Vplyv diétneho podávania polysacharidov z morských rias na rast, mikrobiálnu hojnosť a rast a expresiu génov súvisiacich s imunitou tichomorskej krevety bielonohej (Litopenaeus Vannamei)
May 09, 2023
Abstrakt:
Táto práca je zameraná na určenie vplyvu potravinovej suplementácie polysacharidu extrahovaného z hnedých morských rias Sargassum dentifolium na rastové indexy, využitie krmiva, biochemické zloženie, mikrobiálnu abundanciu, prejavy génov súvisiacich s rastom a imunitou a stresové gény tichomorskej krevety Whiteleg Litopenaeus vannamei. Celkovo 360 lariev L. vannamei bolo náhodne rozdelených do 12-skleneného akvária (4{8}} l z každého) s hustotou zástavu 30 kreviet s počiatočnou hmotnosťou of (0,0017 ± 0,001 g).
Počas {{0}}dňového experimentu boli všetky larvy kreviet kŕmené ich príslušnou potravou v množstve 10 percent celkovej telesnej hmotnosti, trikrát denne. Boli pripravené tri experimentálne diéty s rôznymi hladinami polysacharidov z morských rias (SWP). Základná kontrolná strava nemala žiadnu hladinu polysacharidov (SWP0 ), zatiaľ čo SWP1, SWP2 a SWP3 obsahovali polysacharidy v koncentráciách 1, 2 a 3 g kg-1 stravy. Diéty doplnené o hladiny polysacharidov vykazovali významné zlepšenie v prírastku hmotnosti a miere prežitia v porovnaní s kontrolnou diétou. Biochemické zloženie celého tela a mikrobiálna abundancia (celkový počet heterotrofných baktérií a Vibrio spp.) L. vannamei vykazovali významné rozdiely medzi diétami ošetrenými polysacharidmi v porovnaní s kontrolou.
Na konci experimentu s kŕmením sa doplnkom stravy o hladiny polysacharidov zvýšila expresia génov súvisiacich s rastom (rastové faktory podobné inzulínu (IGF-I, IGF-II), gény súvisiace s imunitou ( -Glucan-binding protein ( - Bgp), profenoloxidáza (ProPO), lyzozým (Lys) a Crustin) a stresové gény (superoxiddismutáza (SOD) a glutatiónperoxidáza (GPx) vo svalovom tkanive L. vannamei. Súčasná štúdia však dospela k záveru, že zahrnutie dávka 2 g.kg-1 polysacharidu ako diétneho aditíva zvýšila prírastok hmotnosti aj mieru prežitia L. vannamei, zatiaľ čo úroveň inkorporácie 3 g.kg-1 znižuje množstvo patogénnych mikróbov a zvyšuje rast a imunitu. a génové expresie L. vannamei súvisiace so stresom.
Kľúčové slová: Sargassum dentifolium; kŕmne prísady; krevetový priemysel; rastové výkony; gény súvisiace s rastom; gény súvisiace s imunitou; stresové gény.
Superoxiddismutáza (superoxiddismutáza, SOD) je vnútrobunkový antioxidačný enzým, ktorý dokáže premeniť škodlivé superoxidové radikály na kyslík a hydroxidové ióny, ktoré sú pre bunky neškodné. Imunita je schopnosť tela rozpoznať a napadnúť cudzie patogény a abnormálne bunky.
Štúdie ukázali, že T aj B bunky v imunitnom systéme potrebujú na udržanie svojich normálnych funkcií určité oxidačné metabolické procesy. Avšak nadmerný oxidačný metabolizmus bude generovať veľké množstvo voľných radikálov, čo vedie k oxidačnému poškodeniu buniek a zníženiu imunitnej funkcie. SOD môže odstrániť prebytočné superoxidové voľné radikály, chrániť bunky pred oxidačným poškodením a zlepšiť imunitu. Okrem toho štúdia tiež zistila, že SOD môže tiež pôsobiť ako signálna molekula na prenos informácií medzi bunkami a reguláciu dôležitých biologických procesov, ako je rast, diferenciácia a funkcia imunitných buniek. Preto existuje úzky vzťah medzi SOD a imunitou.
Z tohto hľadiska musíme v našom živote dbať na zlepšenie imunity. V našom objave môže Cistanche výrazne zlepšiť imunitu. Cistanche obsahuje rôzne biologicky aktívne zložky, ako sú polysacharidy, dve huby, Huang Li atď., Tieto zložky dokážu stimulovať rôzne bunky imunitného systému a zvýšiť ich imunitnú aktivitu.
Kliknite na zdravotné prínosy cistanche
1. Úvod
Odvetvie akvakultúry kreviet zaznamenalo rýchly rast a stalo sa najvýznamnejším a vedúcim odvetvím akvakultúry [1,2]. Hoci sa krevetový priemysel rýchlo rozvinul, problémom, ktorému čelia farmári, je zvýšenie tempa rastu, nízka cena stravy a zníženie prepuknutia chorôb [3,4]. Okrem toho celosvetová spotreba kreviet za posledných desať rokov vzrástla, čo prinútilo odborníkov na výživu začleniť do stravy vodných živočíchov množstvo látok získaných z poľnohospodárstva [1,5,6]. Na celom svete sa najčastejšie pestuje pacifická biela kreveta (Litopenaeus vannamei), ktorá dosahuje viac ako 70 percent všetkých celosvetových pestovaných kreviet [7,8]. Aby sa udržal priemysel s krevetami na celom svete, musí sa vyriešiť veľa problémov, ako je zlá kvalita vody, nízka schopnosť prežitia a zlepšenie priemyslu stravovania [9–14]. Okrem toho zmena klímy a negatívny vplyv znečistenia životného prostredia sú doteraz významnými problémami, ktoré obmedzujú udržateľnosť akvakultúry, rybolovu, vodných ekosystémov a vodných živočíchov [15–20].
Preto boli diéty s krevetami rozšírené pomocou niekoľkých stratégií na riešenie takéhoto globálneho rozvoja v sektore chovu kreviet [10,21]. Jednou z najzákladnejších stratégií je suplementácia kŕmnych doplnkových látok, ktorá sa stala veľmi dôležitou pre mnohé druhy kreviet ako rastový stimul, imunologický booster a alternatívny prístup k rezistencii voči chorobám [22,23]. Vodné rastliny (mikroriasy a morské riasy) sa stále vo veľkej miere využívajú v mnohých dôležitých odvetviach, ako sú aditíva do vodných krmív [24], prípravky na podporu rastu rastlín [25], fytoremediácia [26–30], potravinové doplnky pre ľudí [31,32], liečivá. [33,34], kozmetické látky [35,36], antimikrobiálne aktivity [37,38] a bioenergia [39,40].
