Účinok intravenózneho glutamínu na expresiu Kaspázy-12 pri apoptóze glomerulárnych epitelových buniek samcov potkanov vystavených cisplatine
Mar 17, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Tamara Aulia Fakhrinnisal,Imám Susilo,Arifa Mustika, Miyayu Soneta Sofyan
Zavedenie
Prevalencia metabolických ochorení v Indonézii, najmä ochorenia obličiek, vykazuje vysoký trend. Na základe údajov Spravujúcej agentúry pre zdravotné poistenie (BPJS) z roku 2017 štát pokryl 3 657 691 zaznamenaných prípadov dialýzy chronických ochorení obličiek s celkovými nákladmi na pokrytie IDR vo výške 3,1 bilióna. Jednou z etiológií pri zlyhaní obličiek je trvalé poškodenie nefrónov toxínmi.
Cisplatina je silný chemoterapeutický liek, ktorý sa široko používa na širokospektrálnu liečbu malignít vrátane rakoviny hlavy a krku, pažeráka, močového mechúra, semenníkov, vaječníkov, prsníka a nemalobunkových pľúc (Fillipski et al., 2008; Reck, et al., 2010). Klinická aplikácia cisplatiny je však obmedzená z dôvodu účinkov vysokej toxicity orgánov, ako sú nefrotoxické, neurotoxické, ototoxické a hepatotoxické účinky (Karasawa a Steyger, 2015; Guo et al., 2018). Cisplatina spôsobuje apoptózu pri nižších dávkach (10 - 100uM) a smrť nekrotických buniek pri vyšších dávkach (200 - 800 μM) (Hanigan a Devarajan, 2003)Viac ako 70% pediatrických pacientov, ktorí dostávali cisplatinu, má dysfunkciu obličiek (Skinner et al.1998). Okrem toho sa akútne poškodenie obličiek vyskytuje u 20-30% všetkých podávaných pacientov (Miller et al., 2010). Dysfunkcia obličiek zvyčajne začína niekoľko dní po štandardnej dávke podávania cisplatiny (50-120 mg/m²) a vyjadruje sa zvyšujúcimi sa hladinami kreatinínu v sére a dusíka močoviny v krvi (Akcay et al.2010), Liečba cisplatinou indukuje masívnu tubulárnu dilatáciu a tvorbu odliatkov v niekoľkých tubulových lúmenoch. Príležitostne sa pozoruje aj fokálna rúrková nekróza, zhrubnutie obličkových tubulov a Bowmanovej kapsuly a infiltrácia fokálnych mononukleárnych buniek. Dochádza tiež k poškodeniu obličkových tubulárnych buniek spolu s vakuolizáciou a desquamáciou epiteliálnych buniek. Niektoré glomeruly zažívajú nekrózu a normálne zvyškové glomeruly často vykazujú zväčšené periglomerulárne priestory.
acteozid v cistanche má dobré účinky na obličky
Jedným z nefrotoxických mechanizmov cisplatiny je apoptóza, čo je naprogramovaná bunková cesta smrti aktivovaná cisplatinou prostredníctvom niektorých mechanizmov. Cisplatina znižuje expresiu Bcl-2 v mitochondriálnej dráhe, čo údajne inhibuje vývoj pro-apoptotických molekúl (Oltvai a Korsmeyer, 1994). V dráhach receptorov smrti cisplatina aktivuje dráhy závislé od a apoptózu, a to buď in vivo (Noga et al.,1998), alebo in vitro (Feldenberg et al., 1999). Cisplatina tiež aktivuje kaspázové dráhy. Úloha kaspázy-3 sa prvýkrát vyskytuje v kultivovaných rúrkových proximálnych bunkách, ktoré reagujú na cisplatinu zvýšením aktivity kaspázy-3 spôsobom závislým od dávky (Fukuoka et al,1998; Lau, 1999). Nasledujúce štúdie odhalili aktiváciu caspázy-9 a v menšej miere aktiváciu kaspázy-8 (Kaushal et al.2001:Park et al., 2001).
