Výhody akteozidu - liečte glioblastóm

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG; DONG HUN KIM; DA BI KIM1;TAE WON JANG;GUN‑HWA KIM;MINHO MOON;KYUNG AH YOON;DAE EUN CHO;JAE HO PARK;JWA‑JIN KIM

1. Úvod

Glioblastómje najčastejším typom malígneho primárneho mozgového nádoru a najinvazívnejším a najničivejším primárnym mozgovým nádorom (1,2), s mediánom prežitia ~18 mesiacov pri agresívnej multimodalitnej terapii. Súčasné rozhodnutia o liečbe sú obmedzené a zahŕňajú ožarovanie, chemoterapiu a chirurgický zákrok v kombinácii s alkylačným činidlom temozolomid (TMZ) (3,4). Napriek dostupnosti agresívnych terapií pacienti sglioblastómmajú vo všeobecnosti zlú prognózu (5). TMZ je hlavný chemoterapeutický liek používaný v klinickej liečbe malígnych nádorovglioblastóm(6-8); ako alkylačné činidlo v sérii je schopné preniknúť cez hematoencefalickú bariéru (9‑11). Počas progresie malígneho glioblastómu a rozsiahlej invázie do mozgu neustále rastúca lieková rezistencia na TMZ znižuje jeho terapeutickú účinnosť (12,13). V súlade s tým nové terapeutické lieky protiglioblastómsú naliehavo žiadané.

Predchádzajúce štúdie uviedli, že bunky gliómu podliehajú bunkovej smrti prostredníctvom autofágie alebo programovanej bunkovej smrti typu II v reakcii na TMZ (14, 15). Autofágia môže byť inhibovaná 3-metyladenínom (3-MA) ​​prostredníctvom premeny ľahkého reťazca proteínu 1 asociovaného s mikrotubulami 3 (LC3)-I na LC3-II, čím sa znížiglioblastoma bunková smrť (16,17); úloha autofágie však závisí od bunkového kontextu. S výnimkou cytotoxickej úlohy počas pôsobenia TMZ je indukcia autofágie bunkovým stresom cytoprotektívny proces, ktorý eliminuje stresom indukované cytoplazmatické agregáty, organely a makromolekuly v bunkách cicavcov prostredníctvom lyzozomálneho systému. Na druhej strane bunky zapojené do udržiavania homeostázy dostávajú energiu prostredníctvom týchto katabolických procesov (18, 19). Komplexné úlohy autofágie naznačujú, že aktivátor autofágie môže mať protirakovinové účinky v kombinácii s liečbou TMZ indukciouglioblastómautofágia buniek bez toho, aby mala škodlivé účinky alebo poskytovala výhody normálnym tkanivám. Treba poznamenať, že TMZ vykazoval synergické terapeutické účinky v kombinácii s vitamínom D, vrátane potlačenia životaschopnosti buniek a zvýšenej autofágie vglioblastómbunky. Okrem toho sa ukázalo, že kombinácia TMZ a vitamínu D má protirakovinové účinky in vivo, vrátane zmenšenia veľkosti nádoru a predĺženej miery prežitia. Tieto štúdie naznačujú, že kombinovaná liečba môže mať synergické protirakovinové účinky prostredníctvom autofagických mechanizmov na báze TMZglioblastómterapia (15).

akteozidje fenyletanoidový glykozid, ktorý je široko distribuovaný v niekoľkých tonizačných tradičných čínskych bylinných liekoch (20,21). Množstvo farmakologických účinkov, vrátane antioxidačných, protirakovinových, protizápalových, antinefritických a antimetastatických účinkov, bolo spojených sakteozid(22-24). Predchádzajúce štúdie to dokázaliakteozidmá ochranné účinky proti poškodeniu pečene vyvolanému tetrachlórmetánom a D-galaktozamínom. Mechanizmy, ktoré sú základom ochranných účinkov akteozidu, pravdepodobne súvisia s jeho schopnosťou inhibovať bioaktiváciu sprostredkovanú P450 a účinky zachytávania voľných radikálov vyvolané expozíciou tetrachlórmetánu (25, 26).

