Ochranný účinok extraktu Djulis (Chenopodium Formosanum) proti starnutiu pokožky vyvolanému UV žiarením a starnutím prostredníctvom zmiernenia oxidačného stresu a degradácie kolagénu, časť 2

3. Diskusia

Fibroblasty hrajú kľúčovú úlohu pri premene dermálnej extracelulárnej matrice, vrátane syntézy kolagénu, elastického vlákna a glykozaminoglykánu za vzniku hustého spojivového tkaniva [33]. Akumulácia UV a AGE stresu spôsobuje degradáciu kolagénu a navzájom sa interferuje počas vnútorného a vonkajšieho starnutia [3,34]. Vývoj prírodných produktov alebo materiálov s antioxidačnými, anti-fotoaging a antiglykačnými aktivitami na zmiernenie starnutia pokožky v posledných rokoch pokračuje.

Glykozid cistanche môže tiež zvýšiť aktivitu SOD v tkanivách srdca a pečene a výrazne znížiť obsah lipofuscínu a MDA v každom tkanive, účinne zachytáva rôzne reaktívne kyslíkové radikály (OH-, H₂O₂ atď.) a chráni pred spôsobeným poškodením DNA. OH-radikálmi. Cystanche fenyletanoidové glykozidy majú silnú schopnosť zachytávať voľné radikály, vyššiu redukčnú schopnosť ako vitamín C, zlepšujú aktivitu SOD v suspenzii spermií, znižujú obsah MDA a majú určitý ochranný účinok na funkciu membrány spermií. Polysacharidy Cistanche môžu zvýšiť aktivitu SOD a GSH-Px v erytrocytoch a pľúcnych tkanivách experimentálne starnúcich myší spôsobenú D-galaktózou, ako aj znížiť obsah MDA a kolagénu v pľúcach a plazme a zvýšiť obsah elastínu. dobrý čistiaci účinok na DPPH, predĺženie doby hypoxie u starnúcich myší, zlepšenie aktivity SOD v sére a oddialenie fyziologickej degenerácie pľúc u experimentálne starnúcich myší Experimenty ukázali, že pri bunkovej morfologickej degenerácii má Cistanche dobrú antioxidačnú schopnosť a má potenciál byť liekom na prevenciu a liečbu chorôb starnutia kože. Zároveň má echinakozid v Cistanche významnú schopnosť vychytávať voľné radikály DPPH a má schopnosť vychytávať reaktívne formy kyslíka a zabraňovať degradácii kolagénu vyvolanej voľnými radikálmi a má tiež dobrý reparačný účinok na poškodenie aniónom voľných radikálov tymínu.

Kliknite na Anti-Aging Cistanche Para Que Serve

【Ďalšie informácie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】

Chenopodium formosanum (CF) je pôvodná obilná rastlina pestovaná na Taiwane, hlavne pestovaná v domorodých obytných oblastiach. Okrem použitia obilnín priťahuje čoraz väčšiu pozornosť aplikácia CF na základe antioxidačných vlastností [28–30,35]. Polyfenoly sú dobre známe antioxidanty a ochranné prostriedky pokožky tým, že majú silnú aktivitu na zachytávanie voľných radikálov [36], znižujú zápal a absorbujú UV žiarenie, čím poskytujú pokožke fotoprotekciu [37,38]. Rutín je flavonoid široko rozšírený v ovocí a zelenine a reprezentatívny polyfenol v CF, ktorý naznačili predchádzajúce štúdie [21,22]; niekoľko správ preukázalo biologické účinky rutínu na starnutie kože vyvolané ROS [39] a naznačilo, že rutín účinne inhibuje tvorbu AGE pri syntéze kolagénu [40]. CF bola indikovaná na ochranu kože pred UV-indukovaným epidermálnym poškodením a zápalom v keratinocytoch a myších modeloch a rutín je hlavnou zložkou CF, ktorá prispela k ochrannému účinku [19]. V tejto štúdii výsledky ukázali, že liečba HaCaT bunkami pomocou CF mala vyššiu mieru prežitia a nižšiu produkciu interleukínu-6, MMP-1 a ROS v podmienkach ožiarenia UVB. Predchádzajúca štúdia používala keratinocyty vystavené UVB žiareniu na napodobnenie modelu fotostarnutia kože a fibroblasty sa v tejto štúdii použili na preskúmanie mechanizmov a účinkov vnútorných faktorov (AGE) a vonkajších faktorov (UV) na starnutie kože dermis. Výsledky tejto štúdie ukázali, že CF znížila cytotoxicitu indukovanú UV žiarením a poskytla dobrú aktivitu na zachytávanie ROS a výsledky boli v súlade s Hongovou štúdiou [19]. Táto štúdia zvažovala viac faktorov starnutia pokožky a skúmala antiglykačný účinok CF na prirodzené starnutie a zistenia ďalej potvrdili, že CF má vynikajúcu účinnosť ochrany pokožky prostredníctvom zmiernenia oxidačného stresu a degradácie kolagénu.

20-Hydroxyekdyzón je bioaktívna zlúčenina patriaca medzi fytoekdysteroidy, ktoré sa bežne vyskytujú v Chenopodium formosanum [21–24]. Microsorum grossum (Polypodiaceae) je jednou z najčastejšie používaných papradí v polynézskej tradičnej medicíne a jej výťažky z listov a podzemkov obsahujú 20-hydroxyekdyzón ako hlavné bioaktívne zložky. Bolo známe, že Microsorum grossum má UVB-ochranné účinky na ľudské dermálne fibroblasty tým, že zvyšuje reguláciu antioxidačného enzýmu HO-1 a inhibuje stresom vyvolané predčasné starnutie [41]. Chenopodium quinoa (Amaranthaceae) je semenná plodina známa ako „zlaté zrno“ pôvodnými obyvateľmi Ánd v Južnej Amerike, vrátane 20-hydroxyekdyzónu, o ktorom sa preukázalo, že inhibuje intracelulárnu produkciu ROS a aktivitu MMP [42]. Okrem toho 20-hydroxyekdyzón izolovaný zo semien C. quinoa má silnú inhibičnú aktivitu proti kolagenáze a voľným radikálom DPPH a silnú schopnosť chelatovať ióny železa [43]. Mnohé predchádzajúce štúdie uviedli, že extrakt CF obsahuje rutín a 20-hydroxyekdyzón ako svoju bohatú bioaktívnu zložku, iné rastliny obsahujúce tieto zlúčeniny majú tiež podobné aktivity a potenciál starostlivosti o pleť. Primárnou výhodou rastlinných látok je ich komplexné zloženie a synergický účinok príbuzných zlúčenín s viacerými aktivitami na dosiahnutie vyššej účinnosti [44]. Rastlinné extrakty predstavujú sľubnú budúcnosť v starostlivosti o pleť vďaka ich príťažlivosti ako prírodných produktov, vnímaniu ako bezpečných a hojnosti a udržateľnosti.

