Štúdia o neuroprotektívnom mechanizme Cistanche a Fomitopsis Pinicola na mezencefalových dopaminergných neurónoch indukovaných MPP plus

Štúdia o neuroprotektívnom mechanizme Cistanche a Fomitopsis Pinicola na dopaminergných neurónoch mezencephala indukovaných MPP plus

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Zvýraznenie

Fomitopsis Pinicola sa vyznačuje antioxidačnými, protizápalovými a imunostimulačnými vlastnosťami. V tejto štúdii sa na stanovenieneuroprotektívneúčinky a potenciálne mechanizmy vodného extraktu Fomitopsis Pinicola na degeneráciu dopaminergných neurónov indukovanú MPP plus. Výsledky ukázali, že vodný extrakt z Fomitopsis Pinicola chránil dopamínové neuróny proti MPP plus. Vodný extrakt z Fomitopsis Pinicola vykazoval antioxidačné a protizápalové účinky. Mechanizmusneuroprotektívneúčinok vodného extraktu z Fomitopsis Pinicola môže súvisieť s inhibíciou mitochondriálneho oxidačného stresu. Nedávne štúdie ukázali, ženeuroprotektívneúčinokCistancherobí z neho „ideálneho kandidáta“ na zlepšenie neurologických ochorení.Cistancheje bohatý na echinakozidy. Výťažok zcistancheUkázalo sa, že indukuje syntézu nervových rastových faktorov in vivo a in vitro experimenty, podporuje sekréciu príbuzných faktorov v mozgu a zlepšuje sériu mozgových funkcií súvisiacich s pamäťou.

Cistanchemáneuroprotektívneúčinky

Abstraktné

Cieľ: Pozorovaťneuroprotektívnemechanizmus vodného extraktu Fomitopsis Pinicola na MPP'indukovanú apoptózu mezencefalických dopamínergných buniek in vitro.Metódy: Antioxidačná aktivita húb bola stanovená metódou FRAP. Protizápalová aktivita húb bola detegovaná metódou uvoľňovania NO indukovaného LPS. Mesencefalické dopaminergnéneurónyboli označené TH farbením, aby sa pozorovalo prežitie THirneurónyVýsledky: V teste antioxidačnej aktivity bola stanovená ekvivalentná antioxidačná kapacita Trolox (TEAC) vodného extraktu Fomitonsis Pinicola (165,80±7,13) umol Trolox/g extraktu Vodné extrakty ošetrenia Fomitopsis Pimicola (100,50,25 12,5 ug/ml) významne znížili tvorbu NO. MPP* indukoval významnú kondenzáciu chromatínu v jadrách mezencefalických dopaminergnýchneurónys jadrovou lýzou sa potenciál mitochondriálnej membrány výrazne znížil a produkcia ROS sa výrazne zvýšila. V porovnaní s kontrolnou skupinou MPPt boli morfologické zmeny bunkových jadier po apoptóze zvrátené vodným extraktom Fomtitonsis Pinicola. Vodný extrakt z liečby Fomitopsis Pinicola (50, 25, 12,5 ug/ml) dramaticky zvýšil relatívny potenciál mitochondriálnej membrány v porovnaní s MPP' kontrolou. V porovnaní s kontrolou MPPt, vodný extrakt z liečby Fomitonsis Pimicola （50, 25 ug/ml） významne znížil relatívnu tvorbu ROS, Závery∶Vodný extrakt z Fomitopsis Pinicola vykazoval významnúneuroprotektívneúčinok na mezencefalické dopaminergné bunky indukované MPpt, Vodný extrakt z Fomitopsis Pinicola vykazoval antioxidačné a protizápalové aktivity. Mechanizmusneuroprotektívneúčinok vodného extraktu z Fomitopsis Pimicola môže súvisieť s inhibíciou mitochondriálneho oxidačného stresu.Cistancheglykozidy môžu zlepšiť úroveň učenia a pamäte pacientov s Alzheimerovou chorobou, znížiť obsah malondialdehydu (MDA) v mozgovom tkanive a zvýšiť glutatión peroxidázu (GSH). -Px), aktivitu superoxiddismutázy (superoxiddismutázy, SOD), zníženie aktivity acetylcholínesterázy (acetylcholínesterázy, TChE), rýchlosť apoptózy mozgových buniek a zníženie akumulácie vápnika v mozgovom tkanive.