Preto dôkazy naznačujú, že obojeakteozida TMZ indukujú protirakovinové účinky prostredníctvom bunkovej smrti. Avšak ich asociácia a protirakovinové účinky v kontexteglioblastómzostáva ešte objasniť. Preto bolo cieľom tejto štúdie overiť synergické protirakovinové účinkyakteozidv kombinácii s TMZ inglioblastómterapiu. Na analýzu protirakovinových účinkov kombinovanej liečby v C6 sa uskutočnil test životaschopnosti buniekglioblastómbunky (potkanglioblastómbunková línia) a výsledky sa porovnali s výsledkami po liečbe samotným TMZ. Ďalej skúmať mechanizmus bunkovej smrti spôsobenej spoločnou liečbou sakteozida TMZ sa skúmali gény súvisiace s apoptózou a autofágiou v bunkách C6.

akteozidové protinádorové látky

2. Materiály a metódy

Bunková kultúra:

Potkan C6glioblastómbunková línia bola zakúpená od American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA). Bunky sa kultivovali za sterilných podmienok pri 37 °C vo vlhkom prostredí s 5 percentami CO2 v Dulbeccovom modifikovanom Eaglovom médiu (DMEM) doplnenom 10 percentami fetálneho bovinného séra (FBS) a 1 percentom antibiotík a antimykotík (všetky Welgene, Daegu , Kórea).

Rastlinný materiál:

Abelophyllum distichum Nakai [poukaz č. Park1001(ANH)] bol zozbieraný v zábavnom parku Misun-hyang, Seongbul-Mountain Recreation Forest, Kórea.

Indukcia kalusu:

Na vyvolanie tvorby kalusu (27) boli z čerstvých rastlín izolované explantáty listov s veľkosťou 1 cm2. Explantát sa kultivoval na médiu Murachige a Skoog (4 percentá sacharóza, 0,9 percentný agar doplnený 1 mg/l kyseliny naftalénoctovej a 1 mg/l kyseliny 2,4-dichlórfenoxyoctovej, pH 5,7) pri 25˚C. Kalus bol vyvolaný o 20 dní neskôr. Dostatočné množstvoakteozidsa získal prostredníctvom subkultúry na oddelenie a čistenieakteozidz kalusu (obr. 1). Rôzne šarže čistenýchakteozidboli použité v každom experimente. Každý experiment sa uskutočnil trikrát s použitím inej šarže.

Izolácia a čistenie:

Etylacetátové frakcie sa zahustili vo vákuu a použili sa ako vzorka na čistenie akteozidu.akteozidbol izolovaný a čistený systémom Accelerated Chromatographic Isolation system (Isolera™ Spektra, Biotage, Uppsala, Švédsko) s použitím kaziet SNAP KPHOSPHO-SIL a SNAP Ultra (Biotage). Theakteozidpurifikovaný z kalusu sa kvantitatívne analyzoval s použitím štandardného akteozidu analýzou HPLC-PDA. Nakoniec sa z kalusu získal akteozid s čistotou vyššou alebo rovnou 95 percent a použil sa ako vzorka na chemoterapiu na báze temozolomiduglioblastóm.

Stanovenie 3-(4,5-dimetyltiazol-2-l)-,5-difenyltetrazóliumbromidu (MTT):

Na identifikáciu polovice maximálnej inhibičnej koncentrácie TMZ (hodnota IC50) proti bunkám C6 sa 1 x 104 buniek v jednobunkových suspenziách naočkovalo do jednotlivých jamiek 96-jamkových doštičiek a inkubovalo sa 24 hodín pri 37 °C pred ošetrením TMZ pri uvedených koncentrácie (1, 5, 10 a 20 mM) pri 37 °C počas 24 hodín. Po určení hodnoty TMZ IC50 ako 5 mm sa bunky ošetrili 24 hodín s 5 mM TMZ, 50 uMakteozidalebo kombinácia oboch (5 mM TMZ a 50 uMakteozid). Roztok MTT (5 mg/ml) bol pridaný do každej jamky (10 ul) a kultivovaný pri 37 °C počas 2 hodín. Následne sa médium odstránilo a pridal sa DMSO v objeme 200 ul každý a nechalo sa reagovať pri teplote miestnosti 30 minút. Na stanovenie životaschopnosti buniek sa merala absorbancia pri 595 nm.