IntravenózneGlutamín(Gln alebo Q) je α-aminokyselina používaná pri biosyntéze bielkovín. Je to jedna zo zložiek na výrobu glutatiónu, ktorý je silným antioxidantom. Jedna dávkaintravenózny glutamín(0,15- 0,75 g/kg)môže zvýšiť výraz HSP, znížiť poranenie koncových orgánov a zlepšiť mieru prežitia septického šoku u myší (Wischmeyer, 2002).IntravenózneGlutamíntiež sa zvýšila vaskulárna reaktivita vyvolaním expresie HSP a inhibíciou uvoľňovania zápalových cytokínov a peroxidovej biosyntézy u šokových myší LPS (Jiang et al.). 2017).IntravenózneGlutamínmôže tiež znížiť apoptózu inhibíciou oxidačného stresu, ako to pozorujú výsledky skúšok s použitím myší s kolitídou vyvolanou kyselinou sulfónovou a2,4,6-trinitrobenzénovou (Crespoet al.2012)
Hladiny kaspázy-12 v glomerulárnom epitele neboli študované, aj keď čas vystavenia toxínu prijatému glomerulu je vysoký a epiteliálne bunky sú vystavené najprv ako tubuly. Štúdia ukázala, že Bowmanove kapsuly zohrávajú úlohu vo fyziologickej funkcii normálneho glomerula. Poranenie podocytov stimuluje aktiváciu Bowmanových kapsulových parietálnych buniek, ktoré siahajú do glomerulárneho lúča, čo vedie k segmentálnej a globálnej skleróze tým, že produkuje viac matrice a ničí lúmen glomerulus kapilár (Al Hussain et al., 2017).
Cieľom tejto štúdie je analyzovať nefroprotektívne účinkyintravenózny glutamínna glomerulárnych epiteliálnych bunkách apoptóza vyšetrením expresie kaspázy-12, ktorá je iniciátorom apoptózy v endoplazmatickej stresovej dráhe retikula. Pro-kaspáza-12 sa nachádza v endoplazmatickom retikule, najmä v proximálnych tubuloch obličiek. Táintravenózny glutamínočakáva sa, že bude alternatívnym riešením zlyhania obličiek spôsobeného chemoterapiou cisplatinou.
Materiály a metódy Zvieratá a ošetrenie
Tento výskum bol schválený Etickou komisiou pre výskum zdravia Universitas Airlangga School of Medicine (č. 25/C/KEPKFKUA/2020). V tomto výskume bolo z experimentálnej zvieracej jednotky Fakulty veterinárskeho lekárstva Universitas Airlangga získaných 30 samcov bielych potkanov (Rattus norvegicus) vo veku 2-3 mesiace s telesnou hmotnosťou 150-200 gramov. Každý z nich bol držaný samostatne v anaplastickej krabici, lemovaný šupkami v spodnej časti a potom pokrytý tkanými drôtmi na vrchu. Plevy sa vymieňali každý deň.
Chemikálie
TáIntravenózneGlutamínbol získaný od spoločnosti Serva (Nemecko). TáIntravenózneGlutamínroztok bol pripravený v 0, 9% NaCl, s dávkou l g glutamínu v 10 ml 0, 9% NaCl. Dávka glutamínu sa vstrekne 100 mg/kg telesnej hmotnosti (BW) a jednorazová injekcia sa vykoná maximálne 0,2 ml IV. TáIntravenózneGlutamínbola intravenózne vstreknutá do chvosta potkana pomocou injekčnej striekačky s rozchodom 27 ml.
Materiál cisplatiny bol získaný z Kalbe Farma (Indonézia) s dávkou 20 mg/kg BW, podávaný intraperitoneálnou injekciou pomocou injekčnej striekačky s rozchodom I mL 27. Použili sme tiež primárnu protilátkuCaspáz-12 (Polyklonálna protilátka PA5-27094 Thermo Scientific) a súpravu na detekciu apoptózy v Situ CellPOD(11684817910ROCHE).
Experimentálny dizajn
V tomto výskume bolo na začiatku štúdie náhodne rozdelených 30 samcov bielych potkanov Wistar do troch skupín. Kontrolná skupina (PO) bola obetovaná dislokáciou krčka maternice po anestézii éterom a potom boli obličky odobraté na imunohistochémiu.
