Kaempferol zmierňuje poškodenie LD-mitochondrií podporou autofágie: Dôsledky pri Parkinsonovej chorobe, časť 1

Prosím kontaktujteoscar.xiao@wecistanche.comPre viac informácií

Abstrakt:Nové dôkazy naznačujú, že neočakávané ukladanie a peroxidácia lipidových kvapiek (LD) môže urýchliť stres organel a zohráva kľúčovú úlohu v patogenéze neurodegeneratívnych ochorení (NDD). V našej predchádzajúcej štúdii sme potvrdili, že kaempferol (Ka), prírodný flavonoid s malou molekulou , vykazovali neuroprotektívne účinky na myši s LPS-indukovanou Parkinsonovou chorobou (PD). Predchádzajúce štúdie navyše ukázali, že autofágia hrá dôležitú úlohu pri regulácii bunkového ukladania LD. V súčasnej štúdii sme ukázali, že Ka chráni pred TH plus stratou neurónov a behaviorálnymi deficitmi u MPTP/p-indukovaných PD myší, sprevádzaných zníženým lipidovým oxidačným stresom v substantia nigra pars compacta (SNpc). V kultivovaných neurónových bunkách Ka vykazoval relatívne bezpečný koncentračný rozsah a významne potlačili akumuláciu LD a bunkovú apoptózu indukovanú MPP plus. Ďalšia štúdia ukázala, že ochranný účinok Ka bol závislý od autofágie, konkrétne od lipofágie. Je kritické, že Ka podporoval autofágiu, aby sprostredkoval degradáciu LD v lyzozómoch, čo potom zmiernilo ukladanie lipidov a peroxidáciu a výsledné mitochondriálne poškodenie, čím sa znížila smrť neurónov. Okrem toho knockdown Atg5 sprostredkovaný AAV-shAtg{3}} zrušil neuroprotektívne účinky Ka proti oxidácii lipidov u myší s PD. Táto práca ukazuje, že Ka zabraňuje dopamínergickej neuronálnej degenerácii v PD prostredníctvom inhibície mitochondriálneho poškodenia sprostredkovaného peroxidáciou lipidov podporou autofágie pier a poskytuje potenciálnu novú terapeutickú stratégiu pre PD a súvisiace NDD.

Ak chcete vedieť viac, kliknite sem

1. Úvod

Parkinsonova choroba (PD) je bežné neurodegeneratívne ochorenie (NDD), ktoré je patologicky charakterizované progresívnou stratou dopaminergných (DA) neurónov v substantia nigra pars compacta (SNpc)[]. Aj keď presná etiológia a prirodzený priebeh tohto ochorenia musia byť ešte úplne objasnené, na patogenéze PD sa podieľajú mnohé procesy a dysfunkcie na systémovej úrovni, vrátane mitochondriálnych funkcií, homeostázy dopamínu, neurozápalu a autofágie [1, 2]. Nedávne správy odhalili, že lipotoxicita súvisiaca s lipidovými kvapôčkami (LD) sa môže podieľať na patológii PD [3,4]. LD sú vysoko dynamické organely, ktoré vychádzajú z membrány endoplazmatického retikula (ER) a normálne slúžia ako intracelulárne miesta ukladania neutrálnych lipidov [5]. Nedávno sa ukázalo, že LD hrajú oveľa širšiu úlohu ako ukladanie mastných kyselín (FA) a podieľajú sa na mnohých ochoreniach. Napríklad myeloidné bunky vrátane makrofágov, leukocytov a eozinofilov tvoria LD ako odpoveď na zápal a stres a LD sú miestami produkcie a skladovania zápalových cytokínov a ďalej sa podieľajú na prezentácii antigénu a odstraňovaní patogénov [6]. Dôležité je, že pri ateroskleróze sa ukázalo, že penové bunky bohaté na LD sú škodlivé vo všetkých štádiách ochorenia [7].

