Spontánna granulocytová leukémia u NOD/Shi-scid IL-2R nulovej myši

Abstrakt:Tu uvádzame prípad spontánnej granulocytovej leukémie u 51-týždňového muža NOD/Shi-SCIDIL-2R nulová (NOG) myš. Ukázala sa myšprogresívna anémiaahrubý dýchací pohyb. Makroskopicky bola slezina odfarbená a zväčšená. Histologicky sa kostná dreň zhrudná kosťa stehenná kosť bola vysoko bunková a takmer výlučne vyplnenáneoplastické bunky. Jadrá neoplastických buniek boli veľké, oválneho až mierne nepravidelného tvaru a malý počet buniek malobličky- alebo prstencovité jadrá.Neoplastické bunkyextenzívne infiltrovali orgány a slezina a pečeň boli výrazne zapojené. Imunohistochemicky bola veľká populácia neoplastických buniek v červenej pulpe sleziny a sínusoide pečene pozitívna namyeloperoxidáza. Na základe histologických znakov bol tento prípad diagnostikovanýgranulocytárna leukémia. Táto nová informácia ospontánne nádorymôžu byť užitočné pre vhodné použitie tohto kmeňa myší v ďalšom výskume. (DOI: 10,1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Kľúčové slová: granulocytárna leukémia, NOG myš, spontánny nádor

KLIKNITE SEM A ZÍSKAJTE PRÍRODNÝ BIO EXTRAKT CISTANCHE S 25 % ECHINAKOZIDU A 9 % AKTEOZIDU PRE FUNKCIU OBLIČIEK

Podporná služba Wecistanche - Najväčší vývozca cistanche v Číne:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Nakupujte pre ďalšie špecifikácie Podrobnosti:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontánna granulocytárna leukémiaje zriedkavo hlásená u niekoľkých kmeňov myší, hoci chemické látky a ionizujúce žiarenie môžu zvýšiť výskyt u niektorých kmeňov myší1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) myši sú vážnezvieratá s nedostatočnou imunitoua predstavujú defekty v T-, B- a prirodzených zabíjačských bunkách a zle fungujúcich makrofágoch a dendritických bunkách knockoutom IL-2 receptorového reťazca (IL2R c) do kmeňa NOD-scid3. Tento myšací kmeň sa používa na neklinické testy, ako je test tumorigenicity, na posúdenie kvality a bezpečnosti biologických produktov pre regeneratívnu medicínu s použitím buniek/tkaniva ľudského pôvodu z dôvodu výrazne lepšieho uchytenia xenogénnych buniek4–6. Hoci imunodeficientný stav a jeho dôsledky pre xenoimplantáty boli dobre študované, je k dispozícii len málo informácií o spontánnych nádoroch vyskytujúcich sa u tohto kmeňa myší, ako je lymfóm týmusu,mliečnejžľaza adenóm/adenokarcinóm, bronchioloalveolárny karcinóm, rabdomyosarkóma teratóm7. Tu uvádzame prípad granulocytovej leukémie u 51-týždňového samca NOG myši.

Zviera bolo získané od In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japonsko) vo veku 6 týždňov a bolo chované bez liečby. Zviera bolo individuálne umiestnené v plastovej klietke s individuálne vetraným klietkovým systémom (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japonsko) v miestnosti s bariérovým systémom s kontrolovaným prostredím, ktorá sa udržiavala na teplote 22 ± 2 stupne pomocou vlhkosť 50 ± 20 % a 12-h cyklus svetlo/tma. Myš bola kŕmená autoklávovanou peletovanou stravou (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japonsko) s autoklávovanou vodou z vodovodu a libitom. So zvieraťom sa zaobchádzalo podľa protokolu schváleného Inštitucionálnym výborom pre starostlivosť o zvieratá a používanie zvierat spoločnosti CMIC Pharma Science Co., Ltd., ktorý je akreditovaný AAALAC International.

