Štúdium histopatológie a fyziologických funkcií obličiek

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Ahmad Fauzi a kol

Abstraktné.

The purpose of this study was to analyze abnormal changes in kidney histology and physiology in acute kidney injury animal models with multiple doses of gentamicin. Induction of experimental animals was carried out on 20 rats (Rattus norvegicus) Wistar strain which was divided into 4 groups, group I was a negative control group, groups II, III, and IV are gentamicin-induced groups at doses of 30 mg/kg, 40 mg/kg, and 50 mg/kg, respectively. Kidney histopathology was stained with Hematoxylin Eosin (HE), while analysis of serum BUN and creatinine by spectrophotometric method. Data analysis for kidney histopathology was descriptive while BUN and Creatinine were statistically tested with one-way ANOVA. The results of this study showed there was kidney damage in all gentamicin-induced groups, which is necrosis in the contortions tubule and the Bowman's capsule compared to the negative control group. The group of rats with the higher doses of gentamicin showed a more severe level of histopathological changes, however, BUN and creatinine levels were not significantly different (p>0.05). Táto štúdia dospela k záveru, že indukcia gentamicínu môže spôsobiť histopatologické zmeny obličiek, ale nie fyziológiu obličiek.

Kľúčové slová:zvierací model, antibiotikum, BUN, kreatinín, nefrotoxicita.

cistanche v hindčinemôže zlepšiť funkciu obličiek

1. Úvod

Akútne poškodenie obličiek je ochorenie spôsobené zlyhaním obličiek alebo poškodením obličiek, ktoré sa vyskytuje rýchlo v priebehu niekoľkých hodín alebo dní. Príznaky, ktoré sa objavujú pri výskyte akútobličkyzraneniaako sú bolesti brucha, polyúria, oligúria a iné(1). Toto ochorenie sa väčšinou diagnostikuje meraním hladiny biomarkerov; ako je krvný močovinový dusík (BUN) a kreatinín. Tieto zmeny biomarkerov však často neopisujú skutočný stav obličiek. Stavy akútneho poškodenia obličiek možno jasne vidieť makroskopickým a mikroskopickým pozorovaním obličiek.Poškodenéobličkymôže byť charakterizovaný opuchom obličkovej kôry a tiež nekrózou bunky(2). Zatiaľ čo zvýšené hladiny biomarkerov BUN a kreatinínu v krvi sa vyskytujú, keď sú obličky poškodené o približne 30 percent - 59 percent, sprevádzané anémiou a letargiou(3). Je známe, že obličky sú schopné regenerácie, ale s mierou poškodenia buniek až 50 percent bude ťažké normálne obnoviť jej fyziologické funkcie. To podnietilo mnohých výskumníkov, aby skúmali rôzne látky, ktoré môžu spôsobiť nefrotoxicitu, aby sa znížil výskyt tohto ochorenia.

Okrem toho je tiež dôležité študovať mechanizmus akútneho poškodenia obličiek pomocou zvieracích modelov. Zvieracie modely akútneho poškodenia obličiek sa vyskytujú v dôsledku poškodenia nefrónu v obličkách. V nefróne, ktorý pozostáva z glomerulu, Bowmanovho puzdra, tubulárneho kontortu alebo Henleho oblúka, dôjde k nekróze buniek. Podľa Halima (2014) vytvorenie zvieracieho modelu akútneho poškodenia obličiek trvá približne jeden mesiac(4). Materiál, ktorý možno použiť na vyvolanie poškodenia obličiek, je rôzny, napríklad lieky. Jedným z liekov, ktoré môžu spôsobiť poškodenie obličiek, sú antibiotiká(2). Antibiotiká, ktoré sa často používajú na vytváranie zvieracích modelov s poškodením obličiek, sú gentamicínové antibiotiká. Indukčné dávky antibiotík na stimuláciu poškodenia obličiek sa značne líšia. Boli publikované rôzne štúdie nefrotoxického gentamicínu, ako napríklad pri nízkych dávkach 10 mg/kg telesnej hmotnosti v období mesiacov (4), pri vysokých dávkach 60 mg/kg telesnej hmotnosti v priebehu 10 dní (5, 6), dávkach 100 mg/kg telesnej hmotnosti do 8 dní (7).

