 96-jamkových doštičiek a potom sa do každej jamky pridalo 150 ul detekčného roztoku. Po ekvilibrácii vzoriek pri teplote miestnosti počas 5 minút sa pridalo 50 ul roztoku -0,16 mg/ml NADPH. Obsah GSH bol stanovený vydelením nameranej hodnoty kyseliny 5-tio-2-nitrobenzoovej počtom oocytov v každej vzorke.

Kvantifikácia hladiny malondialdehydu (MDA).

Hladina MDA v oocytoch sa analyzovala pomocou testovacej súpravy MDA (Beyotime) podľa protokolu výrobcu MDA reaguje s kyselinou tiobarbiturovou (TBA) za vzniku červenej zlúčeniny, ktorá má maximálnu absorbanciu pri 532 nm. Činidlo TBA sa pripravilo zmiešaním 0,2 ml SDS (8,1 percenta), 1,5 ml kyseliny octovej (20 percentá, pH =3,5) a 1,5 ml TBA (0,8 percenta) spolu, potom sa 100 ul každej homogenizovanej vzorky oocytov zmiešalo s týmto 200 ul TBA činidla. Zmes sa inkubovala vo vriacom vodnom kúpeli počas 15 minút a potom sa ochladila na ľade. Po ochladení sa zmes centrifugovala pri 4000 ot./min. počas 10 minút. Absorbancia supernatantu bola stanovená pri 532 nm oproti slepému pokusu.

Oplodnenie in vitro a kultivácia embryí Experiment IVF sa uskutočnil tak, ako bolo uvedené vyššie.14 Stručne, oocyty odobraté z miestneho bitúnku sa kultivovali 44 hodín a obnažili sa v 1 mg/ml hyaluronidáze v DPBS mechanickým pipetovaním; potom sa 10-15 oocyty zoskupili a preniesli do 50 μl TBM oplodňovacieho média (113,1 mM NaCl,3.0mM KCl, 7,5 mMCaCl2:2H20.2{{18} }.{{20}} mM Tris, 11,0 mM glukózy, 5,0 mM pyruvátu sodného) obsahujúceho 2,5 mM kofeínu a 2 mg/ml BSA (frakcia V) potiahnuté minerálnym olejom. Čerstvé spermie (od ošípanej Duroc vo veku ~ 12 mesiacov s históriou viacnásobného chovu) poskytnuté spoločnosťou Guangxi Yangxiang Company Co. Ltd (Guangxi, Čína) sa trikrát premylo odstredením s DPBS doplneným 0,1 percenta BSA pri 1500 ot./min. na 4 min. Pelety spermií boli resuspendované a zriedené na 1 x 10 stupňov spermií/ml s TBM na kapacitáciu v CO2 inkubátore počas 30 minút. Potom boli kapacitované spermie pridané do oocytov obsahujúcich kvapky s konečnou koncentráciou spermií 1 x 10 spermií/ml a spoločne inkubované počas 6 hodín pri 39 stupňoch v atmosfére 5 percent CO2 vo vzduchu. Po oplodnení sa oocyty 3-krát premyli médiom PZM3 a kultivovali sa s médiom PZM3 pri 39 °C, 5 percent O2, 5 percent C02 a 90 percent N2; a 100 percent vlhkosti. Embryonálne štiepenie a tvorba blastocyst sa hodnotili 48 hodín a 6 dní po inseminácii. Vzorce na hodnotenie rýchlosti štiepenia a blastocyst boli nasledujúce: rýchlosť štiepenia=počet štiepení/počet zrelých oocytov; počet blastocyst=počet blastocyst/počet zrelých oocytov.

Kvantitatívna PCR v reálnom čase (qRTPCR) Celková RNA sa extrahovala z zrelých oocytov pomocou činidla Trizol (Invitrogen, USA) a kvantifikovala sa meraním absorbancie pri 260 nm. RNA bola reverzne transkribovaná do cDNA pomocou súpravy HiScript"III-RT SuperMix (Vazyme, Nanjing, Čína). PCR v reálnom čase sa uskutočnila na tepelnom cykléri qTOWER³(Analytik Jena, Nemecko) s použitím súpravy ChamQrM Universal SYBR" qPCR Master Mix (Vazyme). Hladiny expresie mRNA detegovaných génov sa normalizovali pomocou GAPDH a vypočítali sa použitím 2-AAc metódy. Sekvencie primérov boli uvedené v doplnkovej tabuľke S1.