Táto myš vykazovala klinické príznaky oslabenia, ako je anémia, hrubé dýchacie pohyby a zníženie telesnej hmotnosti vo veku 49 až 51 týždňov. Zviera bolo usmrtené vo veku 51 týždňov. Pri pitve bola slezina odfarbená a zväčšená. V ostatných orgánoch neboli pozorované žiadne zjavné abnormálne hrubé nálezy. Týmus a lymfatické uzliny boli atrofické, podobne ako u normálnych NOG myší.

Všetky vzorky orgánov a tkanív sa rutinne odoberali, fixovali v 10% neutrálnom pufrovanom formalíne, zaliali sa do parafínu a narezali na približne 3 μm. Na jeho patologické vyšetrenie boli rezy zafarbené hematoxylínom a eozínom (HE). Rezy sleziny a pečene boli imunohistochemicky zafarbené na králičiu polyklonálnu protilátku proti ľudskej myeloperoxidáze (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japonsko) ako marker myeloidných buniek, králičiu anti-ľudskú CD3 monoklonálnu protilátku (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japonsko ) ako T bunkový marker a králičiu anti-ľudskú Pax-5 monoklonálnu protilátku (Abcam Inc., Cambridge, UK) ako B bunkový marker8. Rezy sa inkubovali s protilátkami pri teplote miestnosti počas 1 hodiny a imunodetekcia sa uskutočnila pomocou súpravy Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) s 3,3'-diaminobenzidín/H202 ako chromogénom. Potom boli imunofarbené rezykontrastne zafarbené hematoxylínom.

Histopatologicky bola kostná dreň hrudnej a stehennej kosti vysoko celulárna a takmer výlučne vyplnená neoplastickými bunkami (obr. 1A). Tukové tkanivo bolo úplne vytesnené. V kostnej dreni sa občas vyskytli bunkové ložiská pozostávajúce z erytroidných a megakaryocytárnych prvkov, ktoré sa považovali za zvyškynormálna hematopoéza. Väčšina neoplastických buniek mala blastický vzhľad, charakterizovaný veľkými, oválnymi až mierne nepravidelne tvarovanými jadrami a retikulárnym chromatínom obsahujúcim jedno alebo viac prominentných jadier. Bol tu malý počet buniek s obličkovitými alebo prstencovými jadrami a bolo prítomných aj niekoľko buniek s laločnatými jadrami (obr. 1B). Granuly v cytoplazme neoplastických buniek neboli v rezoch zafarbených HE zrejmé. V kostnej dreni sa našli početné mitotické útvary a príležitostne sa pozorovali aj apoptotické telieska. Neoplastické bunky výrazne prenikli do periostu a okolitého kostrového svalstva. Došlo k rozsiahlej infiltrácii neoplastických buniek do iných orgánov a tkanív a výrazne sa podieľala slezina a pečeň. V slezine boli neoplastické bunky pozorované v celej červenej pulpe (obr. 2). Bola evidentná kapsulárna infiltrácia neoplastických buniek. Pozorovalo sa niekoľko vyvíjajúcich sa erytroidných sérií a megakaryocytov. Príležitostne boli pozorované megakaryocyty obsahujúce jednu alebo niekoľko myeloidných buniek v cytoplazme, čo naznačuje emperipolézu. V pečeni neoplastické bunky difúzne infiltrovali Glissonovu kapsulu a pečeňové sínusoidy (obr. 3). V niektorých krvných cievach boli evidentné aj neoplastické bunky s obličkovými alebo prstencovými jadrami. Niektoré hepatocyty v periportálnej oblasti s výraznou infiltráciou neoplastických buniek vykazovali degeneráciu alebo nekrózu, zatiaľ čo normálna štruktúra pečeňového laloku zostala nedotknutá. Neoplastická bunková infiltrácia bola zistená aj v iných orgánoch, vrátane alveolárnej steny a perivaskulárnej oblasti pľúc, interstadia v obličkách, sínusoidy v nadobličkách a sliznice a submukózy v žalúdočnom trakte (žalúdok a črevo). Imunohistochemicky bola na MPO pozitívna veľká populácia neoplastických buniek v červenej pulpe sleziny (obr. 4) a sínusoide pečene. CD3 a Pax-5 pozitívne bunky sa nezistili. Výsledky imunofarbenia CD3 a Pax{11}} boli podobné ako výsledky sleziny normálnych myší NOG, ktoré boli histologicky hypoplastické a nevykazovali žiadne CD3 alebo Pax{13}} pozitívne bunky.