Ako bolo uvedené v roku 2018, celosvetová produkcia morských rias (vo voľnej prírode zachytených a pestovaných) bola približne 34,4 milióna ton s priemyselnou hodnotou približne 13,3 miliardy USD [41]. Táto produkcia pochádza z približne 35 krajín, pričom najväčším producentom, ktorý produkuje viac ako 99 percent, je Čína [42]. Morské riasy majú vysoký obsah bielkovín, vlákniny, vitamínov, mastných kyselín, minerálov, pigmentov a niekoľkých bioaktívnych zlúčenín [43–46].
Medzi rodinami morských rias sú hnedé morské riasy známe ako vysoký zdroj cukrov, ktoré môžu chrániť vodné organizmy pred niekoľkými škodlivými vplyvmi, pričom ich polysacharid sa postupne používa ako kŕmna prísada pre tilapiu nílsku [47] a tilapiu červenú [2]. Dostupná literatúra preukázala, že polysacharid extrahovaný z morských rias by mohol podporiť vrodenú imunitu a zvýšiť odolnosť kreviet proti patogénnej infekcii [48–50] vďaka svojmu polysacharidovému zloženiu a štruktúre (stupeň vetvenia, substituenty, sulfatácia a typ väzieb ), ktoré sú úplne odlišné od suchozemských rastlín [51,52] Zistilo sa, že hnedá morská riasa Sargassum dentiform obsahuje hojný polysacharid, ktorý je bohatým zdrojom v Egypte, a potvrdilo sa, že má mnohopočetné farmakologické vlastnosti, ako sú protinádorové, antioxidačné, hematopoéza, imunomodulácia a gastrointestinálna ochrana, zatiaľ čo sa uvádza, že diétne podávanie zlepšuje nešpecifické imunitné reakcie u rýb [2].
Napriek dôležitosti kŕmnych aditív používaných pre pacifické biele krevety je málo známe o aplikácii polysacharidov pripravených z hnedých morských rias v priemysle kŕmnych doplnkových látok pre krevety [53,54]. Imunostimulanty sú dôležité ako syntetické látky, ktoré posilňujú schopnosť imunitného systému bojovať proti infekciám a chorobám stimuláciou imunologických reakcií. Baktérie a bakteriálne produkty, komplexné sacharidy, dietetické faktory, živočíšne extrakty, cytokíny, lektíny, rastlinné extrakty a syntetické lieky, ako je levamizol, to všetko sú príklady imunostimulantov, ktoré sú v súčasnosti dostupné [55]. Antibiotiká v strave chovaných rýb a kôrovcov sa bežne používajú na kontrolu infekcie chorobami, ako aj na zlepšenie prežitia a rastu. Bol však široko kritizovaný kvôli rezistencii voči liekom a akumulácii chemikálií v tkanivách vodných živočíchov, čo môže byť potenciálne nebezpečné pre verejné zdravie. Alternatívne sa vo všeobecnosti odporúčajú prírodné stimulanty imunity, ako sú probiotiká a prebiotiká, na použitie v krmivách na účinnú podporu rastu a imunitnej reakcie a kontrolu rôznych chorôb u vodných živočíchov [56].
Stimulačné účinky imunostimulantov ako glukán, chitosan, nukleotidy, lipopolysacharid (LPS), alginát sodný a iné polysacharidy boli predmetom niekoľkých prác o rybách a kôrovcoch [55,57].
V poslednej dobe sa osobitná pozornosť venuje využívaniu prebiotík ako prírodných alternatív k antibiotikám a stimulantom imunity v akvakultúre. Funkčné polysacharidy sú nestráviteľné zložky kvôli ich -1, 3 alebo -1, 4 väzbám. Konzumácia funkčných polysacharidov môže údajne zlepšiť rastový výkon a posilniť imunitnú odpoveď a odolnosť vodných živočíchov voči chorobám [58]. Podľa predchádzajúcich štúdií môže strava obsahujúca určité polysacharidy, vrátane liečivých rastlín a morských polysacharidov, zlepšiť rýchlosť rastu s ohľadom na imunitný systém a gastrointestinálny stav rýb a kreviet [59–61].
Odolnosť voči chorobám je spojená so zvýšením bunkových a humorálnych reakcií, vrátane fagocytózy, baktericídnej aktivity, aktivity fenoloxidázy (PO), respiračného vzplanutia, superoxiddismutázy (SOD) a aktivít lyzozýmu u kôrovcov [62]. Základné informácie týkajúce sa aktivácie a regulácie imunitného systému sú odhalené expresiou génov súvisiacich s imunitou v krevetách [63]. Proteíny rozpoznávajúce vzory (PRP), ktoré sa viažu na molekuly na mikrobiálnom povrchu, sprostredkúvajú detekciu inváznych organizmov ako dôležitý krok v imunitnej odpovedi kreviet [64].
Rozpoznanie inváznych patogénov PRP je kľúčovým medzikrokom v aktivácii systému aktivujúceho profenoloxidázu (ProPO) [65]. Proteíny rozpoznávajúce peptidoglykán [66], lektíny typu C [67], proteíny viažuce glukán ( -Bgps) [68] a lipopolysacharid (LPS) a 1,{9}}proteíny viažuce glukán (1,{11 }}Lgp) [69] boli všetky opísané ako PRP v systéme ProPO. Je známe, že mechanizmus aktivujúci profenoloxidázu (ProPO), ktorý sa spúšťa väzbou PRP na zložky bunkovej steny mikroorganizmu, aktivuje imunitný systém hostiteľa [70]. Stres aktivuje glykolytické reakcie, čo následne zvyšuje spotrebu O2 a zvyšuje uvoľňovanie reaktívnych foriem kyslíka (ROS) (ako hydroxylový radikál, peroxid vodíka a superoxidové anióny) [71]. ROS však môže eliminovať stresor; zvýšenie ROS spôsobí vážne zničenie.