Kľúčové slová: Fomitopsis Pimicola, dopaminergnýneurónyapoptóza, antioxidant, mitochondriálny membránový potenciál, tvorba ROS,Cistanche, Neuroprotektívne

Pozadie

Parkinsonova chorobaje neurodegeneratívne ochorenie u ľudí, ktoré vážne ovplyvňuje zdravie viac ako 6,5 milióna ľudí na celom svete. Prevalencia u starších ľudí nad 65 rokov je asi 1 2 percent [1, 2]. Hoci presná etiológia a patogenézaParkinsonova chorobazostáva nejasné, ukázalo sa, že oxidačný stres je kľúčovým faktorom pri selektívnej degenerácii dopaminergných látokneurónyv nigrostriatálnom striate [3, 4]. Štúdie ukázali, že nadmerná produkcia reaktívnych druhov kyslíka (ROS) indukuje mitochondriálnu dysfunkciu, vrátane zníženého potenciálu mitochondriálnej membrány (△Ψm) a aktivity enzýmov komplexu dýchacieho reťazca Ⅰ, ako aj abnormálnej mitochondriálnej DNA [5, 6]. Okrem toho, citlivosť a selektivita nigrostriatálnej dráhy na oxidačný stres môže tiež viesť k poškodeniu DNA dopamínergickýchneurónyu pacientov sParkinsonova choroba [7].

Fenyletanoidový glykozidový extrakt vCistanchedeserticola môže výrazne zlepšiť zloženie 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridínu, MPTP)-indukovaného modelu PD C57 myší behaviorálne charakteristiky, zvýšiť obsah nigra tyrozínhydroxyláza (tyrozínhydroxyláza, TH) až do obsahu DA v striate u pacientov sParkinsonova choroba.Okrem toho,cistanchefenyletanolglykozidový extrakt má dobrý inhibičný účinok na pokles životaschopnosti cerebelárnych granulových buniek u pacientov sParkinsonova chorobaa zabraňuje MPP plus indukovanej bunkovej apoptóze cerebelárnych granúlneurónyinhibíciou aktivácie kaspázy-3 a kaspázy-8. Smrť, prejav svoj antiapoptotický účinok.

Fomitopsis Pinicola je liečivá huba, ktorá patrí medzi Polyporaceae a Pseudomonas. Má plochú, mierne horkú chuť a má farmakologické účinky, ako je antioxidačné, antibakteriálne, protinádorové a posilnenie imunity [8, 9]. Naše predchádzajúce štúdie potvrdili, že vodné extrakty z Fomitopsis Pinicola majú ochranný účinok na apoptózu fetálnych dopaminergných buniek stredného mozgu indukovanú MPP plus, čo môže významne zvýšiť počet dopaminergných buniek.neurónya dĺžky axónov a Zvýšiť aktivitu enzýmu komplexu mitochondriálneho dýchacieho reťazca I[10].

V tejto štúdii použijeme metódu Ferricovej redukujúcej antioxidačnej sily (FRAP) na pozorovanie antioxidačnej kapacity vodných extraktov Fomitopsis Pinicola a na pozorovanie protizápalového účinku uvoľňovania NO indukovaného lipopolysacharidom (LPS) v mikrogliách BV2. Účinky kultivovaného dopaminergného stredného mozguneurónyna jadrovú morfológiu, mitochondriálny membránový potenciál a produkcia ROS boli pozorované in vitro, aby sa odhalil ochranný mechanizmus endomycét na dopaminergnéneuróny.