Na 7. deň bola skupine P1 podaná cisplatina v jednej dávke 20 mg/kg BW intraperitoneálnou injekciou a potom sa pozorovala 72 hodín. Potkany boli obetované na 10. deň dislokáciou krčka maternice po anestézii éterom a potom boli obličky odobraté na imunohistochémiu. Doba vykonania je spôsobená výskytom apoptózy glomerulárnych epiteliálnych buniek po injekcii cisplatiny na 10. deň (Tsuruya et al.). 2003). Skupina P2 bola podaná sIntravenózneGlutamínv dávke 100 mg/kg BW raz denne intravenóznou injekciou od 1. do 7. dňa (Zhang et al.2009). Na 7. deň sa potkanom podávala cisplatina v jednej dávke 20 mg/kg intraperitoneálnej injekcie BWvia. Následne boli potkany pozorované po dobu 72 hodín a potom obetované na 10. deň dislokáciou krčka maternice po anestézii éterom. Neskôr boli obličky odobraté aj na prípravok imunohistochémie.
Histopatologická príprava
Obličkové tkanivo bolo fixované v 10% formalíne po dobu 15-24 hodín. Dehydratácia sa vykonávala po dobu 60 minút pomocou série alkoholu (30%, 50%, 70%, 80%,96% a absolútnej koncentrácie) aby sa zabránilo akýmkoľvek zmenám v tkanivovej morfológii. Potom sa zúčtovanie pomocou xylolu vykonalo dvakrát (po 60 minút). Následne sa infiltrácia jemným parafínom vykonávala 60 minút pri teplote 48°C. Neskôr bol tvrdý parafín zablokovaný vo forme a uložený na deň L. Na druhý deň bol kalený položený na držiak a nakrájaný na 4-5 um-hrubé časti pomocou rotačného mikrotómu. Potom sa montáž na predmetové sklo vykonala poly-L-lyzínovým povlakom. Namontované tkanivo bolo ponorené do xylolu dvakrát (po 5 minút). Potom sa rehydratácia vykonala pomocou série alkoholu (absolútna,96%,80%,70%,50% a 30% koncentrácia) počas 5 minút. Potom sa opláchol v dH, O po dobu 5 minút.
Imunohistochemický test CSP12
Sklíčka sa raz premyli fyziologickým roztokom s fosfátovým pufrom (PBS) (Milipore 524650) pri pH 7,4 trikrát počas 5 minút. Blokovanie endogénneho peroxidu sa prenášalo pomocou 3% H2O2 po dobu 20 minút. Potom sa sklíčka pred blokovacím ošetrením znova umyli rovnakým postupom. Nešpecifické blokovanie proteínov sa vykonalo pomocou 5% PBS (Milipore 524650)obsahujúcich 0,25% TritonX-100 (Sigma-Aldrich T8787) a potom zopakujte postup prania. Inkubácia primárnych protilátok kaspázy-12 (Polyklonálna protilátka PA5-27094 Thermo Scientific) sa vykonala cez noc pri teplote 40°C. Potom sa sklíčka umývali pomocou PBS (Milipore 524650), pH 7,4, trikrát po dobu 5 minút. Inkubácia s použitím anti-myšacieho biotínu konjugovaného sa vykonávala 1 h pri izbovej teplote, potom sa postup prania opakoval. Inkubácia pomocou peroxidázy reďkovky streptavidínu a koňa (Thermo Fisher Scientific NI00) sa vykonávala 40 minút a potom sa znova umyla. Snímky sa potom pridali kvapkami s diamom v benzidíne (DAB) (Thermo Fisher Scientific 3400) a inkubovali sa 10 minút a potom sa umyli podobným postupom. Protiškodník používal Mayerov roztok hematoxylínu (Sigma-Aldrich MHS32) po dobu 10 minút, potom sa umyl vodou z vodovodu, opláchol dH2O a vysušil na vzduchu. Pripravené sklíčka boli pozorované pomocou svetelného mikroskopu pri zväčšení 400× potom namontované a pokryté skleneným krytom. Pozitívna molekulárna expresia s primárnymi protilátkami by sa pri pozorovaní javila ako hnedá. Vypočítané glomerulárne epitelové bunky sa nachádzali v oblasti obličkového krviniek označenej plochou vrstvou epitelových buniek v parietálnej časti Bowmanovho priestoru.