Cistanche môže pomôcť zlepšiť imunitu

LD však neboli rozsiahle študované v centrálnom nervovom systéme (CNS), pričom len málo prác uvádza histologickú prítomnosť LD v ľudskom mozgovom tkanive [8,9]. Napriek tomu môžu mať LD dôležité funkcie v mozgu, pretože nedávne štúdie potvrdili, že agregované LD v gliách urýchľovali neurodegeneráciu v modeli Drosophila [10]. Nedávno bolo hlásené, že u myší boli bunky plné lipidov s pozitívnymi O-pozitívnymi lipidmi vrátane neurónov, gliálneho fibrilárneho kyslého proteínu (GFAP) plus astrocytov a ionizovanej molekuly adaptéra viažuceho vápnik-1 (IBA-1 ) mikroglie, sú prítomné v mnohých oblastiach mozgu a ukázalo sa, že sa podieľajú na procesoch súvisiacich s vekom [11]. Naša predchádzajúca práca tiež preukázala zvýšenú akumuláciu LD v mozgu v modeli PD myší [12]. Celkovo tieto štúdie naznačujú, že LD sa môžu podieľať na patogenéze PD, ako aj iných NDD.

Normálne sú intracelulárne LD degradované v lyzozómoch a dodávajú FA do mitochondrií na ich spotrebu ako alternatívny zdroj energie počas období vyčerpania živín [13]. Neuróny však majú nízku kapacitu spotreby mitochondriálnych FA na produkciu energie [14]. Táto charakteristika robí neuróny obzvlášť citlivými na akumuláciu LD a peroxidáciu. Okrem toho akumulácia LD zvyšuje rýchlosť oxidácie FA a vytvára trvalý tlak na mitochondriálny transportný reťazec elektrónov, čo zvyšuje produkciu reaktívnych foriem kyslíka (ROS) komplexmi elektrónového transportného reťazca I a II[15], aby sa zosilnil oxidačný stres. Preťaženie lipidmi tiež vedie k produkcii ROS extramitochondriálnymi zdrojmi, ako sú nikotínamid adenín dinukleotid fosfát (NADPH) oxidázy a iné oxidačné enzýmy. V kombinácii so zníženou expresiou antioxidačných enzýmov a nízkou kapacitou spotreby FA v neurónoch sprostredkúva akumulácia LD oxidačný stres a môže ďalej viesť k poškodeniu mitochondrií, lyzozomálnej dysfunkcii, defektnej autofágii a aktivácii zápalových reakcií [16,17]. Pokiaľ nie je možné inhibovať alebo odstrániť nahromadené LD, vysoko aktívne neuróny podliehajú patofyziológii, čo vedie k neurodegenerácii [17]. Dôkazy naznačujú, že lyzozómami sprostredkovaný katabolický proces nazývaný autofágia hrá kľúčovú úlohu pri udržiavaní bunkovej homeostázy LD vo viacerých tkanivách [17,18]. Podrobne, LD môžu byť selektívne sekvestrované v autofagozómoch a dodané do lyzozómov na degradáciu lyzozomálnymi kyslými lipázami, čo je proces špecificky známy ako lipofágia [19]. Zacielenie na LD a ich autofagickú dráhu odstránenia by preto mohlo predstavovať nový prístup k riadeniu neurodegenerácie.

Štúdium prírodných produktov a dietetických látok ako zdrojov potenciálnej liečby a stratégií NDD si v posledných rokoch získalo obrovský záujem [20]. Kaempferol (Ka) je prírodná polyfenolová malá molekula, ktorú možno nájsť v mnohých čínskych liečivých bylinách a potravinových zdrojoch [21]. Uvádza sa, že Ka má antibakteriálne, anti-agingové a imunomodulačné účinky, ako aj antioxidačné a neuroprotektívne aktivity [20,22,23]. Predtým sa uvádzalo, že Ka inhibuje zápal v mikrogliálnych bunkách BV2 in vitro [24] a zvyšuje odolnosť DA neurónov voči neurozápalu in vivo [25]. Účinok Ka na LD pri PD však ešte nebol skúmaný.