V súčasnosti sa stále často používa injekcia gentamicínu u zvierat, zatiaľ čo u ľudí sa od toho začalo upúšťať. Bezpečná dávka, ktorá sa často používa u ľudí, je 5-7 mg/kg telesnej hmotnosti(8), v nasledujúcom roku klesne na 3-5 mg/kg telesnej hmotnosti(9). Je známe, že dávka gentamicínu, ktorá je 10-násobkom bezpečnej dávky, spôsobuje toxicitu u potkanov. Táto bezpečná zmena dávky môže umožniť aj zmeny toxických dávok, preto je cieľom tejto štúdie analyzovať histologické a fyziologické zmeny potkanov ako zvieracích modelov akútneho poškodenia obličiek v dôsledku injekcie gentamicínu vo viacúrovňových dávkach od 30 mg/kg telesnej hmotnosti do 50 mg/ kg telesnej hmotnosti.

2. Materiál a metódy

2.1. Zvierací model

Dvadsať samcov potkanov kmeňa Wistar, získaných od de Wistar Bandung, bolo rozdelených do 4 skupín, skupina I bola kontrolovaná skupina s injekciou placeba, skupina II bola indukovaná dávkou gentamicínu 30 mg/kg telesnej hmotnosti, skupina III bola indukovaná dávkou gentamicínu 40 mg/kg telesnej hmotnosti a skupina IV bola indukovaná dávkou gentamicínu 50 mg/kg telesnej hmotnosti. Zvieratá boli usmrtené na 10. deň. Histopatologické vyšetrenie sa uskutočnilo na tkanive obličiek potkanov po eutanázii. Celé zviera vyhovovalo smerniciam vyhláseným výborom ústavnej starostlivosti o zvieratá a ich použitia s registračným číslom 954-KEP.

2.2. Injekcia gentamicínu

Každý potkan dostával denne intramuskulárnu injekciu (medzi semimembranóznu a semitendinóznu) gentamicín sulfátu (Genta{0}}®) počas 10 dní v rôznych dávkach podľa ich skupiny.

2.3. Vyšetrenie preparátov histológie obličiek

Orgány obličiek sa vložili do 10 percentného pufrovaného formalínu na prípravu prípravkov na histopatológiu. Z obličky sa urobil histologický preparát prenosom tkaniva do 70-percentného alkoholu ako zastavenie. Potom sa tkanivo dehydratovalo viacúrovňovým alkoholom s koncentráciou 70 percent počas 24 hodín, 80 percent etanolu počas 2 hodín, 90 percent etanolu, 95 percent a absolútnym etanolom počas 20 minút. Potom boli orgány namočené v xylole I na 20 minút a v xylole II na 30 minút, aby boli orgány čisté. Potom prefiltrujte tkanivo a vložte do parafínového bloku 56-58 C. Orgán obličiek sa nareže na hrúbku 5 mikrónov pomocou rotačného mikrotómu. Pri každom opakovaní sa urobili 4 rezy v intervaloch po 10 rezov a umiestnili sa na sklo objektu, ktorému bol podaný 70-percentný alkoholový roztok a potom zafarbený farbením hematoxylín-eozín (HE)(10).

2.4. Odber krvi u pokusných zvierat

Odber krvi na zvieracích modeloch cez infraorbitálny sínus pomocou mikrohematokritu, potom vložený do vakutainera. Vytvorené sérum sa vložilo do nekoagulačnej mikroskúmavky, aby sa analyzovalo sérum BUN a kreatinín.

2.5. Meranie hladín BUN a kreatinínu

Hladiny BUN a kreatinínu sa skúmali pomocou spektrofotometrie (ABX Pentra). Fyziológia obličiek sa hodnotila kolorimetrickou metódou Jaffe (súpravy kreatinínu a močoviny DiaSys diagnostic systems GmbH Germany), aby sa vypočítali hladiny močovinového dusíka v krvi (BUN) a kreatinínu v sére.