Štatistická analýza

Všetky analýzy údajov sa uskutočnili pomocou štatistického softvéru R (verzia 3.6.3). Všetky údaje boli prezentované ako priemer ± štandardná odchýlka. Významné rozdiely medzi rôznymi liečebnými skupinami boli hodnotené pomocou permutačných testov. P<0.05 was="" considered="" statistically="">

Výsledky

Účinky EGCG na index expanzie kumulu

Morfológia zrelých oocytov a oocytov s prvou extrúziou polárneho tela, ako je znázornené na doplnkovom obrázku S1A a S1B. Najprv sme skúmali index expanzie kumulu v oocytoch po ošetrení rôznymi koncentráciami EGCG a ako je uvedené v tabuľke 1, EGCG pri 5 a 1 0 μM významne zvýšilo index expanzie kumulu v porovnaní s kontrolnou skupinou （5 μM skupina oproti 0μM skupine∶ 2,989 ±0.068 oproti 2,438±0.081;10 μM skupina oproti {{30}} μM skupina: 3,079±0,110 oproti 2,438±0,081). Avšak EGCG pri 20 μM nemalo žiadny vplyv na index expanzie kumulu v porovnaní s kontrolnou skupinou (20 μM skupina verzus 0 μM skupina ∶2,879±0,076 verzus 2,438±0,081）.

Účinky EGCG na rýchlosť IVM oocytov

Ďalej sa stanovili účinky EGCG na rýchlosť dozrievania oocytov in vitro. Ako je uvedené v tabuľke 2, rýchlosť dozrievania oocytov bola vyššia v skupine s 5 a 20μM v porovnaní s kontrolnou skupinou s 0μM EGCG; pričom rozdiel nebol štatisticky významný (tabuľka 2). Na druhej strane liečba 10 uM EGCG významne zvýšila rýchlosť dozrievania oocytov v porovnaní s kontrolnou skupinou 0 μM EGCG (10 μM skupina verzus 0 μM skupina ∶58,63 ± 2,79 percenta verzus 46,27 ± 3,25 percenta; P<>

Účinky EGCG na oxidačný stres oocytov

Produkcia ROS oocytov ošetrených EGCG bola stanovená testom produkcie ROS. Reprezentatívne obrazy fluorescenčných signálov ROS v oocytoch po ošetrení rôznymi koncentráciami EGCG sú znázornené na obrázku 1A. Kvantifikácia imunofluorescenčného farbenia ukázala, že EGCG pri 5 μM neovplyvnilo produkciu ROS v oocytoch v porovnaní s 0 μM kontrolnou skupinou （obrázok 1B）.EGCG pri 10 a 20 uM významne znížili hladiny ROS oocytov v porovnaní s kontrolnou skupinou s 0 uM EGCG (obrázok 1B).

Keďže EGCG v koncentrácii 1 0 μM by mohlo zvýšiť index expanzie kumulu a rýchlosť dozrievania oocytov a tiež znížiť hladinu ROS v oocytoch, pre nasledujúce štúdie sa vybralo EGCG v koncentrácii 10 μM. Ako je znázornené na obrázku 1C, EGCG pri 10 uM významne zvýšilo antioxidačnú kapacitu oocytov v porovnaní s kontrolnou skupinou s 0 uM (obrázok 1C). Okrem toho sa hladina glutatiónu zvýšila, zatiaľ čo hladina MDA sa znížila v oocytoch ošetrených 10 uM EGCG (obrázok 1D a E).

Okrem toho sa uskutočnila qRT-PCR na stanovenie hladín expresie mRNA génov súvisiacich s oxidačným stresom vrátane katalázy (CAT), glutatiónperoxidázy （GPx） a superoxiddismutázy （SOD）.EGCG pri 10 μM významne up-regulovali hladiny expresie mRNA CAT, GPx a SOD v porovnaní s kontrolnou skupinou 0 uM (obrázok 2A-C).