Vzhľadom na dôležitosť LD a úzke spojenie medzi LD, mitochondriami a autofágiou [16], ktoré sa všetky podieľajú na PD, predpokladáme, že Ka inhibuje peroxidáciu LD a zabraňuje neurodegenerácii DA pri PD. V tejto štúdii sme demonštrovali, že Ka významne chráni pred neurodegeneráciou v myšom modeli PD inhibíciou akumulácie LD. Ďalšia štúdia odhalila, že Ka spustil autofágiu a znížil akumuláciu oxidovaných LD na zmiernenie mitochondriálnej dysfunkcie a produkcie mitochondriálnych ROS (mtROS), čím sa zabránilo apoptotickej smrti neurónov. Zistenia získané v tejto štúdii môžu pomôcť nasmerovať klinické rozhodnutia týkajúce sa použitia prirodzenej molekuly Ka v NDD, ako je PD.

2. Materiály a metódy

2.1. Pokusné zvieratá

Myši C57BL/6J (samci, 4-mesiac) boli získané z Nanjing Medical University Animal Core (Nanjing). Myši boli udržiavané a chované v Centre zdrojov pre zvieratá Lekárskej fakulty Nanjingskej lekárskej univerzity a v zariadení pre zvieratá v nemocnici Nanjing Drum Tower Hospital. Myši majú voľný prístup k potrave a vode v miestnosti s okolitou teplotou 22 stupňov ± 2 stupne a cyklom svetlo/tma 12:12 h. Všetky postupy na zvieratách sa uskutočňovali v prísnom súlade s pokynmi National Institute of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.

2.2. Činidlá

MPTP (M0896),3-MA (M9281), penicillin-streptomycin (V900929), sodium pentobarbital, and probenecid were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Kaempferol (HPLC>95%)for in vivo treatment was purchased from Nanjing Jingzhu Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, China), kaempferol(HPLC>99.0 percent ,96,353) pre experimenty in vitro bolo získaných od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). BODIPY 493/503 (D3922), BODIPY 581/591 C11 (D3861), DHE (D11347) boli zakúpené od Thermo Fisher Scientific. Pre pokusy na zvieratách bol Ka rozpustený v roztoku 10 percent DMSO v 16 percentách SBE- -CD v sterilnom fyziologickom roztoku. Pre bunkové experimenty bol Ka pripravený v DMSO (Sigma-Aldrich) a PBS (konečná koncentrácia DMSO je 0,01 percenta), pH 7,4.

2.3. Indukcia a liečba metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridínom (MPTP)-indukovaného PD myšacieho modelu

Na vyhodnotenie účinkov Ka v PD modeli MPTP/p-toxicity sa myši (samce, vo veku 4-5 mesiacov) náhodne rozdelili do skupiny liečenej fyziologickým roztokom, skupiny liečenej MPTP a skupiny liečenej MPTP plus Ka skupina a skupina liečená samotným Ka. V skupine liečenej MPTP myšiam dostávali chronické podávanie MPTP s protokolom podobným tomu, ktorý bol opísaný vyššie [26]: MPTP bol rozpustený vo fyziologickom roztoku a injikovaný subkutánne v dávke 25 mg/kg, po čom nasledovalo 250 mg/kg probenecidu (rozpusteného v dimetylsulfoxide). intraperitoneálna (ip) injekcia v intervaloch 1 h každé 3,5 dňa počas 5 týždňov. Kontrolné myši dostali injekciu fyziologického roztoku a probenecidu. V skupine liečenej MPTP plus Ka myši dostávali Ka (50 mg/kg, jedna injekcia/deň počas experimentov, Jingzhu Biotechnology, Nanjing, Čína) intraperitoneálne (p.) denne 3 dni pred liečbou MPTP a počas 5. týždňov injekcie MPTP. Týždeň po poslednej injekcii MPTP sa myši podrobili behaviorálnemu testovaniu zaslepenými voči skupinám. Potom boli všetky myši anestetizované 40 mg / kg pentobarbitalu sodného a usmrtené na detekciu mozgových proteínov a imunohistochémiu alebo analýzu qPCR.

