Časť 1|Genetická variácia implikuje plazmatický angiopoetín-2 vo vývoji subfenotypov akútneho poškodenia obličiek

Pavan K. Bhatraju1,2*, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1, Sina A. Gharib1, W. Conrad Liles8, Ying Zheng3,4, David C. Christiani9,10, Jonathan Himmelfarb2 a Mark M. Wurfel1,2

Abstraktné

Pozadie:Predtým sme identifikovali dveakútnaobličkyzranenie(AKI) subfenotypy (AKI-SP1 a AKI-SP2) s rôznymi rizikami zlých klinických výsledkov a reakcií na vazopresorickú terapiu. Plazmatické biomarkery endotelovej dysfunkcie (receptor tumor nekrotizujúceho faktora-1, angiopoetín-1 a 2) diferencovali subfenotypy AKI.

Nie je však známe, či sú tieto biomarkery jednoducho markermi alebo kauzálnymi mediátormi vo vývoji subfenotypov AKI.

Metódy:Testovali sme asociácie medzi jednonukleotidovými polymorfizmami v rámciangiopoetín-1, angiopoetín-2,aReceptor nádorového nekrotického faktora 1Agénov a AKI-SP2 u 421 kriticky chorých jedincov európskeho pôvodu. Najvýkonnejšie jednonukleotidové polymorfizmy (FDR < 0.05)="" sa="" testovali="" na="" expresiu="" cis-biomarkerov="" a="" na="" to,="" či="" je="" genetické="" riziko="" pre="" aki-sp2="" sprostredkované="" cirkulujúcimi="" biomarkermi.="" dokončili="" sme="" tiež="" štúdie="" in="" vitro="" s="" použitím="" mikrovaskulárnych="" endotelových="" buniek="" ľudskej="" obličky.="" nakoniec="" sme="" vypočítali="" renálny="" klírens="" plazmatických="" biomarkerov="" pomocou="" 20="" rôznych="" časovaných="" odberov="">

Výsledky:Genetický variant, rs2920656C > T, blízkoANGPT2bola spojená so zníženým rizikom AKI-SP2 (pomer pravdepodobnosti, 0,45; 95 percent CI, 0,31–0,66; upravené FDR=0,003 ) a znížený plazmatický angiopoetín-2 (p = 0.002). Analýza príčinnej súvislosti ukázala, že pre každú menšiu alelu (T) sa riziko vzniku AKI-SP2 znižuje o 16 percent. Plazmatický angiopoetín{5}} sprostredkoval 41,5 percenta rizika súvisiaceho s rs2920656 pre AKI-SP2. Mikrovaskulárne endotelové bunky ľudských obličiek nesúce T alelu rs2920656 produkovali numericky nižšie hladiny angiopoetínu-2, hoci to nebolo štatisticky významné (p = 0.07). Nakoniec analýzy preukázali, že angiopoetín-2 sa u kriticky chorých jedincov skutočne eliminuje len minimálne.

Záver:Analýza genetickej mediácie poskytuje podporný dôkaz, že angiopoetín-2 hrá príčinnú úlohu v riziku AKI-SP2.

Kľúčové slová: Akútne poškodenie obličiek, Genetika, Endotel

Pre viac informácií kontaktujte:emily.li@wecistanche.com

Cistanche deserticola zabraňuje ochoreniu obličiek, kliknite sem a získajte vzorku