2.6. Štatistická analýza

Pozorovania histopatológie obličiek pomocou elektrónového mikroskopu sa potom analyzovali opisne. Údaje o BUN a kreatiníne boli analyzované kvantitatívne pomocou programu Statistical Package for the Social Sciences (SPSS, v20). Bol vykonaný jednosmerný test ANOVA s cieľom pozorovať významné rozdiely medzi skupinami (<0.05) and="" continued="" with="" the="" tukey="">

3. Výsledky a diskusia

3.1. Makroskopické zmeny v obličkách vyvolaných gentamicínom

Potkany indukované gentamicínom vykazovali klinické príznaky letargie, nečinnosti a makroskopia moču vykazovala mierne červenkastú farbu, ale výkaly boli normálne, konzumácia jedla a nápojov bola stále normálna. Makroskopicky sa veľkosť obličiek kontrolných a liečených potkanov nerozlišovala, ale rozdiely sa vyskytujú mimo farby obličkovej sliznice v kontrolnej skupine (obrázok la) a skupine s indukciou gentamycínu (obrázok 1b).

Obrázok 1. Obličky u negatívnych kontrolných potkanov majú fazuľový tvar a majú červenkastú farbu ako normálne obličky (a), zatiaľ čo obličky v skupine s indukciou gentamycínu vyzerajú bledšie (b)

3.2. Zmena v renálnej histológii zvieracích modelov s indukciou gentamicínu.

Mikroskopické pozorovanie s použitím 100- a 400-násobného zväčšenia ukázalo histopatologickú zmenu v skupine s indukciou gentamicínu. Zatiaľ čo kontrolná skupina, ktorá nebola indukovaná gentamicínom, nevykazovala žiadne mikroskopické zmeny (obrázok 2). Sférický glomerulus sa skladá z simplexných endotelových bunkových kapilár, Bowmanove kapsuly mali okrúhly tvar so zjednodušenými dlaždicovými bunkami, proximálne kontortné tubuly s kvádrovým simplex celulárnym s mikroklkmi a distálne kontortné tubuly so zaoblenou kvádrovou bunkou bez mikroklkov a dreň sa skladá Henleovej slučky so zaoblenou jednoduchou dlaždicovou bunkou (11),

Obrázok 2. Histopatológia obličiek v negatívnej kontrolnej skupine (farbenie hematoxylín-eozín, 100x a 400x zväčšenie). Glomerulus (šípka) je normálny s okrúhlym tvarom a pevnou štruktúrou, proximálne tubuly (hrot šípu) s kvádrovo-okrúhlymi bunkami a vilkami.

Mikroskopické snímky obličiek potkanov s injekciou gentamicínu 30 mg/kg telesnej hmotnosti (skupina I) boli pozorované histopatologické zmeny v porovnaní s negatívnou kontrolnou skupinou (obrázok 3). Glomerulárne endotelové bunky erodujú, Bowmanova kapsula nastáva nekrózu a Bowmanov priestor sa stáva tenším. Stav proximálnych tubulárnych buniek bola nekróza, čo sa prejavuje deskvamáciou kuboidných simplexných epitelových buniek s cytoplazmou a bunkovými jadrami, ktoré miznú. Zápalové bunky v proximálnom tubule sa nachádzajú okolo tubulárnych epitelových buniek charakterizovaných veľkými čiernofialovými okrúhlymi bunkami.

Obrázok 3. Histopatológia obličkových obličiek v liečebnej skupine I s indukciou 30 mg/kg telesnej hmotnosti (farbenie hematoxylín-eozín, 100x a 400x zväčšenie). (šípka) Glomerulus vykazoval eróziu endotelových buniek, (šípka) Bowmanove kapsuly vykazovali nekrózu a naťahovanie, * Tubule contortus vykazovalo nekrózu a množstvo zápalových buniek.