2.4. Stereotaxická chirurgia in vivo a experimentálne liečby

Stereotaxický chirurgický zákrok v anestézii pentobarbitalom sodným (40 mg/kg, ip) sa uskutočnil podľa popisu [25]. Myšia Atg5 a kontrolná shRNA boli transfekované baliacimi vektormi (AAV-U6-CMV-shR-NA-EGFP), aby sa vytvoril AAV. Na mikroinjekciu sa anestetizované myši umiestnia do stereotaxického zariadenia. Bola im vstreknutá 1μLAAV sklenenou elektródou namierenou na DG(AP:-0.3 mm; ML:±0.13 mm; DV:-0.45 mm） rýchlosťou 0,25 μl/min.. Potom sa ihla ponechala ďalšie 2-minúty 2 týždne po mikroinjekcii vírusu, myši sa podrobili MPTP-indukovanej PD modelovej vodivosti a (alebo) liečbe Ka.

Atg5 shRNA sa získala od Hanbio Biotechnology (Shanghai, China) Co., Ltd. Pre ticho Atg5 boli priméry uvedené v doplnkovej tabuľke 1.

2.5. Behaviorálna analýza

Týždeň po poslednej injekcii MPTP alebo fyziologického roztoku sa vykonal rotačný a tyčový test, ako je opísané vyššie [27]. Pre test na rotarode sa myši aklimatizovali na rotarod v dvoch pokusoch (6 minút so zrýchlenou rýchlosťou 12-20 ot./min.) denne počas 2 po sebe nasledujúcich dní pred začiatkom experimentu. Potom sa myši testovali pri 20 otáčkach za minútu počas 300 s počas ďalších 3 po sebe nasledujúcich dní. Latencia do poklesu bola zaznamenaná pomocou systému Rotarod Analysis System (Jiliang, Shanghai, Čína). Na test tyče boli myši umiestnené hlavou nahor na vrchol vertikálnej drevenej tyče (drsný povrch, výška 50 cm, priemer 1 cm). Všetky myši boli zvyknuté na prístroj 2 dni pred testovaním a potom boli trikrát testované na tretí deň. Zaznamenal sa celkový čas (T-celkový, kým myš nedosiahla zem svojimi štyrmi labkami) a čas obratu (T-otočka, kedy sa myš úplne otočila hlavou nadol). Experiment bol zaslepený voči skupinám myší pre každé testovanie správania a test sa uskutočnil trikrát.

2.6. Zbierka vzoriek mozgu

Po záverečných behaviorálnych testoch boli myši anestetizované pentobarbitalom sodným (40 mg/kg, ip). Pre qPCR, Western blotting a vysokoúčinnú kvapalinovú chromatografiu (HPLC) boli zvieratám rýchlo extrahované celé mozgy, potom stredný mozog a tkanivá striatum boli rýchlo vypreparované, vopred zmrazené tekutým dusíkom. Všetky vzorky sa skladovali pri -80 stupňoch až do analýzy.

Na imunohistochemickú analýzu boli myši perfundované transkardiálne 4 percentami paraformaldehydu (PFA). Mozgy boli extrahované, dodatočne fixované, dehydratované, vložené do OCT (Tissue-Tek) a sériové rezy mozgu boli kryosekciou (30 um na plátok) cez každú celú vrstvu a stredný mozog pomocou mraziaceho mikrotómu (Leica CM1950, Nussloch, Nemecko ). Všetky rezy boli zhromaždené v šiestich samostatných sériách a mozgové rezy boli uskladnené v 50 percentnom glyceríne a zmrazené na -20 stupeň až do analýzy.