ROS sú vedľajšie produkty normálnej oxidačnej funkcie buniek v reťazci transportu elektrónov pri aeróbnej metabolickej reakcii. Nadmerná expozícia UV žiareniu a iným environmentálnym stresorom prevyšujú kožnú antioxidačnú kapacitu, čo ďalej vyvoláva produkciu ROS, fragmentáciu DNA, peroxidáciu lipidov a apoptózu [45,46]. Vysoké hladiny ROS spúšťajú kaskády signálov starnutia v kožných bunkách, čím podporujú starnutie buniek, dokonca smrť [47]. Podľa výsledkov bunkového testu extrakt CF bez cytotoxických účinkov na fibroblasty významne zachránil bunkovú cytotoxicitu indukovanú UV žiarením a vykazoval dobrú fotoprotektívnu aktivitu. Okrem toho sa ROS tvorené vo fibroblastoch významne zvýšilo buď UV žiarením alebo pôsobením AGE a obe boli účinne inhibované extraktom CF. Silná aktivita CF zachytávajúca radikály bola tiež overená rôznymi antioxidačnými testami. Polyfenoly sú schopné darovať elektróny voľným radikálom a premieňať ich na stabilnejšie nereaktívne druhy vďaka prítomnosti hydroxylových skupín v kruhovej štruktúre [48,49]. CF bohatý na polyfenoly môže zabrániť poraneniu kože vyvolanému ROS ukončením reťazovej reakcie voľných radikálov. Viaceré zlúčeniny súvisiace s antioxidantmi v extrakte CF poskytujú synergický účinok na zvýšenie celkovej aktivity extraktu CF a robia extrakt z CF silným antioxidantom na ochranu pokožky pred oxidačným stresom.

Koža má endogénny antioxidačný obranný systém, ktorý sa vyrovnáva s oxidačným stresom spôsobeným starnutím. Nrf2 je transkripčný faktor, ktorý pôsobí proti oxidačnému stresu a Keap1 je tlakový senzor, ktorý reguluje expresiu Nrf2 [8]. Keď nerovnováha vnútrobunkového tlaku spôsobí zmenu konfigurácie Keap1 a stratí svoju schopnosť viazať sa na Nrf2, Nrf2 sa translokuje do jadra a zvyšuje hladinu vnútorných antioxidačných enzýmov, aby sa zabránilo oxidačnému poškodeniu a prejavila sa fotoprotektívna aktivita [50,51]. Výsledky ukázali, že extrakt CF by mohol iniciovať signálnu dráhu Nrf2 a antioxidačný obranný systém, keď boli bunky stimulované oxidačným stresom indukovaným UV žiarením. CF extrakt upreguloval expresiu Nrf2 a HO-1. Bunkové obranné vlastnosti CF extraktov možno vysvetliť ich schopnosťou buď priamo neutralizovať ROS, alebo nepriamo upregulovať expresiu bunkových obranných proteínov. Na základe vyššie uvedených výsledkov môže extrakt CF znížiť vnútrobunkový oxidačný stres a použiť ho ako fotoprotektív. Okrem priameho účinku na tvorbu ROS extrakt CF tiež chránil fibroblasty pred poškodením UV žiarením posilnením intracelulárnych antioxidačných obranných mechanizmov prostredníctvom Nrf2 a jeho cieľového faktora, HO-1.

Fotostarnutie je spôsobené nerovnováhou medzi akumuláciou a degradáciou ECM po opakovanej absorpcii UV žiarenia. UV žiarenie poškodzuje zmeny kožného kolagénu a urýchľuje tvorbu ROS, ktoré následne pôsobia na bunky a zložky matrice, aby sprostredkovali ďalší obrat [33,47]. ROS a oxidačný stres vedú k poškodeniu kože prostredníctvom aktivácie AP-1 signalizácie a zvýšenia viacerých MMP. Počas normálnej údržby tkaniva prechádza kolagén nepretržitou premenou. Je však známe, že UV žiarenie indukuje tri rôzne MMP, kolagenázu (MMP-1), stromelyzín (MMP-3) a želatinázu (MMP-9), ktoré lámu kolagénové a elastické vlákna, čo má za následok fragmentáciu a dezorganizáciu [52,53]. TIMP sú inhibítory MMP a homeostáza medzi týmito dvoma proteínmi hrá dôležitú úlohu vo funkčnej a štrukturálnej integrite ECM [54–56]. V tejto štúdii extrakt CF inhiboval AP-1 indukovanú UVB a fosforyláciu proteínov ERK a p38 vo fibroblastoch ľudskej kože. Okrem toho ošetrenie extraktom CF blokovalo UVB-indukovanú degradáciu kolagénu inhibíciou expresie MMP-1, -3 a -9 vo fibroblastoch ľudskej kože a indukovaním expresie TIMP-1 proti aktivite MMP . Dráha TGF- je hlavnou dráhou regulujúcou biosyntézu prokolagénu a produkciu ROS [57]. Oxidačný stres inhibuje signalizáciu TGF znížením regulácie Smad3, čo prispieva k strate obsahu kolagénu v starnúcej pokožke [4]. Výsledky ukázali, že extrakt CF zvýšil expresiu TGF- a Smad3 na zvýšenie celkového obsahu kolagénu. Na základe vyššie uvedených výsledkov CF extrakt zlepšil UVB-indukovanú degradáciu kolagénu prostredníctvom vychytávania ROS, inhibície MMP a zvýšenej regulácie TGF.

Jedným z faktorov prirodzeného starnutia pokožky je progresívna akumulácia AGE počas celého života. RAGE patrí do imunoglobulínovej superrodiny bunkových povrchových receptorov, ktoré interagujú s viacerými ligandami, najmä CML, jedným z produktov glykácie Maillardovej reakcie [58]. RAGE je vysoko exprimovaný v kožných keratinocytoch a fibroblastoch interakciou s AGE, po ktorej nasleduje UVB žiarenie [59] a upregulovaný v koži vystavenej slnku [60]. UV-indukovaná oxidácia urýchľuje tvorbu elastínu ľudskej kože pri aktinickej elastóze a AGE sa hromadia na kožnom kolagéne a elastíne, ktoré narúšajú normálnu funkciu kože [61]. Aktivácia RAGE znižuje syntézu kolagénu typu I a produkciu matrice vo fibroblastoch [62]. Predchádzajúca štúdia uviedla, že extrakt CF inhiboval tvorbu AGE v bezbunkovom systéme [32], ale podrobný antiglykačný mechanizmus v dermálnych fibroblastoch zostáva nejasný. Na základe výsledkov tejto štúdie sme predpokladali, že zabránenie degradácii kolagénu blokovaním interakcie AGE-RAGE a znížením produkcie ROS vo vnútri buniek sú možnými antiglykačnými cestami extraktu CF.