Pozadie

Akútnaobličkyzranenie(AKI) postihuje 40–60 percent pacientov prijatých na jednotku intenzívnej starostlivosti (JIS) a prispieva k zlým krátkodobým a dlhodobým výsledkom. Doterajšie genetické štúdie sa zameriavali na asociácie medzi genetickými variantmi a rizikom AKI porovnávaním prípadov (AKI) s kontrolami (bez AKI). Tento rámec však môže byť obmedzený, pretože prípadyAkútnaobličkyzraneniesú vysoko heterogénne s rôznymi zrážadlami a biologickými profilmi. Kombinácia takýchto pacientov s AKI na maximalizáciu veľkosti vzorky môže viesť k zriedeniu genetických štatistických signálov, ktoré môžu byť prítomné iba v jednej patofyziologicky odlišnej podskupine populácie AKI. Ďalším obmedzením je, že AKI u kriticky chorých populácií je často komplikáciou vážnych urážok, ako je sepsa, chirurgický zákrok, šok, zápal pľúc a trauma. Použitie ovládacích prvkov bez vývojaAkútnaobličkyzraneniemôže byť problematické. Kontroly nesúce vysoko rizikový genetický variant nemusia vyvinúť AKI, ak tiež nezaznamenajú podobné akútne poškodenie ako prípady, a preto by boli klasifikované ako neprípady, čím by sa oslabil akýkoľvek potenciálny asociačný signál. Použitie biologicky odlišných subfenotypov AKI v štúdiách genetickej asociácie prekonáva predchádzajúce obmedzenia vo fenotypizácii AKI špecifickým zameraním sa na populáciu AKI a porovnaním dvoch biologicky odlišných subfenotypov.

Nedávno sme identifikovali dva subfenotypy AKI (AKI-SP1 a AKI-SP2) aplikáciou metodológie analýzy latentných tried na panel 29 klinických a biomarkerových premenných v dvoch nezávislých kriticky chorých populáciách AKI. Je pozoruhodné, že AKI-SP2 bola spojená s horšími výsledkami v nemocnici (napr. úmrtnosť, nová dialýza a 7-denné neuzdravenie obličiek) v porovnaní s AKI-SP1. Ďalej sme identifikovali tieto subfenotypy AKI v predtým dokončenej multicentrickej randomizovanej kontrolnej štúdii, vazopresín verzus infúzia norepinefrínu u pacientov so septickým šokom (VASST). Štúdia VASST skúmala, či výber vazopresorickej liečby zlepšil mortalitu u jedincov so septickým šokom. Zatiaľ čo populácia AKI v klinickom skúšaní nemala žiadny rozdiel v mortalite z vazopresorickej terapie, AKI-SP1 mala mortalitu s vazopresínom v porovnaní s AKI-SP2 bez rozdielu v úmrtnosti. Pokiaľ je nám známe, toto je prvý príklad identifikácie podskupín AKI reagujúcich na liečbu u kriticky chorých.

Pozoruhodné je, že žiadna premenná nebola štatisticky lepšia ako ostatné premenné na identifikáciu AKI-SP2 (tabuľka 1). Na rozdiel od toho model s tromi premennými využívajúci plazmatický angiopoetín-2 (ANG-2), angiopoetín-1 (ANG-1) a receptor rozpustného tumor nekrotizujúceho faktora{{8 }} (sTNFR-1), mal optimálny prediktívny výkon na rozlíšenieAkútnaobličkyzraneniesubfenotypy (C-štatistika 0.93). Nižšie ANG-2, nižšie sTNFR-1 a vyššie ANG-1 boli spojené s nižším rizikom AKI-SP2. Štúdie na zvieracích modeloch AKI ukázali, že tieto plazmatické biomarkery sa podieľajú na

patofyziológie a závažnosti AKI. Nie je však známe, či tieto plazmatické biomarkery zohrávajú kauzálnu úlohu vo vývoji klinickejAkútnaobličkyzraneniesubfenotypy. Identifikácia kauzálnych markerov by mohla poskytnúť informácie o cieľoch vývoja lieku, aby sa zabránilo alebo liečilo vývojAkútnaobličkyzranenieu kriticky chorých a mohla by pomôcť pri stratifikácii rizika pacienta.