Materiál

Zviera

14-deň gravidné myši, OF1/SPF, z Rakúskeho inštitútu pre laboratórne zvieratá a veterinárnu genetiku, experimentovali s experimentálnymi zvieratami v súlade so smernicou Európskej komisie 86/609/EU.

Testovacia vzorka

Fomitopsis Pinicola bol vyrobený v Rakúsku a profesor Wolf-Dieter Rausch ho identifikoval ako Footmitopsis Pinicola. Po pulverizácii Fomitopsis Pinicola sa vodný extrakt získal extrakciou horúcou vodou a obsah surového polysacharidu bol 8,95 %.

bunkovej línie

Myšia mikrogliómová bunková línia BV2, z Katedry biochémie, Viedenská veterinárna univerzita, v médiu DMEM (Sigma) obsahujúcom 10 percent fetálneho hovädzieho séra, 2 percentá B27 (Gibco), 2 percentá glutamínu, 37 stupňovú 5 percentnú CO2 kultúru.

kultivačné médium pre bunky

Médium BM (základné médium), do ktorého bolo médium DMEM doplnené 10 percentom fetálneho bovinného séra, 30 mM glukózy, 2 mM glutamínu, 1 percenta streptomycínu a 0,5 percenta amfotericínu.

hlavné činidlá a nástroje

MPP plus je sigma produkt, čistota väčšia alebo rovná 98 percent; Primárne a sekundárne protilátky proti tyrozínhydroxyláze (TH) sú všetky produkty American Vectastain.TPTZ(2.4.6-terpyridín triazín), FeCl3·6H2O, FeSO4·7H2O sú produkty amerického sušiaceho roztoku sigma-Aldrich.DAPI. Farbiaci roztok JC-1 a farbiaci roztok C-DCDHF-DA sú všetky produkty spoločnosti Invitrogen Molecular Probes. Pôvodná koncentrácia roztoku bola 1 mg/ml, 1 mg/ml a 1 M. Fluorescenčný mikroskop vyrobený spoločnosťou Nikon v Japonsku, model TS-100-F. Spektrofotometer pre Nemecko Pharmacia Biotech produkty, modely pre Novaspec ⅡI.

Cistanchemôže zabrániťParkinsonova choroba

metóda

Stanovenie antioxidačnej kapacity extraktov metódou FRAP

Po príprave 30 ml pracovnej tekutiny FRAP (300 mmol/L acetátového tlmivého roztoku, 10 mmol/L roztoku TPTZ, 20 mmol/L roztokov FeCly rovnomerne zmiešaných v objemovom pomere 10:1:1), 450 μl FRAP pracovného pridala sa kvapalina s rôznymi koncentráciami 60 ul vodných extraktov Fomitopsis Pinicola a 45 ul vody s dvojitým odparovaním. Miešanie pri 37 °C zabráni svetelnej reakcii po 30 minútach, potom sa stanovia jeho hodnoty absorbancie pri 593 nm. Celková antioxidačná kapacita každého extraktu bola kvantifikovaná použitím Troloxu ako štandardu. Pre každú vzorku sa uskutočnili tri paralelné testy. Výsledky boli vyjadrené ako ekvivalent Troloxu (TEAC) (mol TEAC/g) na gram extraktu.

Na detekciu protizápalového účinku extraktu sa použil test uvoľňovania NO

Bunky BV2 z logaritmickej fázy sa naočkovali do 48-jamkových doštičiek v koncentrácii 1 x 10 stupeň buniek/ml. Po inkubácii pri 37 stupňoch a 5 percentách CO2 sa na stimuláciu pridal lipopolysacharid (LPS), konečná koncentrácia bola 1 ug/ml. Potom sa pridali rôzne koncentrácie extraktu a bunky sa kultivovali pri 37 stupňoch pod 5 percentami CO počas 48 hodín, potom sa merala koncentrácia NO. Pred súdnym pojednávaním. Griessove činidlá A a B sa vybrali z chladničky pri 4 °C a nechali sa 30 minút ekvilibrovať izbovú teplotu. Dusitanové štandardy sa sériovo riedili (20, 10, 5, 2,1 a 0,5 uM), aby sa vytvorili štandardné krivky. Pridajte 50 μl zriedeného štandardu a supernatant testovanej vzorky (4 replikáty pre každú koncentráciu), pridajte do 96-jamkovej platne a potom pridajte 50