Pre TEM boli myši perfundované 2,5 percentami glutaraldehydu a 2 percentami paraformaldehydu, ako je opísané 【12】. Malá porcia (<1 mm³）="" of="" the="" mesencephalon="" was="" carefully="" sectioned="" and="" incubated="" in="" the="" same="" fixative="" for="" 2="" h="" at="" 4°c.="" specimens="" were="" postfixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide,="" stained="" in="" aqueous="" uranyl="" acetate,="" and="" then="" dehydrated="" and="" embedded="" in="" epoxy="" resin.="" ultrathin="" sections="" were="" stained="" using="" lead="" citrate="" and="" examined="" with="" a="" transmission="" electron="" microscope(jem-1010,="" tokyo,="">

2.6. Imunohistochemická analýza

Mozgové rezy sa prepláchli v PBS a následne 3 percentami H202 počas 10 minúty, potom sa inkubovali s 0,3% Tritonom X-100 v PBS doplnenom 5 percentami BSA počas 1 hodiny. Potom sa sklíčka inkubovali s primárnymi protilátkami pri 4 stupňoch cez noc v PBS obsahujúcom 5 percent BSA pri 4 stupňoch cez noc, potom sa premyli a inkubovali v sekundárnych protilátkach počas 1 hodiny pri teplote miestnosti, nasledovala inkubácia s diaminobenzidínom (DAB) alebo montáž do DAPI (Life Technologies, Cat P36931) ako imunofluorescenčné farbenie počas 5 minút. Na farbenie Nissl sa sklíčka spojili v roztoku kresylovej violeti (CV) (0,1 g krezylovej fialovej, 99 ml H20 a 1% kyseliny octovej 1 ml) na 30 minút pri teplote miestnosti a potom sa dehydratovali alkoholom a xylénom. Obrázky boli pozorované a fotografie boli zachytené pod mikroskopom Olympus BX52 (Olympus America Inc., Melville, NY, Spojené štáty americké). Celkový počet TH-pozitívnych a Nissl's-pozitívnych neurónov v SNpc sa získal sérologicky použitím metódy optického frakcionátora so softvérom MicroBrightField Stereo-Investigator (MicroBrightField, Williston, VT, USA).

2.7. Analýza vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC).

Striatálne vzorky myší sa homogenizovali s {{0}},1 M kyselinou chloristou （1 mg tkanív v 100 μl kyseliny chloristej） a 0,1 mM EDTA, ošetrili

2.17. Prietoková cytometria

Bunky boli štiepené a premyté D-hank's, potom zafarbené Annexinom V-FITC （5 ul zriedených v 500 ul PBS）/PI（0,1 ul zriedených v 500 ul PBS) apoptózovej súpravy (CA1020, Solarbio, Peking, Chian) podľa protokolu výrobcu. Potom sa apoptotické bunky analyzovali pomocou prietokovej cytometrie (guava easyCyteTM 8, Millipore, USA). Merania mitochondriálneho ROS a mitochondriálneho membránového potenciálu sa uskutočnili tak, ako bolo publikované 【12】. Bunky SH-SY5Y boli zafarbené MitoSOX （2,5 μM, Invitrogen, USA） alebo JCl（10 ug/ml, T-3168, Invitrogen, USA ) pri 37 °C počas 30 minút. Po dvojnásobnom premytí PBS boli bunky resuspendované v studenom PBS obsahujúcom 1 percento FBS na analýzu prietokovou cytometriou. Údaje sa analyzovali pomocou softvéru FCS Express (Guava Easy CyteTM8, Millipore, Hayward, CA, USA).