Analýza genetickej mediácie je jedným z niekoľkých kauzálnych inferenčných prístupov, ktoré dokážu identifikovať potenciálny mechanizmus, ktorým nezávislá premenná (napr. genetický variant) ovplyvňuje výsledok (napr. subfenotypy AKI) prostredníctvom vysvetľujúceho mediátora (napr. biomarker endotelovej dysfunkcie) . Tento prístup bol široko používaný v klinických údajoch na pochopenie kauzálnych mechanizmov ochorenia. Predpokladali sme, že cis-kvantitatívne lokusy znakov (QTL) vANGPT1, ANGPT2 a TNFRSF1Agény ovplyvňujú vývoj subfenotypov AKI reguláciou cirkulujúcich hladín ich príslušných biomarkerov (ANG-1, ANG-2 alebo sTNFR-1).

Metódy

Študijné populácie

Predtým sme uviedli identifikáciu subfenotypov AKI pomocou prospektívne zozbieranej kohorty JIS: identifikácia jednonukleotidových polymorfizmov (SNP) predisponujúcich k zmenenému riziku akútneho poškodenia pľúc (iSPAAR). Populácia iSPAAR je celogenómová prípadová kontrolná štúdia rizika syndrómu akútnej respiračnej tiesne (ARDS), ktorá zahŕňala pacientov s a bez ARDS. Populácia iSPAAR zahŕňala subjekty z predtým dokončených randomizovaných kontrolných štúdií a z prospektívne zaradenej kohorty na JIS. Podrobnosti návrhu štúdie pre každú populáciu zaradenú do iSPAAR boli opísané skôr; Albuterol na liečbu akútneho poškodenia pľúc (ALTA), test na liečbu tekutinami a katétrom (FACTT), enterálna omega{3}} mastná kyselina, kyselina gama-linolénová a suplementácia antioxidantov pri akútnom poškodení pľúc (OMEGA)

a Molekulárna epidemiológia akútnej respiračnej tiesne (MEA) vo Všeobecnej nemocnici v Massachusetts. V rámci iSPAAR došlo k zápisu do štúdie 48 hodín po prijatí na JIS. Pri zaradení do štúdie sa odobrala DNA a plazma na genotypizáciu a analýzu biomarkerov, po ktorej nasledovaloAkútnaobličkyzraneniezistenie. AKI bola definovaná ako zvýšenie sérového kreatinínu (SCr) vyššie alebo rovné 0,3 mg/dl alebo 50 percent od "základnej" SCr. Východisková hodnota SCr bola definovaná ako najnižšia hodnota pred zaradením do štúdie. AKI bol tiež definovaný pomocou modifikovaných kritérií výstupu moču (denný výstup namiesto každých 6 hodín).

Aby sme určili renálny klírens biomarkerov plazmy, zaradili sme perspektívnu kohortu na lekárske a chirurgické jednotky intenzívnej starostlivosti v Harborview, Critical IllnessAkútnaobličkyzraneniekohorta (CIA). Subjekty boli vhodné na zaradenie, ak splnili 2 zo 4 kritérií syndrómu systémovej zápalovej odpovede, mali klinicky podozrenie na infekciu a mali zavedený trvalý močový katéter. Dokončil sa časovaný zber moču, ktorý trval aspoň 2–4 hodiny a vzorky plazmy EDTA sa odobrali na začiatku a na konci časovaného zberu moču. Klírens sa vypočítal pomocou vzorca Klírens(X) = U(X) * V/ P(X), kdeU(X) predstavuje koncentráciu rozpustenej látky v močiX, V označuje objem moču za 2–4-hodinové obdobie zberu aP (X) predstavuje priemerné plazmatické koncentrácie rozpustenej látkyX z počiatočných a konečných odberov krvi.