ul roztoku A, inkubujte pri teplote miestnosti 10 minút v tme a pridajte 50 ul roztoku B. Po inkubácii počas 10 minút pri teplote miestnosti v tme sa merala absorbancia pri 550 nm pomocou čítačky mikrodoštičiek v priebehu 30 minút a uvoľňovanie NO v supernatante sa vypočítalo podľa štandardnej krivky [11]. Súčasne sa do každej jamky doštičky s bunkami pridalo 10 ul MTT (5 mg/ml v roztoku PBS) a kultivovalo sa pri 37 stupňoch pri 5 percentách CO počas 4 hodín. Po odstránení supernatantu sa do každej jamky pridalo 100 ul DMSO a po úplnom rozpustení sa merala absorbancia pri 570 nm, aby sa pozorovala miera prežitia buniek.

Kultivácia a identifikácia primárnych dopaminergných buniek stredného mozgu a liečba liekmi

Gravidné myši boli usmrtené a prenesené do Petriho misky obsahujúcej DPBS pufor, myšie embryá boli vypreparované, stredný mozog bol izolovaný, narezaný na malé kúsky a zozbieraný do DPBS pufra obsahujúceho 2 ml 0 1 percent trypsínu a 2 ml {{ 3}}.02 percentá DNázy L Inkubujte 7 minút vo vodnom kúpeli s teplotou 37 stupňov a potom pridajte 2 ml inhibítora trypsínu s koncentráciou 0,125 mg/ml odstredením tkaniva pri 10}0 xg počas 4 minút a supernatant sa zlikviduje. Potom sa pridalo médium DMEM obsahujúce 0,02 percenta DNázy I a oddelené bunky sa resuspendovali v kultivačnom médiu buniek BM, naočkovali sa na bunkové platne ošetrené polylyzínom a kultivovali sa pri 37 stupňoch 5 percent CO. 10. deň kultivácie, 10. μM MPP* sa pridal do kultivovaných primárnych neurónových buniek na ošetrenie a potom sa pridalo 50,25,12,5 ug/ml vodného extraktu Fomitopsis Pinicola na ošetrenie pri 37 stupňoch, 5 percent CO sa kultivovalo 48 hodín. Na 12. deň kultivácie sa niektoré bunky použili na identifikáciu dopaminergných neurónov a bunky sa fixovali 4 percentami paraformaldehydu pri 4 stupňoch počas 30 minút a potom boli permeabilné počas 30 minút pri teplote miestnosti s 0,4 percentami Triton X{{ 33}}. Po trojnásobnom premytí pufrom PBS sa blokoval blokovacím roztokom konského séra na 90 minút, potom sa cez noc pridala primárna protilátka anti-TH, potom sa pridala biotinylovaná sekundárna protilátka pri teplote miestnosti na 90 minút a nakoniec 3,3 Bol vyvinutý '-diaminobenzidín (DAB, 5 mg/ml). Bunky pozitívne na TH farbu boli pozorované pod mikroskopom ako dopaminergné neuróny.

Pozorovanie jadrovej morfológie

Bunky MPP plus a bunky ošetrené liekom sa fixovali 4 percentami paraformaldehydu počas 30 minút, potom sa roztrhli s 0,4 percentami Triton X-100 počas 30 minút a potom sa pridal farbiaci roztok DAPI v konečnej koncentrácii 1 ug/ml počas 5 minút pri teplote miestnosti. Morfológia jadra bola pozorovaná pod fluorescenčným mikroskopom. Excitačná vlnová dĺžka bola 340 nm a pre každú jamku boli náhodne vybrané 4 polia.