Test hojenia rán:

Suspenzia buniek C6 v 1 ml sa kultivovala na 12-jamkovej platni a pestovala sa do konfluencie. Bunky boli ošetrené TMZ,akteozidalebo TMZ plusakteozida potom poškrabte sterilnou 10-µl špičkou pipety, aby ste vytvorili umelú ranu. Po 0 a 24 hodinách po poranení sa pomocou inverzného mikroskopu zachytili digitálne snímky procesu hojenia rán. Migrácia buniek bola kvantifikovaná meraním veľkosti jazvy po 0 a 24 hodinách pomocou softvéru na analýzu obrazu, ImageJ 1.43u/Java1.6.0_22 (NIH, Bethesda, Maryland, USA). Každý experiment sa uskutočnil trikrát a merania sa uskutočňovali trojmo.

Imunoblotting:

Bunky C6 boli ošetrené TMZ,akteozidalebo TMZ plusakteozidpočas 24 hodín. Bunky sa lyžovali na ľade pomocou lyzačného pufra RIPA (25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 % Nonidet P-40, 1 % deoxycholátu sodného, ​​0,1 % SDS) doplnený kokteilom inhibítorov proteázy a fosfatázy (Roche, Basel, Švajčiarsko) počas 30 min. Po centrifugácii pri 18 341 xg počas 15 minút pri 4 °C sa získal supernatant. Koncentrácia proteínu bola stanovená pomocou Bradford Protein Assays (Bio-rad, Hercules, CA, USA). Rovnaké množstvá celkových proteínov (30 ug) boli naplnené do jednotlivých jamiek a frakcionované elektroforézou cez 10-15 percent SDS-PAGE. Proteíny sa elektrotransferovali na polyvinylidéndifluoridové membrány (EMD Millipore, Bedford, MA, USA). Po inkubácii v blokovacom roztoku obsahujúcom 5 percent odtučneného mlieka vo fyziologickom roztoku Tween/Tris počas 30 minút pri izbovej teplote. Bloty boli sondované s 1:1,000-riedenými primárnymi protilátkami (kat. č. 9662, kaspáza 3; Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA), B0-bunkový lymfóm 2 (sc‑ 7382, Bcl‑2), Bcl‑2‑asociovaný X proteín (kat. č. 2772, Bax), fosforylovaný (p‑)p53 (sc‑101762), celkový‑p53 (sc‑6243), ‑aktín (kat. č. 4970; všetky; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA), LC‑3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, Nemecko), Rab7 (kat. č. 9367, Cell Signaling Technology, Inc. ), p62 (kat. č. 114), p-p38 (kat. č. 9211), total-p38 (kat. č. 9212), p-c-Jun N-terminálna kináza (kat. č. 9251, p ‑JNK), total‑JNK (kat. č. 9252), p‑extracelulárnym signálom regulovaná kináza (kat. č. 9101, p‑ERK), total‑ERK (kat. č. 9102; všetky Cell Signaling Technology, Inc .) cez noc pri 4 °C. Nasledovala inkubácia so sekundárnymi protilátkami konjugovanými s chrenovou peroxidázou (1:2,000; LF‑SA8001A, kozí anti‑myš IgG‑HRP) alebo LF‑SA8002A (kozí anti‑králičí IgG‑HRP), AB Frontier, Soul, Kórea.) počas 2 hodín pri izbovej teplote. Proteíny sa potom vizualizovali expozíciou Chemi-Doc (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA).

Imunofluorescenčné farbenie:

Lysozomálny membránový proteín 1 (LAMP1) a LC3 sú markery pre lyzozomálnu a autofágiu. Bunky (1 x 105 buniek/jamka) sa pripravili na sterilizované sklenené krycie sklíčka (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) v troch vyhotoveniach. Po liečbe TMZ,akteozidalebo TMZ plusakteozidpočas 24 hodín boli bunky fixované v 4% paraformaldehyde počas 30 min, blokované 5% normálnym kuracím sérom (S-3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA), 0,1% Triton X -100 a potom inkubované 1 hodinu na permeabilizáciu a blokovanie nešpecifických interakcií proteín-proteín. Bunky sa potom inkubovali s anti-LAMP1 (1:200; sc-19992, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) a anti-LC3 (1:400; PM036, MBL International, Woburn, MA, USA) cez noc pri 4 ° C. Bunky sa potom dvakrát premyli PBS a inkubovali sa ďalšie 2 hodiny v tme so zmesou sekundárnych protilátok Alexa Fluor 488 a 594 (1:200; Alexa Fluor 488 (A-11008) a 594 (A-11007), Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) a znovu premyté PBS. Jadrá sa zafarbili pomocou 4,6-diamidino-2-fenylindolu (Sigma; Merck KGaA) a potom sa dvakrát premyli PBS. Sklíčka boli potom pripevnené a snímky boli zachytené pod laserovým konfokálnym mikroskopom LSM-700.