Preto je rýchle odstránenie nadmerného množstva ROS kritické pre správnu funkciu bunky. To sa dosahuje zvýšením expresie antioxidačných enzýmov [72]. Superoxiddismutáza (SOD) sú antioxidačné enzýmy, ktoré sa spoliehajú na superoxidové anióny. Superoxidové radikály sa pomocou SOD detoxikujú tak, že sa transformujú na kyslík a peroxid vodíka, ktoré sa následne katalázou menia na H2O a O2 a dodávajú do bunky ako bezpečné kompozity [73,74].
Gén CuZnSOD superoxid dismutázy medi a zinku a ďalšie imunitné gény sa tiež podieľajú na nepriamej imunite Crustina podobného krevetám, ktorý je nevyhnutný pre imunitu voči infekciám [75,76]. V L. vannamei diétny polysacharidový extrakt Panax ginseng znižuje zápal, zvyšuje aktivitu imunitných enzýmov a upravuje expresiu imunitných génov [77]. Vývojové charakteristiky reguluje veľké množstvo génov, vrátane rastového hormónu (GH) a inzulínu podobných rastových faktorov (IGF-I a IGF-II) [78]. Rýchly rast akvakultúry L. vannamei si vyžaduje vytvorenie rýchlych genetických línií [79]. Podľa našich najlepších vedomostí je málo známe o vplyvoch suplementácie polysacharidov v strave Sargassum dentifolium na rast kreviet, imunitu a génové expresie súvisiace so stresom. Preto sa táto štúdia uskutočnila s cieľom vyhodnotiť vplyv diétneho podávania polysacharidu odvodeného z hnedej morskej riasy (S. centifolia) na rastové výkony, využitie krmiva, zloženie tela, mikrobiálne spoločenstvá a rast, imunitu a expresiu stresových génov bielej nohy. krevety Litopenaeus vannamei.
2. Materiály a metódy
2.1. Hnedé morské riasy, Sargassum centifolia
Hnedé morské riasy, S. dentiform, boli zozbierané z Abu-Qir Bay, Alexandria, Egypt (31,3000 N a 30,1667 E) [2]. Zo získaných vzoriek boli odstránené epifyty, ako už bolo opísané [80]. Pred použitím boli vzorky umyté, vyčistené, vysušené na vzduchu, práškované a uložené v plastových vreckách pri izbovej teplote [29]. Na extrakciu polysacharidu z hnedej morskej riasy S. dentifolium sa použili postupy opísané v [81].
2.2. Skúmanie kvality vody
Počas experimentu s kŕmením sme sa uistili, že hladiny NH3 − (mg L−1 ), NO2 − (mg L−1 ), NO3 − (mg L−1 ), zásaditosti (mg L−1 ) a PO4 − (mg L−1) boli v rozmedzí odporúčanom pre krevety [82] a usmerneniami APHA [83]. Okrem toho sa o 13:00 robili denné merania teploty (◦C), slanosti (ppt) a pH. Na presné odčítanie teploty vody sa použil teplomer zavesený v hĺbke 30 cm a pH meter a refraktometer (Orion, Ipswich, MA, USA) sa použil na získanie presných údajov o kyslosti a zásaditosti vody denne o 9.00 h.
2.3. Tichomorské krevety bielonohé (Litopenaeus vannamei)
2.3.1. Pokus na zvieratách
Súkromná liaheň dodávala post larvy (PL) tichomorskej krevety bielej nohy L. vannamei do Laboratória bezstavovcov, Divízia akvakultúry, Suezská pobočka NIOF, Egypt. PL sa potom aklimatizovali 15 dní v dvoch 500-L nádržiach zo sklenených vlákien za kontrolovaných podmienok (28.0 ± 1.0 ◦C a salinita 29 ± 3.0 ppt ) Výskumný výbor NIOF v Egypte schválil návrh experimentu a dodržiavanie etických noriem pri manipulácii s krevetami.
2.3.2. Experimentálny dizajn a vybavenie
Súčasná skúška kŕmenia sa uskutočnila s použitím úplne randomizovaného dizajnu s tromi replikátmi. Celkovo bolo skladovaných 360 PL (s počiatočnou hmotnosťou 0.{11}}17 ± 0.001 g) s hustotou 30 kreviet v 12 pohároch akváriá (každé s objemom 40 l). V 90-dennom pokuse s kŕmením sa PL podávalo 10 percent z celkovej telesnej hmotnosti kreviet trikrát denne (o 6:{15}} ráno, 12:00 a 18:00). Každé akvárium bolo každé ráno vyprázdnené od odpadu a nespotrebovaného jedla a vyčistené sifónom a 10 percent objemu vody bolo denne nahradených čerstvou, okysličenou a filtrovanou morskou vodou [82].
2.3.3. Experimentálna diéta
Krevetám boli poskytnuté štyri diéty: SWP{{0}}: komerčná diéta pre krevety (Aller-Aqua, Egypt, ako kontrolná základná strava, surový proteín 40 percent a surové lipidy 9 percent). Zvyšné tri experimentálne diéty (SWP1, SWP2 a SWP3) sú komerčné diéty pre krevety doplnené 1, 2 a 3 g kg-1 polysacharidu S. dentifolium, v tomto poradí. Pridávanie hladín polysacharidov sa uskutočnilo, ako už bolo opísané v Abdelrhman et al. [2]. V stručnosti, komerčná strava s krevetami bola najprv mletá a rozdelená na tri rovnaké časti. Každá hladina polysacharidu (1, 2 a 3 g kg-1) sa rozpustila v destilovanej vode a potom sa nastriekala na povrch stravy až do úplnej absorpcie a rovnaký primeraný objem destilovanej vody sa nastriekal na kontrolnú stravu (SWP0) bez polysacharidu. [84]. Slnečnicový olej (5 ml kg-1) sa potom nastriekal na stravu, aby pokryl roztok polysacharidu [85]. Nakoniec boli diéty homogenizované a znovu peletizované na pelety, sušené na vzduchu, vložené do celofánových vreciek a až do použitia v chladničke pri 4 °C.
2.4. Testované parametre
2.4.1. Rastové výkony
2.4.2. Analýza biochemického zloženia
Experimentálne diéty aj krevety boli podrobené proximálnej analýze na odhadnutie ich biochemického obsahu podľa pokynov AOAC [86] pripravených tak, ako je podrobne uvedené v predchádzajúcom článku [87]. Na odhadnutie zložky celého tela (sušina, surový tuk, surový proteín a surový popol) sa náhodne získalo 5 kreviet z každého replikátu po dokončení kŕmenia. Krevety sa potom rozdrvili, rozmixovali do hladka a uskladnili pri teplote -20 ◦C na ďalšie skúmanie.