Detekcia mitochondriálneho membránového potenciálu

MPP plus a bunky ošetrené liečivom sa pridali k JC-1 dve v konečnej koncentrácii 10 ug/ml a inkubovali sa pri 37 stupňoch počas 15 minút. Zmeny intenzity fluorescencie sa pozorovali fluorescenčnou mikroskopiou pri 488 nm a 568 nm excitačnom svetle. Zmena potenciálu mitochondriálnej membrány bola meraná pomerom intenzity fluorescencie pri 568 nm k intenzite fluorescencie pri 488 nm.

Test výroby ROS

MPP plus a bunky ošetrené liečivom sa pridali do C-DCDHF-DA dve v konečnej koncentrácii 10 mM a po inkubácii pri 37 stupňoch počas 30 minút sa kultivačný roztok zlikvidoval a bunky sa dvakrát premyli bezfarebným médiom DMEM. . Na pozorovanie zmeny intenzity fluorescencie sa použila fluorescenčná mikroskopia. Excitačná vlnová dĺžka bola 488 nm a pre každú jamku boli náhodne vybrané 4 zorné polia. Čas vystavenia buniek excitačnému svetlu nebol dlhší ako 5 s.

Výsledky

Antioxidačná schopnosť Fomitopsis Pinicola

Fomitopsis Pinicola má zjavný antioxidačný účinok a jej vodný extrakt má antioxidačnú kapacitu （165,80±7,13）μmol extraktu TEACh.

Protizápalový účinok Fomitopsis Pinicola

Po LPS indukovaných BV2 bunkách sa uvoľňovanie NO významne zvýšilo, čo bolo významne odlišné od uvoľňovania v normálnej kontrolnej skupine. Po vodnom extrakte z Fomitopsis Pinicola sa uvoľňovanie NO významne znížilo, medzi 100, 50, 25, bol významný rozdiel medzi skupinou s dávkou 12,5 ug/ml a skupinou s LPS (obr. 1). Po LPS indukovaných BV2 bunkách bola miera prežitia buniek významne nižšia ako u normálnej kontrolnej skupiny. Po pôsobení vodného extraktu Fomitopsis Pimicola mala skupina s dávkou 100 ug/ml významné zníženie životaschopnosti buniek a bol tu významný rozdiel v porovnaní so skupinou s LPS. Skupina s dávkou 50, 25, 12,5 ug/ml nemala žiadny významný vplyv na životaschopnosť buniek (obrázok 1, obrázok 2).

Identifikácia dopaminergných neurónov stredného mozgu u fetálnych potkanov

Po špecifickom TH farbení kultivovaných neurónov stredného mozgu potkanov plodu dopaminergné neuróny vykazovali jasnú hnedo-žltú farbu a farbenie tiel buniek a axónov bolo jasne viditeľné, čo dokázalo, že dopaminergné neuróny boli úspešne kultivované (obrázok 3). .

Obrázok 1 Účinky vodných extraktov z Fomitopsis Pinicola na uvoľňovanie NO v bunkách BV2

indukované LPS

Poznámka: v porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou, **p < {{0}}.01;="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" lps,="" ##p="">< 0,01,="" #p=""><>

Obrázok 2: vplyv vodného extraktu z Fomitopsis Pinicola na mieru prežitia buniek BV2

Poznámka: v porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou, **p < 0.01;="" v="" porovnaní="" so="" skupinou="" lps,=""><>

Obrázok 3 Farbenie TH - značeného mezencefalónového DA neurónu

Účinok Fomitopsis Pinicola na morfológiu jadra DAPI,4',6-diamidino-2-fenylindol, je fluorescenčný ponor, ktorý preniká bunkovou membránou a viaže sa podivne na DNA. Výsledky tohto experimentu ukázali, že jadrá dopaminergných neurónov v normálnej kontrolnej skupine zostali takmer nedotknuté a chromatín bol jednotný. Kontrolná skupina MPP plus vykazovala významnú kondenzáciu chromatínu, lýzu jadrovej membrány a lýzu jadra. Po pôsobení vodného extraktu z Fomitopsis Pinicola bola morfológia jadra relatívne neporušená a charakteristiky apoptózy boli znížené (obrázok 4).