Vyšetrenie apoptózy
Deparaffinizácia tkaniva sa vykonala trojnásobným umývaním tkaniva xylénom (Supelco 108297) po dobu 5 minút. Tkanivo bolo namočené dvakrát v absolútnom etanole po dobu 5 minút a potom sa prenieslo na 95% etanolu a 70% etanolu po dobu 3 minút. Tkanivo sa premývalo PBS (Milipore 524650) po dobu 5 minút.
Príjem antigénu sa vykonal podaním proteinázy K (Sigma-Aldrich 70663) po dobu 15 minút do vzorky. Potom sa tkanivo dvakrát umylo HO v Coplinovej trubici po dobu 2 minút. Endogénna peroxidáza sa odstránila kvapkaním 3% H, O, PBS a nechala sa 5 minút pri izbovej teplote. Potom sa tkanivo dvakrát umylo PBS (Milipore 524650) po dobu 2 minút v Coplinovej trubici. Prebytočná tekutina sa sušila pomocou papiera. Asi 75 ul vyrovnávacieho tlmivého roztoku bolo zhodených na tkanivo a potom inkubovaných po dobu 10 minút pri izbovej teplote. Tekutina okolo tkaniva sa potom vysušila pomocou papiera. Enzýmová aktivita sa znížila o 55ul/5 cm v tkanive TdT (Sigma-Aldrich SAB5600268). a potom sa tkanivo inkubovalo pri teplote 37°C vo vlhkej nádobe na l h. Prípravky boli umiestnené do nádoby Coplin obsahujúcej silný tlmivý roztok / čistenie a potom inkubované po dobu 10 minút pri izbovej teplote. Prípravky sa štyrikrát umyli PBS (Millipore 524650)po dobu 2 minút v pohári Coplin pri izbovej teplote. Prebytočná tekutina okolo tkaniva bola vysušená pomocou papiera. Konjugát anti-digoxigenínu (Roche 11333089001), ktorý bol predtým odstránený zo skladu a zahriaty na izbovú teplotu, bol zhodený na povrch tkaniva 65 ul/5 cm² a potom inkubovaný 30 minút pri izbovej teplote. Prípravok bol štyrikrát umytý PBS (Millipore 524650)v pohári Coplin po dobu 2 minút pri izbovej teplote. Potom sa prebytočná tekutina okolo tkaniva vysušila pomocou papiera. Farba bola vystavená po peroxidázovom substráte (Sigma-Aldrich CPS160) kvapkách 75μl/5cm2 na povrchu tkaniva a ponechaná 10 minút pri izbovej teplote. Prípravky boli trikrát umyté DH, O pre I min v pohároch Coplin a potom inkubované pohármi DH, Oin Coplin po dobu 5 minút pri izbovej teplote. Metylzelený protitaining (Sigma-Aldrich M8884) sa vykonával pre 30. roky pri izbovej teplote. Potom sa prípravok trikrát umyl dH.O po dobu 1 minúty v Coplin ar. Prípravky boli očistené xylénom (Supelco 108297) a prebytočná tekutina okolo tkaniva sa vysušila pomocou papiera. Prípravky boli pozorované pomocou svetelného mikroskopu pri zväčšení 400× a hnedé epitelové bunky z glomerulárneho epitelu obličiek sa počítali v každom zornom poli.
Štatistická analýza
Pomerom bola použitá dátová stupnica pre expresívne bunky caspázy-12 a apoptotické bunky, takže bolo potrebné vykonať test normálnosti pomocou Shapiro-Wilkovho testu (α = 0, 05) a testu homogenity pomocou kvasového testu (α = 0, 05). Ak boli výsledky v normálnom rozdelení a homogénne, potom sa vykonal iný test s použitím jednosmernej ANOVA (α = 0, 05). Ak boli výsledky normálne, ale heterogénne, potom vykonaný test bol Kruskal-Wallis(α = 0, 05). Ak by bol rozdiel v získaných údajoch. potom po analýze nasledoval test Mann-Whitney U (α = 0,05). Nakoniec bol vykonaný Pearsonov korelačný test, aby sa zistila korelácia medzi bunkami expresujúcimi kaspázu-12 a apoptotickými bunkami.