Je známe, že biologické produkty indukované glykáciou sú spojené so starnutím kože, cukrovkou a progresiou niektorých nádorov. Počas procesu starnutia akumulácia AGE mení mechanické vlastnosti kože zvýšením tuhosti [34]. Preto sa prítomnosť AGE považuje za jeden z faktorov oneskoreného hojenia rán a straty elasticity zahojenej kože. Krížová diskusia medzi RAGE a TGF- 1 ovplyvňuje hojenie rán pri cukrovke reguláciou premeny kolagénu a produkcie cytokínov vo fibroblastoch ošetrených AGEs [63]. V tejto štúdii extrakt CF nielen podporuje syntézu pro-kolagénu vo fibroblastoch, ale tiež zlepšuje degradáciu kolagénu spôsobenú vnútorným a vonkajším starnutím pokožky. Okrem toho extrakt CF zvýšil expresiu TGF a znížil expresiu RAGE. Na základe vyššie uvedených výsledkov výskumu možno v budúcnosti ďalej skúmať úlohu CF v mechanizmoch hojenia rán súvisiacich s glykačným stresom.

4. Materiály a metódy

4.1. Materiály a chemikálie

Činidlá použité v bunkovej kultúre, vrátane Dulbeccovho modifikovaného Eaglovho média (DMEM), fetálneho bovinného séra (FBS), penicilín-streptomycínu a trypsínu-EDTA, boli získané od Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, USA). . CML bol zakúpený od Cayman Chemical (Ann Arbor, MI, USA). Dodecylsulfát sodný (SDS), 3-(4,5-dimetyl-2-tiazolyl)-2,5-difenyl-2H-tetrazóliumbromid ( MTT) a fosforečnan draselný a hydroxid draselný (KH2PO4-KOH) boli zakúpené od USB Corporation (Cleveland, OH, USA). 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH), ferikyanid draselný (III) (K3Fe(CN)6), chlorid železitý (FeCl3), kyselina askorbová, fenazínmetosulfát (PMS), - nikotínamidadeníndinukleotid , redukovaný hydrát disodnej soli (NADH), nitrotetrazóliová modrá chlorid (NBT), butylovaný hydroxyanizol (BHA), 2-deoxy-D-ribóza, kyselina tiobarbiturová (TBA), kyselina trichlóroctová (TCA), manitol, chlorid železnatý ( FeCl2), kyselina etyléndiamíntetraoctová (EDTA), 20, 70 -dichlórfluorescín-diacetát (H2DCFDA), 2-propanol a 20-hydroxyekdyzón boli zakúpené od Sigma-Aldrich (Saint Louis, MO, USA) . Rutín bol získaný od ACROS Organics (Morris Plains, NJ, USA). Acetonitril a kyselina mravčia v kvalite HPLC boli získané od JT Baker, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, USA). Všetky ostatné použité chemikálie boli analytickej kvality alebo vyššej kvality.

4.2. Príprava CF extraktu

CF použitý v tejto štúdii bol zakúpený od Pingtung County, Taiwan, a CF extrakt bol dodaný spoločnosťou TCI Co., Ltd. (Taipei, Taiwan). Spôsob prípravy extraktu CF bol opísaný už skôr [32]. Stručne povedané, nelúpané Chenopodium formosanum sa pridalo do vody v pomere 1:10 (w/v) a extrahovalo sa pri troch rôznych teplotách, najprv pri 25 °C, potom pri 50 °C a nakoniec pri 70 °C. Zmes sa centrifugovala pri 4600 x g počas 20 minút a supernatant sa zhromaždil. Prášok CF extraktu sa získal po odstránení rozpúšťadla zo supernatantu lyofilizáciou a skladoval sa pri teplote miestnosti.

4.3. HPLC-ESI-MS/MS a MRM kvantitatívna analýza

Hmotnostná spektrometrická analýza HPLC-ESI sa uskutočnila pomocou kvapalinovej chromatografie Dionex Ultimate 3{{10}}00 (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) spojenej s iónovou pascou hmotnostný spektrometer (HCT Ultra, Bruker Daltonics, Brémy, Nemecko). Separačná metóda bola vykonaná tak, ako opísal Chen et al., s malými úpravami [22]. Extrakt CF sa vstrekol do kolóny Atlantis T3 C18 (2,1 mm ID × 150 mm, veľkosť častíc 3 µm, Waters Corp., Milford, MA, USA), ktorá bola spojená s ochrannou kolónou (SecurityGuard™ C 18 2.0 mm ID × 4,0 mm, Phenomenex Inc., Torrance, CA, USA). Použité mobilné fázy boli: 0,1 % kyselina mravčia vo vode (rozpúšťadlo A) a 0,1 % kyselina mravčia v acetonitrile (rozpúšťadlo B) pri prietokovej rýchlosti 0,3 ml/min. Viacstupňová gradientová elúcia sa uskutočnila s 5 až 45 percentami B za 15 minút, 45 až 95 percentami B za 5 minút a nakoniec 95 percentnou izokratickou elúciou B počas 5 minút.

Hmotnostná spektrometria bola uskutočnená programom Esquire Control (V6.2) a LC/MS bola riadená Hystarom (V3.2) (Bruker Daltonics, Brémy, Nemecko). Prevádzkové parametre hmotnostného spektrometra boli nastavené nasledovne: tlak rozprašovača 30 psi, suchý plyn 12 l/min, suchá teplota 300 ◦C, napätie kapiláry 3600 V s koncovou doskou -500 V. MS/MS bol aplikovaný na všetky hlavné ióny vo vybranom hmotnostnom rozsahu. Viacnásobné sledovanie reakcie (MRM) sa uskutočnilo analýzou nasledujúcich iónových prechodov: prechod od prekurzorového iónu pri m/z 481 k produkcii pri m/z 371 pre 20-hydroxyekdyzón a prechod z prekurzorového iónu pri m/z 611 do výroby pri m/z 303 pre rutín. Šírka izolácie iónov bola nastavená na 4 m/z s amplitúdou fragmentácie 0,5 V. Zlúčenina sa identifikovala a kvantifikovala porovnaním hmotnostných spektier získaných pomocou ESI-MS/MS s komerčnými referenčnými štandardmi.

4.4. Meranie antioxidačnej kapacity

4.4.1. DPPH test na zachytávanie voľných radikálov

Reakčné zmesi obsahujúce metanolový roztok DPPH a sériové riedenia extraktu CF 50–500 µg/ml sa umiestnili do 96-jamkovej mikroplatničky a inkubovali sa 30 minút. Absorbancia sa stanovila pri 517 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakúsko). Kyselina askorbová (10 ug/ml) bola použitá ako porovnávacia kontrola [64].