Účinok Fomitopsis Pinicola na potenciál mitochondriálnej membrány

Po MPP plus indukcii sa mitochondriálny membránový potenciál dopaminergných neurónov významne znížil, čo sa výrazne líšilo od normálnej kontrolnej skupiny (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" mitochondrial="" membrane="" potential="" decreased="" after="" mpp+="" induction.="" there="" was="" a="" significant="" increase="" in="" mitochondrial="" membrane="" potential="" in="" the="" 50,="" 25,="" and="" 12.5ug/ml="" dose="" groups="" compared="" with="" the="" mpp+="" control="" group=""><0.01,><0.05)(figure>

Účinok Pseudomonas Sinensis na produkciu ROS

Po MPP plus indukcii sa produkcia ROS dopaminergných neurónov významne zvýšila. ktorý bol významne odlišný od normálnej kontrolnej skupiny (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" ros="" increased="" after="" mpp+induction.="" the="" reduction="" of="" ros="" production="" in="" the="" 50="" and="" 25="" ug/ml="" dose="" groups="" was="" significantly="" different="" from="" the="" mpp+control="" group=""><0.01)(figure 6,="" figure="">

Obrázok 4. DAPI fluorescenčné vyfarbenie DA neurónov v mezencefaliku

Obrázok 5 Účinok vodného extraktu z Fomitopsis Pinicola na mitochondriálne indukované MPP plus

membránový potenciál mezencefalických DA neurónov

Poznámka: V porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou, **P < {{0}}.01;="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" mpp="" plus,="" #="" #="" p="">< 0,01,="" #="">

0.05.

Obrázok 6. C-DCDHF-DA fluorescenčné farbenie DA neurónov v mezencefaliku

Obrázok 7 Účinky vodných extraktov z Fomitopsis Pinicola na mezencefalickú DA indukovanú MPP plus

produkcia neurónu ROS

Poznámka: v porovnaní s normálnou kontrolnou skupinou, **P < {{0}}.01;="" v="" porovnaní="" s="" kontrolnou="" skupinou="" mpp="" plus,="" #="" #="" p=""><>

Záver

Degenerácia dopaminergných neurónov (DA neurónov) v strednom mozgu je stratená a Lewyho teliesko v cytoplazme reziduálnych neurónov je hlavným znakomParkinsonova choroba.Medzi klinické symptómy patrí najmä statický tremor, bradykinéza, hypermyotónia, nestabilita držania tela a spol. V súčasnosti sa liečbaParkinsonova chorobastále dominuje dopamínová substitučná liečba. Môže síce zlepšiť symptómy pacientov, no nezabráni rozvoju ochorenia. Dlhodobá aplikácia spôsobí množstvo nežiaducich reakcií [12], takže štúdium nových terapeutických prístupov je nevyhnutné. Štúdie ukázali, že oxidačný stres a hladiny oxidovaného dopamínu sú dôležitými príčinami selektívneho poškodenia dopamínergných neurónov [13] a niektoré prírodné antioxidanty, ako je kvercetín, kurkumín, čajové polyfenoly a kol., boli potvrdené ako dopamín spôsobený nervovými látkami. Poškodenie neurónov má zjavné ochranné účinky [14-16], takže je sľubné skríning liekov na liečbuParkinsonova chorobaz tradičnej čínskej medicíny s antioxidačnými farmakologickými účinkami.