Stratégia genotypizácie

Genotypizácia bola vykonaná u 421 pacientov európskeho pôvodu pomocou platformy Illumina 660 (Illumina, San Diego, CA). Genotypizované údaje boli kvalitatívne kontrolované pomocou vzorového filtra frekvencie hovorov > 0,97, frekvencie minor alely (MAF) > 0,01 a frekvencie hovorov SNP > 0,95. Po kontrole kvality bolo 238 SNP ± 50 kilobázANGPT1, ANGPT2,aTNFRSF1Aboli nájdené. Po väzbovej nerovnováhe (LD) prerezanie r²z {{0}}.8 bolo odstránených 48 SNP, čo viedlo k celkovo 190 SNP použitým v asociačných testoch. Imputácia sa uskutočnila pomocou referenčného panelu projektu 1000 Genomes s použitím IMPUTE2 v2.3.0.

Stanovenie plazmatických bielkovín

Plazmatické a močové biomarkery sa merali pomocou elektrochemiluminiscenčných imunotestov (Meso Scale Discovery (MSD), Rockville, MD), ako už bolo opísané. Krv sa odoberala do sterilných skúmaviek ošetrených EDTA, moč sa zbierala do sterilných nádob a obe sa ihneď centrifugovali. Plazma a moč boli potom rozdelené na alikvóty a zmrazené na -80 stupňov. Vzorky boli skladované počas rôznych časov, ale boli rozmrazené v jednej dávke a iba raz na vykonanie meraní biomarkerov pre túto štúdiu. Všetky merania biomarkerov sa uskutočňovali v duplikátoch v Harborview Pulmonary Research Laboratories.

In Silico analýzy

Aby sme otestovali SNP na expresiu QTL účinkov, spýtali sme sa portálu Genotype-Tissue Expression (GTEx).

Bunková kultúra

Ľudské obličkové mikrovaskulárne endotelové bunky (HKME Cs) boli purifikované z fetálnych obličiek po dobrovoľnom prerušení tehotenstva medzi 100 a 135 dňami po počatí. Od pacientok bol získaný informovaný súhlas s použitím fetálnych tkanív. Potom sme náhodne vybrali 9 rôznych darcov HKMEC, rozmrazili sme a umiestnili pol milióna buniek do T25 baniek potiahnutých 0,2% želatínou a udržiavaných v EBM-2 bazálnom médiu obsahujúcom 1% antibiotika-antimykotika (Life Technologies), 10% FBS, 100 ug/ml ECGS, 50 ug/ml heparínu a 20 ng/ml VEGF (R&D), počas 48 hodín do konfluencie. Po 48 hodinách sme purifikovali genómovú DNA z HKMEC a odobrali sa bunkové supernatanty. Úspešne sme genotypizovali bunky od 8 darcov.

Štatistická analýza

Demografické premenné pacientov sa uvádzajú buď ako priemer plus /- štandardná odchýlka alebo ako medián a kvartily. Najprv sme použili logistickú regresiu na testovanie asociácie medzi 190 SNP a vývojom AKI-SP2 v porovnaní s AKI-SP1 pomocou aditívneho genetického modelu (Golden Helix, MT). Náš model bol použitý pre nasledujúce premenné: vek, pohlavie, sepsa a prvých päť hlavných komponentov. Na výpočet hlavných komponentov bola použitá metóda Eigenstrat v4.2 a prvých päť bolo zahrnutých ako kovariáty. Pomery pravdepodobnosti (OR) sa uvádzajú s 95-percentnými intervalmi spoľahlivosti. Na analýzu medzi genetickými variantmi a subfenotypmi AKI sme opravili viacnásobné porovnania pomocou prahu Benjamini-Hochbergovej miery falošného objavenia (FDR) < 0,10,="" čo="" odhaduje,="" že="" menej="" ako="" 10="" percent="" asociácií="" s="" hodnotou="" fdr="" rovnajúcou="" sa="" alebo="" nižšou="" táto="" hladina="" je="" falošne="" pozitívna="" [31].="" v="" analýze="" citlivosti="" sa="" na="" identifikáciu="" ďalších="" snp="" spojených="" s="" aki-sp2="" použil="" imputovaný="">