2.18. Respiračné testy morského koníka

Mitochondriálna respiračná funkcia v živých SH-SY5Y bunkách bola meraná pomocou analyzátora extracelulárneho toku Seahorse (XFe96) (Agi-lent, Santa Clara, USA) prostredníctvom zmien v rýchlosti spotreby kyslíka (OCR). Bunky SH-SY5Y nasadené v množstve 3 x 103 buniek/jamka sa nechali priľnúť k doštičkám s bunkovou kultúrou Seahorse a dosiahli približne 80 percent konfluencie v čase experimentu. Nasledujúci deň boli bunky vopred ošetrené Ka a potom vystavené MPP plus ďalších 24 hodín. OCR sa detegoval za bazálnych podmienok, po ktorých nasledovalo sekvenčné pridanie 1 μM oligomycínu, 1 μM FCCP, ako aj 1 μM rotenónu a antimycínu A.

2.19. Štatistická analýza

Údaje boli prezentované ako priemer ± SEM. Významnosť rozdielu bola stanovená Studentovým t-testom, dvojcestnou analýzou rozptylu alebo jednosmernou analýzou rozptylu (ANOVA), po ktorej nasledoval Tukeyho post hoc test. Rozdiel sa považoval za významný u P<>

3. Výsledky

Výsledok 1. Ka obnovuje motorickú dysfunkciu a zvyšuje hladiny dopamínu v striate myší s modelom MPTP/p PD

Aby sa preskúmal neuroprotektívny účinok patogenézy Kaon PD, 4-mesačným samcom myší C57BL/6 bol injikovaný neurotoxín MPTP na vytvorenie modelu MPTP/p PD a boli liečení Ka (obr. la). Po modelovej indukcii sa test na rotarode a test na tyči použili na vyhodnotenie motorického a behaviorálneho výkonu myší v rôznych skupinách. Ako je ukázané, čas výkonu rotarodu bol výrazne znížený u myší liečených MPTP a tomuto efektu zabránil Ka (obr. 1b). Ka tiež obnovila behaviorálne deficity vyvolané MPTP, ako je indikované znížením času otáčania a celkového času v teste na tyči (obr. lc a d), bez ovplyvnenia telesnej hmotnosti myší (obr. 1e). Okrem toho analýza HPLC ukázala, že hladina dopamínu v striate bola významne znížená u myší infikovaných MPTP/p a táto hladina bola obnovená ošetrením Ka (obr. lf). Liečba Ka tiež zmiernila MPTP/p-indukované zníženie hladín kyseliny dihydroxyfenyloctovej (DOPAC, metabolit dopamínu) v striate (obr. 1g). Tieto výsledky naznačujú, že Ka obnovuje motorickú dysfunkciu a zvyšuje hladiny dopamínu v striate u MPTP-indukovaných PD myší.

Výsledok 2. Ka zmierňuje stratu DA neurónov u SNpc myší s modelom MPTP/p PD

Ďalej, aby sme ďalej vyhodnotili neuroprotektívny účinok poškodenia DA neurónov vyvolaného Kaon MPTP/p, skúmali sme tyrozínhydroxylázu (THD plus neuróny v myšacom SNpc imunofarbením. Ako je znázornené na obr. 2a a b, MPTP/p vyvolal významné zníženie v počte TH plus neurónov, ktorý bol zmiernený liečbou Ka. Ďalej, stereologické počty celkových neurónov v SNpc, ako definoval Nissl

Obr. 1. Liečba Ka zmierňuje motorickú dysfunkciu a zvyšuje hladiny dopamínu v striate myší s modelom MPTP/p PD.