2.4.3. Mikrobiálne komunity
Na určenie bohatosti mikrobiálnych spoločenstiev sa použil prístup APHA [83]. Po dokončení experimentu sa z každého replikátu odobrali vzorky vody (1 ml) a čriev kreviet (1 g) (3 krevety na replikát, n=9). Každá vzorka (črevo a voda) sa naočkovala 9 ml sterilnej destilovanej vody na platne so sójovým agarom Trypticase (TSA) a tio-sulfát-citrát-žlčovými soľami (TCBS) [88]. Platne TSA a TCBS sa inkubovali pri 37 °C, zatiaľ čo platne TCBS sa inkubovali pri 28 °C. Jednotky tvoriace kolónie na mililiter sa použili na stanovenie množstva heterotrofných baktérií a kolónií Vibrio prítomných po 24 hodinách (CFU ml-1) [89].
2.4.4. Extrakcia RNA a syntéza cDNA na expresiu génov
Trojité vzorky brušných svalov kreviet z každého replikátu boli priamo vyrezané pomocou plne sterilných pitevných nástrojov v chladných podmienkach. Pred vykonaním štúdie génovej expresie bola časť svalov zmrazená pri -80 ◦C. Činidlo TRIzol (easyRED, iNtRON Biotechnology) sa použilo na extrakciu celkovej RNA z oblasti brucha kreviet na konci experimentu podľa pokynov výrobcu. Pomocou systému NanoDrop (Bio-Drop) sa určil pomer optickej hustoty (OD) čistoty RNA a 1 ng L-1 RNA sa použil na syntézu cDNA v každej reakcii, keď bol pomer ideálny (A260/A{{ 5}}.8).
Na stanovenie kvality RNA sa použil pomer OD 260/280 nm. Celková RNA, ktorá bola spracovaná DNázou I (NEB, USA) sa použila ako templát v súprave reverznej transkriptázy (RT-PCR guľôčky, Enzynomics, Daejeon, Kórea) na vytvorenie prvého vlákna cDNA. Reakcia sa uskutočnila pomocou PCR amplifikácie (s použitím amerického produktu Applied Biosystems Veriti 96-Well Thermal Cycler) a uskutočnila sa podľa pokynov výrobcu. Real-Time PCR (Bico, Thermo-Fisher) sa uskutočnila za nasledujúcich podmienok cDNA na detekciu jedinečných a odlišných produktov: Po počiatočnej denaturácii pri 95 °C počas 15 minút sa proteín podrobil 40 cyklom za nasledujúcich podmienok: 95 ◦C na 10 s, 58–62 ◦C na 20 s a 72 ◦C na 30 s; a nakoniec, po poslednom cykle, sa teplota zvýšila z 58–62 ◦C na 95 ◦C v prírastkoch po 0,5 ◦C. Primery použité na sondovanie podobných génov sú uvedené v tabuľke 1.
Na hodnotenie expresie cieľového génu alebo násobnej zmeny sa použil prevádzkový gén (-aktín) [90]. Keď sa použije metóda 2∆∆Ct na normalizáciu kritických prahových (Ct) veličín cieľových génov s množstvom -aktínu, hodnoty odhalia n-násobný rozdiel v porovnaní s kontrolou [91].
2.5. Štatistická analýza
Na vyhodnotenie kvality vody, rastových ukazovateľov využitia krmiva, analýzy zloženia tela, mikrobiálnych spoločenstiev a imunity a génovej expresie súvisiacej s rastom sa použila jednosmerná ANOVA na identifikáciu významných rozdielov (p < 0.{{6} }}5) v priemere pre každú premennú medzi ošetreniami polysacharidmi (SWP1, SWP2 a SWP0) a kontrolou (SWP0). Štatistická analýza sa uskutočnila s použitím GraphPad Prism verzie 9. Na preskúmanie akejkoľvek korelácie medzi ošetreniami sa použili Tukeyho testy. Pred vykonaním štatistickej analýzy boli všetky údaje skontrolované na normalitu distribúcie a homogenitu rozptylu. Pred analýzou boli všetky údaje (percentá) transformované oblúk-sin [92]. Na uľahčenie porovnávania však boli údaje prezentované ako netransformované.
3.2. Výkonnosti rastu a indexy využitia živín
Tabuľka 3 demonštruje vplyv doplnkovej stravy polysacharidov na rast kreviet, prežitie a využitie krmiva. V porovnaní s SWP0 tabuľka 3 ukázala, že SWP1, SWP2 a SWP3 vykazovali významné (p < 0.{{10}}5) zvýšenia WG. Okrem toho SWP1 a SWP2 vykazovali významné (p < 0.05) zvýšenia v SR, zatiaľ čo SWP3 vykazovali významné (p < 0,05) poklesy v porovnaní s SWP0. Na druhej strane neboli žiadne významné rozdiely (p < 0,05) v SGR alebo FCR v rámci doplnkových diét (SWP0, SWP1, SWP2 a SWP3), ako je uvedené v tabuľke 3.
3.4. Mikrobiálne komunity
Tabuľka 5 ukazuje vplyv experimentálnych diét doplnených rôznymi koncentráciami polysacharidu (SWP1, SWP2 a SWP3) v porovnaní s SWP0 na celkový počet THB a TVC vo vode aj v črevách kreviet. Údaje ukázali, že množstvo mikróbov (THB a TVC) bolo vyššie v čreve ako vo vode. V porovnaní s SWP0 počet THB aj TVC vo vode aj v čreve postupne klesal so zvyšujúcou sa hladinou polysacharidov (tabuľka 5).
3.5. Génové prejavy súvisiace s rastom, imunitou a stresom
Na konci experimentu výživový doplnok polysacharidov zvýšil expresiu génov súvisiacich s imunitou, rastom a stresom vo svalovom tkanive L. vannamei. Čo sa týka expresie génov súvisiacich s rastom (IGF-I a IGF-II), ich expresia bola značne upregulovaná (p < 0.05) pri liečbe rôznymi porovnávanými koncentráciami polysacharidov na ovládací prvok (SWP{{10}}). Expresia bola zvýšená v SWP3 a zistilo sa, že je vyššia ako SWP0 s približne 12 a 11-násobnou zmenou, v danom poradí (obrázok 1A, B). Expresie génov súvisiacich s imunitou (Bgp, ProPO, Crustin a Lys) boli výrazne upregulované pri liečbe SWP3, kde násobné zmeny boli 9,3, 12,4, 10,5 a 8,8, v tomto poradí, ktoré boli vyššie ako SWP0 (obrázok 1C –F).