Výsledky
Morfológia glomerulárnych epitelových buniek
Pred pozorovaním buniek expresie kaspázy-12 a apoptotických buniek bola morfológia Bowmanovho obličkového epitelu kapsuly prvýkrát pozorovaná pri zafarbení hematoxylín-eozínu (HE) pri zväčšení 400×. Pozorovaný objekt bol vybraný náhodne, aby reprezentoval histologický obraz každej skupiny. Cisplatina sa príležitostne nachádzala pri fokálnej tubulárnej nekróze, zhrubnutí základnej membrány v obličkových tubuloch a Bowmanových kapsulách a infiltrácii fokálnych mononukleárnych buniek do glomerulusu. Niektoré glomeruly zažívajú nekrózu a normálne zvyškové glomeruly často vykazujú zväčšené periglomeruárne priestory.
Caspase-12 Proteínová expresia a apoptotické bunky v glomerulárnych epiteliálnych bunkách
Výsledky imunohistochemicko zafarbeného obličkového tkaniva vykazovali zmeny vo expresii kaspázy-12 v každej skupine. Podanie injekcie cisplatiny v skupine P1 vykazovalo vyššiu strednú expresiu kaspázy-12 po 72 h(4.1±0,86) v porovnaní s kontrolnou skupinou (P0). Podanie injekcie glutamínu a injekcie cisplatiny (P2) vykazovalo nižšiu strednú expresiu kaspázy-12 po 72 hodinách (2, 54± 0, 72)v porovnaní s P1 (tabuľka 1).
Okrem toho injekcia cisplatiny v skupine PI vykazovala vyššiu mieru bunkovej apoptózy po 72h(52,7±17,06)v porovnaní s kontrolnou skupinou (P0). Podanie injekcie glutamínu a injekcie cisplatiny v P2 vykazovalo nižšiu strednú expresiu kaspázy-12 po 72 hodinách (31, 5±6, 73)v porovnaní s PI(tabuľka 1). Kruskal-Wallisov test ukázal rozdiely v počte glomerulárnych epitelových buniek vyjadrujúcich kaspádu-12 a v počte apoptotických buniek v troch liečebných skupinách. Následne test Mann-Whitney U dospel k záveru, že existujú rozdiely v počte parietálnych epitelových buniek vyjadrujúcich proteín caspázy-12 a v počte apoptotických buniek medzi skupinami P1 a P2 s kontrolnou skupinou a medzi skupinami Pl a P2. Rozdiely boli aj v počte parietálnych epitelových buniek vyjadrujúcich proteín kaspázy-12 a v počte bunkovej apoptózy (tabuľka 2).
Korelácia medzi expresívnymi bunkami Capase-12 a apoptotickými bunkami
Výsledky Pearsonovho korelačného testu ukázali, že existuje významná korelácia medzi glomerulárnymi epitelovými bunkami vyjadrujúcimi kaspádu-12 a počtom buniek podstupujúcich apoptózu s korelačným koeficientom 0,707, ktorý je silný a pozitívny. Možno teda dospieť k záveru, že ak sa zníži počet buniek expresie proteínov, zníži sa aj počet apoptotických buniek a naopak.
Tabuľka 1. Popisná štatistika expresie Caspase-12 a apoptotických buniek. P0: kontrolná skupina. P1:cisplatinaInjekcia na 7. deň. P2 bol ošetrenýIntravenózneglutamíninjekcia 7 dní po sebe pred podaním injekciecisplatinana siedmy deň. | Tabuľka 2. Výsledky testov Mann–Whitney U |
 |  |
Diskusia
V tejto štúdii bola liečba vykonaná na pokusných zvieratách, ktoré boli rozdelené do troch skupín: kontrolná skupina (PO); skupina PI, ktorá dostala intraperitoneálnu injekciu cisplatiny; a skupina P2, ktorá dostala intraperitoneálnu injekciu cisplatiny aintravenózny glutamíninjekcia. Odpoveď na liečbu sa pozorovala počas 72 hodín po liečbe, pretože apoptóza bola zjavná po 72 hodinách injekcie cisplatiny (Tsuruya et al.). 2003). Miestom pozorovaným v tejto štúdii bol glomerulárny epitel. Doteraz nebol vykonaný žiadny výskum nefrotoxicity cisplatiny v glomerulárnom epitele. Glomerulus je proximálnejší ako tubuly, a preto sa predpokladá, že je ovplyvnený nefrotoxicitou cisplatinou skôr ako tubuly.