V tejto štúdii sa FRAP použil na detekciu antioxidačnej kapacity vodných extraktov Fomitopsis Trolox Pinicola pomocou (6-hydroxy-2,5,7,8-tetrametylchromanu)2- karboxylová kyselina) má významné antioxidačné účinky. Detegovaný protizápalový účinok vodných extraktov je Pinicolawas Fomitopsis dby metódou NO uvoľňujúcou mikroglie BV2 indukované lipopolysacharidmi a nezistil sa žiadny významný vplyv na životaschopnosť buniek pri koncentráciách nižších ako 100 ug/ml, čo naznačuje, že v gliových bunkách majú významné anti- zápalové účinky a nemajú významný vplyv na prežitie buniek.

Oxidačný stres označuje nerovnováhu medzi tvorbou a elimináciou voľných kyslíkových radikálov v tele. Je to skorá udalosť v procese neuronálnej degenerácie-apoptózy. Štúdie ukázali, že mozgové tkanivo je bohaté na fosfolipidy a nenasýtené mastné kyseliny, ktoré sú obe náchylné na oxidačný stres. U pacientov sParkinsonova choroba, Malondialdehyd, index peroxidácie lipidov, v striate je výrazne zvýšený, zatiaľ čo koncentrácia polynenasýtených. výrazne sa znížili mastné kyseliny [17], znížil sa obsah glutatiónu (GSH) a bola narušená funkcia enzýmu I mitochondriálneho komplexu dýchacieho reťazca[18,19]. MPP plus je metabolit neurotoxickej látky MPTP v tele, ktorý môže v tele generovať voľné radikály, inhibovať mitochondriálnu funkciu, ničiť DA neuróny v substantia nigra a rozvíjať symptómyParkinsonova chorobana zvieracích modeloch. NO sa tiež podieľa na mechanizme poškodenia MPP plus. Nadmerný NO difunduje do DA neurónov, čo môže nitrozovať so sulfhydrylovým miestom enzýmu a inhibovať aktivitu enzýmu I mitochondriálneho komplexu dýchacieho reťazca [20,21].

Výsledky tejto štúdie ukázali, že po primárne kultivovaných DA neurónoch indukovaných MPP plus jadro vykazovalo zjavnú apoptózu, mitochondriálny membránový potenciál sa znížil a produkcia ROS sa významne zvýšila, čo naznačuje, že MPP plus môže indukovať apoptózu DA neurónov inhibíciou mitochondriálneho oxidačného stresu. vodný extrakt z Fomitopsis Pinicola a môže zlepšiť morfológiu dopaminergných neurónov po MPP plus indukcii, zvýšiť potenciál mitochondriálnej membrány a znížiť produkciu ROS, čo naznačuje, že vodný extrakt z Fomitopsis Pinicola inhibuje poškodenie DA neurónov stredného mozgu poškodených nervovými látkami, ktoré môžu byť súvisí s jeho antioxidáciou a inhibíciou produkcie NO a chráni neuróny inhibíciou mitochondriálneho oxidačného stresu.

Referencie

1. Khan AU, Akram M, Daniyal M, et al. Povedomie a súčasné poznatky o Parkinsonovej chorobe: Neurodegeneratívna porucha. Int J Neurosci 2018, 8: 1-64.

2. Klingelhoefer L, Reichmann H. Parkinsonova choroba ako multisystémová porucha. J Neural Transm (Viedeň) 2017, 124: 709-713.

3. Choi DH, Cristóvão AC, Guhathakurta S, a kol. Oxidačný stres sprostredkovaný NADPH oxidázou 1- vedie k smrti dopamínových neurónov pri Parkinsonovej chorobe. Antioxid Redox Signal 2012, 16: 1033-1045.

4. Asaithambi A, Ay M, Jin H a kol. Fosforylácia proteínkinázy D1 (PKD1) podporuje prežitie dopamínergických neurónov počas oxidačného stresu vyvolaného 6-OHDA. PLoS One, 2014, 9: e96947.