Imunohistochemické vyšetrenie odhalilo, že neoplastické bunky pochádzajú z myeloidných bunkových línií. V niektorých zapojených oblastiach, najmä v slezine a pečeni, malo malé množstvo buniek obličkové, prstencové alebo laločnaté tvary, ktoré naznačujú diferenciáciu myeloidných sérií. Tieto zistenia naznačujú, že neoplastické bunky pochádzajú z nezrelých granulocytov. Prípad ťažkej myelopoézy môže byť evidentný prítomnosťou všetkých typov vyvíjajúcich sa myeloidných sérií, na rozdiel od dominancie nezrelých buniek pri leukémii. Okrem toho je progresívna anémia bežným klinickým príznakom granulocytovej leukémie a zvýšenie počtu erytroidných a megakaryocytových buniek je slabé1. Menšia populácia granulocytov s laločnatými jadrami v postihnutej oblasti bez zjavného zápalu naznačuje, že zistenia tohto prípadu sú neoplastickou a nie reaktívnou myelopoézou.

Pri granulocytárnej leukémii môže byť kostná dreň nahradená nezrelými a zrelými myeloidnými bunkami. V predchádzajúcej správe o iných kmeňoch myší tieto neoplastické bunky úplne infiltrovali pečeň, slezinu, lymfatické uzliny atď.2 a tieto bunky v slezine a pečeni sa nachádzali hlavne v červenej dreni a okolo Glissonovho puzdra1. Distribúcia leukemických buniek v tomto prípade bola teda identická s distribúciou v predchádzajúcom prípade. Na základe morfológie buniek je granulocytárna leukémia u myší klasifikovaná do dvoch typov: juvenilný typ, ktorý je porovnateľný s ľudskou akútnou myeloidnou leukémiou, a zrelý typ s ľudskou chronickou myeloidnou leukémiou1. V prípade mladistvých dominovali neoplastické bunky v kostnej dreni, slezine a pečeni slabo diferencované bunky, zatiaľ čo myeloidné elementy predstavujúce rôzne stupne dozrievania možno pozorovať a percento myeloblastov bolo v niektorých zrelých prípadoch nízke2, 9. v tomto prípade leukemickým bunkám dominovala nezrelá forma s veľkými, oválnymi až mierne nepravidelne tvarovanými jadrami. Okrem toho, berúc do úvahy klinické nálezy, že celkové zhoršenie zdravotného stavu, vrátane progresívnej anémie a hrubého dýchacieho pohybu, sa vyvinulo akútne; preto sa v prejednávanej veci predpokladá, že ide o mladistvý typ.

Obr. 1. Histologické snímky kostnej drene femuru. Odpoveď: Neoplastické bunky sa difúzne množia, čím nahrádzajú kostnú dreň. B: Jadrá sú veľké, oválneho až mierne nepravidelného tvaru. Malý počet buniek má jadrá v tvare obličiek (žltá šípka), prstenca (zelená šípka) alebo laloku (biela šípka). Mitotická postava je označená bielou šípkou. HE škvrny. Čierny pruh=50 μm (A), 10 μm (B).

V predchádzajúcej publikácii o NOG myšiach boli neoplastické lézie vo všeobecnosti neobvyklé; avšak lymfóm týmusu bol hlásený u 0,82 % vo vekovej skupine od 16 do 40 týždňov7, 10. Pokiaľ je nám známe, spontánna granulocytárna leukémia nebola predtým u NOG myší hlásená. U niekoľkých kmeňov myší, vrátane B6C3F1 a BALB/c, sa granulocytová leukémia vyskytla zriedkavo2, 11 a nebola hlásená v prípade týchto myší vo veku 12 mesiacov alebo mladších. V tomto prípade sa vyvinula granulocytárna leukémia vo veku 51 týždňov, čo bol relatívne mladý vek. Tieto nové informácie o spontánnych nádoroch môžu byť užitočné pre vhodné použitie tohto myšacieho kmeňa v ďalšom výskume.