Po druhé, použili sme lineárnu regresnú úpravu pre vek, pohlavie a sepsu na určenie asociácií medzi najvýkonnejšími SNP a log₂transformované koncentrácie biomarkerov. Po tretie, dokončili sme kauzálnu inferenčnú analýzu, aby sme otestovali asociáciu medzi genetickými variantmi a AKI-SP2 a potenciálne sprostredkovanie asociácie koncentráciami biomarkerov v plazme. Mediačná analýza bola vykonaná pomocou nelineárnej implementácie modelovania štruktúrnych rovníc implementovaného v mediačnom balíku pre STATA [32, 33]. Ďalšie podrobnosti o analýze kauzálnej inferencie sú uvedené v online dodatku. Po štvrté, určili sme asociácie medzi genetickými variantmi a závažnosťou AKI, merané maximálnym sérovým kreatinínom, prostredníctvom logistickej regresie. Ďalšie podrobnosti o materiáloch a metódach sú uvedené v online prílohe. V analýze sme vyhodnotili 190 SNP a použili sme konzervatívnyp-hodnotaz 0,05/190 =2,6 × 10^{− 4}. Vzhľadom na to, že približne u 40 percent pacientov na JIS sa vyvinie AKI a pomer očakávanej kontroly (AKI-SP1) k prípadu (AKI-SP2) je 1,5, očakávaná veľkosť vzorky je 421 a MAF najmenej { {16}}.30, budeme mať 81-percentnú silu na zistenie relatívneho rizika 1,5 alebo viac [34]. Analýzy boli dokončené pomocou STATA (verzia 15) a Goldenhelix (verzia 4.0). Všetky štúdie boli schválené divíziou Human Subjects Division na University of Washington. Od všetkých zaradených subjektov bol získaný písomný informovaný súhlas.

Výsledky

Charakteristika populácií Zo 425 pacientov z validačnej kohorty v našej predchádzajúcej práci malo 421 k dispozícii údaje o genotypizácii. Demografické údaje a základné klinické charakteristiky sú opísané v tabuľke 1. Všetci jedinci boli európskeho pôvodu. Celkovo 267 (63 percent) bolo klasifikovaných ako AKI-SP1 a 154 (37 percent) ako AKI-SP2. Subjekty, u ktorých sa vyvinul AKI-SP2, mali pri prezentácii vyššiu závažnosť ochorenia (priemerné skóre akútnej fyziológie a chronického zdravotného stavu (APACHE) III, 111 ± 26 oproti 74 ± 24), mali väčšiu pravdepodobnosť sepsy (84 percent oproti 66 percentám) a bola väčšia pravdepodobnosť, že budú liečení vazopresormi (79 percent oproti 42 percentám) v porovnaní s AKI-SP1.

Genetická variácia v blízkosti ANGPT2, rs2920656, je spojená s AKI-SP2

Z 190 SNP ±50 kilobáz génov bolo 72 blízko ANGPT1, 100 bolo blízko ANGPT2 a 18 bolo blízko génu TNFRSF1A. Identifikovali sme jeden SNP s FDR < 0,05,="" ktorý="" bol="" spojený="" s="" aki-sp2="" v="" porovnaní="" s="" aki-sp1="" (tabuľka="" 2="" a="" obr.="" 1).="" neboli="" pozorované="" žiadne="" významné="" asociácie="" s="" snp="" v="" alebo="" blízko="" angpt1="" alebo="" tnfrsf1a="" (tabuľka="" s2="" a="" s3).="" snp="" preukazujúci="" najsilnejšiu="" súvislosť="" s="" rizikom="" pre="" aki-sp2="" bol="" rs2920656="" (or,="" 0,45;="" 95="" percent="" ci,="" 0,31–0,66;="" p="">< 1,4="" ×="" 10-5;="" fdr="0,003)." tento="" intronický="" snp="" je="" ≈="" 30="" kb="" po="" smere="" od="" pozície="" 3′="" angp="" t2="" a="" vysvetľuje="" približne="" 3="" percentá="" rozptylu="">