Obrázok 1. Chemická štruktúra akteozidu.

Prietoková cytometria.

Bunky sa analyzovali na Mitotracker Green a MitoSOX prietokovou cytometriou s použitím prietokového cytometra FACSCanto II, ako uvádza výrobca (BD Biosciences). Po dvoch premytiach PBS boli bunky fixované v 4 percentnom paraformaldehyde počas 3 0 minút pri teplote miestnosti a permeabilizované s 0,25 percentami Triton X-100 v PBS počas 20 minút. Bunky boli zafarbené primárnymi protilátkami cez noc pri 4 °C (1:200) a potom sekundárnymi protilátkami počas 1 hodiny na ľade. Po dvoch premytiach PBS boli bunky fixované v 4% paraformaldehyde a okamžite testované. Údaje z prietokovej cytometrie sa zhromaždili s použitím 10000 buniek a analyzovali sa pomocou softvéru FlowJo 7.6.1 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, USA).

Štatistická analýza:

Všetky údaje boli analyzované pomocou GraphPad Prism 5.0 a sú prezentované ako priemer ± štandardná chyba priemeru. Údaje sa analyzovali jednosmernou analýzou rozptylu s Tukeyho post hoc testom viacnásobného porovnania na porovnanie priemerných hodnôt medzi viacerými skupinami. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Cistanche Echinacoside: Anti-apoptóza

3. Výsledky

3.1 Súčasná liečba TMZ a akteozidom potláčaglioblastómbunkovej proliferácie a migrácie.

Kombinovaná liečba s TMZ aakteozidinhiboval životaschopnosť buniek C6. TMZ znížil životaschopnosť buniek v závislosti od dávky (obr. 2A), zatiaľ čo samotný akteozid nemal žiadny významný účinok na žiadnej úrovni liečby (obr. 2B). Po inkubácii v kultivačnom médiu obsahujúcom TMZ s akteozidom alebo bez neho počas 24 hodín sa uskutočnil MTT test na porovnanie cytotoxicity rôznych úrovní liečby. TMZ významne potlačil životaschopnosť buniek, zatiaľ čo akteozid významne nepotlačil rast buniek. Kombinovaná liečba TMZ a akteozidom výrazne znížila životaschopnosť buniek (obr. 2C). Liečba samotným TMZ alebo akteozidom znížila schopnosť hojenia rán (obr. 3A). Vzdialenosť rany (v percentách) sa merala pomocou výsledkov znázornených na obr. 3A so softvérom ImageJ. Vzdialenosť od rany sa výrazne zvýšila po kombinovanej liečbe (obr. 3B) v porovnaní s každou jednotlivou liečbou. Tieto výsledky naznačujú, že spoločná liečba TMZ a akteozidom bola účinným inhibítoromglioblastómbunkovej proliferácie a migrácie.