Účinky EGCG na hladiny expresie mRNA génov súvisiacich s apoptózou v oocytoch

Uskutočnila sa qRT-PCR na stanovenie hladín expresie mRNA génov súvisiacich s apoptózou vrátane

Obrázok I Účinky EGCG na oxidačný stres v zrelých prasacích oocytoch. (A) Reprezentatívne obrazy fluorescenčných signálov ROS v oocytoch po ošetrení rôznymi koncentráciami EGCG. (B) Účinky EGCG na produkciu ROS oocytov. Účinky EGCG na antioxidačnú kapacitu (C), koncentráciu glutatiónu (D) a koncentráciu MDA (E) v zrelých oocytoch boli stanovené príslušnými in vitro testami. N=3; významné rozdiely boli označené ako *P<>

Bax, Bcl-2 a caspase-3. EGCG v koncentrácii 10 μM významne znížilo hladiny expresie mRNA Bax a kaspázy-3 a zvýšilo hladinu expresie mRNA Bcl-2 v porovnaní s kontrolnou skupinou OμM（obrázok 3A-C）. Účinky EGCG používaného počas IVM a IVF na vývojový potenciál oocytov

Reprezentatívne obrázky pre embryá a blastocysty boli zobrazené na doplnkovom obrázku SIC-S1E. VAJEC

liečba počas IVF významne zvýšila rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocyst v porovnaní s kontrolnou skupinou (tabuľka 3). Liečba EGCG počas IVM významne zvýšila rýchlosť blastocyst, ale nie rýchlosť štiepenia v porovnaní s kontrolnou skupinou (tabuľka 3). Okrem toho liečba EGCG počas IVM aj IVC významne zvýšila rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocýst v porovnaní s ostatnými tromi skupinami (tabuľka 3). Tieto výsledky ukázali, že EGCG počas IVM a IVF by mohlo podporiť vývojový potenciál oocytov.

Účinky EGCG používaného počas IVM a VC na vývojový potenciál oocytov

Liečba EGCG počas IVC významne znížila rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocyst oocytov v porovnaní so skupinou bez liečby EGCG (tabuľka 4). Na druhej strane liečba EGCG počas IVM významne zvýšila rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocýst oocytov v porovnaní so skupinou bez liečby EGCG (tabuľka 4). Liečba EGCG počas IVM a IVC významne znížila rýchlosť štiepenia a rýchlosť blastocyst oocytov v porovnaní so skupinou bez liečby EGCG a skupinou s liečbou EGCG počas IVM (tabuľka 4). Súhrnne tieto výsledky ukázali, že liečba EGCG počas IVM zvýšila potenciál vývoja oocytov, zatiaľ čo liečba EGCG počas IVC oslabila potenciál vývoja oocytov.

Diskusia

The IVM technique for the COC has been developed and applied to produce offspring in mammals including pigs, however, the rate of blastocytes formation following IVF is still low using IVM oocytes compared with that of in vivo-matured oocytes such as pigs. In pigs, the COCs are usually collected from medium size antral follicles(>3 mm priemer), kde oocyt má schopnosť vyvolať dozrievanie oocytov, zatiaľ čo folikulárne somatické bunky nezískajú schopnosť reagovať na ovulačné stimuly. Okrem toho prostredia in vitro zvyčajne zvyšujú bunkovú produkciu ROS, ktorá sa považuje za hlavnú príčinu poškodenia buniek.15 Preto je optimalizácia kultivačných podmienok na napodobňovanie prostredia in vivo nevyhnutná pre normálny rast a dozrievanie oocytov. V tejto štúdii sa do kultivačného média IVM, IVF a IVC pridali rôzne koncentrácie EGCG, aby sa

sledovať kvalitu dozrievania oocytov. EGCG pri 10 uM významne zlepšuje IVM oocytov ošípaných. V tejto štúdii má suplementácia EGCG počas IVF a IVC dva rôzne účinky. Suplementácia 10 uM EGCG počas IVF môže podporiť rýchlosť štiepenia oocytov, čo bolo v súlade so zisteniami Spinaciho a kol., ktoré ukazujú, že suplementácia 10 uM EGCG počas IVF, ale nie IVM, významne zvýšila mieru oplodnenia. EGCG počas IVF môže byť spôsobené jeho pôsobením na spermie, nie na oocyt.