4.4.2. Test zníženia výkonu

Sériové koncentrácie extraktu CF (100–1000 µg/ml) sa zmiešali s fosfátovým tlmivým roztokom a K3Fe(CN)6 a potom sa inkubovali pri 50 ◦C počas 20 minút. Pridala sa TCA a reakčná zmes sa centrifugovala pri 3000 ot./min. počas 10 minút. Roztok FeCl3 sa zmiešal so supernatantom a merala sa absorbancia pri 700 nm pomocou multimódovej čítačky (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Kyselina askorbová (100 ug/ml) bola použitá ako porovnávacia kontrola [64].

4.4.3. Test zachytávania radikálov superoxidových aniónov (O2 -).

Reakčné zmesi obsahujúce PMS, NADH a NBT sa pripravili vo fosfátovom tlmivom roztoku a sériovom riedení extraktu CF 100–1000 µg/ml. Zmes sa nechala reagovať 5 minút a absorbancia sa odčítala pri 560 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakúsko). BHA (250 ug/ml) sa použil ako porovnávacia kontrola [65].

4.4.4. Test zachytávania peroxidu vodíka (H2O2).

Aktivita extraktu CF na zachytávanie H2O2 sa uskutočnila tak, ako bolo opísané vyššie [65]. Do roztoku H2O2 sa pridali rôzne koncentrácie extraktu CF (200–1500 µg/ml) a nechali sa reagovať v tme 10 minút. Absorbancia reakčnej zmesi bola zaznamenaná pri 230 nm pomocou multimódovej čítačky (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA) a BHA (250 ug/ml) bol použitý ako porovnávacia kontrola.

4.4.5. Skúška zachytávania hydroxylových radikálov (· OH).

Test sa uskutočnil zmiešaním riedenia extraktu CF (100–1000 µg/ml), pufra KH2PO4- KOH, 2-deoxy-D-ribózy, FeCl3, kyseliny askorbovej, EDTA, H2O2 a deionizovanej vody . Po inkubácii pri 37 °C počas 1 hodiny sa k zmesi pridali TBA a TCA a zmes sa inkubovala pri 100 °C počas 15 minút a potom sa centrifugovala pri 4000 ot./min a 25 °C počas 10 minút. Následne sa merala absorbancia supernatantu pri 532 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Manitol (2500 ug/ml) sa použil ako porovnávacia kontrola [64].

4.4.6. Chelatačný test železnatých iónov (Fe2 plus).

Chelatácia železnatých iónov pomocou CF extraktu sa uskutočnila podľa postupu opísaného vyššie [65]. CF extrakt (100–1000 µg/ml) sa zmiešal s roztokom FeCl2 a reakcia sa iniciovala pridaním ferozínu. Po dosiahnutí rovnováhy zmesi sa Fe2 plus -chelatačná aktivita extraktu CF monitorovala meraním absorbancie komplexu Fe2 plus -ferrozín pri 562 nm pomocou multimódovej čítačky (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). EDTA (100 uM) sa použila ako porovnávacia kontrola.

4.5. Bunková kultúra

Bunky Hs68 boli zakúpené od Bioresource Collection and Research Center (BCRC, Hsinchu, Taiwan). Bunky boli udržiavané v 10-cm bunkových kultivačných miskách a pestované v DMEM doplnenom 10 percentami FBS, 100 U/ml penicilínu a 100 ug/ml streptomycínu pri 37 °C v inkubátore obsahujúcom 5 percent CO2. V blízkosti konfluencie (80–90 percent) boli bunky dezagregované v trypsín-EDTA a subkultivované [55].

4.6. Vystavenie UV žiareniu a ošetrenie AGEs

Výber dávky vystavenia UV žiareniu pre bunky Hs68 sa odvolával na predchádzajúce štúdie [55,56]. Pred ošetrením boli bunky dvakrát premyté PBS a ožiarené rôznymi dávkami UVB (mJ/cm2). Energetické spektrum UVB (280–320 nm) dodal UV Crosslinker CL-1000M (UVP, Upland, CA, USA) s emisným vrcholom pri 302 nm a expozičným časom bol 15–30 s. Dávky UVB žiarenia v teste životaschopnosti buniek boli 20–100 mJ/cm2 na vyhodnotenie vhodnej dávky vystavenia UVB na vyvolanie cytotoxicity. Bunky Hs68 boli ožiarené vysokou dávkou UVB (80 mJ/cm2) počas 2 hodín, aby sa preskúmala schopnosť rýchleho zachytávania radikálov extraktu CF proti krátkodobo nadprodukovaným intracelulárnym ROS. Iné experimenty využívajú UVB žiarenie (40 mJ/cm2) v bunkách Hs68 počas 24 hodín na napodobenie buniek v podmienkach dlhodobého oxidačného stresu. CML bol dodaný ako kryštalická pevná látka a vodné roztoky CML boli pripravené rozpustením zlúčeniny v PBS pufri. Bunky boli ošetrené 100 ug/ml CML.

4.7. Test bunkovej životaschopnosti

Bunky Hs68 sa naočkovali na 24-jamkové platne (4 x 104 buniek/jamka), nechali sa prichytiť cez noc a ošetrili 1 ml extraktu CF s rôznymi koncentráciami (50 – 250 ug/ml) rozpusteným v DMEM počas 24 h. Na doštičky sa pridal roztok MTT a nasledovala inkubácia pri 37 °C počas 4 hodín. Potom sa pridal 2-propanol na rozpustenie kryštálov MTT formazanu a absorbancia sa merala pri 570 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakúsko) [56].

4.8. Meranie intracelulárnych ROS

Test je založený na použití zavedeného nefluorescenčného (H2DCFDA)/fluorescenčného (DCF) systému, ktorý meria aktivitu ROS v bunke. Bunky Hs68 sa naočkovali do 24-jamkových doštičiek (4 x 104 buniek/jamka) a nechali sa prichytiť cez noc. Bunky boli inkubované v médiu bez séra v prítomnosti rôznych koncentrácií extraktu CF (100–250 µg/ml) po UVB žiarení alebo ošetrení CML. Bunky sa premyli PBS a do každej jamky sa na 30 minút pridalo ROS detekčné činidlo DCFDA. Obrázky sa zachytili pomocou fluorescenčného mikroskopu (Leica DM IL LED, Leica Microsystems, Wetzlar, Nemecko) a fluorescencia (excitácia/emisia: 488 nm/520 nm) sa merala pomocou čítačky mikrodoštičiek (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA) [55].