V porovnaní s kontrolnou skupinou (SWPo) vykazuje gén ProPO najvyššie hladiny expresie vo všetkých liečebných koncentráciách. Pre gén Crusfin existuje významný rozdiel medzi ošetrením SWP3 a kontrolou, zatiaľ čo medzi ošetrením SWP a SWP a kontrolou nebol žiadny významný rozdiel. Ďalej, expresia stresových génov (SOD a GPx) v SWP; sa značne zvýšili o 5.{2}} a 6.{4}}násobne. vzhľadom na kontrolu (obrázok 1G, H). Bol však významný rozdiel (p < 0.05) v expresii génu SOD medzi všetkými liečbami v porovnaní s kontrolou s väčším zvýšením liečby SWP. Medzitým bol významný rozdiel (p < 0,05) v génovej expresii GPx medzi ošetreniami SWP a SWP v porovnaní s kontrolným ošetrením SWP, ale medzi ošetreniami SWP a SWP sa nepozoroval žiadny významný rozdiel.
4. Diskusia
Polysacharidy z morských rias sú uznávané ako vysokohodnotné aktívne molekuly, ktoré zlepšujú rastové výkony, posilňujú odozvu imunitného systému a majú mnoho zdravotných výhod pre organizmy akvakultúry [2,54,93–97]. V tejto štúdii sme predpokladali, že diétne podávanie polysacharidu odvodeného z hnedých morských rias (Sargassum centifolia) zlepšuje rastové výkony, využitie krmiva, zloženie tela, mikrobiálne spoločenstvá a expresiu génov rastu, imunity a stresu kreviet bielych L. vannamei. Súčasná kŕmna skúška preukázala, že prírastok hmotnosti L. vannamei sa významne zlepšil so zvyšujúcimi sa hladinami polysacharidov v komerčnej strave v porovnaní s kontrolnou stravou. Súčasné zistenia sú paralelné s predchádzajúcimi štúdiami vykonanými na rôznych druhoch kreviet a rýb.
Napríklad Lee a kol. [98] uviedli, že extrakt z horúcej vody z hnedej morskej riasy Sargassum horneri výrazne zlepšuje rastové výkony, stimuluje vrodenú imunitu a zvyšuje expresiu imunitných génov kreviet L. vannamei a odporučili, aby ideálna hladina bola 5 g kg–1. Okrem toho štúdia Liu a kol. [99] skúmali vplyv rôznych úrovní začlenenia (0, 1, 2 a 3 g kg–1) polysacharidov extrahovaných zo zelených morských rias (Enteromorpha) do stravy banánových kreviet F. merguiensis a dospeli k záveru, že 1 g kg–1 významne zvyšuje rastovú výkonnosť, zlepšuje nešpecifickú imunitu a moduluje črevnú funkciu F. merguiensis, zatiaľ čo Abdulrahman et al. [2] skúmali vplyv rôznych pomerov zaradenia do stravy (0, 10, 20 a 30 g kg–1) polysacharidov získaných z hnedých morských rias S. dentalium na hybridnú červenú tilapiu a dospeli k záveru, že 30 g kg–1 dosiahli najvyšší významný rastový výkon, FCR a hematologické indexy. Nekonzistentnosť v úrovniach zahrnutia medzi tieto štúdie však môže byť spôsobená rôznymi počiatočnými hmotnosťami, druhmi morských rias, druhmi (druhy rýb a kreviet), vekom atď.
Množstvo črevnej mikroflóry rýchlo reaguje na zmeny v príjme potravy, zložení a zložkách. Preto má obrovský vplyv na zdravotné prínosy všetkých vodných organizmov, ako je konzumácia potravy, trávenie, využitie živín, absorpcia a imunitné reakcie [22,87,100,101]. V súčasnosti je hodnotenie odolnosti voči chorobám dôležité v odvetví akvakultúry, aktivita krvných antioxidantov a imunitných faktorov je dobrým indikátorom zdravotného stavu na skúmanie imunitnej odpovede a odolnosti voči chorobám u L. vannamei, ako je vírus syndrómu bielych škvŕn (WSSV) [ 49] a Vibrio alginolyticus [102]. Reaktívne formy kyslíka (ROS) sú chemicky reaktívne molekuly obsahujúce kyslík, ako sú kyslíkové ióny a peroxidy. Nadmerné množstvo ROS môže ovplyvniť štruktúru a stabilitu funkčných proteínov, nenasýtených mastných kyselín a nukleových kyselín, spôsobiť oxidačné poškodenie imunitného systému organizmu a zvýšiť náchylnosť kreviet voči patogénom [73]. Zdravie vodných organizmov teda závisí od rovnováhy medzi produkciou ROS a antioxidačných enzýmov ako SOD a GPx, ktoré chránia živočíšne bunky pred voľnými radikálmi. Súčasné zistenia ukázali, že diétne polysacharidy získané z hnedých morských rias (S. centifolia) účinne zlepšili aktivity antioxidačných enzýmov, vrátane SOD a GPx. Podobne, aktivity SOD a GPx rôznych kôrovcov sa zvýšili po kŕmení diétami doplnenými o polysacharidy Angelica sinensis v krevetách bielych [60] a -glukán [103] a polysacharidy Rhodiola rosea v červených močiarnych rakoch [104].
Súčasná práca uvádza, že v porovnaní s SWP{{0}} boli počty THB a TVC významne (p > 0,05) znížené so zvýšením úrovní inklúzie polysacharidov (SWP1, SWP2 a SWP3). Tieto výsledky sú v súlade s výsledkami uvedenými v štúdii Mansour et al. [87], ktorí zistili, že zvyšujúce sa hladiny astaxantínu extrahovaného z kmeňa cyanobaktérií Arthrospira platensis NIOF17/003 v diéte L. vannamei významne (p > 0,05) znížili počty THB a TVC. Akčný mechanizmus toho, ako polysacharid z morských rias ovplyvnil množstvo mikrobioty, však stále nie je jasný a vyžaduje si ďalšie štúdie [87, 101].