5. Berndt N, Bulík S, Holzhütter HG. Kinetické modelovanie mitochondriálneho energetického metabolizmu neurónových buniek: Vplyv znížených aktivít -ketoglutarátdehydrogenázy na produkciu ATP a tvorbu reaktívnych druhov kyslíka. Int J Cell Biol 2012, 2012: 757594.

6. Yan MH, Wang X, Zhu X. Mitochondriálne defekty a oxidačný stres pri Alzheimerovej chorobe a Parkinsonovej chorobe. Free Radic Biol Med 2013, 62: 90-101.

7. Guo C, Sun L, Chen X, Zhang D. Oxidačný stres, poškodenie mitochondrií a neurodegeneratívne ochorenia. Neural Regen Res 2013, 8: 2003-2014.

8. Hao L, Sheng Z, Lu J a kol. Charakterizácia a antioxidačné aktivity extracelulárnych a intracelulárnych polysacharidov z Fomitopsis Pinicola. Carbohydr Polym, 2016, 141: 54-59.

9. Shah F, Mali T, Lundell TK. Polyporales Brown Rot Species Fomitopsis Pinicola: Profily aktivity enzýmov, produkcia kyseliny šťaveľovej a Fe3 plus - Reduceing Metabolite Secretion.Appl Environ Microbiol, 2018, 84: e02662-17.

10. Guo SS, Wolf D. Štúdia o neuroprotektívnych účinkoch vodného extraktu Fomitopsis Pinicola na dopaminergné neuróny in vitro. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 582-586.

11. Khaled Radad, Rudolf Moldzio, Wolf-Dieter Rausch. Toxicita Minocyklín chráni dopaminergné neuróny pred dlhodobým rotenónom. Can J Neurol Sci 2010, 37: 81-85.

12. Rizek P, Kumar N, Jog MS. Aktualizácia diagnostiky a liečby Parkinsonovej choroby. MAJ 2016, 188: 1157-1165.

13. Crotty GF, Ascherio A, Schwarzschild MA. Zameranie urátov na zníženie oxidačného stresu pri Parkinsonovej chorobe. Exp Neurol 2017, 298: 210-224.

14. Ay M, Luo J, Langley M, a kol. Molekulárne mechanizmy, ktoré sú základom ochranných účinkov kvercetínu proti mitochondriálnej dysfunkcii a progresívnej dopaminergnej neurodegenerácii v bunkovej kultúre a modeloch Parkinsonovej choroby transgénnych myší MitoPark. J Neurochem 2017, 141: 766-782.

15. Wang MS, Boddapati S, Emadi S, a kol. Kurkumín znižuje cytotoxicitu indukovanú alfa-synukleínom v bunkovom modeli Parkinsonovej choroby. BMC Neurosci 2010, 11: 57.

16. Weinreb O, Amit T, Mandel S, a kol. Neuroprotektívne molekulárne mechanizmy (-)-epigalokatechín-3-galátu: reflexný výsledok jeho antioxidačných, chelatačných a neuritogénnych vlastností. Genes Nutr 2009, 4: 283-296.

17. Dawson TM, Ko HS, Dawson VL. Genetické zvieracie modely Parkinsonovej choroby. Neuron 2010, 66:646-61.

18. Bodis-Wollner. Retinopatia pri Parkinsonovej chorobe. J Neural Transm (Viedeň) 2009, 116: 1493-1501.

19. Hisahara S, Shimohama S. Toxínom indukované a genetické zvieracie modely Parkinsonovej choroby. Parkinsonova choroba. 2010, 2011: 951709.

20. Yang S, Liu T, Li S, a kol. Porovnávacia proteomická analýza mozgov prirodzene starnúcich myší. Neuroveda 2008, 154: 1107-1120.

21. Gautier CA, Corti O, Brice A. Mitochondriálne dysfunkcie pri Parkinsonovej chorobe. Rev Neurol (Paríž) 2014, 170:339-343.