Histopatologické snímky potkanov, ktorým bola podaná injekcia 40 mg/kg telesnej hmotnosti v skupine II, ukazujú závažnejší stupeň poškodenia v porovnaní s kontrolnou a liečenou skupinou I (obrázok 4). glomeruly boli nekrózou a eróziou endotelových buniek, Bowmanov priestor sa stal tenším a jadro epitelových buniek v Bowmanovom puzdre bolo lýzované. Kvádrové simplexné epitelové bunky v proximálnych kontortných tubuloch vidia nekrózu a deskvamácia epitelových buniek sa vyskytuje v cytoplazme aj v jadre. Okolo poškodených nefrónov sa často vyskytujú zápalové bunky.

Obrázok 4. Histopatológia obličiek v liečebnej skupine II Indukcia 40 mg/kg telesnej hmotnosti (farbenie hematoxylín-eozín, 100x a 400x zväčšenie). Glomerulus (šípka) vykazoval deskvamáciu endotelových buniek, zistilo sa, že Bowmanova kapsula (hrot šípky) nekróza a Bowmanov priestor sa natiahol, Tubular Contortus (*) boli nekrózy a po nich nasledovali zápalové bunky (kruh).

Keď sa indukčné dávky gentamycínu zvyšovali, poškodenie obličiek bolo pozorované ako závažnejšie, ako je znázornené na mikroskopických snímkach potkanov, ktorým bol injekčne podaný gentamycín 50 mg/kg telesnej hmotnosti v skupine III (obrázok 5). Poškodenie sa vyskytlo vo všetkých častiach nefrónu, tj glomerulus, Bowmanovo puzdro, proximálny tubul a distálny tubulus. V glomerulus nekróza v endotelových bunkách spôsobuje väčšiu medzeru v oblasti Bowmanovho priestoru, u Bowmanových kapsúl bola pozorovaná nekróza v štruktúre skvamóznej bunkovej steny simplex, proximálny tubulus a distálne tubuly boli pozorované ako nekróza alebo boli označené akútnou tubulárnou nekrózou (ATN ), simplexná štruktúra skvamóznej bunkovej steny bola nekróza a vo svojej histologickej štruktúre sa javí deskvamovaná. V tubulárnych rezoch bolo vidieť veľa mononukleárnych zápalových buniek v bunkách podliehajúcich nekróze.

Obrázok 5. Histopatológia obličiek v skupine III indukcie gentamicínu s 50 mg/kg telesnej hmotnosti (farbenie hematoxylín-eozín, 100x a 400x zväčšenie). Deskvamácia endotelových buniek Glomerulus (šípka), Bowmanova kapsula (šípka) vykazovala nekrózu a Bowmanove priestory sa stávajú zreteľnými. Nekróza sa vyskytuje na Tubular Contortus (*).

Podávanie vysokých dávok injekcie gentamicínu môže spôsobiť poškodenie štruktúry nefrónu charakterizované nekrózou a deskvamáciou epitelových buniek v glomerulus, Bowmanovej kapsule a tubulárnej časti, čo ovplyvní zhoršenú funkciu obličiek glomerulárnej filtrácie a reabsorpcie a sekrécie v tubulárnej obličke. Hlavným aspektom nefrotoxicity gentamicínu je tubulárna cytotoxicita. Liečba gentamicínom u zvierat môže súvisieť s apoptózou(12), ako aj s nekrózou tubulárnych epitelových buniek(13). Gentamicín spôsobuje cytotoxicitu v bunkách, kde sa môže hromadiť. V obličkách sú to zvyčajne proximálne tubulárne epiteliálne bunky (14), zatiaľ čo distálne tubulárne bunky a zberné kanáliky sú výrazne menej ovplyvnené cytotoxickými účinkami (15). Potom je liek transportovaný do lyzozómu, Goldziho zariadenia a endoplazmatického retikula(16). Gentamicín sa viaže na fosfolipidovú membránu, mení jej funkciu a spôsobuje stav známy ako fosfolipidóza u ľudí(17) a experimentálnych zvierat(18). Lysozomálna fosfolipidóza je spôsobená poruchami fosfatidylinozitolovej signálnej dráhy(19), znížením obratu fosfolipidov a ich akumuláciou v plazmatickej membráne.