Súčasný výskum bol zameraný na niekoľko génov zapojených do imunologickej odpovede. Pri liečbe SWP3 bola expresia upregulačného génu zreteľne vyššia. Výsledky ukázali zvýšenú expresiu pri ošetreniach v porovnaní s kontrolou (SWP0), čo naznačuje, že polysacharid môže zlepšiť imunitný stav kreviet prostredníctvom mikrobiálnych bunkových stien zložených z peptidoglykánov, lipopolysacharidov (LPS) a -1 , 3-glukány, ktoré môžu aktivovať imunitnú odpoveď kreviet spustením hlavného nešpecifického obranného mechanizmu [22,87,105,106].
Profenoloxidáza je kľúčovým enzýmom v humorálnej imunite bezstavovcov, ktorý podporuje melanizáciu, aby sa zbavil invazívnych patogénov [107] a je spojený so sklerotizáciou kutikuly a hojením rán [108]. Bezstavovce majú systém bez sebarozpoznania nazývaný aktivačný systém ProPO, ktorý môže detekovať a reagovať na votrelcov pomocou peptidoglykánu alebo lipopolysacharidov z baktérií a -1, 3-glukánov z húb [109]. Ukázalo sa, že expresia mRNA génu ProPO je značne vyššia vo všetkých liečebných postupoch v porovnaní s kontrolnou skupinou a zistilo sa, že táto expresia je najväčšia spomedzi všetkých skúmaných génov, pretože sa zvýšil obsah polysacharidov z morských rias (diéta 3 g kg-1). . Kŕmenie kreviet P. monodon stravou, ktorá obsahovala polysacharid fukoidan z hnedej morskej riasy S. wightii, zvýšilo expresiu génu ProPO [110]. Niektoré ďalšie doplnky stravy odvodené z mikrorias a morských rias zvýšili ProPO systém kreviet a zlepšili humorálnu imunitnú odpoveď. Naše zistenia sú v súlade s predchádzajúcimi štúdiami uskutočnenými na L. vannamei [22,87].
Crustin, definovaný ako súčasť vrodeného imunitného systému [111], je proteín nachádzajúci sa v hemocytových granulách kôrovcov a je účinný proti niekoľkým mikroorganizmom. V tejto štúdii doplnená strava extrahovaného polysacharidu zvýšila expresiu génu Crustina a medzi týmito tromi liečbami bol jasný rozdiel. Po podaní peptidoglykánu sa pozorovalo významné zvýšenie hladín mRNA Crustina u Marsupenaeus japonicus [112]. Gén Crustina bol upregulovaný (p < 0 0,05) u tichomorskej bielej krevety L. vannamei, ktorej sa podával doplnkový astaxantín [87,113]. Ako proteín nachádzajúci sa v eukaryotoch a prokaryotoch je lyzozým už nejaký čas známy a považuje sa za jeden z prvých známych antibakteriálnych proteínov [114]. Nešpecifická vrodená imunita sa spolieha na svoju schopnosť rozložiť b -1,4 glykozidickú väzbu medzi kyselinou N-acetylmuramovou a N-acetylglukózamínom v peptidoglykáne bakteriálnej bunkovej steny [115].
V súčasnom výskume sa ukázalo, že expresia Ly génu je podstatne vyššia v liečených skupinách (SWP1, SWP2 a SWP3) ako v kontrolnej skupine (SWP0). Ďalšie skúmanie transkriptómu s použitím druhov, ktoré čelia environmentálnym výzvam, tiež prinieslo podobné zistenia [116, 117]. Tieto zistenia ukázali, že lyzozým je kľúčovou súčasťou antibakteriálneho obranného mechanizmu kreviet a je vyvolaný rôznymi imunostimulačnými látkami. Antioxidačné enzýmy kataláza a glutatiónperoxidáza premieňajú peroxid vodíka na kyslík a vodu, zatiaľ čo SOD, jeden zo stresových génov, sa podieľa na eliminácii superoxidových aniónov ich premenou na peroxid vodíka a vodu [118]. V dôsledku toho tieto antioxidačné enzýmy poskytujú hemocytom zvierat dýchajúcich kyslík po fagocytóze sebaobranu, čím zachovávajú zdravie a životaschopnosť organizmov [119, 120]. V porovnaní s kontrolou bola expresia génu SOD zvýšená v troch experimentálnych podmienkach a predchádzajúci výskum [22,87,113,116] naznačil, že kŕmna prísada zvýšila expresiu génu SOD, ktorý sa podieľa na antioxidačnom enzýmovom systéme v L. vannamei.
V glutatiónovom obrannom systéme je GPx zodpovedný za redukciu peroxidu vodíka na vodu [117,121]. V našom výskume sa zistilo, že expresia GPx je vyššia pri liečbe SWP3, kde sa použila vyššia koncentrácia polysacharidov z morských rias. Oba stresové gény v tejto štúdii sú teda výrazne upregulované v porovnaní s kontrolnou skupinou a aktivity SOD a GPx sa zvyšujú spolu so zvýšením superoxidového aniónu (O2 -) a peroxidu vodíka (H2O2), čo môže naznačovať zvýšenie aktivita NADPH-oxidázy a produkcia množstva reaktívnych foriem kyslíka (ROS), ktoré môžu predstavovať obranný mechanizmus proti mikrobiálnej infekcii [73,122]. Nedávny výskum hodnotil expresiu génov zapojených do imunity u kreviet [123,124] a sústredil sa na spôsoby, ako posilniť ich prirodzenú obranyschopnosť.
Existujú dva typy peptidových hormónov inzulínu podobného rastového faktora (IGF), IGF-I a IGF-II; existujú aj receptory na povrchu buniek a cirkulujúce väzbové proteíny. IGF-II, podobne ako IGFI, má úlohu v metabolizme proteínov, bunkovej diferenciácii, bunkovej proliferácii a somatickom raste. Na základe zistení súčasnej štúdie sa zdá, že extrakcia polysacharidov z morských rias môže zvýšiť expresiu génov súvisiacich s rastom na úrovni mRNA, čím sa nepriamo zvýši rastová kapacita. Iné štúdie skúmajúce vplyv využívania rôznych zdrojov uhlíka na zvýšenie expresie génov IGF-I a IGF-II odhalili podobné výsledky [123]. Okrem toho, použitie nanočastíc zelenej mikroriasy, T. suecica a A. platensis ako doplnkového krmiva pre L. vannamei výrazne zvýšilo expresiu oboch génov a zlepšilo rast [22 100].