Rozdiely v úrovni expresie kaspázy- 12 boli priamo úmerné úrovni podávania glutamínu pri každej liečbe. Tieto výsledky sú podporené štúdiou, ktorá uviedla, že glutamín môže vyvolať vysoké hladiny expresie HSP vo všetkých orgánoch vrátane obličiek (Zhang et al., 2009). Jedna dávkaintravenózny glutamínmôže zvýšiť expresiu HSP, znížiť zranenie koncových orgánov a zlepšiť prežitie zo septického šoku u celých myší (Wischmeyer, 2002). Cytoprotektívne a antioxidačné vlastnosti glutamínu môžu byť rozhodujúce v situáciách s vysokým katabolizmom, kde je modulovaná aktivita a expresia zápalových dráh sprostredkovaných NF-kB (Cruzat et al., 2014). Bola hlásená znížená dostupnosť plazmatického glutamínu, ktorá spôsobuje zníženie proliferácie lymfocytov, zhoršuje expresiu povrchovo aktivačných proteínov a produkciu cytokínov a indukuje apoptózu v bunkách (Roth. 2008). To je dôvod, prečo glutamín môže zabrániť bunkám smerom k apoptóze v tejto štúdii.
Ako je uvedené vo výsledkoch, podávanie glutamínu znížilo apoptózu buniek liečených cisplatinou. To bolo preukázané v štúdii Kadri et al. (2017), kde potlačenie metabolizmu glutamínu môže zvýšiť cytotoxický potenciál niektorých terapeutických liekov, ako je cisplatina, čím sa umožní zníženie dávky chemoterapeutických zlúčenín, aby sa minimalizovala toxicita a nežiaduce reakcie.
Mechanizmy bunkovej smrti závisia od dávky podávania cisplatiny, či už nekrózou alebo apoptózou (Lieberthal et al,1996). V experimentoch in vitro nízke koncentrácie cisplatiny spôsobujú, že bunky prechádzajú apoptózou, zatiaľ čo nekróza vo vysokých koncentráciách (Megyesi et al.1998: Ramesh and Reeves.2003). V tomto výskume dávka stačila na to, aby epiteliálne bunky podstúpili apoptózu.
V tejto štúdii injekcia cisplatiny v P1 vykazovala vyššiu mieru bunkovej apoptózy po 72 h v porovnaní s kontrolou (PO). Zistili sme tiež, že injekcia glutamínu a cisplatiny v P2 vyjadrovala nižšiu expresiu kaspázy-12 po 72 h v porovnaní s P1.
Apoptóza po liečbe cisplatinou môže tiež zahŕňať ER-stresovú dráhu. Iniciátorom kaspázy v dráhe ER je kaspáza-12, ktorá je lokalizovaná na cytosolickú tvár pohotovosti a aktivovaná tlakom ER (Boyce a Yuan, 2006). Caspase-12 sa aktivuje počas liečby cisplatiny v bunkách LLC-PK1 (Liu a Baliga, 2005). Pozorovania in vitro sa nedávno rozšírili na myšacie modely nefrotoxicity cisplatiny, kde sa pozorovalo namáhanie pohotovosti a súvisiaca signalizácia, ako je štiepenie kaspázy-12 (Peyrou et al., 2007).
Možno dospieť k záveru, že apoptóza v dôsledku podávania cisplatiny sa vyskytuje v dôsledku zvýšenej expresie kaspázy-12, ktorá indukuje apoptózu v obličkových glomerulárnych epitelových bunkách. Pri 72 hodinách pozorovania pointravenózny glutamínpodávanie, výskyt apoptózy v obličkových glomerulárnych epiteliálnych bunkách bol významne inhibovaný (p<0.0001)between the="" groups="" and="" was="" directly="" proportional="" to="" the="" effect="" of="" glutamine,="" which="" inhibited="" the="" expression="" of="">
Na záver, na základe výsledkov dochádza k zníženiu expresie kaspázy-12 a apoptotických buniek v glomerulárnych epiteliálnych bunkách samcov bielych potkanov vystavených cisplatine pointravenózny glutamínadministratíva. Znížená expresia kaspázy-/2 vintravenózny glutamínPo podaní nasleduje zníženie apoptózy v glomerulárnom epitele. Predpokladá sa teda, že imunohistochemické vyšetrenie obličkového glomerulárneho epitelu sa môže použiť ako marker nefrotoxického účinku cisplatiny.