Fosfolipidóza priamo súvisí s toxicitou gentamicínu(20). Podobné zmeny sa však zistili aj v iných typoch buniek vystavených gentamycínu, ale bez významného poškodenia a bunkovej smrti. Keď koncentrácie gentamicínu v endozómoch dosiahnu určitú úroveň, membrána sa naruší a jej obsah vrátane gentamicínu sa uvoľní do cytoplazmy(21). V cytoplazme pôsobí gentamicín na mitochondrie priamo aj nepriamo(22) a aktivuje vnútornú apoptotickú dráhu, prerušuje dýchací reťazec, znižuje syntézu ATP a spôsobuje oxidačný stres tvorbou superoxidových aniónov a hydroxylových radikálov(23), čo vedie k bunkovej smrti. Keď je katepsín prítomný vo veľkom množstve, spôsobuje masívnu proteolýzu, ktorá vedie k nekróze, najmä k nedostatku ATP. V endoplazmatickom retikule gentamicín inhibuje syntézu proteínov, čím zasahuje do presnosti translácie a modifikácie posttranslačných proteínov(24). To má za následok stres endoplazmatického retikula a apoptotickú aktiváciu kaspázou 12 a kalpaínom (25).

Výsledky tejto štúdie sú podobné výsledkom výskumu, ktorý uskutočnil Lintong (2012). Podávanie gentamicínu laboratórnym potkanom v dávke 10-20 mg/kg telesnej hmotnosti spôsobilo charakteristické a výrazné zmeny v lyzozómoch proximálnych tubulárnych epitelových buniek(6). Tieto zmeny sú tubulárna dysfunkcia; oddelenie kefového lemu a uvoľnenie lyzozomálnych enzýmov; zníženie reabsorpcie bielkovín, vápnika, horčíka, draslíka a glukózy; fos-folipidúria a vylučovanie odliatku. Podávanie gentamicínu v dávkach nad 40 mg/kg telesnej hmotnosti rýchlo vyvoláva nekrózu v obličkovej kôre sprevádzanú poruchou funkcie obličiek.

3.3. Žiadne významné zmeny BUN a kreatinínu v skupine s gentamicínom

One-way ANOVA results showed no significant difference between treatments (p>0.05). Preto sa v Tukeyho teste nepokračovalo. Priemerné hladiny BUN a kreatinínu v krvnom sére sú uvedené v tabuľke 1.1.

Podľa Johnsona (2014) sa hladiny BUN u potkanov pohybujú od 10-21 mg/dl(26). Zatiaľ čo akútne poškodenie obličiek produkuje hladiny BUN 10-krát vyššie ako normálne hladiny (27). Za normálnych okolností je BUN výsledkom metabolizmu bielkovín, ktorý sa vyskytuje v pečeni. Táto látka bude vedená cez krvné cievy a odvádzaná cez močový systém v obličkách, takže hladiny BUN v cievach sa budú nachádzať v malom množstve. Z priemernej hodnoty každej skupiny, ktorá bola získaná, sa zdá, že neexistuje žiadny významný rozdiel v rámci skupín, ale existuje tendencia zvyšovať sa v súlade so zvyšujúcimi sa dávkami gentamicínu.

One-way ANOVA test results on creatinine samples showed no difference between treatments (p>{{0}}.05). Priemerná hodnota kontrolnej skupiny a liečenej skupiny I bola stále v normálnom rozmedzí hladín kreatinínu u bielych potkanov, čo je 0.2 - 0.8(26). Súčasné štandardné testy na určenie stavu funkcie obličiek boli meraním sérového kreatinínu a tvorby moču. Počiatočné meranie sérového kreatinínu však nemusí odrážať rozsah poranenia, pretože akumulácia kreatinínu vždy zaostáva za udalosťami poranenia (28). Zvýšenie sérového kreatinínu môže naznačovať poškodenie obličiek, ale má obmedzenú schopnosť určiť poškodenie v skorých štádiách (29). Podľa Nguyen & Devarajan (2008) sa hladiny kreatinínu začnú zvyšovať, keď poškodenie obličiek dosiahne 50 percent (30), takže možno konštatovať, že pozorované poškodenie obličiek je stále pod 50 percent.