5. Závery
Celosvetovo sa strava s krevetami rozšírila pomocou niekoľkých stratégií na riešenie vývoja v chove pacifických kreviet bielych L. vannamei. Napriek dôležitosti kŕmnych doplnkových látok pre L. vannamei je málo známe o aplikácii polysacharidov pripravených z hnedých morských rias v priemysle kŕmnych doplnkových látok L. vannamei. V súčasnej práci miera inklúzie 2 g kg-1 polysacharidov, vysokohodnotnej aktívnej molekuly pripravenej z hnedej morskej riasy Sargassum dentiform, ako podávanie diétnej prísady zvyšuje konečný prírastok hmotnosti a mieru prežitia pacifickej bielej krevety, L. vannamei, zatiaľ čo úroveň inkorporácie 3 g kg–1 znižuje množstvo patogénnych mikróbov, navyše zvyšuje imunitu a génové expresie L. vannamei súvisiace so stresom. Mali by sa však vykonať ďalšie štúdie, aby sa maximalizovali výhody polysacharidov pripravených z druhov morských rias ako doplnkové podávanie do pacifickej krevety belorítky L. vannamei.
Príspevky autora:
Konceptualizácia, EMA, ZZS a MA; metodika, EMA, ZZS a MA; softvér, EMA, ZZS a MA; validácia, EMA, ZZS, MA a EE-H.; formálna analýza, EMA, ZZS a MA; vyšetrovanie, EMA, ZZS, MA a EE-H.; zdrojov, EMA, ZZS a MA; správa údajov, EMA, ZZS a MA; písanie – príprava pôvodného návrhu, EMA, ZZS a MA; písanie—recenzia a úprava, EMA, ZZS, MA, ASA-S. a EE-H.; vizualizácia, EMA, ZZS, MA a EE-H.; dozor, ZZS, MA a EE-H.; administrácia projektov, EMA; získavanie financií, EMA, ZZS, MA a ASA-S. Všetci autori si prečítali publikovanú verziu rukopisu a súhlasili s ňou.
Financovanie:
Tento výskum nezískal žiadne externé financovanie.
Vyhlásenie inštitucionálnej revíznej rady:
Súlad s etickými štandardmi pri experimentálnom usporiadaní a manipulácii s krevetami schválil Výskumný výbor NIOF, Egypt, číslo schválenia: NIOF/AQ3/1/22/R/012 dňa 22. januára 2021.
Vyhlásenie o informovanom súhlase: Neuplatňuje sa.
Vyhlásenie o dostupnosti údajov: Neuplatňuje sa.
Poďakovanie: Otvorený prístup k tejto práci čiastočne podporila jednotka pre akvakultúru AL Hail, Katedra námornej vedy a rybolovu, Vysoká škola poľnohospodárstva a námorníctva, Univerzita sultána Qaboosa, Omán.
Konflikty záujmov: Autori nevyhlasujú žiadny konflikt záujmov.
Referencie
1. Abbas, EM; Ali, FS; Desouky, MG; Ashour, M.; El-Shafei, A.; Maaty, MM; Sharawy, ZZ Novela Komplexná molekulárna a ekologická štúdia predstavujúca krevety pobrežné bahenné (Solenocera crassicornis) zaznamenané v Suezskom zálive v Egypte. J. Mar. Sci. Ing. 2020, 9, 9. [CrossRef]
2. Abdelrhman, AM; Ashour, M.; Al-Zahaby, MA; Sharawy, ZZ; Nazmi, H.; Zaki, MA; Ahmed, NH; Ahmed, SR; El-Haroun, E.; Van Doan, H. Vplyv polysacharidov odvodených z hnedých makrorias Sargassum dentalium na rastový výkon, biochemické vlastnosti séra, histológiu trávenia a enzýmovú aktivitu hybridnej červenej tilapie. Aquac. Rep. 2022, 25, 101212. [CrossRef]
3. Goda, A.; Saad, A.; Hanafy, M.; Sharawy, Z.; El-Haroun, E. Diétne účinky Azolla pinnata v kombinácii s exogénnym tráviacim enzýmom (Digestin™) na rast a využitie živín sladkovodných kreviet, Macrobrachium rosenbergii (de Man 1879). J. Oceanol. Limnol. 2018, 36, 1434–1441. [CrossRef]
4. Sharawy, ZZ; Abbas, EM; Abdelkhalek, NK; Ashry, OA; Abd El-Fattah, LS; El-Sawy, MA; Helal, MF; El-Haroun, E. Vplyv zdroja organického uhlíka a hustoty zásob na rastové indexy, vodnú mikroflóru a expresiu génov súvisiacich s imunitou lariev Litopenaeus vannamei v intenzívnej kultúre. Akvakultúra 2022, 546, 737397. [CrossRef]