vývoj AKI-SP2 (R2). Pretože len malý počet jedincov bol homozygotný rs2920656 (n=26), testovali sme aj asociácie medzi rs2920656 a AKI-SP2 v dominantnom genetickom modeli, ktorý poskytoval konzistentné výsledky (ALEBO, 0 0,42; 95 percent CI, 0,28–0,64; p < 1,4="" ×="" 10–6).="" tiež="" sme="" testovali="" ďalšie,="" potenciálne="" silnejšie="" asociácie="" v="" rámci="" lokusu="" angpt2="" pomocou="" imputovaných="" genotypov,="" ale="" nenašli="" sme="" žiadne="" asociácie="" silnejšie="" ako="" asociácie="" pozorované="" s="" rs2920656="" (tabuľka="" s4).="" v="" analýze="" citlivosti="" sme="" testovali,="" či="" zahrnutie="" kriticky="" chorých="" pacientov="">Akútnaobličkyzranenieovplyvní genetickú asociáciu. Zoskupili sme pacientov bez AKI a AKI-SP1 a určili sme, či rs2920656 stále silne súvisí so zníženým rizikom AKI-SP2. V tejto analýze 839 pacientov nemalo buď AKI, alebo AKI-SP1 a 154 malo AKI-SP2. Riziko opätovného rozvoja AKI-SP2 sa výrazne znížilo, ak máme aspoň jednu alelu T pre rs2920656 (ALEBO 0.31; 95 percent CI, 0.19–0,52; p < 0,001)="" (tabuľka="" s5).="" v="" ďalšej="" analýze="" citlivosti="" sme="" testovali,="" či="" bol="" rs2920656="" spojený="" so="" zníženým="" rizikom="" aki-sp2="" v="" každej="" zo="" štyroch="" rôznych="" štúdií,="" ktoré="" boli="" zahrnuté="" do="" ispaar.="" v="" každej="" z="" troch="" randomizovaných="" kontrolných="" štúdií="" (alta,="" factt="" a="" omega)="" a="" prospektívnej="" kohorty="" na="" jis="" (mea)="" bol="" bodový="" odhad="" v="" súlade="" s="" vedľajšou="" alelou="" rs2920656,="" čo="" dokazuje="" znížené="" riziko="" rozvoja="" aki-sp2="" (tabuľka="" s6="" ).="" preto="" sa="" rs2920656="" ďalej="" analyzoval,="" aby="" sa="" určila="" súvislosť="" s="" koncentráciami="" biomarkerov="" v="">

Alela T rs2920656 je spojená so zníženým plazmatickým ANG-2

Ďalej sme analyzovali súvislosť medzi rs2920656 a plazmatickými koncentráciami ANG-2. Po úprave podľa veku, pohlavia a sepsy bola každá kópia T alely rs2920656 spojená so zníženými log2 plazmatickými koncentráciami ANG-2 (= − 0,09; 95 percent CI {{9} },15, − 0,04; P=0,002). Jedinci homozygotní pre alelu C vykazovali najvyššie koncentrácie plazmatického ANG-2 (40 683 pg/ml; interkvartilový rozsah (IQR) 19,374-73,205), zatiaľ čo jedinci homozygotní pre alelu T vykazovali najnižšie plazmatické koncentrácie ANG-2 (28 308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944). Okrem toho zo 100 testovaných SNP v blízkosti génovej oblasti ANGP T2 bol rs29206565 najsilnejšie spojený s plazmatickým ANG -2 koncentrácie (obr. 2).