3.2 Akteozid a TMZ ovplyvňujú apoptózu synergicky v C6 bunkách.

Výsledky analýzy western blot odhalili, že hladiny štiepenej kaspázy-3, Bax a fosforylovaného p53 boli vyššie a hladiny Bcl-2 nižšie po kombinovanej liečbe s TMZ aakteozidnež po liečbe samotným TMZ (obr. 4A).akteozidV bunkách C6 ošetrených TMZ sa potom pozorovala mitochondriálna funkcia sprostredkovaná a tvorba reaktívnych foriem kyslíka (ROS), ktoré sú kľúčovými mediátormi apoptickej signalizácie. Na overenie mitochondriálnej hmoty sa uskutočnila fluorescenčne aktivovaná analýza triedenia buniek pomocou MitoTracker Green. Súbežná liečba TMZ aakteozidviedlo k vyššej mitochondriálnej hmote ako pri liečbe samotným TMZ (obr. 4B). Generovanie ROS bolo významne vyššie po spoločnej liečbe TMZ a akteozidom ako pri liečbe samotným TMZ (obr. 4C). Tieto výsledky naznačujú, že tvorba ROS a mitochondriálna funkcia sú dôležité pri apoptóze indukovanej liečbou TMZ plus akteozid. Súbežná liečba TMZ a akteozidom indukuje autofágiu v C6 bunkách. Uvádza sa, že TMZ indukuje autofágiu (28,29); preto táto štúdia skúmala rozsah, v akom bola autofágia indukovaná liečbou TMZ plus akteozidmi. Bunky C6 boli ošetrené TMZ s alebo bez akteozidu; po 24 hodinách a bunky sa zafarbili na imunofluorescenciu na detekciu LAMP1 a LC3 ako markerov autofágie. Po kombinovanej liečbe boli pozorované vyššie hladiny expresie LAMP1 a LC3 (obr. 5A). Skúmala sa aj expresia proteínov súvisiaca s autofágiou a zistilo sa, že TMZ indukoval konverziu LC3-I na LC3-II, čo je znakom tvorby autofagozómov. Po súbežnej liečbe TMZ a akteozidom sa pozorovala vyššia miera konverzie LC3‑I na LC3‑II ako pri liečbe samotným TMZ. Hladiny expresie Rab7 a p62 indikovali indukciu autofágie v bunkách ošetrených TMZ (obr. 5B). Tieto zistenia naznačujú, že spoločná liečba TMZ a akteozidom posilnila autofagický proces vglioblastómbunky.

3.3 Akteozid indukuje expresiu génu dráhy MAPK pri liečbe založenej na TMZ.

Predchádzajúce štúdie ukázali, že TMZ reguluje dráhu MAPK, vrátane p38, JNK a ERK (30). Preto táto štúdia skúmala, čiakteozidovplyvňuje expresiu génu MAPK súvisiaceho s TMZ. Bunky C6 boli ošetrené TMZ s alebo bezakteozid. Po 24 hodinách liečba TMZ viedla k vyšším hladinám expresie p-p38, p-JNK a p-ERK. Expresia TMZ-regulovaných génov bola signifikantne vyššia po liečbe TMZ plus akteozidmi ako pri liečbe samotným TMZ (obr. 6). Tieto pozorovania tomu nasvedčujúakteozidovplyvňuje terapeutické mechanizmy založené na TMZ prostredníctvom dráhy MAPK.

Akteozid protiglioblastóm

Diskusia

Výsledky tejto štúdie ukazujú, že kombinovaná liečba s TMZ sakteozidponúka terapeutický potenciál preglioblastómliečbe a poskytnúť dôkaz, že chemosenzibilizácia na kombináciu TMZ aakteozidmôže nastať prostredníctvom zvýšenia autofágie. Ako mutáciaglioblastómbunky môžu viesť k inaktivácii apoptotickej dráhy, indukcii autofágie pomocou TMZ plusakteozidspoločná liečba môže predstavovať alternatívnu metódu preglioblastómterapiu. Či je však autofágia jediným mechanizmom preglioblastómterapia TMZ plusakteozidspoločná liečba sa ešte musí objasniť.

Autofágia je základným bunkovým mechanizmom degradácie proteínov a cytoplazmatických organel. Katabolická výhoda indukovanej autofágie môže byť dôležitá v stresových podmienkach; preto môže byť indukcia autofágie adaptívnym mechanizmom na prevenciu bunkovej smrti (31-33). Predchádzajúce štúdie uviedli, že znížená autofágia koreluje s rakovinou (34-36). Okrem toho je počas malígnej transformácie deregulovaných niekoľko proteínov a signálnych dráh spojených s autofágiou, čo vedie k zníženiu autofagickej aktivity. Vysoké hladiny expresie LC3 boli tiež spojené so zvýšenou mierou prežitia u pacientov sglioblastómso slabým skóre výkonnosti (37,38). Podobne výsledky tejto štúdie naznačujú, že obnovenie normálnej autofágie môže byť latentnou stratégiouglioblastóma môže slúžiť ako mechanizmus na obmedzenie abnormálneho rastu nádorových buniek.