4. Záver

Na základe výsledkov tejto štúdie možno konštatovať, že renálne histopatologické zmeny v dôsledku injekcie gentamycínu počas 10 dní sa vyskytli vo všetkých gentamycínových skupinách, ale táto abnormalita sa neobjavila v sére BUN a kreatinínu. Kvôli oneskorenému biomarkeru v tejto štúdii sme navrhli pridať ďalšiu premennú na pozorovanie akútneho poškodenia obličiek.

5. Uznanie

Vďačné uznanie patrí ministerstvu výskumu, technológie a vyššieho vzdelávania za podporu financovania prostredníctvom programu PUPT 2017 a za spoluprácu pri realizácii tohto výskumu.

Referencie

1. Alfonso AA, Mongan AE, Memah MF. Gambaran kadar kreatinin sérum pada pasien penyakit ginjal kronik stadium 5 non dialisis. Denník e-Biomedik. 2016;4(1).

2. Chasani S. Antibiotiká Nefrotoksik: Penggunaan pada Gangguan Fungsi Ginjal. J Laporan Penelitian. 2008.

3. K KZ. Chronické ochorenie obličiek. Los Angeles: Zdravotný systém Henryho Forda; 2011.

4. Halim H, Achadiyani A, Tjahjodjati T. Nigella sativa Infusion as an Antioxidačné činidlo proti gentamicínom indukovaným obličkám poškodeným u myší. Althea Medical Journal. 2014; 1(2):90-3.

5. Padmini MP, Kumar JV. Histopatologická štúdia nefrotoxicity vyvolanej gentamicínom u experimentálnych potkanov albínov. IOSR J Dent Med Sci. 2012; 1(1):14-7.

6. Lintong PM, Kairupan CF, Sondakh PL. Gambaran Mikroskopik Ginjal Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Setelah Diinduksi Dengan Gentamisin. Jurnal Biomedik. 2012;4(3).

7. ATAMAN N, Mert H, Yildirim S, Mert NJAÜVFD. Vplyv fukoidánu na zmeny niektorých biochemických parametrov nefrotoxicity vyvolanej gentamicínom u potkanov. 2018;65(1):9-14.

8. Freeman CD, Nicolau D, Belliveau P, Nightingale C. Dávkovanie aminoglykozidov raz denne: prehľad a odporúčania pre klinickú prax. Časopis antimikrobiálnej chemoterapie. 1997; 39(6):677-86.

9. Gentamicín [Internet]. Datasheet Publikácie. 2005.

10. Wulandari S. Ekstraksi Tumor Necrosis Fakcor (TNF-) a Gambaran Histopatologi Ginjal Pada Tikus (Rattus Norvegicus) Renálna fibróza Pasca Induksi Streptokináza. Malang: Univerzita v Brawijaya; 2012.

11. Handani AR, Salim MN, Harris A, Budiman H. PENGARUH PEMBERIAN KACANG PANJANG (Vigna unguiculatTERHADAP STRUKTUR MIKROSKOPIS GINJAL MENCIT (Mus musculus) YANG DIINDUKSI ALOKSAN.11aria.2009 Medika Ve

12. Li J, Li Qx, Xie Xf, Ao Y, Tie Cr, Song Rj. Rozdielne úlohy dihydropyridínového antagonistu vápnika nifedipínu, nitrendipínu a amlodipínu na renálnu tubulárnu toxicitu vyvolanú gentamicínom u potkanov. Európsky žurnál farmakológie. 2009;620(1-3):97-104.

13. Edwards JR, Diamantakos EA, Peuler JD, Lamar PC, Prozialeck WC. Nová metóda hodnotenia proximálnej tubulárnej epiteliálnej bunkovej nekrózy v intaktnej obličke potkana s použitím homodiméru etídia. J BMC fyziológia. 2007;7(1):1.