4.9. Expresia proteínov analýzou Western Blot

Po uvedených ošetreniach sa bunky Hs68 (5 x 105 buniek/miska) zhromaždili a homogenizovali s proteínovým extrakčným pufrom na ľade. Bunkové lyzáty sa vortexovali 30 minút pri 4 °C a centrifugovali sa, aby sa získal supernatant ako intracelulárny proteín. Pripravené vzorky obsahujúce rovnaké množstvá celkového proteínu boli separované elektroforézou na SDS-polyakrylamidových géloch a prenesené na polyvinylidéndifluoridové blotovacie membrány. Nešpecifická väzba bola blokovaná odtučneným mliekom v TBST pufri. Membrána sa inkubovala s primárnymi protilátkami proti c-Jun, c-Fos, MMP-1, MMP-3, TGF-, Smad3 a pro-COL1A1 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA), MMP-9, TIMP-1 a HO-1 (GeneTex, Inc., Irvine, CA, USA). Nrf2, Keap1, RAGE, pc-Jun, p-p38, p-ERK a - aktín (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA) pri 4 ◦C cez noc. Následne boli membrány niekoľkokrát premyté TBST pufrom a ako sekundárna protilátka bola použitá zodpovedajúca anti-imunoglobulínová G-chrenová peroxidáza. Bloty sa inkubovali s chemiluminiscenčným detekčným činidlom. Imunoreaktívne pásy boli detegované pomocou detekčného systému ECL western blotting (LAS-4000, Fujifilm, Tokio, Japonsko) a intenzita signálu bola kvantifikovaná pomocou softvéru ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA) [56] .

4.10. Imunofluorescenčné farbenie

Bunky sa naočkovali na sklíčka v 6-jamkovej doštičke (Hs68 bunky: 1 x 105 buniek/jamka) a nechali sa prichytiť cez noc. Bunky boli ožiarené UVB (40 mJ/cm2) a ošetrené 1 ml CF extraktu rozpusteného v DMEM. Bunky boli premyté PBS, fixované paraformaldehydom počas 30 minút a blokované použitím odtučneného mlieka s pufrom Triton X-100/PBS (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) počas 60 minút. Vzorky boli inkubované s primárnou králičou anti-Nrf2 protilátkou cez noc pri 4 °C. Sklíčka sa premyli PBS a potom sa inkubovali s anti-králičou sekundárnou protilátkou počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Sklíčka boli pripevnené pomocou ProLong® Gold Antifade Mountant s DAPI (Invitrogen, Waltham, MA, USA). Všetky vzorky boli analyzované pomocou zobrazovacieho systému konfokálneho spektrálneho mikroskopu (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemecko) [51].

4.11. Stanovenie celkového obsahu kolagénu

Celkový obsah kolagénu sa kvantifikoval pomocou súpravy Sirius Red Collagen Detection kit (Chondrex Inc., Redmond, WA, USA). Bunkové kultivačné médium bolo zozbierané a zmiešané s koncentračným činidlom. Zmes sa vortexovala a inkubovala pri 4 °C počas 24 hodín. Po inkubácii bola zmes centrifugovaná pri 10, 000 rpm a supernatant bol zlikvidovaný. Potom sa do mikroskúmavky pridala kyselina octová, aby sa peleta rozpustila, a získaný roztok sa použil ako testovacia vzorka. Do každej skúmavky sa pridal roztok Sirius Red na farbenie kolagénom, premiešal sa, inkuboval sa 20 minút pri teplote miestnosti a odstredil sa. Supernatant sa odstránil opatrným pipetovaním bez narušenia pelety. Do každej skúmavky sa pridal premývací roztok a vyššie uvedené kroky sa raz zopakovali. Nakoniec sa pridal extrakčný pufor a merala sa absorbancia pri 540 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek (Sunrise, Tecan, Salzburg, Rakúsko).

4.12. Štatistická analýza

Údaje sú prezentované ako priemer ± štandardná odchýlka v aspoň troch nezávislých experimentoch. Všetky štatistické analýzy sa uskutočnili s použitím GraphPad Prism 5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Významné rozdiely medzi skupinami v experimentoch boli analyzované pomocou jednosmernej ANOVA, po ktorej nasledoval Tukeyho post-hoc test. Rozdiely s p < 0,05 sa považovali za štatisticky významné.

5. Závery

Táto štúdia odhaľuje molekulárne mechanizmy zodpovedné za ochranný účinok CF proti intracelulárnej tvorbe ROS indukovanej UV a AGE a degradácii kolagénu v kožných fibroblastoch. V dôsledku toho naša štúdia poskytuje súčasné pochopenie a informácie o úlohe extraktu CF v systéme bunkovej obrany proti oxidačnému stresu prostredníctvom aktivácie signálnej dráhy Nrf2/HO-1. Okrem toho CF nielen moduluje signálne dráhy MAPK/AP-1/MMP a TGF, aby sa zabránilo strate kolagénu vyvolanej oxidačným stresom, ale tiež tlmí upreguláciu receptorov pre AGE. CF extrakt možno rozvinúť do zdravých potravín alebo použiť na produkty starostlivosti o pleť a kozmetiku ako antioxidant, anti-fotoaging a antiglykačný prostriedok na oddialenie starnutia v budúcnosti. Regulačné mechanizmy extraktu CF v bunkách Hs68 sú znázornené na obrázku 13.

Doplnkové materiály:Nasledujúce podporné informácie si môžete stiahnuť z webovej stránky, Obrázok S1: Iónový chromatogram MRM a hmotnostné spektrum v pozitívnom režime ESI štandardu 20-hydroxyekdyzónu a rutínu. Obrázok S2: Celkový iónový chromatogram (TIC) a extrahovaný iónový chromatogram (EIC) 20-hydroxyekdyzónu (m/z 481) a rutínu (m/z 611) v CF extrakte pod monitorovaním MRM.

Autorské príspevky:Konceptualizácia, J.-LL, K.-CW, C.-YC, Y.-HL a H.-MC; Metodológia, J.-LL, C.-YC a H.-MC; Investigation, J.-LL a Y.-JL; Zdroje, Y.-HL; Spracovanie údajov, J.-LL a Y.-JL; Písanie – pôvodný návrh, J.-LL a H.-MC; Písanie – recenzia a úprava, J.-LL, Y.- JL; K.-CW, C.-YC a H.-MC; Vizualizácia, J.-LL; Dohľad, K.-CW; Administrácia projektu, H.-MC Všetci autori si prečítali a súhlasili s publikovanou verziou rukopisu.

Financovanie: Tento výskum bol financovaný Čínskou lekárskou univerzitou (CMU106-ASIA-20, CHM106-5- 2 a CMU108-MF-38).

Vyhlásenie inštitucionálnej revíznej rady:Nepoužiteľné.

Vyhlásenie informovaného súhlasu:Nepoužiteľné.