V procese kultivácie in vitro sú oocyty a embryá nevyhnutne vystavené svetlu a vyššej koncentrácii kyslíka ako in vivo, čo môže viesť k zvýšenej produkcii RO (superoxidový anión, peroxid vodíka a vysoko reaktívny hydroxyl). Veľký počet štúdií ukázal, že suplementácia antioxidantov do IVM média môže zlepšiť vývojovú schopnosť embrya. Zistilo sa, že EGCG pôsobí ako antioxidant zmierňuješkodlivéúčinky materskej hypertermie na folikulom uzavreté oocyty u myší.'Barberino et al preukázali, že EGCG zoslabuje apoptózu preantrálnych folikulov prostredníctvom signálnej dráhy fosfatidylinozitol-3-kinázy/proteínkinázy B po in vitro kultivácii tkaniva vaječníkov oviec.“ Huang et al navrhli, že 50 μM EGCG môže zlepšiť dozrievanie oocytov hovädzieho dobytka a ochranná úloha EGCG môže korelovať s jeho antioxidačnými vlastnosťami.6 V kombinácii s predchádzajúcimi štúdiami naše výsledky ukázali, že účinky EGCG na IVM oocytov ošípaných môžu súvisí s antioxidačným a antiapoptóznym účinkom, ktorý sa ďalej skúmal v tejto štúdii.

Nadmerná akumulácia ROS môže viesť k oxidačnému stresu a naše výsledky ukázali, že EGCG môže zvýšiť celkovú antioxidačnú kapacitu a znížiť hladinu ROS a MDA v prasacích oocytoch. To môže byť spôsobené tým, že EGCG môže priamo eliminovať ROS a/alebo EGCG môže pôsobiť synergicky s antioxidačným systémom. Neenzymatické systémy sa spoliehajú na molekuly, aby priamo uhasili ROS, zatiaľ čo enzymatické systémy sa skladajú zo špecifických enzýmov, ktoré detoxikujú ROS. V druhom prípade je rodina SOD dôležitá pri regulácii oxidačného stresu. SOD je jediný známy enzým, ktorý priamo zachytáva voľné radikály tým, že katalyzuje dismutáciu superoxidového aniónu na peroxid vodíka. Enzým SOD reguluje hladiny superoxidu a peroxidu vodíka produkovaného bunkami a potom reguluje prenos bunkového signálu.1 Kataláza je dôležitý antioxidant a markerenzýmperoxizómov. Tvorí 40 percent celkových peroxizómových enzýmov. Je to antioxidačný oligomér-použitie so štyrmi identickými podjednotkami usporiadanými do štvorstenov a je dôležitým enzýmom, ktorý chráni bunky pred oxidačným poškodením ROS.20 Glutatión je tripeptid zložený z kyseliny glutámovej, cysteínu a glycínu obsahujúci Y-amidové väzby a sulfhydrylové skupiny. Dokáže udržiavať normálnu funkciu imunitného systému a má antioxidačný účinok. Glutatiónperoxidáza (GPXs) kombinuje oxidáciu GSH s H, O, detoxikáciou.21 Štúdie ukázali, že tepelný stres môže spôsobiť oxidačný stres v bubalínových oocytoch, ktorý spúšťa elimináciu ROS obranným systémom antioxidačných enzýmov.22 Naše štúdie konzistentne ukázali, že EGCG znižuje hladina ROS a obsah MDA v oocytoch, pričom sa zvyšuje intracelulárny obsah GSH a celkantioxidantkapacita.

Theapoptózaproces môže ovplyvniť kvalitu a mieru prežitiaoocytya tým ovplyvňujú embryonálny vývoj.23 Proteíny rodiny Bcl{1}} hrajú kľúčovú úlohu pri regulácii bunkovej smrti prostredníctvom vyváženej interakcie medzi proapoptotickými a antiapoptotickými proteínovými členmi.24 Proapoptotický proteín Bax je jadrom cicavčích mitochondriálne závislá apoptóza. Kaspáza-3 tiež hrá nezastupiteľnú úlohu pri apoptóze buniek. Kaspáza-3 je najdôležitejší terminálny zostrihový enzým v procese bunkovej apoptózy a aktivovaná kaspáza-3 je kľúčovým spúšťačom bunkovej apoptózy. Naše výsledky ukazujú, že EGCG zvýšilo hladinu expresie Bcl-2 mRNA, ale znížilo hladiny expresie mRNA Bax a kaspázy{12}}. Súhrnne tieto výsledky naznačujú, že antioxidačné a antiapoptotické účinky EGCG v oocytoch ošípaných do značnej miery súvisia s reguláciou SOD1, CAT a GPX, ako aj s génmi súvisiacimi s apoptózou.

Tento článok je prevzatý z Drug Design, Development, and Therapy