Obmedzenie tejto štúdie spočíva v tom, že neboli pozorované rôzne premenné. Výskumník nevykonal pozorovania exekútorovi kaspázy (kaspáza-3), pretože výskumník chcel vidieť, že význam liečby sa vykonal v iniciátorskej kaspáze. Táto štúdia tiež nezaznamenala výskyt apoptózy dvoma alebo viacerými cestami. V tomto prípade sa výskumník chce najprv pokúsiť prejsť jednou cestou a nie je potrebné študovať viac ako jednu cestu, ak sú výsledky významné. Odporúča sa tiež vykonať ďalší výskum v oblasti aplikácieintravenózny glutamínintravenózne pre ľudí, ktorí dostávajú chemoterapiu cisplatinou, a tiež na liečbu u zvieraťa s rakovinou, takže je možné pozorovať účinok glutamínu v skupine s rakovinou a nerakovinovou rakovinou.
Obrázok 1. Morfológia glomerulárnych epitelových buniek po protilátke CSP-12. P0:kontrolná skupina. P1: injekcia cisplatiny na 7" deň. P2 ošetrenéintravenózny glutamíninjekcia po dobu 7 dní po sebe pred infikovaním cisplatinou v deň 7"h. Pozitívny výsledok indikovaný hnedou cytoplazmou. | Obrázok 2. Morfológia glomerulárnych epitelových buniek po súprave na detekciu apoptózy. PO: kontrolná skupina. P1: injekcia cisplatiny v 7" deň. P2 ošetrenéintravenózny glutamíninjekcia počas 7 dní po sebe pred podaním injekcie cisplatiny počas 7 dní. Pozitívny výsledok indikovaný hnedou cytoplazmou. |
 |  |
Referencie
AkcayA, Turkméni K, Lee D, Edelstein CL(2010). Aktuálne informácie o diagnostike a manažmente akútneho poškodenia obličiek. Int J Nephrol Renovasc Dis, 3,129-40
Al Hussain T, Al Mana H, Hussein M, Achtar M (2017). Podocytové a parietálne epitelové bunkové interakcie v zdraví a chorobe. Ady Anat Pathol,24,24-34.
Bovce M. Yuan J(2006). Bunková odpoveď na endoplazmatický retikulum stres; Otázka života alebo smrti. CellDeathDiffer, 13,363-73
Crespo I, San-Miguel B, Prause C.et al (2012). Liečba glutamínom zmierňuje endoplazmatický retikulum stres a apoptózu pri kolitíde vyvolanej TNBS. PLoS One,7,50407 Cruzat VF,BittencourtA,Scomazzon SP, et al (2014). Perorálne voľné a dipeptidové formy suplementácie glutamínom attenuujú oxidačný stres a zápalové ióny vyvolané endotoxémiou. Výživa, 30,602-11
Feldenberg LR,Thevananther S,Del Rio M, De Leon M, Devarajan P(1999). Čiastočné vyčerpanie ATP indukuje fas-a kaspádou sprostredkovanú apoptózu v bunkách MDCK. Am.J/ Fyziol (Renálna fyziol),276.837-46.
Fillipski KK,Loos WJ, Verweij J, Sparreboom A(2008). Interakcia cisplatiny s ľudským organickým katiónovým transportérom 2. Rakovina clinu Res,15,3875-80
Fukuoka K, Takeda M, Kobayashi M et al(1998). Zreteľné enzýmy konvertujúce interleukín-1β-konvertujúce enzýmy čeľade proteázy sprostredkúvajú cisplatinu a staurosporínom indukovanú apoptózu proximálnych tubulových buniek myší. Život Sei,62.1125-38.
Guo Y, Wang M,MouJ,etal(2018). Extrakt z pretreatmentofhuaiqihuang chráni pred nefrotoxicitou vyvolanou cisplatinou. Sci Rep,8, 7333
Hanigan MH. Devarajan P(2003). Nefrotoxicita cisplatiny: Molekulárne mechanizmy. Rak ther,1,47-61
Jing L, Wu O, Wang F(2017). Glutamín indukuje tepelno-šokový proteín a chráni pred Escherichia coli
Nota:Vyššie uvedený zoznam nie je úplným referenčným zoznamom