Analýza sprostredkovania naznačuje, že ANG-2 je kauzálnym faktorom pri vývoji AKI-SP2

Testovali sme dôkaz, že súvislosť medzi rs2920656 a rizikom pre AKI-SP2 je sprostredkovaná plazmatickými koncentráciami ANG-2 (obr. 3). Celkový účinok rs2920656 na AKI-SP2 bol celkom=− 0,16 na alelu (95 percent CI -0,24, − 0 .10, p=1.0 × 10− 4), čo naznačuje, že pre každú vedľajšiu alelu (alelu T) genetického variantu sa riziko vzniku AKI-SP2 znižuje o 16 percent. Analýza kauzálneho sprostredkovania zistila významný nepriamy účinok pre rs2920656 na AKI-SP2, ktorý bol sprostredkovaný prostredníctvom plazmatických koncentrácií ANG-2 (nepriamy, - 0,07 na alelu; 95 percent CI -0 0,11, - 0,03; p { {34}}.001), čo znamená, že podiel účinku medzi rs2920656 a AKI-SP2, ktorý je sprostredkovaný koncentráciami ANG-2, je 41,5 percenta.

Alela T rs2920656 je spojená so zníženou závažnosťou AKI po 7 dňoch

Ďalej sme testovali asociáciu rs2920656 s tradičnými kritériami pre závažnosť AKI, ako je maximálny sérový kreatinín a zvýšenie sérového kreatinínu do 7 dní po zaradení do štúdie. V dominantnom genetickom modeli bola alela T rs2920656 spojená s poklesom kreatinínu v sére o − 0,44 mg/dl (95 percent CI, − 0,77 , − 0.10), p=0.01) po úprave podľa veku, pohlavia, indexu telesnej hmotnosti a stavu sepsy. Vedľajšia alela rs2920656 bola tiež spojená so znížením nárastu sérového kreatinínu medzi východiskovou hodnotou a dňom 7 (= − 0,25, 95 percent CI, − 0,46, − 0,03; p=0,03)

Alela T rs2920656 je spojená s nižším ANG-2 v bunkovej kultúre

Uskutočnili sme experimenty in vitro a analýzy in silico, aby sme určili funkčný význam rs2920656. Z 8 rôznych ľudských plodovobličkytkanivavzorky, 2 boli CC, 5 bolo CT a 1 bola TT pre rs2920656. V dominantnom genetickom modeli boli koncentrácie ANG-2 numericky najvyššie v endotelových bunkách od darcov homozygotných pre alelu C a nižšie u nosičov alely T, p=0.07 (obr. 4). V databáze projektu GTEx nebol rs2920656 spojený s expresiou génu ANGPT2. Avšak dva ďalšie SNP (rs41311412 a rs2515591), ktoré majú strednú LD (r2=0.23 a D'=0.86) s rs2920656, boli spojené so zníženou expresiou génu ANGPT2 (p=4.1 × 10− 5 ) v tibiálnej artérii, tkanive, ktoré je vysoko obohatené o endotelové bunky (tabuľka S7).

Plazmový ANG-2 sa obličkami odstraňuje minimálne, aby sa zistilo, či rozdiely vobličkyfunkciumohli ovplyvniť plazmatické koncentrácie ANG{{0}}, merali sme renálny klírens ANG-2 u kriticky chorých jedincov s AKI a bez AKI. V 20 rôznych časovaných odberoch vzoriek moču s rezervovanými vzorkami plazmy bol medián sérového kreatinínu 0.86 mg/dl s medzikvartilovým rozsahom (IQR) od 0,69 do 1,45 mg/dl. Stredná plazmatická koncentrácia ANG-2 bola 10 261 pg/ml (IQR 6210 – 19 115 pg/ml). Naopak, koncentrácie ANG-2 v moči boli 50-krát nižšie s mediánom 206 pg/ml (IQR 11–839 pg/ml). Vypočítaný renálny klírens ANG-2 bol < 1="" ml/min="" pre="" všetky="" načasované="" odbery="" moču,="" čo="" naznačuje,="" že="" plazmatické="" koncentrácie="" ang-2="" sa="" nezvyšujú="" jednoducho="" ako="" funkcia="" zhoršenia="" aki="" (tabuľka="">