Vyhlásenie o dostupnosti údajov:Nepoužiteľné.

Poďakovanie: Extrakt Chenopodium formosanum dodal TCI Co., Ltd. (Taipei, Taiwan). Experimenty a analýza údajov sa uskutočnili čiastočne s využitím základných zariadení lekárskeho výskumu, Úradu pre výskum a vývoj na Čínskej lekárskej univerzite (Taichung, Taiwan). Hmotnostná spektrometrická analýza bola vykonaná v Proteomics Research Core Laboratory, Office of Research and Development na China Medical University (Taichung, Taiwan).

Konflikt záujmov:Autori nedeklarujú žiadny konflikt záujmov.

Referencie

1. Zouboulis, CC; Makrantonaki, E. Klinické aspekty a molekulárna diagnostika starnutia kože. Clin. Dermatol. 2011, 29, 3–14. [CrossRef] [PubMed]

2. Helfrich, YR; Sachs, DL; Voorhees, JJ Prehľad starnutia pokožky a fotostarnutia. Dermatol. Zdravotné sestry. 2008, 20, 177–183. [PubMed]

3. Gkogkolou, P.; Böhm, M. Konečné produkty pokročilej glykácie: Kľúčoví hráči pri starnutí pleti? Dermatoendokrinológia 2012, 4, 259–270. [CrossRef] [PubMed]

4. Tu, Y.; Quan, T. Oxidačný stres a starnutie spojivového tkaniva ľudskej kože. Kozmetika 2016, 3, 28. [CrossRef]

5. Shin, J.-W.; Kwon, S.-H.; Choi, J.-Y.; Na, J.-I.; Huh, C.-H.; Choi, H.-R.; Park, K.-C. Molekulárne mechanizmy starnutia pokožky a prístupy proti starnutiu. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2126. [CrossRef]

6. Dupont, E.; Gomez, J.; Bilodeau, D. Beyond UV radiation: A skin under challenge. Int. J. Cosmet. Sci. 2013, 35, 224–232. [CrossRef]

7. D'Orazio, J.; Jarrett, S.; Amaro-Ortiz, A.; Scott, T. UV žiarenie a koža. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 12222–12248. [CrossRef]

8. G ˛egotek, A.; Skrzydlewska, E. Úloha transkripčného faktora Nrf2 v metabolizme kožných buniek. Arch. Dermatol. Res. 2015, 307, 385–396. [CrossRef]

9. Silva-Palacios, A.; Ostolga-Chavarría, M.; Zazueta, C.; Königsberg, M. Nrf2: Molekulárna a epigenetická regulácia počas starnutia. Ageing Res. Rev. 2018, 47, 31–40. [CrossRef]

10. Fisher, GJ; Kang, S.; Varani, J.; Baťa-Csorgo, Z.; Wan, Y.; Datta, S.; Voorhees, JJ Mechanizmy fotostarnutia a chronologického starnutia pleti. Arch. Dermatol. 2002, 138, 1462–1470. [CrossRef]

11. Pittayapruek, P.; Meephansan, J.; Prapapan, O.; Komine, M.; Ohtsuki, M. Úloha matricových metaloproteináz pri fotostarnutí a fotokarcinogenéze. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 868. [CrossRef] [PubMed]

12. Wautier, M.-P.; Chappey, O.; Corda, S.; Stern, DM; Schmidt, AM; Wautier, J.-L. Aktivácia NADPH oxidázy prostredníctvom AGE spája oxidačný stres so zmenenou génovou expresiou prostredníctvom RAGE. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2001, 280, E685 – E694. [CrossRef] [PubMed]

13. Oliveira, MIA; Souza, EMd; Pedrosa, FdO; Réa, RR; Alves, AdSC; Picheth, G.; Rego, FGdM RAGE receptor a jeho rozpustné izoformy pri komplikáciách diabetes mellitus. J. Bras. Patol. Med. Lab. 2013, 49, 97–108. [CrossRef]

14. Reddy, S.; Bichler, J.; Wells-Knecht, KJ; Thorpe, SR; Baynes, JW N epsilon-(karboxymetyl)lyzín je dominantný antigén pokročilého konečného produktu glykácie (AGE) v tkanivových proteínoch. Biochemistry 1995, 34, 10872-10878. [CrossRef]

15. Ikeda, K.; Higashi, T.; Sano, H.; Jinnouchi, Y.; Yoshida, M.; Araki, T.; Ueda, S.; Horiuchi, S. N (epsilon)-(karboxymetyl)lyzínový proteínový adukt je hlavným imunologickým epitopom v proteínoch modifikovaných konečnými produktmi pokročilej glykácie Maillardovej reakcie. Biochemistry 1996, 35, 8075-8083. [CrossRef]

16. Crisan, M.; Taulescu, M.; Crisan, D.; Cosgarea, R.; Parvu, A.; Cãtoi, C.; Drugan, T. Expresia konečných produktov pokročilej glykácie na kožných miestach vystavených slnku a neexponovaných počas procesu starnutia u ľudí. PLoS ONE 2013, 8, e75003. [CrossRef]

17. Jeanmaire, C.; Danoux, L.; Pauly, G. Glykácia počas ľudského dermálneho vnútorného a aktinického starnutia: In vivo a in vitro modelová štúdia. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 10-18. [CrossRef]

18. Tsai, P.-J.; Chen, Y.-S.; Sheu, C.-H.; Chen, C.-Y. Vplyv nano brúsenia na pigment a bioaktivitu Djulis (Chenopodium formosanum Koidz.). J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 1814–1820. [CrossRef]

19. Hong, Y.-H.; Huang, Y.-L.; Liu, Y.-C.; Tsai, P.-J. Vodný extrakt Djulis (Chenopodium formosanum Koidz.) a jeho bioaktívne zložky zlepšujú dermálne poškodenie na modeloch kože ožiarených UVB žiarením. BioMed Res. Int. 2016, 2016, 7368797. [CrossRef]

20. Hsu, B.; Lin, S.; Inbaraj, BS; Chen, B. Simultánne stanovenie fenolových kyselín a flavonoidov v Chenopodium formosanum Koidz. (julio) pomocou HPLC-DAD-ESI-MS/MS. J. Pharm. Biomed. Anal. 2017, 132, 109–116. [CrossRef]

21. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Inhibičné účinky Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktívnych zlúčenín na adipogenézu v 3T3-L1 adipocytoch. Molekuly 2018, 23, 1780. [CrossRef] [PubMed]

22. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Chyau, C.-C.; Yang, J.-W.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktívne zlúčeniny ovplyvňujú vazodilatáciu, aktivitu enzýmu konvertujúceho angiotenzín a hypertenziu. Food Biosci. 2019, 32, 100469. [CrossRef]

23. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Wu, Y.-C.; Chu, H.-L.; Duh, P.-D. Protirakovinová aktivita a sprostredkovanie apoptózy v bunkách karcinómu hepatómu indukované juliom a jeho bioaktívnymi zlúčeninami. J. Funct. Potraviny 2020, 75, 104225. [CrossRef]

24. Tu, D.-G.; Chyau, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chu, H.-L.; Wang, S.-C.; Duh, P.-D. Antiproliferatívny účinok a sprostredkovanie apoptózy v bunkách ľudského hepatómu HepG2 indukovaných šupkou Djulis a jej bioaktívnymi zlúčeninami. Potraviny 2020, 9, 1514. [CrossRef]

25. Hsu, B.-Y.; Pan, S.-Y.; Wu, L.-Y.; Ho, C.-T.; Hwang, LS Hypoglykemická aktivita Chenopodium formosanum Koidz. komponenty pomocou testu absorpcie glukózy s 3T3-L1 adipocytmi. Food Biosci. 2018, 24, 9–16. [CrossRef]

26. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Lin, Y.-C.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktívne zlúčeniny na zvládnutie hyperlipidémie a hyperglykémie u myší kŕmených diétou s vysokým obsahom tuku. J. Food Nutr. Res. 2019, 7, 452–457. [CrossRef]

27. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Fu, Z.-H.; Liu, C.-C.; Duh, P.-D. Ochranný účinok Djulis (Chenopodium formosanum) a jeho bioaktívnych zlúčenín proti poškodeniu pečene vyvolanému tetrachlórmetánom in vivo. J. Funct. Potraviny 2016, 26, 585–597. [CrossRef]

28. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosaneum) a jeho bioaktívne zlúčeniny chránia pred oxidačným stresom v ľudských HepG2 bunkách. J. Funct. Potraviny 2015, 18, 159–170. [CrossRef]

29. Lin, T.-A.; Ke, B.-J.; Cheng, C.-S.; Wang, J.-J.; Wei, B.-L.; Lee, C.-L. Výťažky z červených otrúb quinoa chránia pred poškodením pečene a fibrózou u myší vyvolaným tetrachlórmetánom prostredníctvom aktivácie antioxidačných enzýmových systémov a blokovania dráhy TGF- 1. Živiny 2019, 11, 395. [CrossRef]

30. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Xie, G.-R.; Shih, C.-K. Djulis (Chenopodium Formosanum) zabraňuje karcinogenéze hrubého čreva prostredníctvom regulácie antioxidačných a apoptotických dráh u potkanov. Živiny 2019, 11, 2168. [CrossRef]

31. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Chien, Y.-H.; Hsia, S.-M.; Chen, J.-H.; Shih, C.-K. Synbiotická kombinácia Djulis (Chenopodium formosanum) a Lactobacillus acidophilus inhibuje karcinogenézu hrubého čreva u potkanov. Živiny 2020, 12, 103. [CrossRef] [PubMed]

32. Lin, Y.-K.; Chung, Y.-M.; Lin, Y.-H.; Lin, Y.-H.; Hu, W.-C.; Chiang, C.-F. Zdravotné funkčné vlastnosti nelúpaného červeného julia (Chenopodium formosanum) v boji proti starnutiu. Int. J. Food Prop. 2021, 24, 833–844. [CrossRef]

33. Naylor, EC; Watson, RE; Sherratt, MJ Molekulárne aspekty starnutia pokožky. Maturita 2011, 69, 249–256. [CrossRef] [PubMed]

34. Fournet, M.; Bonté, F.; Desmoulière, A. Poškodenie glykácie: Možný náboj pre veľké patofyziologické poruchy a starnutie. Aging Dis. 2018, 9, 880. [CrossRef] [PubMed]

35. Tsai, P.-J.; Sheu, C.-H.; Wu, P.-H.; Sun, Y.-F. Tepelná a pH stabilita betacyanínového pigmentu Djulis (Chenopodium formosanum) na Taiwane a ich vzťah k antioxidačnej aktivite. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 1020–1025. [CrossRef]

36. McClain, GE; Watson, RR Úloha polyfenolov v zdraví pokožky. In Bioaktívne dietetické faktory a rastlinné extrakty v dermatológii; Springer: Berlín/Heidelberg, Nemecko, 2013; s. 169–175.

37. Nichols, JA; Katiyar, SK Fotoprotekcia pokožky prírodnými polyfenolmi: Protizápalové, antioxidačné a mechanizmy opravy DNA. Arch. Dermatol. Res. 2010, 302, 71–83. [CrossRef]

38. Afaq, F.; Katiyar, SK Polyfenoly: Fotoprotekcia kože a inhibícia fotokarcinogenézy. Mini Rev. Med. Chem. 2011, 11, 1200–1215.

39. Choi, SJ; Lee, S.-N.; Kim, K.; Joo, DH; Shin, S.; Lee, J.; Lee, HK; Kim, J.; Kwon, SB; Kim, MJ Biologické účinky rutínu na starnutie pokožky. Int. J. Mol. Sci. 2016, 38, 357–363. [CrossRef]

40. Cervantes-Laurean, D.; Schramm, DD; Jacobson, EL; Halaweish, I.; Bruckner, GG; Boissonneault, GA Inhibícia tvorby pokročilých konečných produktov glykácie na kolagéne rutínom a jeho metabolitmi. J. Nutr. Biochem. 2006, 17, 531–540. [CrossRef]

41. Ho, R.; Teai, T.; Meybeck, A.; Raharivelomanana, P. UV-ochranné účinky fytoekdysteroidov z extraktov Microsorum grossum na ľudské dermálne fibroblasty. Nat. Prod. komun. 2015, 10, 1934578X1501000110. [CrossRef]

42. Graf, BL; Cheng, DM; Esposito, D.; Shertel, T.; Poulev, A.; Plundrich, N.; Itenberg, D.; Dayan, N.; Lila, M.; Raskin, I. Zlúčeniny vylúhované zo semien quinoa inhibujú aktivitu matricovej metaloproteinázy a intracelulárne reaktívne formy kyslíka. Int. J. Cosmet. Sci. 2015, 37, 212–221. [CrossRef] [PubMed]

43. Nsimba, RY; Kikuzaki, H.; Konishi, Y. Ekdysteroidy pôsobia ako inhibítory kolagenázy teľacej kože a oxidačného stresu. J. Biochem. Mol. Toxicol. 2008, 22, 240–250. [CrossRef]

44. Schmidt, B.; Ribnický, DM; Poulev, A.; Logendra, S.; Cefalu, WT; Raskin, I. Prirodzená história botanických terapií. Metabolizmus 2008, 57, S3–S9. [CrossRef] [PubMed]

45. Poljšak, B.; Dahmane, R. Voľné radikály a vonkajšie starnutie pokožky. Dermatol. Res. Prax. 2012, 2012, 135206. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​De Jager, T.; Cockrell, A.; Du Plessis, S. Tvorba reaktívnych foriem kyslíka vyvolaná ultrafialovým svetlom. Adv. Exp. Med. Biol. 2017, 996, 15-23.