14. Verpooten GA, Giuliano RA, Verbist L, Eestermans G, De Broe ME. Dávkovanie raz denne znižuje akumuláciu gentamicínu a netilmicínu v obličkách. J Terapeutika klinickej farmakológie. 1989;45(1):22-7.

15. Fujiwara K, Shin M, Matsunaga H, Saita T, Larsson LI. Svetelná mikroskopická imunocytochémia pre gentamicín a jej použitie na štúdium absorpcie liečiva v obličkách. J Antimikrobiálne látky Chemoterapia. 2009;53(8):3302-7.

16. Silverblatt F. Patogenéza nefrotoxicity cefalosporínov a aminoglykozidov: prehľad súčasných konceptov. J Recenzie infekčných chorôb. 1982;4(Dodatok_2):S360-S5.

17. De Broe ME, Paulus GJ, Verpooten GA, Roels F, Buyssens N, Wedeen R a kol. Včasné účinky gentamicínu, tobramycínu a amikacínu na ľudské obličky. J Obličky internacionála. 1984;25(4):643-52.

18. Nonclercq D, Wrona S, Toubeau G, Zanen J, Heuson-Stiennon JA, Schaudies RP, et al. Tubulárne poškodenie a regenerácia v obličkách potkanov po akútnej expozícii gentamicínu: štúdia časového priebehu. J Zlyhanie obličiek. 1992; 14(4):507-21.

19. Ramsammy LS, Josepovitz C, Kaloyanides GJ. Gentamicín inhibuje agonistickú stimuláciu fosfatidylinozitolovej kaskády v primárnych kultúrach králičích proximálnych tubulárnych buniek a v kôre obličiek potkanov. J Journal of Pharmacology Experimental Therapeutics. 1988;247(3):989-96.

20. Kaloyanidy G. Interakcie liečivo-fosfolipid: úloha pri nefrotoxicite aminoglykozidov. J Zlyhanie obličiek. 1992; 14(3):351-7.

21. Regec AL, Trump BF, Trifilis AL. Účinok gentamicínu na lyzozomálny systém kultivovaných ľudských proximálnych tubulárnych buniek: Endocytotická aktivita, lyzozomálne pH a krehkosť membrány. J Biochemická farmakológia. 1989; 38(15):2527-34.

22. Morales AI, Detaille D, Prieto M, Puente A, Briones E, Arévalo M, et al. Metformín zabraňuje experimentálnej nefropatii vyvolanej gentamicínom cestou závislou od mitochondrií. J Obličky internacionála. 2010;77(10):861-9.

23. Cuzzocrea S, Mazzon E, Dugo L, Serraino I, Di Paola R, Britti D a kol. Úloha superoxidu pri nefropatii sprostredkovanej gentamicínom u potkanov. European Journal of Pharmacology. 2002;450(1):67- 76.

24. Horibe T, Matsui H, Tanaka M, Nagai H, Yamaguchi Y, Kato K a kol. Gentamicín sa viaže na lektínové miesto kalretikulínu a inhibuje jeho chaperónovú aktivitu. J Biochemical Biophysical Research Communications. 2004;323(1):281-7.

25. Peyrou M, Hanna PE, Cribb AE. Cisplatina, gentamicín a p-aminofenol indukujú markery stresu endoplazmatického retikula v obličkách potkanov. J Toxikologické vedy. 2007;99(1):346-53.

26. Johnson D. Normal Lab values ​​2014.

27. Fauzi A, Salasia SIO, Titisari N. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) ako potenciálny biomarker na včasnú detekciu akútneho zlyhania obličiek. J Porovnávacia klinická patológia. 2016;25(2):387-92.

28. Lameire N, Hoste EJCoicc. Úvahy o definícii, klasifikácii a diagnostickom hodnotení akútneho zlyhania obličiek. 2004;10(6):468-75.

29. Devarajan P. Vznikajúce biomarkery akútneho poškodenia obličiek. Akútne poškodenie obličiek. 156: Karger Publishers; 2007. s. 203-12.

30. Nguyen MT, Devarajan PJPn. Biomarkery na včasnú detekciu akútneho poškodenia obličiek. 2008;23(12):2151.