5. Gillett, R. Globálna štúdia lovu kreviet. FAO Fish Tech. Pap. 2008, 475, 25–29.
6. Ahmed, N.; Thompson, S.; Glaser, M. Globálna produktivita akvakultúry, udržateľnosť životného prostredia a adaptabilita na zmenu klímy. Environ. Manag. 2019, 63, 159–172. [CrossRef] [PubMed]
7. Lukwambe, B.; Nicholas, R.; Zhang, D.; Yang, W.; Zhu, J.; Zheng, Z. Následné zmeny komunity mikrorias v reakcii na komerčné probiotiká v systémoch intenzívnej kultúry kreviet (Litopenaeus vannamei Boone). Akvakultúra 2019, 511, 734257. [CrossRef]
8. Li, E.; Xu, C; Wang, X.; Wang, S.; Zhao, Q.; Zhang, M.; Qin, JG; Chen, L. Črevná mikroflóra a jej modulácia pre zdravý chov tichomorských bielych kreviet Litopenaeus vannamei. Ryba. Sci. Aquac. 2018, 26, 381–399. [CrossRef]
9. Stevens, C.; Croft, D.; Paull, G.; Tyler, C. Stres a dobré životné podmienky okrasných rýb: Čo sa dá naučiť z akvakultúry? J. Fish Biol. 2017, 91, 409–428. [CrossRef]
10. El-Sayed, AFM Použitie technológie biofloc v akvakultúre kreviet: Komplexný prehľad s dôrazom na posledné desaťročie. Rev. Aquac. 2021, 13, 676–705. [CrossRef]
11. Anh, NTN; Shayo, FA; Nevejan, N.; Van Hoa, N. Účinky hustoty zástavu a rýchlosti kŕmenia na kvalitu vody, účinnosť krmiva a výkonnosť bielych kreviet Litopenaeus vannamei v integrovanom systéme s morským hroznom Caulerpa lentillifera. J. Appl. Phycol. 2021, 33, 3331–3345. [CrossRef]
12. Emerenciano, MG; Rombenso, AN; Vieira, FdN; Martins, MA; Coman, GJ; Truong, HH; Noble, TH; Simon, CJ Intenzifikácia kultúry kreviet Penaeid: Aplikovaný prehľad o pokrokoch vo výrobných systémoch, výžive a chove. Zvieratá 2022, 12, 236. [CrossRef] [PubMed]
13. Mansour, AT; Ashry, OA; Ashour, M.; Alsaqufi, AS; Ramadán, KM; Sharawy, ZZ Optimalizácia hladiny bielkovín a zdrojov uhlíka v potrave na nutričné hodnoty biofloku, množstvo baktérií a rastové výkony mláďat kreviet bielych (Litopenaeus vannamei). Life 2022, 12, 888. [CrossRef] [PubMed]
14. Mansour, AT; Ashry, OA; El-Neweshy, MS; Alsaqufi, AS; Dighiesh, HS; Ashour, M.; Kelany, MS; El-Sawy, MA; Mabrouk, MM; Abbas, EM účinok poľnohospodárskych vedľajších produktov ako zdroja uhlíka v systéme založenom na bioflokoch na výkonnosť rastu, aktivity tráviacich enzýmov, histológiu hepatopankreasu a črevnú bakteriálnu záťaž Litopenaeus vannamei po larvách. J. Mar. Sci. Ing. 2022, 10, 1333. [CrossRef]
15. Iber, BT; Kasan, NA Nedávne pokroky v manažmente odpadových vôd z akvakultúry kreviet. Heliyon 2021, 7, e08283. [CrossRef] [PubMed]
16. Zaki, MA; Ashour, M.; Heneash, AMM; Mabrouk, MM; Alprol, AE; Khairy, HM; Nour, AM; Mansour, AT; Hassanien, HA; Gaber, A.; a kol. Potenciálne aplikácie izolátu natívnej cyanobaktérie (Arthrospira platensis NIOF17/003) na výrobu bionafty a využitie jej vedľajšieho produktu pri produkcii morských vírnikov (Brachionus plicatilis). Udržateľnosť 2021, 13, 1769. [CrossRef]
17. Abisha, R.; Krishnani, KK; Sukhdhane, K.; Verma, A.; Brahmane, M.; Chadha, N. Trvalo udržateľný rozvoj akvakultúry odolnej voči klíme a rybolovu založeného na kultúre prostredníctvom prispôsobenia sa abiotickým stresom: Prehľad. J. Water Clim. Zmena 2022, 13, 2671–2689. [CrossRef]
18. Alprol, AE; Ashour, M.; Mansour, AT; Alzahrani, OM; Mahmoud, SF; Gharib, SM Hodnotenie kvality vody a štruktúry fytoplanktónu ôsmich alexandrijských pláží, juhovýchodné Stredozemné more, Egypt. J. Mar. Sci. Ing. 2021, 9, 1328. [CrossRef]
19. Metwally, AS; El-Naggar, HA; El-Damhougy, KA; Bashar, MAE; Ashour, M.; Abo-Taleb, HAH GC-MS analýza bioaktívnych zložiek v šiestich rôznych surových extraktoch z mäkkých koralov (Sinularia maxim) zozbieraných z Ras Mohamed, Aqaba Gulf, Červené more, Egypt. Egypt. J. Aquat. Biol. Ryby. 2020, 24, 425–434. [CrossRef]
20. Magouz, FI; Essa, MA; Matter, M.; Tageldein Mansour, A.; Alkafafy, M.; Ashour, M. Dynamika populácie, plodnosť a zloženie mastných kyselín Oithona nana (Cyclopoida, Copepoda), kŕmené rôznymi diétami. Zvieratá 2021, 11, 1188. [CrossRef]
21. Kesselring, J.; Gruber, C.; Standen, B.; Wein, S. Vplyv fytogénneho kŕmneho aditíva na rastový výkon a imunitu tichomorských kreviet, Litopenaeus vannamei, kŕmených stravou s nízkym obsahom rybej múčky. J. World Aquac. Soc. 2021, 52, 303–315. [CrossRef]
22. Sharawy, ZZ; Ashour, M.; Labena, A.; Alsaqufi, AS; Mensour, AT; Abbas, E. Účinky diétnych nanočastíc Arthrospira platensis na rastový výkon, využitie krmiva a génovú expresiu tichomorských bielych kreviet Litopenaeus vannamei súvisiacu s rastom. Akvakultúra 2022, 551, 737905. [CrossRef]
23. Ceseña, CE; Jacinto, EC; González, AL; Villasante, FV; Castro, RMM; Ochoa, N.; Montes, RE; Ramírez, DT; Ortiz, ACS; Campa-Córdova, AI Doplnok stravy Debaryomyces hansenii zlepšil prežitie, antioxidačnú a imunitnú odpoveď u mladých kreviet Penaeus vannamei vystavených Vibrio parahaemolyticus. Trop. Subtrop. Agroecosyst. 2021, 24, 2. [CrossRef]
24. Mansour, AT; Ashour, M.; Alprol, AE; Alsaqufi, AS Vodné rastliny a vodné živočíchy v kontexte udržateľnosti: Kultivačné techniky, integrácia a modrá revolúcia. Udržateľnosť 2022, 14, 3257. [CrossRef]
25. Hassan, SM; Ashour, M.; Soliman, AAF; Hassanien, HA; Alsanie, WF; Gaber, A.; Elshobary, ME Potenciál nového komerčného extraktu z morských rias pri stimulácii morfo-agronomických a bioaktívnych vlastností Eruca vesicaria (L.) Cav. Udržateľnosť 2021, 13, 4485. [CrossRef]
26. Essa, D.; Abo-Shady, A.; Khairy, H.; Abomohra, AE-F.; Elshobary, M. Potenciálna kultivácia halofilných olejnatých mikrorias na priemyselných odpadových vodách. Egypt. J. Bot. 2018, 58, 205–216. [CrossRef]
27. Mansour, AT; Alprol, AE; Abualnaja, KM; El-Beltagi, HS; Ramadán, KMA; Ashour, M. Sušený potenciál fytoremediácie hnedých morských rias na odstránenie farbiva metylénovej modrej z vodného prostredia. Polyméry 2022, 14, 1375. [CrossRef]
For more information:1950477648nn@gmail.com