Pri normálnej autofágii sú konkrétne cytoplazmatické zložky izolované v autofagozómoch, ktoré sa potom spájajú s lyzozómom, ktorý sa má degradovať a recyklovať (39, 40). Keď je autofágia upregulovaná, rýchlosť tvorby autofagozómov prevyšuje rýchlosť lyzozomálnej degradácie; tento stav sa nazýva autofagický stres. Ak stres alebo abnormálna autofágia pokračuje, bunková smrť môže nastať prostredníctvom vyčerpania energie alebo zmien v rovnováhe beclin-1/Bcl-2. Apoptózu môže spustiť aj autofagozómová hyperaktivita, ktorá pohltí cytoplazmatické organely vrátane mitochondrií alebo endoplazmatického retikula (41). Bolo navrhnuté, že všeobecná autofágia môže indukovať bunkovú smrť počas normálneho obratu cytoplazmy a organel v zdravých bunkách. V tomto procese sa bunka „kanibalizuje“ zvnútra, čo je kľúčová charakteristika programovanej bunkovej smrti typu II. Hoci mechanizmy, ktorýmiakteozidzvyšuje terapeutický účinok na báze TMZglioblastómterapia ešte nie je úplne objasnená, protirakovinové účinky vykazované kombinovanou liečbou skúmanou v tejto štúdii môžu byť spojené s týmito autofagickými mechanizmami.

akteozidje fenyletanoidný glykozid získaný z rastlín (22,26). Predchádzajúce štúdie informovali o rôznych biologických aktivitách akteozidu. Zmeny v hladinách expresie štiepenej kaspázy-3 a LC3 v tejto štúdii ukazujú, že liečba kombináciou TMZ aakteozidindukovali apoptózu a autofágiu v C6 bunkách (obr. 4 a 5). Ukázalo sa, že kombinovaná liečba má synergický účinok naglioblastómbunky. Aj keď je potrebné objasniť ďalšie možné mechanizmy týchto synergických účinkov, táto štúdia identifikovala indukciu autofágie ako rozhodujúci tumoricídny mechanizmusakteozidchemosenzibilizácia počas na báze TMZglioblastómterapiu.

Akteozid lieči glioblastóm

Referencie

1. Friedman HS, Kerby T a Calvert H: Temozolomid a liečba malígneho gliómu. Clin Cancer Res 6: 2585-2597, 2000.

2. Mrugala MM a Chamberlain MC: Mechanizmy ochorenia: Temozolomid aglioblastóm- pozerať sa do budúcnosti. Nat Clin Pract Oncol 5: 476-486, 2008.

3. Agarwala SS a Kirkwood JM: Temozolomid, nové alkylačné činidlo s aktivitou v centrálnom nervovom systéme, môže zlepšiť liečbu pokročilého metastatického melanómu. Onkológ 5: 144-151, 2000.

4. Stevens MF, Hickman JA, Stone R, Gibson NW, Baig GU, Lunt E a Newton cG: Protinádorové imidazotetrazíny. 1. Syntéza a chémia 8-karbamoyl-3-(2-chlóretyl)imidazo[5,1-d]-1,2,3, 5-tetrazín-4(3H)-ónu, nového širokospektrálneho protinádorového agent. J Med Chem 27: 196-201, 1984.

5. Fulda S: Liečba založená na bunkovej smrtiglioblastóm. Cell Death z 9: 121, 2018.

6. Chen PH, Shen WL, Shih CM, Ho KH, Cheng CH, Lin CW, Lee CC, Liu AJ a Chen KC: Cesta Notch3 inhibovaná CHAC1 sa podieľa na cytotoxicite gliómu indukovanej temozolomidom. Neuropharmacology 116: 300-314, 2017.

7. Oshiro S, Tsugu H, Komatsu F, Ohmura T, Ohta M, Sakamoto S, Fukushima T a Inoue T: Účinnosť liečby temozolomidom u pacientov s gliómom vysokého stupňa. Anticancer Res 29: 911-917, 2009.

8. Van den Bent MJ: Adjuvantná liečba gliómov vysokého stupňa. Ann Oncol 17 (Suppl 10): x186‑x190, 2006.

9. Shen W, Hu JA a Zheng JS: Mechanizmus protinádorových účinkov vyvolaných temozolomidom na bunky gliómu. J Int Med Res 42: 164-172, 2014.

10. Barciszewska AM, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S a Naskręt-Barciszewska MZ: Nový epigenetický mechanizmus účinku temozolomidu v gliómových bunkách. PLoS One 10: e0136669, 2015.