47. Rittié, L.; Fisher, GJ signálne kaskády indukované UV svetlom a starnutie pokožky. Ageing Res. Rev. 2002, 1, 705–720. [CrossRef]

48. Leopoldini, M.; Russo, N.; Toscano, M. Molekulárny základ pracovného mechanizmu prírodných polyfenolických antioxidantov. Food Chem. 2011, 125, 288–306. [CrossRef]

49. Sandoval-Acuña, C.; Ferreira, J.; Speisky, H. Polyfenoly a mitochondrie: Aktualizácia ich čoraz viac sa objavujúcich nezávislých akcií na zachytávanie ROS. Arch. Biochem. Biophys. 2014, 559, 75–90. [CrossRef]

50. Wu, P.-Y.; Liu, J.-L.; Liu, Y.-J.; Chien, T.-Y.; Hsu, H.-C.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. Fisetín reguluje expresiu Nrf2 a signálnu dráhu súvisiacu so zápalom, aby sa zabránilo poškodeniu kože u bezsrstých myší vyvolanom UVB. Int. J. Mol. Sci. 2017, 18, 2118. [CrossRef]

51. Kuo, Y.-H.; Chiang, H.-L.; Wu, P.-Y.; CHU ý.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Ochrana pred apoptózou kože a karcinogenézou vyvolanou ultrafialovým žiarením prostredníctvom účinkov N-(4-brómfenetyl)kofeamidu, derivátu propolisu, na zníženie oxidačného stresu. Antioxidanty 2020, 9, 335. [CrossRef]

52. Quan, T.; Qin, Z.; Xia, W.; Shao, Y.; Voorhees, JJ; Fisher, GJ Matrix-degradujúce metaloproteinázy pri fotostarnutí. J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2009, 14, 20–24. [CrossRef] [PubMed]

53. Brenneisen, P.; Sies, H.; Scharffetter-Kochánek, K. Ultrafialové-B ožarovanie a matricové metaloproteinázy: Od indukcie cez signalizáciu po počiatočné udalosti. Ann. NY Acad. Sci. 2002, 973, 31–43. [CrossRef] [PubMed]

54. Kanaki, T.; Makrantonaki, E.; Zouboulis, CC Biomarkery starnutia pokožky. Endocr. Metab. Porucha. 2016, 17, 433–442. [CrossRef] [PubMed]

55. Wu, P.-Y.; Lin, T.-Y.; Hou, C.-W.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. 1,2-bis[(3-metoxyfenyl)metyl]etán-1,2- dikarboxylová kyselina znižuje fotopoškodenie spôsobené UVB žiarením in vitro a in vivo. Antioxidanty 2019, 8, 452. [CrossRef] [PubMed]

56. Lin, T.-Y.; Wu, P.-Y.; Hou, C.-W.; Chien, T.-Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Ochranné účinky sezamínu proti zápalu kože vyvolanému UVB a fotopoškodeniu in vitro a in vivo. Biomolecules 2019, 9, 479. [CrossRef] [PubMed]

57. Kim, YI; Kim, KS; Ahn, HJ; Kang, IH; Shin, MK Redukovaná matricová metaloproteináza a transkripcia kolagénu sprostredkovaná dráhou TGF-/Smad v pasážovaných normálnych ľudských dermálnych fibroblastoch. J. Cosmet. Dermatol. 2020, 19, 1211–1218. [CrossRef]

58. Kislinger, T.; Fu, C.; Huber, B.; Qu, W.; Taguchi, A.; Du Yan, S.; Hofmann, M.; Yan, SF; Pischetsrieder, M.; Stern, D. N(epsilon)-(karboxymetyl)lyzínové adukty proteínov sú ligandy pre receptor pre koncové produkty pokročilej glykácie, ktoré aktivujú bunkové signálne dráhy a modulujú génovú expresiu. J. Biol. Chem. 1999, 274, 31740-31749. [CrossRef]

59. Han, AR; Nam, MH; Lee, KW Plantamajoside inhibuje UVB a expresiu MMP-1 indukovanú pokročilou glykáciou koncovými produktmi potlačením dráh MAPK a NF-KB v HaCaT bunkách. Photochem. Photobiol. 2016, 92, 708–719. [CrossRef]

60. Lohwasser, C.; Neureiter, D.; Weigle, B.; Kirchner, T.; Schuppan, D. Receptor pre koncové produkty pokročilej glykácie je vysoko exprimovaný v koži a upregulovaný koncovými produktmi pokročilej glykácie a tumor nekrotizujúcim faktorom alfa. J. Investig. Dermatol. 2006, 126, 291–299. [CrossRef]

61. Mizutari, K.; Ono, T.; Ikeda, K.; Kayashima, K.; Horiuchi, S. Foto-enhancovaná modifikácia elastínu ľudskej kože pri aktinickej elastóze N(epsilon)-(karboxymetyl)lyzínom, jedným z produktov glykooxidácie Maillardovej reakcie. J. Invest. Dermatol. 1997, 108, 797-802. [CrossRef]

62. Owen, WF, Jr.; Hou, F.; Stuart, RO; Kay, J.; Boyce, J.; Chertow, GM; Schmidt, AM Beta 2-mikroglobulín modifikovaný koncovými produktmi pokročilej glykácie moduluje syntézu kolagénu v ľudských fibroblastoch. Kidney Int. 1998, 53, 1365–1373. [CrossRef] [PubMed]

63. Serban, AI; Stanča, L.; Geicu, OI; Munteanu, MC; Dinischiotu, A. RAGE a krížové rozhovory TGF- 1 regulujú premenu extracelulárnej matrice a syntézu cytokínov vo fibroblastových bunkách vystavených AGEs. PLoS ONE 2016, 11, e0152376.

64. Liu, Y.-J.; Lyu, J.-L.; Kuo, Y.-H.; Chiu, C.-Y.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. Antimelanogenézny účinok 3, 4-dihydroxybenzalacetónu prostredníctvom downregulácie dozrievania a transportu melanozómov v B16F10 a ľudských epidermálnych melanocytoch. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 2823. [CrossRef] [PubMed]

65. Huang, Y.-H.; Wu, P.-Y.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Ochranné účinky a mechanizmy metanolového extraktu Terminalia catappa L. na oxidačný stres vyvolaný peroxidom vodíka vo fibroblastoch ľudskej kože. Doplnková alternatíva BMC. Med. 2018, 18, 266. [CrossRef]

【Ďalšie informácie:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:{0}}】