(a) Schematický diagram experimentálneho dizajnu. (b) Čas na tyči sa meral pre test rotarod tri po sebe nasledujúce dni. (cd) Čas potrebný na otočenie sa (čas otočenia) a zostup tyče (čas stúpania) sa zaznamenal pri teste na tyči. (e) Telesná hmotnosť myší sa merala na konci štúdie, (fg) Dopamín (DA) a kyselina dihydroxyfenyloctová (DOPAC) v striate sa analyzovali vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou. Údaje sú vyjadrené ako priemer ± SEM.n =9-10 pre každú skupinu v (b, C, d); n=6-8 pre každú skupinu v(f,g).ns, nevýznamné,*P<><><0.001, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.="" mptp,="" 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine;="" ka,="">

farbenie, overilo, že strata THt buniek odráža bunkovú smrť, ale nie downreguláciu expresie TH, a ukázalo, že liečba Ka obnovila pokles počtu Nissl-pozitívnych neurónov v SNpc myší liečených MPTP zo 43,3 percenta na 25,4 percent ( Obr. 2c a d). Okrem toho Ka významne zlepšil MPTP-indukovanú redukciu expresie proteínov TH a DAT, ako bolo merané Western blotom (obr. 2e-g). Tento dôkaz potvrdzuje neuroprotektívny účinok Ka na myšom modeli PD.

Výsledok 3. Ka znižuje akumuláciu LD vakuol a oxidačný stres v SNpc myší liečených MPTP/p

Stále viac dôkazov ukázalo zapojenie LD do NDD [10], naša predchádzajúca práca konzistentne identifikovala zvýšené LD v SNpc myší s PD indukovanou MPTP [12]. LD možno ľahko identifikovať a vykazujú okrúhle štruktúry s nízkou hustotou s homogénnym amorfným obsahom [28]. Normálne môžu byť LD degradované autofágiou, aby sa zabránilo akumulácii [29]. Aby sa zistilo, či Ka môže regulovať LD v PD, akumulácia LD sa analyzovala transmisnou elektrónovou mikroskopiou (TEM) v SNpc kontrolných, MPTP/p a MPTP/p plus Ka myší. Ako je uvedené v našej predchádzajúcej práci [12], počet a veľkosť LD sa zvýšili u myší MPTP/p v porovnaní s kontrolami liečenými fyziologickým roztokom (obr. 3a a b) a boli významne znížené u myší liečených Ka (obr. 3c- e). Okrem toho u myší liečených Ka boli LD častejšie pozorované v blízkosti autolyzozómov, uzavreté v nich alebo degradované autolyzozómami, ktoré boli definované ako granuly lipofuscínu s hustotou elektrónov. Ďalšie histologické farbenie TH plus neurónov pomocou BODIPY, farbiva, ktoré špecificky označuje neutrálne lipidy a bežne sa používa na detekciu LD [30], ukázalo, že počet aj veľkosť BODIPY plus LD v SNpc boli vyššie u PD myší ako u kontrol. a boli významne znížené ošetrením Ka (obr. 3f-h).

Ak sa LD nedajú včas degradovať, nahromadené LD môžu podliehať peroxidácii a prispievať k mitochondriálnemu stresu sprostredkovanému ROS [4], ktorý zosilňuje neurotoxicitu a progresiu ochorenia. Preto sme ďalej skúmali expresné profily génov spojených s ochranou proti toxicite voľných FA (Gpx8), neutralizačnými oxidačnými druhmi, superoxidovými radikálmi (Sod3) a peroxidom vodíka (Cat) a metabolizmom FA (Acsbg1 a Dbi), ako bolo uvedené [31]. , pričom všetky boli nápadne znížené u SNpc myší liečených MPTP v porovnaní s kontrolami a tieto účinky sa zlepšili u myší s PD liečených Ka (obr. 3i). Podobne MPTP/p tiež zvýšil hladiny expresie mRNA

podjednotiek NADPH oxidázy, ako sú Nox1, Nox2 a Nox4 v SNpc myší MPTP/p, ktoré boli ďalej otupené ošetrením Ka (obr. 3j). Celkovo tieto údaje naznačujú, že Ka zmierňuje MPTP/p-indukovanú akumuláciu LD, peroxidáciu a stres sprostredkovaný ROS.

Tento článok je extrahovaný zo zoznamov obsahu dostupných na domovskej stránke časopisu ScienceDirect Redox Biology: www.elsevier.com/locate/redox